Stereotaktische Injektion von viralen Vektoren für die Reprogrammierung von Gliazellen in einem Mausmodell

Befestigen Sie eine anästhesierte transgene Maus in einem stereotaktischen Rahmen mit freiliegendem Schädel.

Diese Maus exprimiert Cre-Rekombinase in Gliazellen.

Positionieren Sie den stereotaktischen Arm, der das Kapillarrohr hält, über dem Schädel und richten Sie ihn über dem Bregma aus.

Passen Sie die stereotaktischen Achsen für präzises Zielen an.

Bohren Sie ein Loch an der Zielstelle, um sicherzustellen, dass die Dura Mater intakt bleibt. Entfernen Sie Knochenfragmente.

Spülen Sie das Kapillarrohr mit Puffer. Ziehen Sie eine Luftblase auf und laden Sie dann das Adeno-assoziierte Virus, das inaktive neuronale Reprogrammierung und fluoreszierende Proteingene trägt.

Senken Sie das Kapillarrohr auf die Zieltiefe ab und injizieren Sie die Viruslösung in die gliazellreiche Region.

Ziehen Sie den Schlauch vorsichtig zurück, um einen Rückfluss zu verhindern.

Schließen Sie den Schnitt und lassen Sie die Genesung zu.

Die internalisierten Viren liefern loxP-flankierte inaktivierte Gene an den Gliakern. Die Cre-Rekombinase dreht sie um, aktiviert neuronale Reprogrammierungsgene und treibt die neuronale Umwandlung voran. Reprogrammierte Interneurone exprimieren das fluoreszierende Protein unter dem