Maus Eye Enukleation für Remote High-throughput Phänotypisierung
19. November 2011
Die Dissektionstechnik zeigt Enukleation der Maus Auge für Gewebefixierung um Phänotypisierung in Hochdurchsatz-Screening durchzuführen.
Dieses Video zeigt das Mausauge und die Keimbildung oder das Entfernen des Augapfels aus der Augenhöhle. Der Augapfel wird durch den unteren Lidrand begrenzt. Hier ist der mediale oder nasale Canthus.
Im Hintergrund befindet sich der Schläfen- oder laterale Canthus. Oben befindet sich der obere Lidrand. Hier ist ein chirurgisches Exemplar.
Die Nadel zeigt auf die klare Hornhaut. Wir können sehen, wie ein kleiner Teil des Objektivs an der Iris vorbeiragt. Die Iris ist hier in Braun gehalten und bedeckt die Linse.
Der wichtigste chirurgische Orientierungspunkt ist diese weiße Linie, sonst wird der Limbus direkt dahinter eine Stichwunde hinterlassen. Die hintere Hälfte des Globus befindet sich hinter dem Limbus und wir zeigen auf einen Muskelansatz. Sie können hier den Muskel sehen, der an der Kugel liegt, und dann das Bindegewebe, das die Augenhöhle ausfüllt und die arianische Drüse einschließt.
Und schließlich ist dies der weiße lange Streifen des Sehnervs von einer stumpfen Dissektion. Beginnen Sie mit einer gebogenen Verbandezange, die mit einer scharfen Spitze versehen ist, die Augenlider auseinander. Dies neigt dazu, das Auge auszureißen und wegzurösten.
Setze deine Pinzette vorsichtig in die Augenhöhle und hinter den Augapfel ein, drücke sie sanft hinter den Augapfel, ohne sie zu quetschen, und ziehe sie nach vorne. Du solltest das Bindegewebe und nicht den Augapfel fassen können. Dreht man den Augapfel zur Seite, sieht man das Augenhöhlengewebe zusammen mit dem weißen Sehnerv.
Dies ist eine zweite Dissektion, nur um zu zeigen, dass man wieder am Canthus antritt, die Pinzette hinter den Augapfel schiebt, das Bindegewebe greift und es nach vorne zieht, ohne auf den Augapfel selbst zu drücken. Auch hier kann man das Bindegewebe in dem langen Streifen des weißen Sehnervs erkennen. Um eine Stichwunde zu machen, fassen Sie den Augapfel mit einem Muskelansatz und führen Sie eine Nadel hinter dem Limbus direkt neben der Stelle ein, an der Sie das Auge halten, um es zu stabilisieren.
Dadurch kann das Fixiermittel in das Auge gelangen. Wenn du die Punktion weit weg von der Stelle machst, an der du das Auge hältst, wird der Augapfel sehr instabil sein und es wird schwierig sein, diese Wunde zu machen, solange du das Auge nicht zusammendrückst oder übermäßigen Druck ausübst. Sie können auch das gesamte Bindegewebe direkt hinter dem Augapfel selbst greifen.
Einige Fixiermittel benötigen keine Stichwunde. Im Allgemeinen geben wir das Auge in ein Fünf-ml-Szintillationsfläschchen mit mindestens drei mls Fixiermittel, um sicherzustellen, dass das Auge untergetaucht ist. Bei einer Fülle von fixierten Tieren ist eine scharfe Dissektion notwendig.
Wir verwenden eine gebogene Calibri-Pinzette und eine gebogene Wescott-Schere. Fassen Sie das untere Lid mit der Kalibri-Pinzette. Führen Sie Ihre Schere gegen den Augenhöhlenknochen ein und beginnen Sie, das Bindegewebe zu schneiden.
Wir verwenden die Kurve weg vom Augapfel und vermeiden sie bei der Größenbestimmung. Jedes Auge wird den ganzen Weg entlang des unteren Lidrandes von einem Canthus zum anderen arbeiten. Ab einem bestimmten Punkt wird der größte Teil des Bindegewebes entfernt, und Sie können Ihre Schere hinter den Globus schieben und ihn wegziehen.
Hier ist wieder ein weiteres Beispiel, bei dem die Schere in die Augenhöhle eingeführt wird, aber gegen den Augenhöhlenknochen und nicht gegen den Augapfel, und das Bindegewebe abgeschnitten wird. Dadurch wird der Augapfel befreit, der wie ein Basketball in einem Korb ist. Ziehe die Augenlider mit der Pinzette zurück und mache sanfte Abkürzungen um den Augapfel herum.
Hier greifen wir mit dem Collibra das Bindegewebe oder einen Muskelansatz und schneiden den Augapfel vom orbitalen Bindegewebe ab. Nachdem die Augäpfel entsprechend fixiert sind und wenn sie transportiert werden müssen, legen wir eine Parafolie auf. Wir um das Sationsfläschchen herum.
Die Verpackung muss den Vorschriften Ihrer Universität und der Regierung entsprechen. Normalerweise legen wir diese in einen Behälter mit etwas Watte, um Flüssigkeit aufzufangen, muss dieser Behälter sehr dicht verschlossen werden. Dieser Versandbehälter wird dann in einen Luftpolsterbeutel gelegt.
Diese wird zusammen mit allen Unterlagen in eine flüssige Laborversandverpackung gelegt.
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Übersicht
Dieses Video veranschaulicht die Technik der Enukleation des Mausauges, die für die Gewebefixierung bei Hochdurchsatz-Phänotypisierungsuntersuchungen entscheidend ist. Das Verfahren beinhaltet das Entfernen des Augapfels aus seiner Höhle und hebt anatomische Orientierungspunkte für mehr Klarheit hervor.
Wichtige Studienkomponenten
Wissenschaftsbereich
- Neurowissenschaften
- Biologie
Hintergrund
- Enukleation ist eine entscheidende Technik in verschiedenen biologischen Studien.
- Das Verständnis der Augenanatomie hilft bei präzisen chirurgischen Eingriffen.
- Diese Methode ist für Hochdurchsatz-Screening-Anwendungen unerlässlich.
- Eine angemessene Gewebefixierung ist für eine genaue Phänotypisierung erforderlich.
Zweck der Studie
- Um die Enukleationstechnik zu Demonstrationszwecken zu zeigen.
- Um Forschern, die ähnliche Verfahren durchführen, eine visuelle Anleitung zu geben.
- Um das Verständnis der anatomischen Orientierungspunkte während der Operation zu verbessern.
Verwendete Methoden
- Videodemonstration des Enukleationsprozesses.
- Identifikation wichtiger anatomischer Merkmale des Mausauges.
- Schritt-für-Schritt-Anleitung zur Durchführung des Verfahrens.
- Visuelle Hilfsmittel zur Unterstützung von Lernen und Anwendung.
Hauptergebnisse
- Klare Visualisierung der Enukleationstechnik.
- Identifikation des medialen und lateralen Kanthus.
- Demonstration des chirurgischen Präparats nach der Enukleation.
- Verbessertes Verständnis des Verfahrens für Hochdurchsatz-Screenings.
Schlussfolgerungen
- Das Video dient als effektives Bildungsinstrument für Forscher.
- Das Verständnis des Enukleationsprozesses ist für eine erfolgreiche Gewebefixierung entscheidend.
- Die richtige Technik kann die Ergebnisse von Phänotypisierungsstudien verbessern.
Häufig gestellte Fragen
Executive Industry Relevance
Remote high-throughput phenotyping of mouse eyes enables distributed genetic resource utilization and accelerates discovery of genotype-phenotype correlations in ophthalmic disease models. Standardized enucleation and tissue transfer protocols reduce geographic and operational barriers, supporting scalable, multi-site preclinical research. This approach enhances portfolio-wide access to rare or geographically dispersed transgenic lines for early-stage target validation and phenotypic screening.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Facilitates systematic collection of ocular tissues from diverse genetic backgrounds for hypothesis-driven studies.
- Enables functional validation of candidate genes implicated in ocular development and disease.
- Supports predictive confidence in linking genetic perturbations to phenotypic outcomes.
Screening & Assay Development
- Provides standardized, fixed tissue samples suitable for downstream molecular and morphological assays.
- Improves reproducibility and comparability across multi-site phenotyping screens.
- Enables scalable preparation of samples for high-throughput screening platforms.
Translational & Preclinical Research
- Aligns mouse phenotyping with translational biomarker discovery for human ophthalmic diseases.
- Supports continuity from genetic discovery to preclinical validation of disease mechanisms.
- Reduces logistical barriers to accessing rare or geographically distributed mouse models.
Pipeline & Workflow Integration
This remote enucleation and tissue transfer protocol integrates into the early discovery and preclinical continuum, bridging genetic model generation with centralized phenotyping and analysis.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing and mechanistic de-risking by providing access to diverse genetic models.
- Screening: Standardizes sample preparation for reproducible, quantitative phenotyping assays.
- Analytics: Supports acquisition of morphological and molecular readouts for comparative analysis.
- Translational Research: Facilitates alignment of mouse phenotypes with human disease biomarkers.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable protocol for distributed tissue acquisition across research networks.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in genotype-phenotype associations and target validation.
- Operational Value: Streamlines logistics, standardizes procedures, and enables multi-site scalability.
- Strategic Value: Enhances go/no-go decision-making by broadening access to phenotypic data from rare models.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of genetic targets and disease models.
Implementation Considerations
- Requires surgical proficiency in mouse eye enucleation and tissue handling.
- Needs access to fixation reagents, validated shipping containers, and compliance with shipping regulations.
- Demands cross-site standardization of collection and documentation protocols.
- Adaptable to both unfixed and perfusion-fixed tissue workflows as supported by the protocol.
- Dependent on institutional and governmental guidelines for biological sample transport.
