JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:31 Min. • April 28th, 2025
Nehmen Sie rehydriertes, in Fibrin eingebettetes, fixiertes und permeabilisiertes, vom Patienten stammendes erkranktes fibrovaskuläres Gewebe. Dieses Gewebe enthält unregelmäßige neovaskuläre Strukturen mit Endothelzellen und Perizyten.
Behandeln Sie das Gewebe mit einer Blockierungslösung, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.
Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die auf Oberflächenproteine auf Endothelzellen und Perizyten abzielen.
Mit Puffer spülen, um ungebundene Antikörper zu entfernen, dann in Puffer inkubieren.
Nach der Pufferwäsche mit fluoreszierenden Farbstoff-konjugierten Sekundärantikörpern inkubieren, um an die Primärantikörper zu binden.
Mit Puffer waschen, um überschüssige Antikörper zu entfernen, und in Puffer inkubieren.
Nach der Pufferwäsche fügen Sie einen Kernfarbstoff hinzu, um die Zellkerne zu färben. Mit Puffer und entionisiertem Wasser abspülen, um ungebundenen Farbstoff zu entfernen.
Übertragen Sie das Gewebe auf einen Objektträger.
Eindeckmittel aufbringen und mit einem Deckglas verschließen, das schnell aushärtende Eindeckmittel enthält.
Lagern Sie den Objektträger nach dem Trocknen an der Luft bei niedriger Temperatur. Anschließend wird das G
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