Lebendzell-Bildgebung der Müller-Gliakernmigration während der Netzhautregeneration von Zebrafischen

Beginnen Sie mit einem in Agarose eingebetteten dorsalen Netzhautexplantat eines transgenen Zebrafisches, das in einer Fluoroschale mit Medien montiert ist.

Die Netzhaut weist lichtinduzierte Photorezeptorschäden auf und enthält Müller-Gliazellen oder MGCs mit Zellkernen, die GFP exprimieren.

Stellen Sie die Schale in eine Kammer mit Multiphotonenmikroskop

.

Fokussieren Sie mit Hellfeldbeleuchtung auf die Netzhaut.

Wechseln Sie in den Fluoreszenzmodus, um die MGCs zu lokalisieren.

Konfigurieren Sie einen Z-Stack von der Ganglienzellschicht (GCL) zur äußeren Kernschicht (ONL).

Starten Sie die Live-Bildgebung.

Beschädigte Photorezeptoren setzen TNF-α frei und aktivieren die MGCs.

MGC-Kerne wandern basal innerhalb der inneren Kernschicht (INL), um ihre DNA zu replizieren.

Dann wandern die Zellkerne apikal zum ONAL, um eine Mitose zu durchlaufen und neuronale Vorläuferzellen zu produzieren.

Nach der Mitose wandern die MGC-Kerne und Vorläuferzellen basal zurück zum INL.

Die Vorläuferzellen vermehren sich, wandern zur Verletzungsstelle und differenzieren sich zu Photorezeptoren, was die Regeneration der Netzhaut ermöglicht.

Analysieren Sie die aufgenommenen Bilder, um die nukleare Migration zu visual