Native Chromatin-Immunpräzipitation von Neurosphärenzellen

Nehmen Sie Neurosphärenzellen in einem Puffer ein, der Detergenzien, Kalzium und Proteaseinhibitoren enthält.

Das Detergens permeabilisiert die Zellen, während der Inhibitor Proteasen inaktiviert, um das Chromatin-gebundene Zielprotein zu erhalten.

Nuklease zugeben und inkubieren. Die Nuklease verwendet Kalzium, um das Chromatin zu verdauen.

Fügen Sie einen EDTA-haltigen Puffer hinzu, der Kalzium chelatisiert und die Nuklease inaktiviert.

Fügen Sie Lysepuffer hinzu, um die Zellen zu lysieren und das Chromatin freizusetzen.

Zentrifugieren und den Überstand auffangen.

Fügen Sie Antikörper hinzu, die für das Zielprotein spezifisch sind, und inkubieren Sie mit Rotation. Zentrifugieren und den Überstand entfernen.

Führen Sie magnetische Beads ein, die auf den Antikörper abzielen, und inkubieren Sie mit Rotation.

Fügen Sie Lysepuffer hinzu, um unspezifisch gebundene DNA zu trennen.

Fangen Sie die Kügelchen magnetisch auf und entfernen Sie den Überstand.

Fügen Sie einen salzreichen Puffer hinzu, um unspezifisch gebundene Proteine zu trennen.

Fangen Sie die Kügelchen magnetisch auf und entfernen Sie den Überstand.

Fügen Sie einen Stabilisierungspuffer hinzu, fangen Sie die Kügelchen magnetisch ein un