Tüm Dağı Muscle Analizi ile tekrarlanabilir Fare Siyatik Sinir Ezilme ve Rejenerasyon daha sonraki Değerlendirme

Bu prosedürün genel amacı, siyatik sinir ezme işleminin basit ve tekrarlanabilir bir yöntemini ve siyatik sinir ezilmesi sonrası kas reinnervasyonunun bütün mount analizini göstermektir. Bu işlem, öncelikle, sinire iyi erişim sağlamak için cerrahi ekartörlerin uygun şekilde yerleştirilmesini içeren siyatik sinirin açığa çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, sinir hemostat pens ile ezilir ve kömür yardımıyla işaretlenir.

Ardından, arka ekstremiteden siyatik sinir tarafından innerve edilen bireysel kasları çıkarın. Son adım, immün boyama sonrası bütün bağlama (whole mount) analizi için bireysel kasların diseke edilmesidir. Sonuç olarak, tekrarlanabilir siyatik sinir ezilmesinin basitçe gerçekleştirilebileceği ve sonraki rejenerasyonu analiz etmek için kas bütün bağlama örneklerinin kullanılabileceği gösterilmiştir.

Bu prosedürün temel avantajı, siyatik siniri ezmek ve ardından aksonal rejenerasyonu skorlamak için basit ve tekrarlanabilir bir teknik sunmasıdır. Postoperatif ağrıyı minimize etmek için, fareyi kg başına 100 miligram ketamin ve kg başına 10 miligram ksilazin içeren bir kokteylin intraperitoneal enjeksiyonu ile anestezi yaparak prosedüre başlayın. Fareye ayrıca kg başına 10 miligram meloksikam şeklinde subkütan enjeksiyon uygulanır.

Ardından, cerrahi bir tıraş makinesi kullanarak her iki arka bölgeyi dikkatlice tıraş edin. Daha sonra, tüylerin tamamen temizlenmesi için tüy dökücü krem uygulayın. Cildi, steril pamuklu bir aplikatör ve Betadine cerrahi temizleme solüsyonu ile temizleyin.

Ardından, gözlere steril pamuk uçlu bir aplikatör ile oftalmik pomad uygulayın. Fareyi, önceden ısıtılmış bir homeotermik battaniye üzerindeki temiz bir paslanmaz çelik plaka üzerine yerleştirin ve hayvanın vücut sıcaklığını 37 °C'de tutun. Daha sonra tüm ekstremiteleri bantla sabitleyin.

Arka ekstremiteyi, diz eklemi gövdeyle dik açı oluşturacak şekilde simetrik olarak dikkatlice konumlandırın. Ardından, cerrahi alanı mikroskop altında steril bir örtüyle örtün. Orta hattı boyunca yarı dairesel bir insizyon yapın.

Cildi alttaki kas dokusundan nazikçe ayırın ve ara ara üzerine katlayın. Prosedür sırasında cerrahi bölgeyi nemli tutmak için yaklaşık 0,1 milliliters steril salin uygulayın. Ardından, gluteus maximus ile biceps femoris'in anterior başı arasındaki fasyal planı açın.

Cerrahi kontrol için siyatik sinir açığa çıkarılır. Kontralateral siyatik sinir ortaya çıkarılmalı ve mobilize edilmeli, ancak sağlam bırakılmalıdır. Ardından gluteal kaslar tekrar yerleştirilip dikilmelidir.

Ekartörler kullanarak deneysel siyatik siniri aynı şekilde açığa çıkarın. Görselleştirmeyi kolaylaştırmak için, siyatik siniri çevreleyen bağ dokusundan bir iridektomi makası yardımıyla nazikçe serbest bırakın.

Ardından, siniri süper ince hemostatik pensetin alt çenesine yerleştirmek için ince 5 45 pensini kullanın ve üç fasyayı birbirinin üzerine değil, yan yana hizalayın. Hemostatik pensetlerin uçlarından 1,5 milimetre uzaklıkta bir işaretle oyulmuş olduğu görülür. Ezme işleminden önce, siyatik sinirin en dış kısmını bu işaretle aynı hizaya getirin.

Bu işlem, ezilme genişliğinin tekdüze olmasını ve sinirin, ezme kuvveti nedeniyle düzleştiğinde hemostatik penslerin uçlarının dışına taşmamasını sağlar. Sinir pens uçlarını aşarsa, sinir sadece kısmen ezilmiş olur. Ezilme bölgesini işaretlemek için önceden karbon tozuna batırılmış ikinci bir hemostatik pens çifti kullanın.

Sinyirleri aynı ezme bölgesinde, üç klikte 15 saniye boyunca ezin. Karbon işaretlemesi ilk ezme sınırının ötesine geçmemelidir. Bu durum, özellikle ezme bölgesinin hassas şekilde işaretlenmesi gerekiyorsa, forsepslerin önceden karbona batırılması ve cerrahi bölgede yaygın karbon oluşumunun önlenmesi açısından önemlidir.

Penseti toz karbon içinde açın. Ardından nazikçe kapatın. Hemostatlarn dış tarafındaki karbonu silmek için steril gazlı bez kullanın.

Ezme yüzeylerinin toz karbon ile eşit şekilde kaplandığını doğrulamak için forsepsi en az üç kat büyütme altında kontrol edin. Gerekiyorsa, forsepsler tekrar daldırılır ve silinir; ardından gluteal kas yapısını karşı taraf ile aynı şekilde yeniden yerleştirin ve dikin. Son olarak, dokuz milimetrelik refleks klipsleri kullanarak cilt insizyonunu kapatın.

Dokuz milimetrelik refleks kliplerin hareketi kısıtladığı görülürse, daha küçük refleks klipler veya altı adet aut sütür kullanılabilir. Bunun yerine, fare kurban edildikten sonra; arka bacakta bulunan tibias anterior extensor digitorum longus, peroneus longus ve soleus kaslarını, bağ dokularından siyah sard kaplı bir kaba iğneleyerek dikkatlice çıkarın.

Ardından bunları PBS ile yıkayın. Sonrasında, 30 dakika boyunca %4 paraformaldehit ile fikse edin. Her bir kası siyah sard kaplı bir Petri kabında diseke etmek için, iridektomi makaslarını kullanarak tendonlarını çıkarın.

Ardından, iç kas liflerini soyarak kasları inceltin. Son plak bantları da dahil olmak üzere kasın dış yüzeyini dikkatlice koruyun. Daha sonra, elde edilen kasları vector shield ve 22 x 40 milimetrelik cam lameller kullanarak artı lamlar üzerine monte edin ve iki kenarını şeffaf oje ile mühürleyin. Lam üzerine düzgün şekilde monte edildiklerinde, son plak bantları lamellerle temas halinde olmalıdır.

Sol arka ekstremitede in situ bir ezilme bölgesine örnek verilmiştir. Ezilme bölgesi siyah karbon ile işaretlenmiştir. Yıldız işareti, uyluk kaslarını innerve eden ve faydalı bir referans noktası görevi gören tibial sinir dalını belirtmektedir.

Ezilme cerrahisi sırasında, siyatik sinirin tibial dalı maviyle, peroneal dalı yeşil ve srel dalı sarıyla belirtilmiştir. Bu yarı ince kesit, hemostatik forseps ile gerçekleştirilen tam bir ezilmeyi göstermektedir. Ok uçları buradaki ezilmiş lifleri işaret etmektedir.

Açılı pensle gerçekleştirilen eksik bir ezilme, başka bir yarı ince kesitte gösterilmiştir. Ok başları tekrar ezilmiş lifleri, oklar ise korunmuş aksonları göstermektedir. Bunlar, bütün monte kaslardan elde edilen görüntülerin işlenmiş halleridir.

Bağ dokusunun uzaklaştırılması ve ardından gerçekleştirilen inceltme işleminden sonra, her kas üzerindeki nplate bantları belirlenmiştir. Burada, siyatik sinir ezilmesinden 14 gün sonraki komplet tutunmuş sous kası gösterilmektedir.

Oklar, bir akson tarafından yeniden innerv edilmiş nöromüsküler kavşak bölgelerini göstermektedir. Burada denerve edilmiş bir nöromüsküler kavşağın gösterimi yer almaktadır. Gap 43 pozitif Schwann hücresi uzantıları ok uçlarıyla belirtilmiştir.

Bu denerve nöromüsküler bileşke içerisinde hiçbir akson görülmemektedir. Bu videoyu izledikten sonra, statik sinirin tekrarlanabilir şekilde nasıl ezileceği ve rejenerasyon analizi için kas hormon preparatlarının nasıl hazırlanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.