Name: Maus Eye Enukleation für Remote High-throughput Phänotypisierung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: Lernen Sie die Enukleation des Mausauges für Hochdurchsatz-Phänotypisierung. Diese Methode ermöglicht präzise Gewebe-Fixierung und verbessert die Ergebnisse in der Entwicklungsbiologie.

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Forschung zur Erblindung verhindern; Bartly J. Mondino MD, Direktor des Jules Stein Eye Institute, UCLA, und Ramiro Ramirez-Solis, Jacqui White, and Jeanne Estabel am Sanger Institute, Wellcome Trust Genome Campus. Diese Forschung entspricht der ARVO Statement für die Verwendung von Tieren in Ophthalmic und Visual Research.

Ein. Blunt Dissection: Enukleation der Maus Auge fixierten Proben <ol><li> Auseinanderziehen die Augenlider, um die Exposition und den Zugang zu den hinteren Globus (Augapfel) Oberfläche zu verbessern. </li><li> Legen Sie eine gebogene Verband forcep hinter (unter) den Globus in der Umlaufbahn (Augenhöhle). Die Mahajan Sharptip Verband forcep ist ein Brauch Instrument mit Spitzen um diesen Schritt zu erleichtern (siehe Materialien und Reagenzien Tabelle). </li><li> Schließen Sie die Zange und fassen Sie den Orbital Bindegewebe und Sehnerv hinter dem Globus, während sie vorsichtig, um zu vermeiden, drückte den Globus. </li><li> Ziehen Sie die Zange nach oben und reißen den Augapfel aus der Augenhöhle. Die weißen Faden-ähnliches Gewebe ist der Sehnerv. </li><li> Legen Sie das Auge in PBS. Mit einer 30-Gauge-Nadel, machen eine einzige Stichwunde unmittelbar hinter dem Limbus durch Einführen der Nadel 1-2 mm in den Augapfel. Dies ermöglicht Fixiermittel, wie Glutaraldehyd, die sonst nicht in der Lage, um das Auge Gewebe zu durchdringen sind, um direkt enter das Auge. Schaffung dieses Einstichwunde eventuell nicht notwendig, wenn ein Fixiermittel wie Paraformaldehyd oder Alkohol, in der Lage ist Diffundieren in Augengeweben von Interesse. </li><li> Legen Sie das gesamte Auge sofort in Fixativ für Tauch-Fixierung. </li></ol> 2. Sharp Dissection: Enukleation der Maus eye folgenden Perfusionsfixierung <ol><li> Verwenden Sie eine gekrümmte colibri forcep um das Augenlid entfernt von der Welt zu halten. </li><li> Orient gekrümmten Westcott Dissektion Schere parallel zu den Globus beim Zielen in Richtung der Rückseite der Bahn. </li><li> Schneiden Sie die feste Bindegewebe, das die Welt umgibt aus den minderwertigen, medial, überlegen, und Seitenflächen. </li><li> Legen Sie die gebogenen Pinzette hinter den Globus, fassen das Bindegewebe, ohne Druck auf der ganzen Welt, und nach vorne ziehen, um das Auge entkernen. Da die Orbital Bindegewebe steif Perfusionsfixierung können zusätzliche Schneiden von Orbital Gewebe notwendig sein, komplett loslassen globE. </li></ol> 3. Fixation und Verpackung Versand von festen Geweben folgen müssen Ihren institutionellen und Postdienst Anforderungen einschließlich geeigneter Etiketten und Verpackungen. Das folgende Protokoll ist ein Beispiel des Versendens eines nicht-infektiösen biologischen Probe bei Umgebungstemperatur. Dies erfordert 3 Schichten der Verpackung, aber keine Klasse A / B biologische Substanz oder flüssigem Stickstoff Etiketten. <ol><li> Legen Sie das Auge in einer 5-mL Glasszintillationsröhrchen mit mindestens 3-mL Fixativ, oder post-Fixateur-Puffer, wenn die Fixierung ist kurz. Schreiben Sie die Tracking-Nummer auf dem Deckel des Fläschchens und verschließen Sie diese mit Parafilm. </li><li> Ort Szintillationsgefäße in einer biologischen Probe geeigneten Behälter. Im Institut, erfordern zum Beispiel zugelassenen Behältern drei Schichten: einen abgedichteten Behälter, in dem die Probe platziert ist, eine absorbierende mittlere Schicht und eine schützende Deckschicht. </li><li> Stellen Sie den Behälter in eine Luftpolsterfolie Paket und dann in einer Appschweiften Labor Transportbehälter zusammen mit den entsprechenden Unterlagen. </li></ol> 4. Repräsentative Ergebnisse Die histologische Untersuchung der Augen können durch eine Vielfalt von Verfahren einschließlich Hämatoxylin und Eosin-Färbung, enzymatische Nachweis Expression, Transmissionselektronenmikroskopie und Immunhistochemie erfolgen. Nach dem Eintauchen Fixierung in 4% Paraformaldehyd wurde Gewebe in Paraffin und geschnitten auf einem Mikrotom eingebettet. In Hochdurchsatz-Phänotypisierung analysieren wir Schüler-Sehnervs Abschnitte, die Probe alle Gewebearten im Auge (Abbildung 1). Gewebestücke wurden auch für lacZ-Expression (Abbildung 2), Transmissionselektronenmikroskopie von Zellorganellen (Abbildung 3), und die Expression von spezifischen Molekülen mit Antikörpern (Abbildung 4) geprüft. In unserem Phänotyp Screeningverfahren, war es nicht wichtig, Orientierung des Auges in Bezug auf die Nasen (medialen Augenwinkel) und zeitliche aufrechtzuerhalten (lateral Augenwinkel) Seiten. Es gibt mindestens zwei Optionen, wenn Auges Orientierung erforderlich ist. Nach Enukleation, haben wir Licht Kauter auf die zeitliche Hornhaut am 03.00 Position mit einem Handheld-Kauter Gerät. Die Läsion ist offensichtlich auf Histologie und nicht während der Verarbeitung, wie histologische Tinten verloren gehen. Der Nachteil ist, dass Kauter schädigt die Hornhaut, die eine kritische Gewebe für eine Untersuchung sein kann. Die andere Option erfordert einen erfahrenen Anatomen, die die Augenmuskeln Insertionen identifizieren können. Unter einem Stereomikroskop, markiert Identifizierung des unteren und oberen schrägen Muskel Einsetzen der unteren und oberen und Aspekt des Globus. 3 Mit jeder Orientierung Verfahrens ist es wichtig, die Probe als rechte oder linke Auge verfolgen. Gemeinsam werden diese Exact Globe Orientierung vor lassen Schneidens. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig1.jpg" alt="Mikroskopische Aufnahme der Augenanatomie; histologische Abschnitte; Linse, Netzhaut, Hornhaut; Details der Zellschicht." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Maus Auge histologische Bilder afte r Remote-Akquisition. Maus Augen waren durch scharfe Dissektion nach Perfusionsfixierung mit 4% Paraformaldehyd enukleiert. A. Schüler-Sehnervs Abschnitt mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt zeigt Erhaltung aller Gewebe Unterkonstruktionen. ON, Sehnerv. (Grün Maßstab = 500 Mikron) B. Eine stärkere Vergrößerung Ansicht des normalen Netzhaut zeigt seine Schichtstruktur: RGC, retinalen Ganglienzellen, IPL, inneren plexiformen Schicht; INL, innere Körnerschicht; OPL, plexiformen Schicht; ONL, äußere Körnerschicht (Sehzellen) (Pfeil); IS, Photorezeptor inneren Segmente (Pfeilspitze); OS, Photorezeptor äußeren Segmente, RPE, Pigmentepithel; C, Aderhaut. (Grün-Skala bar = 50 Mikron) C. der normalen Netzhaut ist im Vergleich dieser Probe dünner aufgrund Photorezeptordegeneration. Die ONL, IS und OS fehlen völlig (Pfeil). (Grün-Skala bar = 50 Mikron) "Alt =" Bild 2 "/&gt; Abbildung 2. LacZ-Expression in transgenen Mäusen. Augen wurden stumpf enukleiert und eingetaucht in 1 mg / ml X-gal-Lösung (5 mM K3Fe (CN) 6, 5 mM K4Fe (CN) 6, 2 mM MgCl2, 0,02% NP40 und 0,1% Natriumdesoxycholat) über Nacht bei 37 ° C. Augen wurden in 2% formaldehyde/0.2% Glutaraldehyd für 30 Minuten und auf einem Mikrotom geschnitten fixiert. X-gal Produkt (blau) Etiketten: A. Ziliarepithel, B. Hornhautepithel, und C. die retinalen Ganglienzellen (RGC) in der Netzhaut. INL, innere Körnerschicht; ONL, äußeren Körnerschicht. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig3.jpg" alt="Netzhautstruktur; elektronenmikroskopische Aufnahme mit Stäbchen-Außensegmenten, RPE-Zellen, Bruch-Membran." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3. Transmissionselektronenmikroskopie des retinalen Pigmentepithels (RPE). Nach stumpf und die Schaffung einer Stichwunde, waren Augen Eintauchen in 2,5% Paraformaldehyd / 2,5% Glutaraldehyd in 0,1 M Natriumphosphatpuffer fixiert. Augen waren gebrauchtdarily in 1% Osmium textroxide fixiert, schrittweise entwässert, und in Spurr das Harz. Gewebe wurde bei 90 nm geschnitten und gelegt auf Kupfer Schlitz Gittern in Formvar abgedeckt und abgebildet mit einem Transmissions-Elektronen-Mikroskop. Die Aufnahme zeigt, Photorezeptor äußeren Segmente des Neuroretina, Melanosomen (M) innerhalb des retinalen Pigmentepithels und der Bruch-Membran. <img src="/files/ftp_upload/3184/3184fig4.jpg" alt="Fluoreszenzmikroskopische Aufnahme der bakteriellen Biofilmstruktur; Vergrößerung im Maßstab von 20 Mikrometern." data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Abbildung 4"> Abbildung 4. Immunhistochemische Kennzeichnung von Superoxiddismutase-3 (grün) in der Maus Glaskörper. Augen wurden durch stumpfe Dissektion entkernt und unterzog Eintauchen Fixierung in 4% Paraformaldehyd. Sie wurden in Paraffin und unter Verwendung eines Mikrotoms geschnitten eingebettet. Gewebeschnitte wurden mit polyklonalem Kaninchen-Antiserum inkubiert SOD3 1:50 verdünnt. SOD3 Expression wurde unter Verwendung eines Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG (H + L)-Alexa Fluor 488 konjugierten sekundären Antikörper. Kennzeichnung von SOD3 in gre angezeigten.

<ol><li>Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+models+of+retinal+degeneration+and+targets+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy.</a> Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).</li>
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<li>Tsang, S. H., Woodruff, M. L., Jun, L., Mahajan, V., Yamashita, C. K., Pedersen, R., Lin, C. S., Goff, S. P., Rosenberg, T., Larsen, M., Farber, D. B., Nusinowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+mice+carrying+the+H258N+mutation+in+the+gene+encoding+the+beta-subunit+of+phosphodiesterase-6+%28PDE6B%29+provide+a+model+for+human+congenital+stationary+night+blindness%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mutat%22%5BJournal%5D)">Transgenic mice carrying the H258N mutation in the gene encoding the beta-subunit of phosphodiesterase-6 (PDE6B) provide a model for human congenital stationary night blindness.</a> Hum. Mutat. 28, 243-254 (2007).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die meisten transgenen Mäusen gibt es in Laboratorien, die nicht prüfen müssen die Augen. Unsere Video-Technik stellt eine einfache, standardisierte Methode zur Remote-chirurgischen Fähigkeiten Übertragung von Gewebe Akquisition von Laboratorien mit wenig Erfahrung mit den Augen zu optimieren. Dieses Video-Technik hilft bei der Bewältigung einer großen Sünden in High-Throughput-Phänotypisierung, die Verwendung einer begrenzten Anzahl von Experten Standorten aufgrund der nicht-standardisierten Gewebe Sammlung und Fixieru...

<table border="1"><tbody><tr><th> Name </th><th> Firma </th><th> Catalog Number </th><th> Kommentare </th></tr><tr><td> Curved Dressing Forcep </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1408 </td><td></td></tr><tr><td> Mahajan Sharptip Verband forcep </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1406 (REF SP7-64520) </td><td></td></tr><tr><td> Curved Westcott Schere </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3321 WH </td><td></td></tr><tr><td> 15 ° BD Beaver Mikrochirurgische Klinge </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 374881 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 Fine-Castroviejo Naht-Zange </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1805 </td><td></td></tr><tr><td> 0,12 Colibri Pinzette </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> 2/132 </td><td></td></tr><tr><td> 30-Gauge-Nadel </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 305128 </td><td></td></tr><tr><td> Biohazard Mailer </td><td> Fischer </td><td> 03-523-4 </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Fischer </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Glasszintillationsröhrchen </td><td> Wheaton </td><td> 4500413033 </td><td></td></tr><tr><td> PBS, pH 7.4 </td><td> Invitrogen </td><td> 70011-044 </td><td></td></tr><tr><td> 16% Paraformaldehyd </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15700 </td><td></td></tr><tr><td> 2,5% Paraformaldehyd / 2,5% Glutaraldehyd in 0,1 M Natriumphosphatpuffer </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15700 &amp; 16300 </td><td> Gemischt im Labor </td></tr><tr><td> 50% Glutaraldehyd </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 16300 </td><td></td></tr><tr><td> 0,25% Formvar </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15810 </td><td></td></tr><tr><td> Polizistpro Slot Grid </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> M2010-CR </td><td></td></tr><tr><td> 4% Osmiumtetroxid </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 19140 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-SOD3 Antikörper </td><td> Abcam </td><td> Ab21974 </td><td></td></tr><tr><td> Ziege anti-Kaninchen Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11070 </td><td></td></tr><tr><td> Spurr die Einbettung von Harz </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 14300 </td><td></td></tr></tbody></table>

maus eye enukleation für remote high-throughput phänotypisierung

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

Die Maus Auge ist ein wichtiges genetisches Modell für die translationale Erforschung der menschlichen Augenerkrankung. Blendende Erkrankungen beim Menschen, wie Makuladegeneration, Photorezeptordegeneration, Katarakt, Glaukom, Retinoblastom, und diabetische Retinopathie haben in transgenen Mäusen wurde rekapituliert. 1-5 meisten transgenen und Knockout-Mäuse von Laboratorien erzeugt wurden auf nicht-ophthalmologische Krankheiten zu studieren, aber Generhaltung zwischen Organsysteme lässt vermuten, dass viele der gleichen Gene können auch eine Rolle bei der Entwicklung und okulare Krankheit. Daher stellen diese Mäuse eine wichtige Ressource für die Entdeckung neuer Genotyp-Phänotyp-Korrelationen in die Augen. Da diese Mäuse auf der ganzen Welt verstreut sind, ist es schwierig, zu erwerben, zu halten und Phänotyp sie in eine effiziente, kostengünstige Weise. So sind die meisten High-Throughput-ophthalmologische Phänotypisierung Bildschirmen auf wenige Standorte, die vor Ort, ophthalmologische Know-how erfordern beschränkt Augen in lebenden Mäusen zu untersuchen. 6-9 Ein alternativer Ansatz in unserem Labor entwickelt wurde, ist eine Methode für Remote Gewebe-Übernahme, die in großen oder kleinen Erhebungen der transgenen Maus Augen verwendet werden können. Standardisierte Verfahren für Video-basierte chirurgische Fachwissen, Gewebefixierung und Versand ermöglichen jedem Labor zu ganzen Augen von mutierten Tiere zu sammeln und senden Sie sie für molekulare und morphologische Phänotypisierung. In diesem Video Artikel präsentieren wir Techniken, um entkernen und übertragen sowohl fixierten und Perfusion festen Mäuseaugen für Remote Phänotypisierung Analysen.

Die Dissektionstechnik zeigt Enukleation der Maus Auge für Gewebefixierung um Phänotypisierung in Hochdurchsatz-Screening durchzuführen.

Maus Eye Enukleation für Remote High-throughput Phänotypisierung

Das Mausauge ist ein wichtiges genetisches Modell für die translationale Untersuchung menschlicher ophthalmologischer Erkrankungen. Erblindende Erkrankungen beim Menschen, wie beispielsweise die makuläre...

Dieses Video veranschaulicht das Mausauge und die Enukleation, also das Entfernen des Augapfels aus der Augenhöhle. Der Augapfel wird durch den unteren Lidrand begrenzt. Hier befindet sich der mediale oder nasale Augenwinkel.Im Hintergrund befindet sich der laterale oder temporale Augenwinkel. Oben liegt der obere Lidrand. Hier ist eine chirurgische Probe.Die Nadel zeigt auf die klare Hornhaut. Man kann ein wenig der Linse sehen, die hinter der Regenbogenhaut hervorragt. Die Regenbogenhaut ist hier braun und bedeckt die Linse.Die wichtigste chirurgische Orientierungsmarke ist diese weiße Linie, bzw. der Limbus, an dem eine Punktion direkt hinter dieser Linie vorgenommen wird. Die hintere Hälfte des Bulbus liegt hinter dem Limbus, und wir weisen hier auf eine Muskelansatzstelle hin. Man kann den Muskel erkennen, der hier am Bulbus anliegt, sowie das Bindegewebe, das die Orbita ausfüllt und die Arian-Drüse enthält.Und schließlich ist dies der weiße, lange Streifen des Sehnervs aus einer stumpfen Präparation. Ziehen Sie mit einer gebogenen Tupferpinzette, die mit einer scharfen Spitze modifiziert wurde, zunächst die Augenlider auseinander. Dadurch wird das Auge meist nach vorne und außen gedrückt.Verwenden Sie Ihre Pinzette vorsichtig, um in die Augenhöhle und hinter den Augapfel zu gelangen, drücken Sie sanft hinter dem Augapfel, ohne diesen zu quetschen, und ziehen Sie nach vorne. Sie sollten das Bindegewebe erfasst und nicht den Augapfel ergriffen haben. Wenn Sie den Augapfel zur Seite drehen, können Sie das Orbitagewebe zusammen mit dem weißen Sehnerv erkennen.Dies ist eine zweite Präparation, die erneut zeigen soll, dass man am Augenwinkel eintritt, die Pinzette hinter den Augapfel schiebt, das Bindegewebe erfasst und nach vorne zieht, ohne dabei auf den Augapfel selbst Druck auszuüben. Auch hier sieht man das Bindegewebe im langen, weißen Streifen des Sehnervs. Um eine Punktionswunde zu erzeugen, greifen Sie den Augapfel an einer Muskelansatzstelle und führen eine Nadel hinter der Limbusregion ein, direkt neben der Stelle, an der Sie das Auge halten, um es zu stabilisieren.Dies ermöglicht es dem Fixans mittel, in das Auge einzudringen. Wenn Sie die Punktion weit entfernt von der Stelle vornehmen, an der Sie das Auge halten, wird der Augapfel sehr instabil sein, und es wird schwierig sein, die Wunde so lang zu halten, ohne das Auge zu komprimieren oder unangemessenen Druck auszuüben. Sie können auch das gesamte Bindegewebe direkt hinter dem Augapfel selbst erfassen.Einige Fixanzien erfordern keine Einstichwunde. Im Allgemeinen geben wir das Auge in ein fünf ml fassendes Szintillationsfläschchen mit mindestens drei ml Fixans, um sicherzustellen, dass das Auge vollständig bedeckt ist. Bei durchströmten Tieren ist eine scharfe Präparation erforderlich.Wir verwenden eine gebogene Pinzette aus Kalibri und gebogene Wescott-Scheren. Fassen Sie das Unterlid mit der Kalibri-Pinzette. Führen Sie die Schere entlang des Orbitalknochens ein und beginnen Sie, das Bindegewebe zu durchtrennen.Wir verwenden die Kurve, die vom Augapfel wegzeigt, und vermeiden das Zuschneiden. Jeder Bereich des Auges entlang des gesamten unteren Lidrandes von einem Lidwinkel zum anderen ist geeignet. An einer bestimmten Stelle wird der größte Teil des Bindegewebes entfernt sein, sodass man die Schere hinter den Augapfel schieben und diesen wegziehen kann.Hier ist erneut ein weiteres Beispiel, bei dem die Schere in die Augenhöhle eingeführt wird, jedoch gegen den Augenhöhlenknochen und nicht gegen den Augapfel, um das Bindegewebe abzuschneiden. Dadurch beginnt sich der Augapfel zu lösen, der wie ein Basketball im Korb sitzt. Verwenden Sie die Pinzette, um die Augenlider zurückzuziehen, und führen Sie vorsichtige, kurze Schnitte um den Augapfel herum aus.Hier fassen wir das Bindegewebe oder einen Muskelansatz mit dem Collibra und trennen den Augapfel vollständig vom orbitären Bindegewebe ab. Nachdem die Augäpfel angemessen fixiert wurden und falls sie transportiert werden müssen, bringen wir etwas Parafilm um das Sammelgefäß herum an.Die Verpackung muss den Vorschriften Ihrer Universität und der Regierung entsprechen. Üblicherweise geben wir diese in einen Behälter mit etwas Watte, um eventuelle Flüssigkeiten aufzufangen; dieser Behälter muss sehr dicht verschlossen werden. Dieser Versandbehälter wird anschließend in eine Luftpolsterfolie verpackt.Dies wird zusammen mit allen erforderlichen Unterlagen in ein flüssiges Laborversandpaket gegeben.

mouse-eye-enucleation-for-remote-high-throughput-phenotyping

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieses Protokoll beschreibt eine einfache und kostengünstige Möglichkeit, um die Aktivität von cis-regulatorischen Elemente (dh Enhancer / Promotoren) in lebenden Maus Netzhaut via Explantation Elektroporation zu quantifizieren. DNA-Präparation, Netzhaut-Dissektion, die Elektroporation, Netzhaut-Explantat-Kultur, und nach der Fixierung Analyse und Quantifizierung beschrieben.

Die Quantifizierung der Aktivität von Cis-Regulatorische Elemente in der Maus Retina durch Explantation Elektroporation

Source: Jagodzinska, J., et. al., Optische Kohärenztomographie: Bildgebung von retinalen Ganglienzellen der Maus In Vivo. J. Vis.  (2017)  In diesem Video demonstrieren wir die Verwendung der optischen Kohärenztomographie (SD-OCT) im Spektralbereich zur Abbildung von Netzhautschichten und zur Beurteilung struktureller Veränderungen in einem genetisch veränderten Mausmodell mit Optikusneuropathie.

In-vivo-Bildgebung der Netzhaut der Maus mittels optischer Kohärenztomographie

Die Entfernung der Augen, auch als Enukleation, bietet eine nützliche Strategie, um Aspekte der visuellen, Cross-Modal und Entwicklungs Plastizität entlang der Säugetier-visuelle System zu studieren, da es teilweise irreversible induziert (monokulare) oder komplett (Fernglas) Verlust der Sehkraft. Hier beschreiben wir eine hoch reproduzierbare und unkomplizierte Ansatz zur in vivo Enukleation durchzuführen.

Ein hoch reproduzierbare und einfache Methode, um Führen In Vivo Ocular Enukleation in der Maus nach Augenöffnung

In diesem Artikel beschreiben wir die Prinzipien für das Entwerfen und Durchführen eines mehrfarbigen Abstammungsverfolgungsexperiments mit R26R-Confetti-Mäusen. Wir bieten ein spezifisches Protokoll für die Verfolgung von Hornhautepithelzellen an, das für andere Gewebe von Interesse modifiziert werden kann.

Eine Methode zur Lineage Tracing von Hornhautzellen mit Multi-Farben-Fluoreszenz-Reporter-Mäuse

Hier zeigen wir einen neuartigen Ansatz zur Verwendung von hochauflösenden spectral-Domain optische Kohärenztomographie (HR-SD-OCT) Lieferung der Gen-Therapie-Agenten in den subretinalen Raum zu unterstützen, beurteilen seine areal Abdeckung und Photorezeptor Vitalität zu charakterisieren.

Höchste Auflösung Maus optische Kohärenztomographie, intraokulare Injektion in die retinale Gentherapie Forschung unterstützen

Präsentiert wird hier eine mikroskopische Multiphotonen-Plattform für die Live-Maus-Augenoberflächenbildgebung. Fluoreszierende transgene Maus ermöglicht die Visualisierung von Zellkernen, Zellmembranen, Nervenfasern und Kapillaren innerhalb der Augenoberfläche. Nichtlineare Signale der zweiten harmonischen Generation, die von kollagenen Strukturen abgeleitet werden, bieten eine etikettenfreie Bildgebung für stromale Architekturen.

Eine benutzerdefinierte Multiphotonen-Mikroskopie-Plattform für Live-Bildgebung von Maus-Cornea und Konjunktiva

In-vivo-Bildgebung ist ein leistungsfähiges Werkzeug für das Studium der Biologie in Gesundheit und Krankheit. Dieses Protokoll beschreibt die transpupille Bildgebung der Netzhaut der Maus mit einem Standard-Zwei-Photonen-Mikroskop. Es zeigt auch verschiedene In-vivoimaging-Methoden, um mehrere zelluläre Kohorten der Netzhaut fluoreszierend zu markieren.

Transpupille Zwei-Photonen-In-vivo-Bildgebung der Netzhaut der Maus

Dieses Protokoll, das ursprünglich von Fernandez-Godino et al. im Jahr 20161berichtet wurde, beschreibt eine Methode zur effizienten Isolierung und Kultur von Maus-RPE-Zellen, die innerhalb einer Woche auf Transwell-Platten eine funktionelle und polarisierte RPE-Monoschicht bilden. Das Verfahren dauert ca. 3 Stunden.

Effiziente Dissektion und Kultur der primären Maus retinalen Pigmentepithelzellen

In diesem Artikel wird ein Protokoll für die okuläre Mikrodissektion bei Nagetieren vorgestellt. Der Prozess beinhaltet die Enukleation des Augapfels zusammen mit der Nickhaut (d.h. dem dritten Augenlid). Es folgt die Trennung der hinteren und vorderen Augenmuscheln.

Mikrodissektion des Nagetierauges

Die Netzhaut weist eine komplexe räumliche Organisation über ihre laminare Struktur auf. Moderne räumliche Transkriptomik- und Sequenzierungstechniken erfordern Gewebeschnitte mit einer Dicke von &lt; 20 μm, was ihre Anwendbarkeit in der Netzhautforschung einschränkt. Diese frisch gefrorene Kryosektionsmethode erzeugt dünne Gesichtsabschnitte der Netzhaut von Mäusen unter Beibehaltung planarer räumlicher Beziehungen und ermöglicht so eine umfassende molekulare Kartierung über Laminae hinweg.

En face Kryosektion der Netzhaut der Maus für die hochdimensionale räumliche molekulare Analyse

Diese Arbeit demonstriert eine Methode zur Visualisierung und Quantifizierung der Mikroglia-Motilität und des Kontakts mit postsynaptischen Puncta in der Netzhaut mittels rotierender Scheiben-Konfokalmikroskopie.

Live-Bildgebung und Charakterisierung der Mikroglia-Dynamik und Wechselwirkungen mit Synapsen in erkrankter Maus-Netzhaut

Lernen Sie die Enukleation des Mausauges für Hochdurchsatz-Phänotypisierung. Diese Methode ermöglicht präzise Gewebe-Fixierung und verbessert die Ergebnisse in der Entwicklungsbiologie.

Maus Eye Enukleation für Remote High-throughput Phänotypisierung

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