Bildgebung der Freisetzung von Neurotransmittern mit zellbasierten Neurotransmitter-Fluoreszenz-Reportern
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:13 Min. • June 17th, 2025
Nehmen Sie eine Maus mit einem Schädelfenster, das eine dünne Schädelschicht enthält, um die Visualisierung des Gehirns zu ermöglichen.
Die Kopfbewegung wird durch eine angebrachte Kopfstange eingeschränkt.
Der Kortex wird mit zellbasierten Neurotransmitter-Fluoreszenz-Reportern (CNiFERs) vorinjiziert, bei denen es sich um Reporterzellen handelt, die den Echtzeit-Nachweis der Freisetzung von Neurotransmittern ermöglichen.
Die CNiFERs exprimieren einen G-Protein-gekoppelten Neurotransmitterrezeptor und einen zytoplasmatischen Kalziumdetektor, der aus einer Kalziumbindungsdomäne besteht, die mit Donor- und Akzeptorfluorophoren fusioniert ist.
Stimulieren Sie den Detektor mit einem Zwei-Photonen-Mikroskop, um eine Donorfluoreszenzemission zu verursachen und die CNiFER-Visualisierung zu ermöglichen.
Neuronale Aktivität, die den Kortex erreicht, bewirkt die Freisetzung von Neurotransmittern.
Diese Neurotransmitter binden an CNiFER-Rezeptoren und aktivieren Signalwege, die die Kalziumfreisetzung aus dem endoplasmatischen Retikulum induzieren.
Das erhöhte zytoplasmatische Kalzium bindet an den Detektor und bewirkt eine Konformationsänderung, die die Fluorophore in die Nähe bringt.
Der Donor übert
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