Transplantation von humanen Interneuronen-Vorläuferzellen in den Hippocampus des Maus-Welpen

Sichern Sie einen betäubten, genetisch veränderten Mäusewelpen in einem stereotaktischen Rahmen mit Ohrstangen in entgegengesetzter Richtung, um Verletzungen zu vermeiden.

Der Hippocampus des Welpen hat reduzierte inhibitorische Interneuronen, was zu einer Übererregung der exzitatorischen Neuronen führt.

Behalten Sie eine flache Kopfhaltung bei und bedecken Sie den Welpen mit Eis, um die Anästhesie zu verlängern.

Desinfizieren Sie den Schädel und identifizieren Sie die Lambda-Naht als Referenzpunkt.

Positionieren Sie die Injektionsnadel an den Zielkoordinaten des Hippocampus.

Erstellen Sie mit einer gebogenen Nadel ein Mikroeintrittsloch und minimieren Sie gleichzeitig die Schädelschäden.

Senken Sie die Nadel auf die Zieltiefe ab und injizieren Sie vom Menschen stammende Interneuronen-Vorläuferzellen mit einer kontrollierten Geschwindigkeit, um Gewebeschäden zu minimieren.

Ziehen Sie die Nadel langsam zurück, um einen Zellrückfluss zu verhindern.

Nehmen Sie den Welpen aus dem Rahmen, wärmen Sie ihn, bis die Bewegung wieder aufgenommen wird, und setzen Sie ihn dann wieder in die Einstreu im Käfig ein.

Die injizierten Vorläuferzellen verteilen sich über den Hippocampus, reifen und integrieren sich in das neuronale Netzwerk. Im Laufe der Zeit verstärken sie die inhibitorische Übertragung, wodurch das exzitatorisch-inhibitorische Gleichgewicht wiederhergestellt wird.

Positionieren Sie den Welpen, indem Sie ihn auf den stereotaktischen Rahmen legen und die Ohrbügel in die entgegengesetzte Richtung verwenden. Reinigen Sie anschließend die Hautoberfläche mit einem weichen, in Ethanol getränkten Tuch. Identifizieren Sie Lambda und setzen Sie die Koordinaten auf der digitalen Anzeigekonsole des stereotaktischen Instruments auf 0.

Nachdem Sie die Hamilton-Spritze auf die gewünschten Koordinaten gebracht haben, verwenden Sie eine um 90 Grad gebogene Insulinnadel, um in den Schädel einzudringen, wodurch ein winziges Loch entsteht. Bringen Sie dann die Hamilton-Spritze nach unten, bis die Nadel den Schädel kreuzt, und 0 die dorsoventrale Koordinate.

Senken Sie die Nadel ab, bis die gewünschten dorsoventralen Koordinaten erreicht sind. Ziehen Sie die Nadel langsam zurück, sobald die Stammzellen injiziert wurden. Beenden Sie den Eingriff, indem Sie den Welpen mit den Händen aufwärmen, bis er sich zu bewegen beginnt, bevor Sie ihn der Mutter zurückgeben.