Einbettung des Drosophila-Gehirns in eine Matrix für die Zeitraffer-Bildgebung der Neuronen der zirkadianen Uhr

Beginnen Sie mit einem Petrischalendeckel, der das Larvengehirn von Drosophila enthält, das einem Hell-Dunkel-Zyklus ausgesetzt ist. Die Scheibe enthält fluoreszierende Protein-exprimierende Uhrenneuronen.

Fügen Sie ein nährstoffreiches Medium mit Antibiotika zur Unterstützung des neuronalen Überlebens und eine warme Fibrinogenlösung hinzu.

Mischen Sie die Lösung vorsichtig, um das Fibrinogen gleichmäßig zu verteilen.

Geben Sie eine kleine Menge dieser Mischung auf das Deckglas einer Glasbodenschale.

Fügen Sie Thrombin hinzu, um mit Fibrinogen zu reagieren und die Bildung einer dreidimensionalen Fibrinmatrix zu induzieren.

Übertragen Sie das Gehirn auf diese Matrix und positionieren Sie es mit der vorderen Seite nach unten, um die Uhrenneuronen für die Bildgebung auszurichten.

Falten Sie die Matrix über das Gehirn, um sie zu verankern und Bewegungen zu verhindern.

Fügen Sie nährstoffreiches Medium hinzu, um die Thrombinaktivität zu inaktivieren.

Verschließen Sie die Schale mit einer gasdurchlässigen Membran, um die Hydratation und die Lebensfähigkeit der Neuronen zu erhalten.

Führen Sie in bestimmten Abständen eine Zeitraffer-Fluoreszenzbildgebung durch.

Die Fluoreszenzveränderungen