Name: Ausbau zytotoxische T-Lymphozyten aus Nabelschnurblut, dass Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr-Virus und Adenovirus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 18 s
Description: Erfahren Sie, wie man GMP-konforme, virus-spezifische zytotoxische T-Lymphozyten aus Nabelschnurblut generiert. Diese Methode nutzt dendritische Zellen und EBV-LCL zur Stimulation für Immuntherapie.

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Diese Arbeit wurde durch einen Dan L. Duncan kollaborative Forschungsstipendium (CMB und EJS), der National Heart, Lung, and Blood Institute (US4HL081007), ein Leukemia and Lymphoma Society Clinical Research Scholar Award (CMB), und dem National Cancer Institute unterstützt (RO1 CA06150816; EJS).

Ein. Mononukleären Zellen Isolation (Tag 0) <ol><li> Legen Spitze von weiblichen Luer-Adapter in die Steckdose Port des 20% Anteil an der Nabelschnurblut-Einheit legen Spritze und entfernen Sie das Blut. Die aufgetauten Blut 20 ml RPMI erwärmt in 50 ml Zentrifugenröhrchen. Spülen Nabelschnurblut Beutel mit 5 ml RPMI und Transfer zum gleichen Zentrifugenröhrchen. </li><li> Zentrifuge Zellen für 10 Minuten bei 400 x g beträgt. Absaugen des Überstandes. </li><li> Resuspendieren Zellen in 20 ml warmem RPMI. Schicht von Zellen auf 15 ml Lymphoprep in 50 ml Zentrifugenröhrchen. Zentrifuge 40 Minuten bei 400 x g. </li><li> Ernten die Schnittstelle mit den mononukleären Zellen und waschen in 20 ml RPMI. Zentrifuge für 10 Minuten bei 450 x g. </li><li> Absaugen des Überstandes und waschen in 20 ml RPMI. Zählen von Zellen und Spin für 5 Minuten bei 400 x g. </li><li> Absaugen des Überstandes und resuspendieren Zellen bei 5 x 10 6 mononukleären Zellen / ml CellGenix DC Medien (Serum-frei). Entfernen 1 mL für EBV-LCL-Generation und in 15 mL centrifuge Röhre. </li></ol> 2. Dendritische Zelle Generation (beginnend am Tag 0) <ol><li> Platte 2 ml Zellen (bereits bei 5 x 10 6 Zellen / ml Medium DC) pro Vertiefung in eine Platte mit 6 Vertiefungen. Lassen Sie im Inkubator für 1-2 Stunden. </li><li> Nach 1-2 Stunden, Auswaschen der nicht-adhärenten Zellen durch Waschen 3-4 mal mit PBS. Sammeln Sie die nicht-adhärenten Zellen und einfrieren. 2 ml / Vertiefung des DC Medien mit 1000 U / ml IL-4 und 800 U / ml GM-CSF. </li><li> 3-4 Tage nach DC Initiierung, füllt die IL-4 und GM-CSF durch Zugabe von 100 ul / Vertiefung von Medien mit einer Endkonzentration von 1000U/mL IL-4 und 800 U / ml GM-CSF. </li><li> Am Tag 5-6, Ernte der DC durch Abkratzen der gut mit einer Pipette. Zählen Sie die großen Zellen und Zentrifuge für 5 Minuten bei 400 x g. Aspirate Medien und resuspendieren DC bei 2x10 6 Zellen / ml DC Medien. 0,5 mL / Well einer 24-Well-Platte. </li><li> Transduzieren die DC mit dem Ad5f35pp65 Vektor bei einer MOI pro Zelle von 10 infektiösen Einheiten. Fügen vector zu jedem Well in einer 24-Well-Platte. Inkubieren Zellen für 1,5 Stunden. Nach 1,5 Stunden, 1,5 mL / Well DC Medien mit: 1000 U / mL IL-4, 800 U / ml GM-CSF, 10 ng / mL TNF-alpha, 1 ug / mL PGE-1, 100 ng / mL IL-6, und 10 ng / ml IL-1beta. Diese Zytokine reifen die DCs. </li></ol> 3. Erzeugung von EBV-LCL (beginnend am Tag 0) <ol><li> Zentrifugieren enthaltend die 5 x 10 6 mononukleären Zellen. Fügen Sie 200 ul konzentrierter EBV B95.8 Überstand und 1,8 ml komplettem Medium (RPMI + 10% FBS + 2mM L-Glutamin) enthält Cyclosporin (1 pg / mL). </li><li> Aliquot 100 ul Zellen in 10 Wells einer 96-Well-Platte und in 200 ul 5 Vertiefungen. 100 ul von kompletten media + Cyclosporin zu den Vertiefungen, die nur 100 ul der Zellen. Füllen restlichen Vertiefungen mit sterilem Wasser. </li><li> Führen Sie das LCL wöchentlich und erweitern von einer 96-Well-Platte auf eine 24-Well-Platte nach ~ 2 Wochen. Nach einer weiteren Woche zu einer T25-Flasche übertragen und in der anschließenden Woche Transfer zuma T75-Flasche. In diesem Stadium ist es empfehlenswert, dass Sie Aliquots von LCL einfrieren. Es dauert in der Regel 1 Monat bis eine ausreichende Anzahl von LCL generieren. </li></ol> 4. CTL Initiation - 7 Tage nach Beginn der DCs <ol><li> Ernte DCs und strahlen bei 30 Gy. Waschen Sie 4 x und zählen. Resuspendieren DC in T-Zell-Medium mit humanem Serum (45% RPMI, 45% der CLICK, 10% humanem Serum, 2 mM L-Glutamin) bei 1 x 10 5 DCs / ml. </li><li> Auftauen nichtadhärenten Zellen aus Schritt 2.2. Waschen der Zellen und zu zählen. Resuspendieren bei 2 x 10 6 nicht-adhärenten Zellen / ml in T-Zell-Medium, das humanes Serum. Fügen Sie 10 ng / ml IL-7 und IL-12 und 5 ng / ml IL-15. 1 mL Zellen pro Well in einer 24-Well-Platte. 1 mL DC pro Vertiefung. Füllen Sie leere Vertiefungen von 24-Well-Platte mit sterilem Wasser. </li><li> 7 Tage nach der T-Zell-Initiierung, aufgeteilt Futter und / oder die Zellen mit T-Zellen-enthaltenden Medien Humanserum. </li><li> 9-12 Tage nach T-Zell-Initiation, frieren die T-Zellen, bis die LCL bereit sind. </li><li> Once LCL ausgebaut wurden und in T75-Flaschen passagiert, transduzieren das LCL durch Zentrifugation für 5 Minuten bei 400 x g beträgt. Hinzufügen des Vektors zu dem Zellpellet bei einer MOI von 100 infektiösen Einheiten pro Zelle. Inkubieren für 1,5 Stunden. Nach 1,5 Stunden, in komplettem Medium auf 5 x 10 5 LCL / mL resuspendieren und 2 mL pro Vertiefung einer 24-Well-Platte. 12 </li><li> Nach 2 Tagen ernten die LCL und strahlen bei 40 Gy. Waschen Sie 4 x und zählen. Resuspendieren des LCL in T-Zell-Medien mit menschlichem Serum bei 2,5 x 10 5 Zellen / ml. 1 mL LCL pro Vertiefung einer 24-Well-Platte. Fügen Sie außerdem 5 x 10 6 LCL einer Grex40 Kultur Gerätes sowie 5 ng / mL IL-15. 13 </li><li> Ernten Sie die T-Zellen. Zentrifuge für 5 Minuten bei 400 xg, den Überstand aspirieren und resuspendieren in T-Zell-Medien mit menschlichem Serum bei 1 x 10 6 T-Zellen / mL. Add 5 ng / mL IL-15 und geben Sie 1 ml / Vertiefung von T-Zellen (insgesamt 1 x 10 6 T-Zellen) der LCL, die bereits in den 24-Well-Platte. In der Grex40 bringendas Gesamtvolumen der Medien bis 30 mL. </li><li> Am Tag 3-4 nach der Stimulation, wenn die Zellen konfluent sind dann teilen (in der Platte) 1:1 und frisches Medium mit 50 U / ml IL-2. Wenn sie nicht konfluent sind dann einfach absaugen ½ die Medien und ersetzen mit Medien, die 50 U / ml IL-2. In der Grex40 absaugen die Hälfte der Medien, ersetzen Sie sie durch frische Medien, und 50 U / ml IL-2. </li><li> Am Tag 7, wie in Schritt 4,6 wiederholen, sondern verwenden IL-2 am Tag der Stimulation, nicht IL-15. </li></ol> 5. Repräsentative Ergebnisse Eine schematische Darstellung der GMP-konformen FDA-zertifizierten Fertigungsstätte Protokoll ist in Abbildung 1 dargestellt. Der Vorgang dauert etwa 50 Tage. Typische Methoden zur Erzeugung von virus-spezifischen T-Zellen zu erweitern bereits vorhandene Gedächtnis-T-Zellen, jedoch fehlt Nabelschnurblut Virus-erfahrenen T-Zellen und deshalb müssen wir prime naiven T-Zellen ex vivo. Hierzu verwenden wir dendritischen Zellen als auch die Zytokine IL-7, IL-12 und IL-15,die zum Erzeugen viralen Spezifität. Nach 3 Stimulationen, sollte die Ausbeute über 100x10 6-Zellen sein. Wenn genügend Zellen zur Verfügung stehen, können zusätzliche Stimulationen durchgeführt, bis die gewünschte Anzahl von CTLs zur Verfügung stehen. Die Mehrheit dieser Zellen sollten CD3 + mit einem Gemisch aus CD4 + und CD8 + T-Zellen sein. Es sollte weniger als 15% NK-Zellen (CD3-/CD56 +) und weniger als 1% CD19 + B-Zellen (Abb. 2). Das expandierte CTL sollte das pp65 von CMV, Hexon und Penton erkennt aus Adenovirus, sowie zahlreiche EBV-Antigene, die auf EBV-LCL exprimiert werden. Wenn in einem ELISPOT-Assay getestet, CTL sollte sezernieren mehr IFN-? in Reaktion auf diese Antigene als irrelevant Antigene (Abbildung 3). Die CTL sollte auch lysieren virale Peptid-gepulsten Ziele wie PHA-Blasten. In einem 51 Cr-Release-Assay sollte CTL lysieren LCL, CMVpp65-gepulste und Adenovirus Hexon-und /oder Penton-gepulste Ziele, aber keine Ziele mit irrelevanten Peptide (Abbildung 4) gepulst. <img src="/files/ftp_upload/3627/3627fig1.jpg" alt="Abbildung 1."/> Abbildung 1. Generation von Multi-virus-spezifischen CTL aus Nabelschnurblut. Schematische Darstellung des gesamten Prozesses der CTL Herstellung aus Nabelschnurblut. Zuerst werden die Nabelschnurblut mononukleäre Zellen aus dem 20%-igem Anteil des fraktionierten Nabelschnurblut Gehäuse isoliert. Mit Ausnahme von 5x10 6 Zellen, die für LCL Generation gespeichert werden, werden alle Zellen dann in dendritische Zelle Medien für 1-2 Stunden ausplattiert, an welchem ​​Punkt die nicht-adhärenten Zellen geerntet und eingefroren. Die DC werden dann zugeführt DC Medien mit IL-4 und GM-CSF. Nach 5 Tagen Kultur werden die DC gereift und transduziert mit einem adenoviralen Vektor, der das immundominante CMV pp65. Bei der Initiierung werden diese DC mit den nicht haftenden Zellen sowie den Zytokinen IL-7, IL-12 in Kombination,und IL-15. Bei nachfolgenden Stimulationen wird derselbe adenovirale Vektor verwendet, die EBV-LCL, die als Antigen-präsentierende Zellen verwendet werden transduzieren. IL-15 ist an der zweiten Stimulation und IL-2 danach verwendet. <img src="/files/ftp_upload/3627/3627fig2.jpg" alt="Abbildung 2."/> Abbildung 2. Phänotyp der resultierenden T-Zellen. Gezeigt ist der Prozentsatz an lebenden Zellen in der Lymphozyten-Gate enthalten. CTL sind CD3 + und CD4 + oder CD8 + aber weitgehend CD3-/CD56- und CD19-. <img src="/files/ftp_upload/3627/3627fig3.jpg" alt="Abbildung 3."/> Abbildung 3. T-Zell-Funktionalität. T-Zell-Spezifität wurde durch IFN-γELISPOT getestet. T-Zellen wurden mit überlappenden Peptiden, die die gesamte Protein von Hexon, Pentonbasis, pp65 gepulst und das irrelevante IE-1 Antigens. CTL allein zeigt Medien allein. Autologen LCL bestrahlt wurden und fügte bei 1x10 5 / well. Dargestellt ist die Kassamittelkurs bildende Zelle count der dreifachen Wells. <img src="/files/ftp_upload/3627/3627fig4.jpg" alt="Abbildung 4."/> Abbildung 4. Cytolytische Aktivität von CTL. Die Fähigkeit der resultierenden CTL-Ziele zu exprimierenden viralen Antigenen lysieren wurde in einem 51 Cr-Assay getestet. 51 Cr-markierten autologen PHA-Blasten mit überlappenden Peptide, die die gesamte Antigen oder 51 Cr-markierten autologen LCL wurden kokultiviert mit CTL wurden gepulst. Nach 4 Stunden wurde Gamma-Release auf einem Gamma-Zähler gezählt.

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Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

<html> Aktuelle Strategien zur Steuerung virale Infektionen nach CBT soll wirksam sein kann, aber sie sind mit erheblicher Toxizität verbunden sind, sind teuer und nicht verleihen langfristigen Schutz gegen spätere Infektionen. In der Tat kann die Verwendung einiger antiviralen Medikamenten begrenzen die Expansion des Virus-spezifischen T-Zellen, die sonst Schutzschicht. 14 weitere Option ist die Infusion von Donor-derived Virus-spezifischen T-Zellen. Wir und andere haben gezeigt, dass solche T-Zellen sichere,...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namen Reagenz </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 21870-076 </td></tr><tr><td> DC Medien </td><td> CellGenix </td><td> 20801-0500 </td></tr><tr><td> EHAA (Anweisungen-Medium) </td><td> Irvine Scientific </td><td> 9195 </td></tr><tr><td> Human Serum </td><td> Gemini Bio Produkte </td><td> 100-110 </td></tr><tr><td> Gasdurchlässige Cultureware 18 </td><td> Wilson-Wolf </td><td> 80040S </td></tr><tr><td> IL-2 </td><td> Chiron (TCH Pharmacy) </td><td></td></tr><tr><td> IL-12 </td><td> NCI / CTEP </td><td></td></tr><tr><td> IL-15 </td><td> CellGenix </td><td> 1013-050 </td></tr><tr><td> IL-7 </td><td> R &amp; D </td><td> AFL207 </td></tr><tr><td> IL-1beta </td><td> R &amp; D </td><td> AFL201 </td></tr><tr><td> IL-6 </td><td> ZelleGenix </td><td> 1004-050 </td></tr><tr><td> GM-CSF </td><td> TCH Pharmacy </td><td></td></tr><tr><td> IL-4 </td><td> R &amp; D </td><td> <a href="http://www.rndsystems.com/pdf/AFL204.pdf" target="_blank">AFL204</a> </td></tr><tr><td> TNF-alpha </td><td> R &amp; D </td><td> AFL210 </td></tr><tr><td> Ad5f35pp65 </td><td> BCM CAGT Vector Production Facility </td><td></td></tr><tr><td> Plasma Transfer mit Luer-Adapter-Set </td><td> Charter Medical </td><td> 89-550 66j </td></tr><tr><td> Lymphoprep </td><td> Nycomed </td><td> 1114550 </td></tr></tbody></table>

ausbau zytotoxische t-lymphozyten aus nabelschnurblut, dass target cytomegalovirus, epstein-barr-virus und adenovirus

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

Virus-Infektionen nach einer Stammzelltransplantation gehören zu den häufigsten Todesursachen, besonders nach Nabelschnurblut (CB) Transplantation (CBT), wo die CB enthält keine nennenswerte Zahl von Virus-erfahrenen T-Zellen, die den Empfänger vor einer Infektion schützen können 1. - Wir und andere 4 gezeigt, dass Virus-spezifische CTL von seropositiven Spendern erzeugt und an den Empfänger infundiert haben sind sicher und schützend. 5-8 jedoch bis vor kurzem Virus-spezifischen T-Zellen nicht aus Nabelschnurblut erzeugt werden, was wahrscheinlich auf die Abwesenheit von virus-spezifischen Gedächtnis-T-Zellen. In dem Bemühen, besser zu imitieren die in vivo Bedingungen Priming von naiven T-Zellen haben wir ein Verfahren, CB-abgeleitete dendritische Zellen (DC) transduziert mit einem adenoviralen Vektor (Ad5f35pp65), enthaltend die CMV immundominanten pp65 verwendet, daher T-Zell-Spezifität Antreiben Richtung CMV und Adenovirus. 9 Bei der Initiierung, verwenden wir diese marierte DCs sowie CB-abgeleiteten T-Zellen in Gegenwart der Cytokine IL-7, IL-12 und IL-15. 10 In der zweiten Stimulation verwendeten wir EBV-transformierten B-Zellen oder EBV-LCL, die sowohl exprimieren latente und lytische EBV-Antigene. Ad5f35pp65-transduzierten EBV-LCL werden verwendet, um die T-Zellen in Gegenwart von IL-15 bei der zweiten Stimulation zu stimulieren. Nachfolgende Reize verwenden Ad5f35pp65-transduzierten EBV-LCL und IL-2. Von 50x10 6 CB mononukleären Zellen können wir nach oben von 150 x 10 6 Virus-spezifischen T-Zellen, Antigen-gepulste Freisetzung Targets und Zytokinen in Reaktion auf Antigenstimulation lysieren erzeugen. 11. Diese Zellen wurden in einer GMP-gerechte Weise hergestellt unter Verwendung nur die 20%-Anteil an einer fraktionierten Nabelschnurblut Einheit und haben für den klinischen Einsatz übersetzt worden.

Hier beschreiben wir die erste Good Manufacturing Practice (GMP)-kompatiblen Verfahren zur Herstellung virus-spezifische zytotoxische T-Lymphozyten (CTL) aus Nabelschnurblut, eine Quelle von überwiegend naiven T-Zellen.

Ausbau zytotoxische T-Lymphozyten aus Nabelschnurblut, dass Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr-Virus und Adenovirus

Virusinfektionen nach einer Stammzelltransplantation gehören zu den häufigsten Todesursachen, insbesondere nach einer Nabelschnurbluttransplantation (CB-Transplantation, CBT), bei der ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, aus Nabelschnurblut gewonnene zytotoxische T-Lymphozyten oder CTL zu erzeugen, die Antigene aus mehreren Viren erkennen. Dies wird erreicht, indem zunächst die mononukleären Zellen des Nabelschnurbluts aus dem 20%-Anteil der Nabelschnurbluteinheit isoliert werden. Der zweite Schritt besteht darin, mithilfe der mononukleären Zellen dendritische Zellen, Epstein-Barr-Virus-Lymphoblasten-Zelllinien oder EBV-LCL sowie virus-spezifische CTL zu erzeugen.Die mononukleären Zellen, die die T-Zellen enthalten, werden mit Zellen stimuliert, die mit dem A-five-F-35-PP-65-Vektor transduziert wurden. Der letzte Schritt besteht darin, die Spezifität der multivirus-spezifischen CTL zu bestätigen und die CTL einzufrieren. Letztendlich kann die Spezifität der Expansion der CTL für mindestens ein virales Antigen durch ELISpot-Analyse und Zytotoxizitätsassays bewertet werden.Im Allgemeinen haben Personen, die neu in dieser Methode sind, Schwierigkeiten, da das Volumen des Kernbluts in der 20 %-Fraktion sehr gering ist, was bedeutet, dass nur sehr wenige Zellen zur Verfügung stehen. Das Verfahren ist außerdem recht komplex und beinhaltet die Generi

expanding-cytotoxic-t-lymphocytes-from-umbilical-cord-blood-that

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Eine schnelle, einfache und kostengünstige Protokoll für die Erzeugung von Spender-derived multivirus-spezifische CTLs (RCTL) zur Infusion einer allogenen hämatopoetischen Stammzelltransplantation (HSCT) Empfänger die Gefahr der Entwicklung CMV, Adv. oder EBV-Infektionen. Dieses Herstellungsverfahren ist GMP-konform und sollte die breitere Umsetzung von T-Zell-Immuntherapie über spezialisierte Zentren zu gewährleisten.

Generierung von Multivirus-spezifischen T-Zellen zu verhindern / zu behandeln virale Infektionen nach allogenen hämatopoetischen Stammzelltransplantation

Ein neuer DC unabhängige Methode zur Induktion und Expansion von Antigen-spezifischen T-Zellen beschrieben. HLA A2-Ig Basis künstlicher Antigen-präsentierende Zellen (AAPC) sind mit HLA-A2 restringierte Peptide effizient erweitern CTL verschiedener Antigen-Spezifität geladen. Diese Technologie birgt ein großes Potenzial für die CTL-basierte adoptiven Immuntherapie.

HLA-Ig Basierend Artificial Antigen-präsentierende Zellen für eine effiziente Ex vivo Erweiterung des menschlichen CTL

CD4+ Regulatorische T-Zellen sind potente Immunmodulatoren und erfüllen wichtige Funktionen bei der Immunhomöostase. Der Mangel an diesen Zellen im peripheren Blut macht funktionelle Studien, insbesondere im Zusammenhang mit HIV-1-Infektionen, zu einer Herausforderung. Wir beschreiben hier eine Methode zur Isolierung und Expansion funktioneller CD4+ Tregs aus peripherem Blut von HIV-1-infizierten Personen.

Neue Tools erweitern regulatorischen T-Zellen von HIV-1-infizierten Personen

Neue Generationen von Funktionstests, wie Gamma-Interferon (IFN-γ) ELISpot, die Zytokin-Produktion zu erkennen an der Einzelzellebene und bieten sowohl quantitative und qualitative Charakterisierung der T-Zell-Reaktionen können zum Zell-vermittelten Immunantworten gegen Varicella-Zoster-gerichtet zu bewerten Virus (VZV).

Entwicklung eines IFN-γ ELISPOT-Assay zu beurteilen, Varicella-Zoster-Virus-spezifische Zellvermittelte Immunität nach Nabelschnurblut-Transplantation

Das Ziel dieses Protokolls ist es, pathogenspezifische T-Zellen in klinischer Qualität herzustellen, indem ein automatisiertes Zellanreicherungsgerät der zweiten Generation verwendet wird, das ein geschlossenes Zytokin-Capture-System enthält und kein spezielles Personal oder die Verwendung einer GMP-Einrichtung erfordert. Die erzeugten pp65-spezifischen T-Zellen des Cytomegalievirus können direkt an Patienten verabreicht werden.

Automatisierte Zellanreicherung des Cytomegalovirus-spezifischen T-Zellen für die klinische Anwendung mit der Zytokin-Capture-System

Hier zeigen wir, wie Monozyten durch magnetische Kügelchentrennung aus mononukleären Zellen des peripheren Blutes nach Dichtegradientenzentrifugation von humanem antikoaguliertem Blut isoliert werden. Nach einer 5-tägigen Inkubation werden die menschlichen Monozyten in unreife dendritische Zellen differenziert und sind bereit für experimentelle Verfahren in einer nicht-klinischen Umgebung.

Herstellung von menschlichen Monozyten abgeleiteten Dendritischen Zellen aus Vollblut

Wir stellen Ihnen hier einen Antrag auf eine immunologische Standardtechnik (CFSE gebeizt OT-ich Verbreitung) schnell Adjuvans-vermittelten zytotoxischen T-Lymphozyten (CTL) Generation überwachen sollen in-vivo. Diese schnelle Abschätzung der CTL-Kapazitäten ist nützlich für die Entwicklung der prophylaktische Impfstoffe gegen intrazelluläre Erreger sowie therapeutische krebsimpfstoffe.

Schnelle In-Vivo Beurteilung des Adjuvans der zytotoxischen T-Lymphozyten Generation Fähigkeiten für die Impfstoffentwicklung

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Vorbereitung und der stereotaktischen Verwaltung der allogenen menschlichen Lymphozyten in immungeschwächte Mäuse tragen orthotopen menschlichen primären Hirntumoren. Diese Studie liefert eine Machbarkeitsstudie für die Machbarkeit und die Antitumor-Wirksamkeit von zellulären Immuntherapien Intrabrain geliefert.

Stereotaktische Adoptiv Übertragung von zytotoxischen Immunzellen in murinen Modellen der Orthotopen Human Glioblastoma Multiforme Xenotransplantate

Hier wird ein Protokoll zur wirksamen Unterdrückung der Hepatitis-B-Virus -Replikation (HBV) bei Mäusen unter Verwendung des Adoptivzelltransfers (ACT) von Stammzell-abgeleitetem viralem Antigen (Ag)-spezifischen T-Lymphozyten vorgestellt. Dieses Verfahren kann für eine mögliche ACT-basierte Immuntherapie der HBV-Infektion angepasst werden.

Stammzell-abgeleitete virale Ag-spezifische T-Lymphozyten unterdrücken HBV-Replikation bei Mäusen

Wir skizzieren ein 9-Tage-Protokoll für die Transduktion und Expansion von rhesus-makaken peripheren Mononuklezellen im Blut, das Zellen mit hervorragender Koexpression der Gene von Interesse in ausreichender Anzahl für Infusionsstudien zur Zellwirksamkeit ergibt.

Transduktion und Erweiterung von primären T-Zellen in neun Tagen mit Erhaltung des Zentralen Speicherphänotyps

Vorgestellt wird ein Protokoll für die Expansion von Gamma-Delta (γδ) T-Zell-Arzneimittel. Lymphozyten werden durch Elutriation isoliert und γδ-angereichert mit Zoledronsäure und Interleukin-2. Alpha-Beta-T-Zellen werden mit einem magnetischen Trenngerät in klinischer Qualität erschöpft. Die γδ-Zellen werden mit K562-abgeleiteten, künstlichen Antigen-präsentierenden Zellen ko-kultiviert und expandiert.

Erweiterung und Anreicherung von Gamma-Delta (γδ) T-Zellen aus Apheresed Human Product

Erfahren Sie, wie man GMP-konforme, virus-spezifische zytotoxische T-Lymphozyten aus Nabelschnurblut generiert. Diese Methode nutzt dendritische Zellen und EBV-LCL zur Stimulation für Immuntherapie.

Ausbau zytotoxische T-Lymphozyten aus Nabelschnurblut, dass Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr-Virus und Adenovirus

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