Immunfärbung von Neuronen in Hirnschnitten von Mäusen nach Fluoreszenz-In-situ-Hybridisierung

Nimm feste und permeabilisierte Maushirnschnitte, die Neuronen enthalten, einschließlich cholinerger Neuronen, die Cholin-Acetyltransferase exprimieren.

Die Schnitte werden einer fluoreszierenden In-situ-Hybridisierung unterzogen, um Ziel-mRNAs zu detektieren, die an cholinergen Axonen lokalisiert sind, was zu amplifizierten Signalen mit Fluoreszenzsonden führt, die mit Fluoreszenzmikroskopie detektiert werden.

Füge eine Blockierungslösung hinzu, die Proteine und ein Quenchmittel enthält. Die Proteine verhindern eine unspezifische Bindung, und das Quenchmittel neutralisiert restliche Fixiermittel.

Inkubieren Sie mit primären Antikörpern, die auf die neuronale Cholin-Acetyltransferase abzielen.

Mit Puffer waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.

Inkubieren Sie mit Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörpern, die an die Cholin-Acetyltransferase-gebundenen Primärantikörper binden.

Mit Puffer waschen, um überschüssige Antikörper zu entfernen, dann in destilliertem Wasser spülen, um Pufferrückstände zu entfernen.

Montieren Sie die Scheiben mit Einbettmedien, die einen Kernfleck enthalten, um die Kerne zu markieren.

Mittels Fluoreszenzmikroskopie die Schichten abbilden, um die Ziel-mRNA-