Konfokalmikroskopische Bildgebung von intakten dendritischen Dornen und der Morphologie der Wirbelsäule in einem gereinigten Mausgehirn

Nehmen Sie ein gereinigtes Mausgehirn, bei dem Zellen, die fluoreszierende Proteine exprimieren, und Lipide entfernt wurden, um Transparenz für die Tiefenstrukturbildgebung mit hoher Auflösung zu gewährleisten.

Ein Hydrogel-Netz bewahrt Biomoleküle und erhält neuronale Netzwerke.

Übertragen Sie das Gehirn in eine Bildgebungskammer mit einem Agarosering zur Unterstützung.

Befestigen Sie das Gewebe mit Klebstoff und füllen Sie die Kammer mit einer Brechungsindex-Matching-Lösung, um die Lichtstreuung zu minimieren und eine stabile Bildgebungsumgebung zu schaffen.

Stellen Sie die Kammer auf einen konfokalen Mikroskoptisch und senken Sie das Objektiv vorsichtig in die Lösung, um eine kontinuierliche Kontaktsäule zu schaffen.

Verwenden Sie Epifluoreszenz, um die interessierenden Bereiche zu lokalisieren. Passen Sie dann den Laser und die Bildgebungsparameter an, um die Bildqualität zu optimieren.

Erfassen Sie eine Reihe von Z-Stapeln, um eine dreidimensionale Darstellung des Gewebes zu erstellen.

Verwenden Sie geeignete Software, um die zelluläre Morphologie zu analysieren, einschließlich dendritischer Dorne, ihrer Stacheln sowie der Verteilung und Dichte von Neuronen.

Um eine große Gewebe