JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:07 Min. • June 17th, 2025
Beginnen Sie mit einer Glioblastom-Gewebeschnitte, die aus einem chirurgisch exzidierten Tumor gewonnen wurde.
Bewahren Sie die Gewebescheibe in einem Kulturmedium auf, um das Überleben der Zellen zu unterstützen.
Tumorzellen innerhalb der Scheibe exprimieren ein grün fluoreszierendes Protein (GFP), das die Visualisierung von Tumorzellen während der Zellmigration erleichtert.
Legen Sie die Kulturplatte mit den Gewebescheiben auf den Tisch des konfokalen Mikroskops.
Positionieren Sie einen Inkubator auf der Bühne, um die Temperatur des Mediums zu halten.
Wählen Sie ein Objektiv aus und visualisieren Sie die Schnittkulturen unter dem Mikroskop.
Mikroskope nutzen Laserlicht, um die fluoreszierenden Proteine in den Zellen anzuregen.
Scannen Sie nun die Probe Schicht für Schicht, um Bilder in verschiedenen Tiefen aufzunehmen.
Stapeln Sie die Bilder, um eine detaillierte 3D-Darstellung der Zellen zu erstellen.
Erfassen Sie dann in regelmäßigen Abständen Z-Stack-Bilder, um die Bewegung und Richtung der Zellen zu verfolgen und so die Migration von Tumorzellen im Laufe der Zeit zu untersuchen.
Stellen Sie die Schale in einen 37 Grad heißen, mit 5 % CO2 versiegelten Mikroskoptisch-Inkubator eines konfokalen Mikroskops. Verwenden Sie ein 10-faches Luftobjektiv mit großem Arbeitsabstand in Verbindung mit Einzel- oder Multiphotonen-Bildgebung, um dreidimensionale, zeitaufgelöste Bilder der Zellmigration aufzunehmen. Visualisieren Sie den Schnitt mit dem Mikroskop und lokalisieren Sie ein geeignetes Feld mit einer ausreichenden Dichte an fluoreszenzmarkierten Tumorzellen zwischen dem Schnittrand und der Mitte des Gewebes. Stellen Sie dann im mehrdimensionalen Analysemodus der Bildgebungssoftware die Mitte des Z-Stapels so ein, dass alle abzubildenden Positionen ein sichtbares fluoreszierendes zelluläres Signal enthalten. Legen Sie für jede Z-Stack-Erfassung einen angemessenen Zeitpunkt fest.