Name: Die CYP2D6-Tiermodell: Wie Autoimmune Hepatitis in Mäusen zu induzieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Lernen Sie die Induktion von Autoimmunhepatitis in Mäusen durch Adenovirus-Infektion mit CYP2D6. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung chronischer Leberentzündung und autoantigenspezifischer Immunantworten.

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Diese Arbeit wird von der Goethe-Universität Frankfurt und einem Zuschuss von der Deutschen Forschungsgemeinschaft unterstützt, um UC

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<li>Krebs, P., Scandella, E., Odermatt, B., Ludewig, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+functional+exhaustion+and+deletion+of+CTL+following+immunization+with+recombinant+adenovirus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Rapid functional exhaustion and deletion of CTL following immunization with recombinant adenovirus.</a> J. Immunol. 174, 4559-4566 (2005).</li>
<li>Hintermann, E., Bayer, M., Pfeilschifter, J., Christen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+delivery+of+the+liver+autoantigen+cytochrome+P450+2D6+chronically+activates+hepatic+stellate+cells+and+induces+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Manuscript+Submitted%22%5BJournal%5D)">Adenoviral delivery of the liver autoantigen cytochrome P450 2D6 chronically activates hepatic stellate cells and induces fibrosis.</a> Manuscript Submitted. , (2011).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

In früheren Studien wurde experimentellen Hepatitis oft berichtet, dass sie nur vorübergehend und viele aktuelle Modelle für autoimmunen Lebererkrankungen auf einem ziemlich komplexe Erkrankung Induktion Protokolle (für Übersichten siehe 3,5) ab. Verwenden Sie z. B. mehrere Modelle transgenen Mäusen, die spezifische Ziel-Antigene und adoptiv übertragen Ziel-Antigen-spezifische, meist TcR-transgenen, T-Zellen 14,15. Oft eine zusätzliche Infektion mit livertropic Viren, Bakterien oder Parasiten ist nötig, Krankheit 16-18 zu induzieren. Alternativ wird die DNA-Impfung mit Plasmiden, die für die Ziel-Antigene, einschließlich CYP2D6 19, verwendet werden, um Hepatitis zu induzieren. Es wird jedoch ein zusätzliche Impfung mit Plasmiden, die für pro-inflammatorische Zytokine, wie IL-12, erforderlich 20. Leider mit einigen wenigen Ausnahmen 15,20 Hepatitis ist nur vorübergehend. Die CYP2D6-Modell 6,21 verwendet eine einfache Methode to induzieren Autoimmun-Hepatitis, indem Sie einfach Infektion von Mäusen mit einem Adenovirus, hCYP2D6, dem wichtigsten Autoantigen in AIH-2 7,8. Lieferung von CYP2D6 durch einen Adenovirus Konstrukt garantiert sowohl eine direkte Ausrichtung der Leber sowie eine lokale Entzündung, die den Abbau von Toleranz fördert. Es ist jedoch wichtig darauf hinzuweisen, dass sowohl der Virustiter sowie die Art der Verabreichung von entscheidender Bedeutung für dieses Modell an ist. Auf der einen Seite, ist Ad-2D6 eine Replikation defizienten Virus, damit, eine ausreichend hohe Titer von Virus benötigt, um eine kritische Menge an Antigen in der Leber zu erzeugen. Auf der anderen Seite könnte eine zu hohe Titer in einem fatalen akutem Leberversagen führen. Darüber hinaus hat es sich bereits erwiesen, dass Infektion von Mäusen durch hohe Titer von Adenovirus auf eine funktioneller Erschöpfung der Immunantwort 22 führt demonstriert. In unserem Modell haben wir eine Kombination von intravenöser und intraperitonealer Infektion, um sowohl die chronische zelluläre Infiltration sowie ext erhaltenensive Fibrose. Wir haben beobachtet, dass die intravenöse Infektion allein noch verursacht massive zelluläre Infiltration, aber keine Fibrose der subkapsulären Region, was darauf hinweist, dass die peritoneale Entzündung aufgrund der intraperitonealen Injektion könnte in der kontinuierlichen subkapsulären Ansammlung von Kollagen (Hintermann &amp; Christen, Manuskript in Vorbereitung) beteiligt sein. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass die beobachtete Leberfibrose Antigen-spezifische ist, da wir nicht erkennen Aktivierung von hepatischen Sternzellen und Ablagerung von Kollagen nach der Infektion mit dem gleichen Virus-Titer von Ad-GFP-oder Ad-Control 23. Die CYP2D6-Modell spiegelt viele Aspekte des menschlichen AIH 1,2, wie chronische Hepatitis durch anhaltende zelluläre Infiltration und Leberfibrose 6 gekennzeichnet. Darüber hinaus zeigt das Vorhandensein von hohem Titer Anti-CYP2D6 Antikörper mit ähnlichen Epitop-Spezifität und Verbreitung 13 bis LKM-1-Antikörper bei der AIH-2-Patienten fanden die Presence einer gemeinsamen chronische Autoimmun-Reaktivität. CYP2D6 ist die wichtigste Antigen in AIH-2, aber es wird nicht von Patienten mit der häufigeren Typ 1 AIH diagnostiziert anerkannt. Darüber hinaus Patienten mit anderen Lebererkrankungen mit autoimmunen Ätiologie, wie der primär biliären Zirrhose (PBC) oder primär sklerosierende Cholangitis (PSC), erzeugen Markenzeichen Autoantikörper mit Spezifität für verschiedene Autoantigene Leber und ihre Lebern zeigen verschiedene pathologische Merkmale Zentrierung auf kleine (PBC ) oder große (PSC) Gallengänge. Dennoch bietet die CYP2D6-Modelle die Möglichkeit, immunpathogenen Mechanismen der chronischen hepatischen entzündlichen Prozessen wie auftretenden autoimmunen Lebererkrankungen, zu wichtigen Akteuren, die die autoimmune Zerstörung der Hepatozyten zu fahren und eine mögliche therapeutische Interventionen zu bewerten, um die Krankheit zu heilen identifizieren beteiligt zu analysieren.

<table border="1"><tbody><tr><td> Bezeichnung des Geräts </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> 23G Nadel </td><td> BD Biosciences </td><td> 300800 </td><td></td></tr><tr><td> 27 ½ G Nadel </td><td> VWR </td><td> 612-0151 </td><td></td></tr><tr><td> 30 ½ G Nadel </td><td> BD Biosciences </td><td> 304000 </td><td></td></tr><tr><td> Alanin-Aminotransferase-Teststreifen (GPT / ALT) </td><td> Roche Diagnostics </td><td> 10 745 138 202 </td><td></td></tr><tr><td> Aspartat-Aminotransferase-Teststreifen (GOT / AST) </td><td> Roche Diagnostics </td><td> 10 745 120 202 </td><td></td></tr><tr><td> Anästhesiegerät Univentor 400 </td><td> <a href="http://www.agnthos.se" target="_blank" >AgnTho die</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Bodenformen, Einweg 37x24x10 mm </td><td> VWR </td><td> 720-0208 </td><td></td></tr><tr><td> Zellsieb 70mm </td><td> VWR </td><td> 734-0003 </td><td></td></tr><tr><td> Kryostat </td><td> Leica </td><td> CM1850 UV </td><td></td></tr><tr><td> Heparinisiertes Kapillarröhren </td><td> Fischer </td><td> 3123987 </td><td></td></tr><tr><td> Objektträger Superfrost Plus </td><td> Menzel Gläser </td><td> J1800AMNZ </td><td></td></tr><tr><td> Microtainer SST Rohre </td><td> BD Biosciences </td><td> 365951 </td><td></td></tr><tr><td> Mikrotiterplatten, V-Boden </td><td> VWR </td><td> 391-1924 </td><td></td></tr><tr><td> Reflotron Plus </td><td> Roche Diagnostics </td><td></td><td> Determiniation des Serum-AST / ALT </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td> O Namef das Reagenz </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Kaninchen anti-Maus-Anti-Kollagen Typ I-IgG-, </td><td> Chemicon </td><td> AB765P </td><td></td></tr><tr><td> Biotinylierte Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG </td><td> Vector (AXXORA) </td><td> VC-BA-1000-MC15 </td><td></td></tr><tr><td> FITC-konjugiertem Anti-Maus-CD8a antibody </td><td> Southern Biotech </td><td> 1550-02 </td><td></td></tr><tr><td> PE-konjugierten anti-Maus-IFN &amp;ggr; antibody </td><td> BD Biosciences </td><td> 554412 </td><td></td></tr><tr><td> PE-konjugiertem anti-Maus-CD16/CD32 antibody (FcR Block) </td><td> BD Biosciences </td><td> 553141 </td><td></td></tr><tr><td> Aquatex </td><td> VWR </td><td> 1.08562.0050 </td><td></td></tr><tr><td> Avidin / Biotin-Blocking-Kit </td><td&gt; Vector (AXXORA) </td><td> VC-SP-2001-KI01 </td><td></td></tr><tr><td> Brefeldin A </td><td> Sigma </td><td> B6542 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase IV </td><td> Sigma </td><td> C5138-100MG </td><td></td></tr><tr><td> DAB Substrat Kit 3&#39;3&#39;diaminobenzidine </td><td> Vector (AXXORA) </td><td> VC-SK-4100-KI01 </td><td></td></tr><tr><td> DNase </td><td> Sigma </td><td> DN-25 </td><td></td></tr><tr><td> Elite ABC-Reagenz </td><td> Vector (AXXORA) </td><td> VC-PK-7100-L050 </td><td></td></tr><tr><td> Eosin G / Y-Lösung </td><td> Roth </td><td> X883.1 </td><td></td></tr><tr><td> Fötales Kälberserum (FCS) </td><td> Biochrom AG </td><td> S 0115 </td><td></td></tr><tr><td> Isofluran </td><td> Forene </td><td> B506 </td><td></td></tr><tr><td> Meyers Hämatoxylin-Lösung </td><td> AppliChem </td><td> A4840, 1000 </td><td></td></tr><tr><td> OCT-Verbindung </td><td> Sakura Finetek Europa </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> PBS-gepuffertem Formaldehyd 10% </td><td> Roth </td><td> A146.3 </td><td></td></tr><tr><td> Percoll </td><td> Amersham </td><td> 17-0891-01 </td><td></td></tr><tr><td> Roti-Histokit </td><td> Roth </td><td> 6638,1 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> Invitrogen </td><td> 61870 </td><td></td></tr><tr><td> Saponin aus Quillaja Rinde </td><td> Sigma </td><td> S7900 </td><td></td></tr></tbody></table>

die cyp2d6-tiermodell: wie autoimmune hepatitis in mäusen zu induzieren

The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Autoimmun-Hepatitis ist eine seltene, aber lebensbedrohliche Autoimmunerkrankung der Leber unbekannter Ätiologie 1,2. In der Vergangenheit viele Versuche unternommen worden, es, ein Tiermodell, die die Eigenschaften der humanen Erkrankung 3-5 spiegelt zu erzeugen. Allerdings in verschiedenen Modellen die Induktion der Erkrankung war sehr komplex und oft nur vorübergehend war, Hepatitis 3-5. Deshalb haben wir einen einfachen Maus-Modell, das die wesentlichen menschlichen Autoantigen verwendet bei Typ-2 Autoimmunhepatitis (AIH-2), nämlich hCYP2D6, als Auslöser 6 entwickelt. Typ-1-Leber-Niere-Mikrosomen-Antikörper (LKM-1) Antikörper, die hCYP2D6 sind das Markenzeichen der AIH-2 7,8. Lieferung von hCYP2D6 in Wildtyp FVB oder C57BL / 6 Mäusen wurde von einem Adenovirus Konstrukt (Ad-2D6), die einer direkten Lieferung des auslösenden Antigens an der Leber sorgt. Somit erzeugt die daraus resultierende lokale Entzündung ein fruchtbares Feld 9 für die spätere Entwicklung von Autoimmunität. A combination von intravenöser und intraperitonealer Injektion von Ad-2D6 ist der effektivste Weg, um eine lang anhaltende autoimmunen Schädigungen der Leber (Abschnitt 1) ​​zu induzieren. Hier bieten wir Ihnen ein ausführliches Protokoll, wie autoimmunen Lebererkrankungen wird in der CYP2D6-Modell induziert und wie die verschiedenen Aspekte von Leberschäden beurteilt werden kann. Zunächst werden die Serumspiegel von Markierungen, die Hepatozyten-Zerstörung, wie Aminotransferasen, sowie die Titer von Antikörpern durch hCYP2D6 Blutentnahme retroorbitaly (Abschnitt 2) bestimmt. Zweitens wird die hCYP2D6-spezifischen T-Zell-Antwort durch das Sammeln von Lymphozyten aus der Milz und der Leber dadurch gekennzeichnet. Um reines Leber-Lymphozyten zu erhalten, werden die Lebern von PBS über die Pfortader (Abschnitt 3), in Kollagen verdaut und gereinigt über einen Percoll-Gradienten (Abschnitt 4) perfundiert. Die Häufigkeit der hCYP2D6-spezifischen T-Zellen wird durch Stimulation mit hCYP2D6 Peptide und Identifizierung von IFN-produzierenden Zellen mittels Durchflusszytometrie (Abschnitt 5) analysiert. Drittenszelluläre Infiltration und Fibrose wird durch Immunhistochemie von Leber-Abschnitte (Abschnitt 6) bestimmt. Eine solche Analyse Regime muss zu mehreren Zeitpunkten nach Beginn der Erkrankung durchgeführt werden, um die chronische Natur des Modells zu beweisen. Die Größe der Immunantwort durch die Frequenz und Aktivität von hCYP2D6-spezifischen T-und / oder B-Zellen und dem Grad der Leberschädigung und Fibrose dadurch gekennzeichnet haben, um für eine spätere Auswertung der möglichen Behandlungen zu verhindern, verzögern oder aufheben Autodestruktiven beurteilt werden Verfahren nach der Leber.

Infektion von Mäusen mit einem Adenovirus, welches das wesentliche humane Autoantigen Cytochrom P450 2D6 (hCYP2D6) durch Seren von Patienten mit Typ-2-Autoimmun-Hepatitis führt zu einer persistierenden Form der Autoimmun-vermittelten Lebererkrankung, die durch umfangreiche Hepatitis, Fibrose und Erzeugung eines CYP2D6 gekennzeichnet anerkannt -spezifische Immunantwort.

Die CYP2D6-Tiermodell: Wie Autoimmune Hepatitis in Mäusen zu induzieren

Die autoimmune Hepatitis ist eine seltene, aber lebensbedrohliche Autoimmunerkrankung der Leber unbekannter Ätiologie1,2. In der Vergangenheit wurden zahlreiche Versuche unternommen, um ...

Das übergeordnete Ziel der folgenden Experimente besteht darin, ein Mausmodell für die autoimmune Hepatitis zu erzeugen und zu überprüfen, eine humane autoimmune Lebererkrankung, die durch eine chronische Entzündung der Leberinterface, Hepatitis, Hypergammaglobulinämie und die Produktion charakteristischer Autoantikörper gekennzeichnet ist. Die Tiere werden zunächst mit einem Adenovirus-Konstrukt infiziert, das das krankheitsverursachende Autoantigen CYP 2D6 exprimiert, um eine lokale Entzündung in der Leber hervorzurufen. Anschließend werden Leberlymphozyten durch Leberperfusion und differenzielle Dichtezentrifugation isoliert. Schließlich können Leberschäden und die Identifizierung von autoantigenspezifischen T-Zellen jeweils mittels Immunhistochemie und intrazellulärer Zytokinstaining bewertet werden.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden liegt darin, dass unser Modell der autoimmunen Hepatitis durch eine chronische Leberentzündung und eine autoantigenspezifische Immunantwort gekennzeichnet ist, die der bei menschlichen Individuen mit autoimmunem Hepatitistyp 2 nahezu identisch ist. Unser Modell kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der autoimmunen Lebererkrankungen zu beantworten, beispielsweise wie die fortschreitende Leberzerstörung bei Patienten mit autoimmunem Hepatitits getrieben wird. Im Allgemeinen bereitet die Vorgehensweise in Vials Schwierigkeiten beim intravenösen Infizieren sowie beim Blutentnehmen über den ophthalmischen Venensinus und bei der Leberperfusion, wobei letztere eine geübte Hand des Bearbeiters erfordert.Nach der Anästhesie das Tier am Nacken festhalten und die lose Haut des Kopfes mit Daumen und Mittelfinger straff ziehen. Achten Sie darauf, wie sich in dieser Position das Auge leicht vorwölbt, bedingt durch die Zugkraft der Haut neben dem Auge. Setzen Sie nun die Nadel in den medialen Augenwinkel an der Verbindungslinie desjenigen Augenlids an, das der Nase des Tieres am nächsten liegt, und injizieren Sie langsam 100 µL der 80 2D six-Viruslösung.Ziehen Sie die Nadel dann leicht zurück und schließen Sie die Augenlider. Füllen Sie zunächst eine Fünf-Milliliter-Spritze mit kaltem PBS und befestigen Sie eine 27-Gauge-Nadel an der Spritze. Anschließend, nach der Tötung der Maus, machen Sie mit einer Schere einen Schnitt etwa einen Zentimeter entfernt von den Hinterbeinen des Tieres durch Haut- und Muskelschichten auf beiden Seiten des Tieres, wobei Sie mit der Schere bis zum Zwerchfell arbeiten.Wenn das Zwerchfell erreicht ist, ziehen Sie die Haut rückwärts und schneiden Sie das Zwerchfell mit einer Schere von den Rippen ab. Dissezieren Sie anschließend die Vena cava. Zu diesem Zeitpunkt der Sektion schieben Sie Magen und Darm zur Seite, um die Pfortader freizulegen. Die Perfusion der Leber ist der schwierigste Teil des Verfahrens, insbesondere wenn die Leber chronisch entzündet oder sogar fibrotisch ist. Die Maus ist sehr klein, weshalb eine ruhige Hand erforderlich ist, um die Pfortader präzise zu punktieren.Außerdem ist es wichtig, dass das PBS langsam zugegeben wird, da andernfalls das Gewebe beschädigt werden kann. Führen Sie die zuvor vorbereitete Nadel in die Pfortader ein und üben Sie dann vorsichtig Druck auf den Kolben der Spritze aus, um das PBS langsam durch die Leber laufen zu lassen, wodurch das Blut ausgewaschen wird. Entfernen Sie die Leber, indem Sie mit einer Pinzette das Zwerchfell greifen und mit der Schere das Zwerchfell vom Körper abschneiden.Überführen Sie abschließend das Organ in eine Petrischale und entfernen Sie das Zwerchfell, die Gallenblase sowie jedes andere noch mit der Leber verbundene Gewebe. Beachten Sie, dass die Leber des Tieres mit autoimmuner Hepatitis fibrotisch ist und die einzelnen Lappen miteinander verwachsen sind. Beginnen Sie damit, eine Petrischale mit 10 Millilitern frischem PPS zu füllen und sie auf Eis zu stellen.Überführen Sie die perfundierte Leber in die Schale und schneiden Sie das Gewebe mit einer Schere in kleine Stücke. Gießen Sie anschließend das Gewebe und PBS in einen 70-Mikrometer-Zellsieb und drücken Sie die Leberstücke mit einem Glasstößel durch den Sieb. Gießen Sie nun vorsichtig 10 Milliliter kalte Kollagenase-Pufferlösung über die Gewebestücke und verwenden Sie bei Bedarf weiterhin den Stößel.Zentrifugieren Sie die Zellen bei 30 × g für drei Minuten bei vier Grad Celsius. Überführen Sie den Überstand in ein frisches Gefäß und lassen Sie fünf Millimeter Flüssigkeit über dem Pellet zurück. Zentrifugieren Sie bei 650 × g für 10 Minuten bei vier Grad Celsius. Entfernen Sie den Überstand bis auf die letzten drei Millimeter. Suspendieren Sie das Pellet in 20 Milliliter pro Zellpuffer und zentrifugieren Sie die Zellen anschließend bei 600 ×g für 20 Minuten bei vier Grad Celsius. Entsorgen Sie danach den Überstand und resuspendieren Sie das Pellet durch vorsichtiges Antippen des Röhrchens bei persistierender autoimmuner Hepatitis, die nach Adenovirus-2D6-Infektion von Wildtyp-Mäusen im CYP2D6-Modell auftritt. Die Leber weist eine offensichtlich veränderte Morphologie auf, wie hier in der Abbildung rechts zu sehen ist. Insbesondere sind die Leberlappen, wie durch schwarze Pfeilspitzen angezeigt, miteinander verwachsen, und hyperplastische Knoten, die durch schwarze Pfeile markiert sind, sind über die gesamte Leber verstreut. Zudem ist eine massive kapsuläre Fibrose sichtbar, infolge einer Infektion mit einem Kontrollpräparat.Adenovirus, das keinen menschlichen CYP 2D sechs exprimiert, hat keinen Einfluss auf die Lebermorphismologie, wie in der Abbildung auf der linken Seite zu sehen ist. Weitere umfangreiche und anhaltende zelluläre Infiltrate treten in den periportalen und parenchymalen Regionen der Lebern von Mäusen auf, die mit Adenovirus 2D sechs infiziert sind, nicht jedoch bei Kontrollmäusen, die mit Adenovirus infiziert wurden. Beachten Sie die signifikanten Infiltrationen mononuklearer Zellen, die ausschließlich bei den mit Adenovirus 2D sechs infizierten Mäusen auftreten, wie durch die einzelnen schwarzen Pfeile angezeigt. Hier.Die dreifachen Pfeile zeigen größere zelluläre Infiltrate im Leberparenchym an, die benachbarte Portalfelder verbinden. In dieser Abbildung ist zu erkennen, wie sich Fibrose vorwiegend in der subkapsulären Region entwickelt, wobei einige Kollagenbündel in das Parenchym hineinragen. Beachten Sie die mehrfachen Schichten aus abgelagertem Kollagen unter der Leberkapsel, wie durch die dreifachen schwarzen Pfeile angezeigt, sowie einige Bündel, die in das Parenchym hineinragen, wie durch die einfachen Pfeile gekennzeichnet sind, und das Vorhandensein großer Zellinfiltratkonglomerate, wie durch die schwarzen Pfeilspitzen angezeigt.Ein drittes Merkmal einer persistierenden autoimmunen Hepatitis bei mit Adenovirus 2D6 infizierten Mäusen ist die vorherrschende Bildung lebertropfer, menschlicher CYP2D6-spezifischer CD4- und CD8-T-Zellen, wie in diesen repräsentativen Dot-Plots der intrazellulären Zytokinstainung zu sehen ist. Die über Nacht erfolgte Stimulation von Leberlymphozyten mit dem immun-dominanten CD4- oder CD8-Peptid des menschlichen CYP2D6 führt jeweils zur Expression interferon-gamma-spezifischer, CD4-positiver oder CD8-positiver T-Zellen. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig zu beachten, dass eine optimale Perfusion der Leber ein entscheidender Schritt ist, um eine Kontamination der Leberlymphozyten durch periphere mononukleäre Blutzellen zu vermeiden. Nach Abschluss dieses Verfahrens können weitere Methoden wie die Isolierung primärer hepatischer Sternzellen durchgeführt werden, um den Aktivierungsstatus und das Migrationspotenzial der T-Zellen nach ihrer Entwicklung zu untersuchen.Dieses Tiermodell sollte Forschern auf dem Gebiet der autoimmunen Lebererkrankungen den Weg ebnen, zentrale Faktoren zu erforschen, die die chronische Entzündung der Leber antreiben, und mögliche Behandlungen für Patienten zu bewerten.

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Dieses Video zeigt, wie autoimmune Hypophysitis in SJL Mäusen und wie sie ihre Strenge durch Histopathologie beurteilen zu induzieren.

Induktion der experimentellen autoimmunen Hypophysitis in SJL Mäuse

Das Video zeigt einen Assay, bei dem von humanen induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSC) abgeleitete CD8+ T-Zellen verwendet werden, um die Replikation des Hepatitis-B-Virus (HBV) in Mäusen zu hemmen. Diese T-Zellen, die mit HBV-spezifischen Rezeptoren versehen sind, werden in transgene Mäuse übertragen. Replikationskompetente HBV-Genom-Plasmide werden dann direkt in die Leber injiziert und ermöglichen so die Aufnahme viraler DNA. Sobald virale Antigene exprimiert und von hybriden...

Unterdrückung der Hepatitis-B-Virusreplikation mit viralen Antigen-spezifischen T-Zellen

Dieses Video demonstriert eine Methode zur Generierung eines dualen humanisierten Mausmodells mit einem menschlichen Immunsystem und Leberzellen. Dabei werden menschliche Leberzellen und hämatopoetische Stamm- und Vorläuferzellen durch intrasplenische Injektion in eine transgene immundefiziente Maus transplantiert, was zur Transplantation von Leberzellen und zur Entwicklung menschlicher Immunzellen führt.

Entwicklung eines humanisierten Mausmodells mit menschlichen Leberzellen und Immunzellen

Der Transfer von bm12-Lymphozyten in einen C57BL/6-Empfänger ist ein etabliertes Modell des systemischen Lupus erythematodes. Hier beschreiben wir, wie man mit diesem Modell eine Krankheit auslösen kann und wie man T-follikuläre Helferzellen, Keimzentrum-B-Zellen und Plasmazellen mittels Durchflusszytometrie charakterisiert.

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Hier beschreiben wir eine gängige Methode um chronische Schädigung der Leber bei Mäusen zu induzieren, durch die Fütterung einer Cholin-Mangel und Ethionine ergänzt (CDE) Ernährung. Wir zeigen Systemüberwachung, Leber Perfusion, Isolation und Erhaltung. Schädigung der Leber, Pathohistology, Fibrose, entzündliche, und Leber Stammvater-Zell-Reaktionen kann ein zeitlichen Verlauf von sechs Wochen mitteilen.

Der murinen Cholin-Mangel, Ethionine ergänzt (CDE) Diät-Modell einer chronischen Leberschädigung

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um eine menschliche Leber chimärer Maus-Modell der Familiäre Hypercholesterinämie mit menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen gewonnenen Hepatozyten zu generieren. Dies ist ein wertvolles Modell zum Testen neuer Therapien für Hypercholesterinämie.

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Generierung eines Mausmodells für spontane Autoimmunthyreoiditis

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