Diagnose Lungentuberkulose mit dem Xpert MTB / RIF-Test

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, innerhalb von zwei Stunden Mycobacterium tuberculosis und Rifampicin-Resistenz in ausgespucktem Sputum oder konzentrierten Sputum-Sedimenten gleichzeitig nachzuweisen. Beginnen Sie mit einem einfachen, äußerst wirksamen Protokoll zur Probendekontamination. Anschließend wird jede aufbereitete Probe in eine Einweg-Expertenkartusche, M-T-B-R-I-F, überführt, die PCR-Reagenzien enthält und den PCR-Prozess beherbergt.

Laden Sie die Kartuschen in ein Gene-Expert-DX-System ein und starten Sie die ultrasensitive HEMI-nested-PCR zur gleichzeitigen Detektion von Mycobacterium tuberculosis und Rifampicin-Resistenz. Schließlich lesen Sie die Testergebnisse ab und melden Sie diese an den behandelnden Arzt. Der Expert-MTPR-Assay ist zur Verwendung mit Proben von Patienten bestimmt, bei denen klinisch ein Verdacht auf Tuberkulose der Lunge besteht und die die in dem Unternehmenstext beschriebenen Kriterien erfüllen.

Beachten Sie, dass es nicht zur Überwachung der Wirkung einer medikamentösen Therapie verwendet werden sollte. Crystal. Ein Techniker aus meinem Labor wird nun die Protokoll gemäß Standard zwei der internationalen Standards für die Tuberkulosebehandlung demonstrieren. Sammeln Sie zwei Proben zur bakteriologischen Untersuchung von jedem Patienten, bei dem ein Verdacht auf eine pulmonale Tuberkulose besteht.

Weisen Sie jedem Testprobe ein Modul des Genexpert-DX-Systems zu, und beschriften Sie jede Kartusche mit der Proben-ID. Überführen Sie nun für jeden Probentest ein Milliliter Sputum mit einer weiteren sterilen Transferpipette in ein 15-Milliliter-Konischrohr mit Schraubverschluss. Geben Sie zwei Milliliter M-T-B-R-I-F-Probenreagenz hinzu.

Setzen Sie den Deckel kräftig auf. Schütteln Sie das Röhrchen 10 bis 20 Mal. Danach stellen Sie das Röhrchen nach dem kräftigen Schütteln fünf Minuten lang bei Raumtemperatur aufrecht hin.

Auch hier erneut 10 Minuten bei Raumtemperatur anstellen. Überprüfen Sie, dass alle Proben ED sind und keine sichtbaren Klumpen von Sputum enthalten. Beschriften Sie zunächst die Kartuschen mit der Proben-ID jedes Sputum-Sedimentproben; geben Sie zu jeder Sedimentprobe 1,5 Milliliter M-T-B-R-I-F-Probenreagenz und überführen Sie 0,5 Milliliter in ein 15-Milliliter-Konischrohr mit Schraubverschluss. Setzen Sie den Deckel wieder auf, wirbeln Sie 30 Sekunden im Vortex und stellen Sie das Gefäß danach für fünf Minuten aufrecht.

Durch Vortexen mischen, das Röhrchen 10 Minuten aufrecht stehen lassen. Die verflüssigten Proben auf das Fehlen von Sputumklumpen überprüfen. Das Etikett auf den Röhrchen mit den entsprechenden Kassetten abgleichen.

Öffnen Sie die Kartusche nicht, bevor Sie bereit sind, den Test durchzuführen, und verwenden Sie die Kartusche innerhalb von 30 Minuten nach dem Öffnen des Kartuschenverschlusses. Saugen Sie mit der sterilen Transferpipette die verflüssigte Probe so lange auf, bis der Meniskus oberhalb der Mindestmarkierung liegt. Geben Sie die Probe langsam in die Kartusche ein.

Schließen Sie den Kartuschen-Deckel. Starten Sie den Test innerhalb von 30 Minuten nach Zugabe der Probe zur Kartusche. Schalten Sie zuerst den Computer und anschließend das Gerät auf dem Schreibtisch ein.

Doppelklicken Sie das Gene Expert DX-Symbol. Melden Sie sich am Systemsoftware an. Wählen Sie „Test erstellen“, um das Dialogfeld zum Scannen des Kartuschen-Barcode zu öffnen.

Geben Sie dann die Proben-ID ein und scannen Sie den Barcode auf der Kartusche. Wenn das Fenster „Test erstellen“ erscheint, klicken Sie auf „Test starten“ und geben Sie das Kennwort in das Dialogfeld ein. Öffnen Sie nun die Tür des Gerätemoduls und laden Sie die Kartusche ein.

Schließen Sie die Tür, um den Test zu starten. Wenn das grüne Licht erlischt, ist der Test abgeschlossen. Öffnen Sie die Modultür und nehmen Sie die Kartusche heraus, sobald das System die Türverriegelung freigegeben hat.

Entsorgen Sie die verwendeten Kartuschen abschließend in den geeigneten Abfallbehältern. Jede Testkartusche enthält Reagenzien für die QPCR des Mycobacterium-tuberculosis-Komplexes zur Rifampicin-Resistenz sowie die entsprechenden experimentellen Kontrollen. Die Sondentestkontrolle überprüft die Rehydratation der Reagenzien, die Befüllung der PCR-Röhrchen in der Kartusche, die Integrität der Sonde und die Stabilität des Farbstoffs.

Die Probenaufarbeitungskurve dient als positive Kontrolle für eine ausreichende Aufarbeitung der Zielbakterien und zeigt außerdem das Vorhandensein eventueller PCR-Inhibitoren an. Die Primer sind so konzipiert, dass sie zwischen der konservierten Wildtyp-Sequenz und Mutationen im Kernbereich des RPOB-Gens, die mit RIF-Resistenz assoziiert sind, unterscheiden. Die CT-Werte sind umgekehrt proportional zur Konzentration der Ziel-M-T-B-D-N-A-Vorlage in der Testprobe.

Im Dialogfeld mit dem Testergebnis wird angegeben, dass die MTB-Ziel-DNA in dieser Patientenprobe nachgewiesen wurde und eine Resistenz gegen Rifampicin nicht festgestellt wurde. Die MTB-Ziel-DNA wird in geringen Mengen nachgewiesen, wobei ein Hinweis auf Rifampicin-Resistenz vorliegt. Beide Kontrollen SPC und PCC erfüllen die vorgegebenen Akzeptanzkriterien.

Das Ergebnis dieses Assays wird als ungültig betrachtet, da die SPC negativ ist und keine PCR-Produkte vorhanden sind. Entweder wurde die Probe nicht ordnungsgemäß verarbeitet oder die PCR wurde inhibiert. Wiederholen Sie den Assay.

Wie Sie im Video-Test gesehen haben, ist die Methode standardisiert und erfordert nur einen mäßigen Laboraufwand sowie eine moderate Ausbildung. Daher glaube ich, dass der Experten-M-T-B-R-F-Assay das Potenzial besitzt, standardisierte, empfindliche und äußerst spezifische Diagnosetests sowohl für Tuberkulose als auch für Rifampicin-Resistenz an allen Versorgungspunkten universell zugänglich zu machen.