Name: Bildgebung des dem Maus-Kniekehlen-Lymphknoten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Erfahren Sie die intravitalen Bildgebung des Maus-Kniekehlen-Lymphknotens mit Zwei-Photonen-Mikroskopie. Diese Methode ermöglicht die Echtzeit-Beobachtung von Immunzellmigration und -interaktionen in vivo.

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Diese Arbeit wird durch Zuschüsse aus NCI 1R01CA154656, NIAID 1R21AI092299, Cancer Research Institute, St. Baldrick Stiftung, Dana Foundation, Gabrielle &#39;s Angel-Stiftung, und Hyundai Motors of America &quot;Hope-on-Wheels&quot;-Programm unterstützt.

1. Maus-Halter-Anordnung <ol><li> Überlagern Sie die Abdeckung eines 100-mm-Glas-Petrischale auf der Spitze eines 100-mm-Kunststoff-Petrischale Deckel nach unten zeigt. Das Glas sollte kaum berühren Sie den Mittelpunkt der Plastikschale. Mit dem Glas als Schablone, verfolgen eine Markierung auf der Plastikschale. </li><li> Verwenden Sie eine Handbohrmaschine (dh Dremel), um einen Teil eines 100-mm-Deckel Plastikschale, eine sichelförmige Plattform zu schaffen, zu entfernen. Diese sichelförmigen Kunststoffdeckel wird als Träger für den Oberkörper der Maus (1a) dienen. Bohren Sie zwei Löcher auf der halbmondförmigen Deckel, um die Gasmaske mit einem Metall Bindedraht zu sichern. Sichern Sie den Plastikdeckel an den Rand des Glases Petrischale mit Sekundenkleber oder eine gleich starke Klebstoff (Abbildung 1b). </li><li> Kleber die Deckel von zwei gewölbte Kappe PCR-Röhrchen (Schnitt im Scharnier) 1 cm voneinander entfernt auf die Mitte des Bodens Gericht für den zur Verankerung Kniekehle Hautlappen. </li></ol> 2. Maus-Vorbereitung <strong&gt; Hinweis: Bei ausreichender Übung, man sollte in der Lage sein, um die Maus Vorbereitung und des chirurgischen Schritte in 20-30 Minuten durchführen. <ol><li> Betäuben die Maus mit Isofluran (2 bis 2,5% für Induktion, 1,5 bis 2% für Chirurgie / Imaging) in 1:1 O 2 gemischt: Luft-Gemisch bei einer Fließgeschwindigkeit von 1L/min mit Hilfe eines anerkannten Verfahrens IACUC. Sobald sich die Maus betäubt, sichern eine Gasmaske über die Nase mit Klebeband. Bestimmen Sie, ob die Maus ist vollständig betäubt durch den Mangel an Reaktion auf Zehen-und / oder Schwanz drückt. Die Höhe der Isofluran kann entsprechend angepasst werden, um sicherzustellen, das Tier vollständig betäubt, mit einem stetigen, nicht gearbeitet Atemfrequenz zwischen 60-80 Atemzüge / min. </li><li> Verwenden Sie einen elektrischen Trimmer die Haare auf dem rechten Hinterbein und inguinalen Bereich der Maus zu entfernen. </li><li> Bürsten Sie losen Haare und üben Sie sanften einen bescheidenen Schicht Nair Lotion auf die rasierte Fläche mit einem Wattestäbchen. Nach einer Minute der ersten Anwendung, entfernen Sie den Nair und reinigen Sie die betroffene Haut mit einem feuchtenPapiertuch. Achten Sie darauf, die Maus ist sauber und trocken sein, bevor Sie fortfahren. </li><li> Machen Sie eine kleine 2 bis 3 mm Schnitt mit der Schere am rechten Knie, um die Strecksehne aussetzen. </li><li> Anwenden Vetbond entlang der Mittellinie der Maus Halter, in dem die Maus Körper und Beine angeordnet werden. Sorgfältig sichern die Maus auf den Halter, mit dem rechten Knie nach unten, um die richtige Kniekehle aussetzen. Sichern Sie das rechte Knie Sehne mit Vetbond zwischen den zwei Hautlappen Halter zur Stabilisierung des Bildfeldes. </li><li> Stretch-und Tape die Arme und das linke Bein auf der oberen Plattform des Halters. </li><li> Verwenden Sie einen Bindedraht, um die Gasmaske zu fixieren. </li><li> Platzieren Sie die Halterung unter dem Dissektionsmikroskop. Der LN muss unbedingt noch bleiben, unabhängig von der Atmung Bewegung der Maus. Daher müssen Vorkehrungen getroffen werden, während der Durchführung der Operation, um die Stabilität des Beines zu optimieren. Bestimmen der Position des Schwanzes (typischerweise über dem Kopf), die einen hohen beitragenStabilität auf dem rechten Bein und der Schwanz Band nach unten. </li></ol> 3. Chirurgie <ol><li> Während unter der Dissektion Umfang, pflegen Maus Körpertemperatur mit Hilfe eines Heizgerätes oder ein Heizkissen. Für eine erfolgreiche Bildgebung der Kniekehle LN, ist es wichtig, die richtige Körpertemperatur während der Operation sowie ermöglicht, um Feuchtigkeit der Gewebe durch die ständige Anwendung warmer PBS auf die freiliegende Gewebe zu erhalten. </li><li> Sterilisieren Sie die Haut mit Betadine. Mit einer sterilen Schere, machen Sie einen Medianschnitt durch die Haut an der rechten Seite zur Mitte der Wade, und weiter Schneiden vertikal bis zu den oberen Anteil des rechten Oberschenkels. </li><li> Machen Sie zwei horizontalen Hautschnitte an der Spitze der vertikalen Schnittführung zu Hautlappen auf beiden Seiten zu schaffen. </li><li> Einfahren und kleben Sie beide Hautlappen mit Vetbond. Durch Ziehen an der Haut straff vor dem Auftragen Vetbond wird weiter zu fördern Bein Stabilität, aber stellen Sie sicher, dass die Spannung der Haut nicht verschließen Blutfluss (dh Veränderungen in der Vessel Farbe oder Durchmesser). Weiter die Verklebung anderen Bereichen der Haut, um die Stabilität des Schenkels vor dem Freilegen der LN zu gewährleisten. Die Größe der Maus wird bestimmen, wie viel zusätzliche Haut zu kleben benötigt wird, nach unten. Typischerweise wird größer Mäuse erfordern mehr Haut auf den Inhaber geklebt werden. </li><li> Der LN muss innerhalb der Kniekehle liegen entweder nach rechts oder links von der V. poplitea, abhängig von der Platzierung der Maus an der Halterung. Sie vorsichtig die LN aus den umliegenden Fettgewebe und Muskeln mit Mikro-Pinzetten und Zangen sezieren. Um Blutungen und Traumata zu minimieren, verwenden Sie die Spreizung Techniken mit Mikro-Pinzetten sezieren, um getrennte Gewebe. Vorsichtig setzen die Kniekehle LN, ohne dabei die Integrität der zu-und abführenden Blutgefäße und die afferenten Lymphgefäße. </li><li> Für zusätzliche Stabilität Gewebe kann ein Quadrat Deckglas über die feuchte LN positioniert werden, nur berühren kaum den LN bei gleichzeitiger Vermeidung Gefäßverschluss. Das Deckglas kann secur seinED-Modelle aus Ton auf beiden Seiten der Maus. </li><li> Fluoreszierende Farbstoffe Behälter verschiedener Größen (zB TRITC-Dextran, mindestens 70 kDa) kann intravenös an dieser Stelle eingeführt werden, um die strukturellen Beziehungen zu markieren und die Integrität des LN während der Bildgebung. </li></ol> 4. 2-Photonen-Imaging Acquisition ** <ol><li> Sobald die LN ausreichend ausgesetzt ist und die Stabilität erreicht wird, unverzüglich versetzen die gesamte Maus-Anordnung auf dem Mikroskoptisch mit einem programmierbaren Temperatur Rückkopplung gesteuerten Heizkissen in einer Umwelt Mikroskop Kammer bei 37 ° C angebracht Fügen Sie genug sterile warme (37 ° C) PBS oder HBSS zu tauchen LN. Das Volumen ändert sich je nach Größe und Platzierung der Maus. Alternativ kann warmer PBS oder HBSS direkt an dem zerschnittenen LN aufgebracht werden durch ein feines Glaspipette ausgestattet mit einer Peristaltikpumpe und mit Klebeband an der Spalte der Immersionslinse Ziel. Die Strömung der Flüssigkeit sollte sein, dass einStabile Wasser Spalte zwischen der Linse und dem Gewebe gehalten werden. </li><li> Pflegen Sie die PBS oder HBSS Temperatur bei 37 ° C mit einem Heizkissen mit einem Feedback-Sonde. Eine separate Temperaturfühler muss in der Maus Halter platziert werden, um die Temperatur des PBS im Bereich von 36,5 bis 37,5 zu bestätigen ° C Eine rektale Sonde kann auch verwendet werden, um die Körperkerntemperatur des experimentellen Maus in der Imaging-Sitzung zu überwachen. </li><li> Verwenden Sie einen epi-Leuchtstofflampe zu Führung LN Platzierung unter dem Ziel zu helfen. Erwerben Sie Fluoreszenzbildstapeln mit Zeitintervallen, die für den gewünschten zellulären Interaktionen (typischerweise 10 Sekunden bis 1 Minute zwischen jedem xyz Bildstapel) sind. </li><li> Überwachen Sie den Status des Tieres in der Kammer Mikroskop häufig durch eine Sichtprüfung oder durch Verwendung eines Tieres Monitoring-System. Bestimmen Sie, ob die Maus ist vollständig betäubt durch den Mangel an Reaktion auf Zehen-und / oder Nagel drückt, und eine stetige, nicht gearbeitet Atemfrequenz zwischen 60-80 breaths / min. Die Höhe der Isofluran kann entsprechend angepasst werden, um sicherzustellen, dass das Tier vollständig sediert. Mit geeigneter Monitoring-und Flüssigkeitszufuhr, Tiere können für 4-6 Stunden abgebildet werden, oder möglicherweise länger. </li><li> Nach der Imaging-Experiment, einschläfern das Tier in einer CO 2-Kammer unter Verwendung IACUC zugelassenen Euthanasie Protokoll. Das Tier darf nicht aus der Narkose vor der Euthanasie auftauchen werden. </li></ol> ** Dieses chirurgische Verfahren kann auch nützlich sein für andere Formen der Bildgebung intravitalen andere als 2P-LSM. 5. Repräsentative Ergebnisse Verschiedene zirkulierenden Immunzellen an die LN mit unterschiedlicher Geschwindigkeit nach adoptiven Transfer rekrutiert. Für CD4 + und CD8 +-Lymphozyten, beginnen diese Zellen in der LN durch die hohen endothelialen Venole (HEV) Minuten nach iv Transfer mit einer beträchtlichen Zahl der Ankunft in der Kniekehle LN nach 2 bis 4 Stunden 6,17-18 ankommen. Für B cells, wird eine erhebliche Anzahl nach 8 bis 24 Stunden 19 ansammeln. Aktivierte DCs sollten beginnen, in den ableitenden poplitealen LN 8 bis 16 Stunden nach der Injektion Wegelagerer 3,11,16-17 erscheinen. Abbildung 2a zeigt, dass auch ohne andere Sehenswürdigkeiten, Bauwerke wie B-Zell-Follikel leicht durch die runde kugelförmige Ansammlung Zelle sichtbar unter 2P-LSM 19 zu erkennen. Mit Hilfe eines endogenen fluoreszierenden Reporter wie die Ubiquitin-GFP Splenozyten (Abbildung 2, Supplemental Videos 1 und 2), kann man diese Lymphozyten-Migrationen und Verhaltensweisen für Tag verfolgen, bis zu einer Woche unter nicht-stimulatorischen physiologischen Bedingungen. Mit Multi-Channel hochempfindlichen Detektoren ist es möglich, ein Multiplex-Imaging-Dataset, das strukturelle Informationen sowie Interaktionsdynamiken umfasst unter mehreren zellulären Partnern 17,19 zu erwerben. Wenn die chirurgischen Techniken korrekt ausgeführt werden und die Umgebungsbedingungen sorgfältig überwacht, lymphocyTES sollte zeigen charakteristische Geschwindigkeit der Migration, wie in Abbildung 2c, 2d und anderswo 13-14,16 demonstriert. Lymphozyten können zeigen auch Unterschiede in der Migrations-Geschwindigkeit in Abhängigkeit von den Teilregionen des LN Bildgebung unterzogen, so wird zusätzliche Attraktionen, wie Blutgefäße (wie durch die Einführung des Schiffes Farbstoffen markiert) dazu beitragen, den gesamten Imaging-Qualität (dh richtige Temperierung bestimmen , minimale Traumatisierung LN, etc.) 3,6,20. <img alt="Abbildung 1." src="/files/ftp_upload/3720/3720fig1.jpg" /> Abbildung 1. Bau einer Halterung für Maus Maus poplitealen LN Imaging a) Schematische Darstellung der Maus Halterbaueinheit;. B) repräsentative intravitalen Maus Vorbereitung, c) Abgeschlossene Maus Halterbaueinheit, d) Nahaufnahmen von der Kniekehle LN nach chirurgischer Freilegung. <img alt="Abbildung 2." src="/files/ftp_upload/3720/3720fig2.jpg" /> Abbildung 2. Migration Analyse von GFP +-Lymphozytenin der Kniekehle LN. (a) 3D-Momentaufnahme von 2P-LSM Bildgebungssequenz der Kniekehle LN in einer C57BL / 6 Empfängermaus getroffen adoptiv mit 1x10 7 GFP +-Lymphozyten 1 Tag vor Bildgebung übertragen. Dash Linie zeigt die Grenze des B-Zell-Follikel, (b) Tracks von Lymphozytenmigration während 1 Stunde kontinuierlicher Bildgebung; c) Verteilung der insgesamt Lymphozytenmigration Geschwindigkeit. Die mittlere Geschwindigkeit = 10,04 ± 4,26 um / min (insgesamt 15.125 Tracks analysiert), d) Differentielle zelluläre Migration Geschwindigkeit Verteilung der Zellen in der B-Zell-Follikel gefunden (offene Balken; mittlere Geschwindigkeit = 8,79 ± 3,90 um / min; insgesamt 1.525 Tracks analysiert ) und T-Zell-Zone (gefüllte Balken; mittlere Geschwindigkeit = 13,77 ± 5,93 um / min; insgesamt 1.250 Spuren ausgewertet). Balken = 50 um. Zusätzliche Video 1. Zeitraffer-intravitale 2P-LSM Bildgebung einer Maus poplitealen LN wie in 2 beschrieben. Insgesamt wurden 1x10 7-Lymphozyten wurden isoliert from ein Ubiquitin-GFP + Donor-Maus und adoptiv intravenös in einer C57BL / 6 Empfängermaus 24 Stunden vor dem bildgebenden übertragen. Eine Reihe von XY (750 um x 750 um) Fluoreszenz-Bilder wurden durch feste Z-Stapel (5 um Schritte, 13 Schritte) getroffen, um eine Zuordnung beim Imaging-Stapel (750 um x 750 um x 65 um), die alle 20 Sekunden wiederholt wurde nachgeben für insgesamt 60 Minuten, was zu einer xyzt Bildgebungssequenz für Geschwindigkeit Analyse (Figuren 2c, 2d). Abspiel-Geschwindigkeit = 450x. Balken = 50 um. Zeitstempel = min: sec. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3720/Huang_Jove_video1.avi" target="_blank">Klicken Sie hier, um zusätzliche Video anzuschauen</a> . Zusätzliche Video 2 vergrößerten Ansicht der Bildgebungssequenz in Supplemental Video 1 an der B-Zell-Follikel -. T-Zell-Zone Grenze. Abspiel-Geschwindigkeit = 450x. Balken = 25 um. Zeitstempel = min: Sek. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3720/Huang_Jove_video2.avi" target="_blank">C</a>lecken Sie hier, um ergänzende Video zu sehen.

<ol><li>Bousso, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-Cell+activation+by+dendritic+cells+in+the+lymph+node%3A+lessons+from+the+movies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">T-Cell activation by dendritic cells in the lymph node: lessons from the movies.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 675-684 (2008).</li>
<li>Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+friends+in+out-of-the-way+places%3A+how+cells+of+the+immune+system+get+together+and+how+they+conduct+their+business+as+revealed+by+intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Making friends in out-of-the-way places: how cells of the immune system get together and how they conduct their business as revealed by intravital imaging.</a> Immunol. Rev. 221, 163-181 (2008).</li>
<li>Huang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illuminating+the+landscape+of+in+vivo+immunity%3A+insights+from+dynamic+in+situ+imaging+of+secondary+lymphoid+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Illuminating the landscape of in vivo immunity: insights from dynamic in situ imaging of secondary lymphoid tissues.</a> Immunity. 21, 331-339 (2004).</li>
<li>Stefanova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-recognition+promotes+the+foreign+antigen+sensitivity+of+naive+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Self-recognition promotes the foreign antigen sensitivity of naive T lymphocytes.</a> Nature. 420, 429-434 (2002).</li>
<li>Stefanova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+role+of+self-recognition+in+T+cell+responses+to+foreign+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">On the role of self-recognition in T cell responses to foreign antigen.</a> Immunol. Rev. 191, 97-106 (2003).</li>
<li>Bajenoff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblastic+reticular+cells+guide+T+lymphocyte+entry+into+and+migration+within+the+splenic+T+cell+zone%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Fibroblastic reticular cells guide T lymphocyte entry into and migration within the splenic T cell zone.</a> J. Immunol. 181, 3947-3954 (2008).</li>
<li>Celli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decoding+the+dynamics+of+T+cell-dendritic+cell+interactions+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Decoding the dynamics of T cell-dendritic cell interactions in vivo.</a> Immunol. Rev. 221, 182-187 (2008).</li>
<li>Mempel, T. R., Junt, T., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rulers+over+randomness%3A+stroma+cells+guide+lymphocyte+migration+in+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Rulers over randomness: stroma cells guide lymphocyte migration in lymph nodes.</a> Immunity. 25, 867-869 (2006).</li>
<li>Worbs, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCR7+ligands+stimulate+the+intranodal+motility+of+T+lymphocytes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">CCR7 ligands stimulate the intranodal motility of T lymphocytes in vivo.</a> J. Exp. Med. 204 (3), 489-495 (2007).</li>
<li>Bajenoff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((byways+and+breadcrumbs%3A+directing+lymphocyte+traffic+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">byways and breadcrumbs: directing lymphocyte traffic in the lymph node.</a> Trends Immunol. 28, 346-352 (2007).</li>
<li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+priming+by+dendritic+cells+in+lymph+nodes+occurs+in+three+distinct+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-cell priming by dendritic cells in lymph nodes occurs in three distinct phases.</a> Nature. 427, 154-159 (2004).</li>
<li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+leukocyte+trafficking+in+blood+vessels+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues.</a> Curr. Opin. Immunol. 16, 406-417 (2004).</li>
<li>Miller, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomous+T+cell+trafficking+examined+in+vivo+with+intravital+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Autonomous T cell trafficking examined in vivo with intravital two-photon microscopy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 100, 2604-2609 (2003).</li>
<li>Sumen, C., Mempel, T. R., Mazo, I. B., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy%3A+visualizing+immunity+in+context%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy: visualizing immunity in context.</a> Immunity. 21, 315-329 (2004).</li>
<li>von Andrian, U. H., Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homing+and+cellular+traffic+in+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Homing and cellular traffic in lymph nodes.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 867-878 (2003).</li>
<li>Bousso, P., Robey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+CD8%2B+T+cell+priming+by+dendritic+cells+in+intact+lymph+nodes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dynamics of CD8+ T cell priming by dendritic cells in intact lymph nodes.</a> Nat. Immunol. 4, 579-585 (2003).</li>
<li>Castellino, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines+enhance+immunity+by+guiding+naive+CD8%2B+T+cells+to+sites+of+CD4%2B+T+cell-dendritic+cell+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chemokines enhance immunity by guiding naive CD8+ T cells to sites of CD4+ T cell-dendritic cell interaction.</a> Nature. 440, 890-895 (2006).</li>
<li>Halin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+lymphocyte+trafficking%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of lymphocyte trafficking.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 21, 581-603 (2005).</li>
<li>Qi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrafollicular+activation+of+lymph+node+B+cells+by+antigen-bearing+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Extrafollicular activation of lymph node B cells by antigen-bearing dendritic cells.</a> Science. 312, 1672-1676 (2006).</li>
<li>Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+extended+vision+for+dynamic+high-resolution+intravital+immune+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">An extended vision for dynamic high-resolution intravital immune imaging.</a> Semin. Immunol. 17, 431-441 (2005).</li>
</ol>

Die Autoren haben noch nichts offen zu legen.

Jüngste Fortschritte in der hochauflösenden in-situ-Bildgebung, insbesondere 2P-LSM, wurden von einem wachsenden Interesse an der Untersuchung von dynamischen zellulären Verhaltens in vivo begleitet worden. Das 4D-Bildgebung auf der Kniekehle LN einer lebenden Maus erlaubt solche Analysen in das dynamische Verhalten von Immunzellen im Gewebe ungestörten Mikro-Umgebung. Die Verwendung von 2P-LSM mit mehreren Detektoren, die den gesamten sichtbaren Spektrum ermöglicht die gleichzeitige Bilddaten Sammlung mehrerer Zellpopulationen. Dies kann nun durch die Verwendung von In-vivo-Zelle, fluoreszierenden Reporter-Mäuse (zB Ubiquitin-eGFP, RFP-, oder-eCFP) unter Verwendung der adoptive Transfer von unterschiedlich markierten Zellpopulationen unter Verwendung von organischen Farbstoffen kombiniert fluoreszierende Zelle erreicht werden (zB CFSE , SNARF-1, and Cell Tracker Orange), zelluläre Mechanismen und Funktion innerhalb der LN zu untersuchen. Zusätzlich zu der direkten Beobachtung der Wechselwirkungen zwischen differentiell erfasst cell Populationen kann das Multiplex-Bilddatenstatz weiteren Analyse mit kommerziell erhältlichen Bildverarbeitung Software-Programme (zB Imaris, Bitplane Inc.) zu weiteren Aufklärung des Verhaltens von Zellen und Funktion zu unterziehen. Ein breiter Fächer von Möglichkeiten existiert, um zelluläre Mechanismen für die Interaktion mit diesen in vivo und in-silico-Techniken zu studieren. Die wichtigste Einschränkung der experimentellen hier beschriebene Ansatz ist die technische Vielschichtigkeit der Chirurgie Ansatz. Diese Technik erfordert hartes Training, um sich mit der Anatomie und die genauen technischen Verfahren und Fähigkeiten durch dieses Protokoll benötigt. Weitere erschwerende Faktoren wie die Schwierigkeit, bei der Minimierung von Gewebeschäden während LN Erforschung, Optimierung Gewebe Stabilität während der Bildgebung und Verhinderung von thermischer und Laser Verletzungen des LN vor und während der Bildgebung Experimentieren. Störung an einem dieser Faktoren wird in weniger als optimalen Lymphe führenocyte Motilität und wird daher mit der richtigen Interpretation der daraus resultierenden Bilddaten Analysen stören.

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; Reagenz</strong</td&gt;<td<strong&gt; Unternehmen</strong</td&gt;<td<strong&gt; Katalog-Nummer</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Isofluran, USP</td&gt;<td&gt; Baxter Healthcare Corporation</td&gt;<td&gt; NDC 10019-773-60</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Vetbond</td&gt;<td&gt; 3M</td&gt;<td&gt; 1469SB</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Nair - Haarentfernung Lotion</td&gt;<td&gt; Nair</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; PBS 1X</td&gt;<td&gt; Cellgro</td&gt;<td&gt; 21 bis 040-CV</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Heizkissen</td&gt;<td&gt; Watlow</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Heiz-Pad-Controller</td&gt;<td&gt; Watlow</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Luft-und O<sub&gt; 2</sub</td&gt;<td&gt; Airgas</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Temperaturfühler</td&gt;<td&gt; Harvard Apparatus</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Pinzetten Dumont # 5</td&gt;<td&gt; World Precision Instruments, Inc</td&gt;<td&gt; 14101</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Pinzetten, Graefe Iris, 7 cm gebogen</td&gt;<td&gt; World Precision Instruments, Inc</td&gt;<td&gt; 14141</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Scheren</td&gt;<td&gt; Roboz Surgical Instrument Co., Inc.</td&gt;<td&gt; RS-5880</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Cover von 100x20 mm Glas Zellkulturschale</td&gt;<td&gt; Corning</td&gt;<td&gt; 70165-102</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Cover von 100x20 mm Polystyrol Zellkulturschale</td&gt;<td&gt; Corning</td&gt;<td&gt; 430167</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Betadine Lösung (10% Providine-Jod Topical Solution)</td&gt;<td&gt; Purdue Products, LP</td&gt;<td&gt; NDC 67618-150-08</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

bildgebung des dem maus-kniekehlen-lymphknoten

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Lymphknoten (LK) sind sekundären lymphatischen Organen, die strategisch im ganzen Körper befinden, um zum Einfangen und Präsentation von fremden Antigenen aus peripheren Geweben, um die adaptive Immunantwort zu entlüften lassen. Gegenübergestellt zwischen angeborenen und adaptiven Immunantwort ist die LN ein idealer Ort, um Immunzellen Wechselwirkungen 1,2 studieren. Lymphozyten (T-Zellen, B-Zellen und NK-Zellen), umfassen dendritische Zellen (DCs), Makrophagen und den Großteil der Knochenmark-abgeleitete zellulären Elemente des LN. Diese Zellen sind strategisch positioniert in der LN, um eine effiziente Überwachung der Selbst-Antigene und potentielle fremde Antigene 5.3 zu ermöglichen. Der Prozess, durch den Lymphozyten erfolgreich begegnen verwandten Antigenen ist ein Gegenstand intensiver Forschung in den letzten Jahren, und eine Integration der molekularen Kontakte einschließlich Antigen-Rezeptoren, Adhäsionsmoleküle, Chemokine, und Stroma-Strukturen, wie das Fibro-retikuläre Netzwerk 2,6-12 . </p&gt; Vor der Entwicklung von hochauflösenden Echtzeit-Fluoreszenz-in-vivo-Bildgebung, Ermittler auf statischen Bildern verlassen, die nur bietet Antworten zur Morphologie, Lage und Architektur. Während diese Fragen grundlegend für unser Verständnis von Immunzellen Verhalten sind, wird die intrinsische Einschränkungen mit dieser Technik nicht zulassen Analyse zu entziffern Lymphozyten-Handel und Umwelt Hinweise, die dynamische Verhalten von Zellen beeinflussen. Vor kurzem hat die Entwicklung der intravitalen Zwei-Photonen-Laser-Scanning-Mikroskopie (2P-LSM) hat es Ermittlern, um die dynamischen Bewegungen und Interaktionen der einzelnen Zellen innerhalb von Live-LNs in situ 12-16 zu sehen. Insbesondere haben wir und andere diese Technik, um Bild zellulären Verhalten und die Interaktionen innerhalb der Kniekehle angewendet LN, wo die kompakte, dichte Natur bietet den Vorteil der Multiplex-Datenerfassung über einen großen Bereich mit verschiedensten Gewebe Gewebe Sub-Strukturen 11,17-18 . Es iist wichtig zu beachten, dass diese Technik zusätzliche Vorteile über explantierten Gewebe bildgebenden Verfahren, die Störung der Blut-, Lymph-Fluss, und letztlich die zellulären Dynamik des Systems erfordern bietet. Darüber hinaus haben explantierten Gewebes eine sehr begrenzte Zeitfenster, in dem das Gewebe bleibt lebensfähig Bildgebung nach Explantat. Mit ausreichende Flüssigkeitszufuhr und die Überwachung des Tieres Umgebungsbedingungen kann die Belichtungszeit wesentlich mit dieser intravitalen Technik erweitert werden. Hier stellen wir eine detaillierte Verfahren zur Herstellung von Maus poplitealen LN für die Ausübung ihrer intravitalen Bildgebung.

Jüngste Fortschritte in der 2-Photonen-Mikroskopie sind in Echtzeit ermöglichte<em&gt; In</em&gt; Situ Darstellung von lebendem Gewebe in Tiermodellen, wodurch die Fähigkeit, das Zellverhalten sowohl physiologischen und pathologischen Bedingungen zu untersuchen. Hier skizzieren wir die Vorbereitungen erforderlich, um die Bildgebung des Maus-Kniekehlen-Lymphknoten durchzuführen.

Bildgebung des dem Maus-Kniekehlen-Lymphknoten

Lymphknoten (LKs) sind sekundäre lymphatische Organe, die strategisch im gesamten Körper verteilt sind, um das Abfangen und die Präsentation fremder ...

Das allgemeine Ziel dieses Verfahrens besteht darin, den poplitealen Lymphknoten für die intravitale Bildgebung freizulegen und zu stabilisieren. Dies wird erreicht, indem zunächst ein Halter für die Maus angefertigt wird, der eine Stabilisierung des Beins während des Eingriffs ermöglicht. Der zweite Schritt besteht darin, die anästhesierte Maus korrekt auf dem Halter zu positionieren.Der dritte Schritt besteht darin, den Popen-Lymphknoten vorsichtig freizulegen, ohne ihn oder die umgebende Gefäßstruktur zu beschädigen. Der letzte Schritt ist die Durchführung der intravitale Bildgebung an dem freigelegten Popen-Lymphknoten. Letztendlich können die Echtzeit-Migration und Wechselwirkungen von Immunzellen im Lymphknoten mittels intravitalem Mikroskopie beobachtet und analysiert werden.Die visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend. Da die chirurgischen Schritte schwer zu erlernen sind und eine ausreichende Stabilisierung des Lymphknotens, ohne ihn zu beschädigen, von großer Bedeutung ist, wird Rachel Liu das Verfahren demonstrieren.Eine Technikerin in unserem Labor beginnt damit, den Deckel einer 100 Millimeter großen Glas-Petri-Schale mit der Innenseite nach oben auf den umgedrehten Deckel einer 100 Millimeter großen Kunststoff-Petri-Schale zu legen, wobei das Glas gerade eben den Mittelpunkt der Kunststoffschale berührt. Anschließend wird das Glas als Schablone verwendet, um eine halbmondförmige Linie über den Kunststoffdeckel zu zeichnen. Danach wird mit einem Handbohrer der 100 Millimeter große Kunststoffdeckel entlang dieser Linie zu einer halbmondförmigen Plattform ausgeschnitten.Bohren Sie zwei Löcher in die Plattform und befestigen Sie den Kunststoffdeckel mithilfe eines starken Klebstoffs an der Kante der Glas-Petri-Schale. Schneiden Sie abschließend zwei gewölbte PCR-Caps von ihren Röhrchen an den Scharnieren ab und kleben Sie die Caps im Abstand von einem Zentimeter in die Mitte der unteren Schale. Sobald die Maus anästhesiert wurde, befestigen Sie die Gasmaske mit Klebeband über der Nase des Tieres.Passt die Isofluran-Konzentration entsprechend an, um sicherzustellen, dass das Tier vollständig sediert ist. Verwenden Sie anschließend einen elektrischen Rasierer, um das Haar am rechten Hinterbein und am inguinalen Bereich der Maus zu entfernen. Bürsten Sie die losen Haare ab und tragen Sie dann mit einem Wattestäbchen vorsichtig eine dünne Schicht Haarentfernungscreme auf den rasierten Bereich auf.Eine Minute nach der ersten Anwendung entfernen Sie die Depiliercreme und reinigen die freiliegende Haut mit einem feuchten Papiertuch. Wenn die Maus trocken ist, machen Sie mit einer Schere einen kleinen zwei bis drei Millimeter langen Schnitt am rechten Knie, um die Strecksehne freizulegen. Tragen Sie nun Vet Bond entlang der Mitte des Maus-Halters auf, wobei der Körper und das Bein der Maus sorgfältig positioniert werden.Befestigen Sie die Maus an dem Halter, wobei das rechte Knie zur Exposition der rechten Kniekehle nach unten gerichtet bleibt. Danach fixieren Sie das rechte Kniesehnenband mit Vebo zwischen den beiden Hautlappenhaltern, um das Bildgebungsgebiet zu stabilisieren. Anschließend strecken und verkleben Sie die Vorderbeine und das linke Hinterbein der Maus auf der oberen Plattform des Halters.Führen Sie zwei Metallverschlüsse durch die Löcher ein und befestigen Sie damit die Gasmaske an dem Deckel. Platzieren Sie schließlich den Halter unter das Stereomikroskop. Positionieren Sie den Schwanz so, dass die größtmögliche Stabilität des rechten Beins gewährleistet ist, typischerweise oberhalb des Kopfes, wie hier gezeigt.Und befestigen Sie den Schwanz mit Klebeband. Halten Sie während der Arbeit unter dem Stereomikroskop die Körpertemperatur der Maus mit einem Heizgerät aufrecht. Beginnen Sie das Verfahren, indem Sie die Haut mit Betadine und sterilen Scheren desinfizieren.Führen Sie einen medianen Schnitt durch die Haut am rechten mittleren Unterschenkel durch und setzen Sie den vertikalen Schnitt bis zum oberen Bereich des rechten Oberschenkels fort. Anschließend führen Sie zwei horizontale Hautschnitte am oberen Ende der vertikalen Schnittlinie durch, um Hautlappen auf beiden Seiten zu bilden. Bewahren Sie die Gewebefeuchtigkeit, indem Sie kontinuierlich warmes PBS auf das exponierte Gewebe auftragen.Ziehen Sie die Haut straff und tragen Sie dann Vet Bond auf die Hautlappen auf, um die Beinstabilität weiter zu erh&ouml;hen. Fahren Sie fort, andere Bereiche der Haut festzukleben, um die Stabilit&auml;t des Beins zu verbessern, bevor Sie den Lymphknoten freilegen. Die Freilegung des Lymphknotens, ohne das umgebende Gewebe zu besch&auml;digen, ist der schwierigste Teil dieses Verfahrens.Beachten Sie besondere Vorsicht beim Trennen des Fettgewebes und der Muskulatur, wobei darauf geachtet werden muss, die umgebenden Blutgefäße und Lymphgefäße nicht zu beschädigen. Am besten heben Sie jeweils einige Muskelstränge leicht an und weg vom Lymphknoten, während Sie sie trennen. Verwenden Sie nun mikrochirurgische Pinzetten und Präparationsbesteck, um das umliegende Fettgewebe und die Muskeln vorsichtig auseinanderzuspreizen und den poplitealen Lymphknoten freizulegen, ohne die Integrität der zufließenden Blutgefäße und der zufließenden Lymphgefäße zu gefährden.Wenn der Lymphknoten ausreichend freigelegt ist und die Stabilität erreicht wurde, übertragen Sie die gesamte Maus-Halterungsanordnung umgehend auf den Objekttisch des Zwei-Photonen-Bildgebungsmikroskops und geben Sie sterilem PBS mit einer Temperatur von 37 Grad Celsius in ausreichender Menge in die mikroskopische Umgebungskammer, um den Lymphknoten zu überfluten. Halten Sie die PBS-Temperatur mit Hilfe einer Heizplatte mit Rückkopplungs-Sonde bei 37 Grad Celsius. Platziere eine separate Temperatursonde im Maus-Halter, um sicherzustellen, dass die Temperatur des PBS im Bereich von 36,5 bis 37,5 Grad Celsius bleibt.Eine rektale Sonde kann ebenfalls zur Überwachung der Körpertemperatur im Tiermodell verwendet werden. Verwenden Sie eine epifluoreszierende Lampe, um die Platzierung des Lymphknotens unter dem Objektiv zu unterstützen. Erheben Sie anschließend Fluoreszenzbildstapel unter Verwendung von Zeitintervallen, die für die gewünschte zelluläre Interaktion geeignet sind.Überwachen Sie den Zustand des Tieres in der Mikroskopkammer regelmäßig durch visuelle Inspektion. Dieser 3D-Aufnahmemoment wurde aus einer Zweiphotonen-Laserscanning-Mikroskopie-Aufnahmesequenz des poplitealen Lymphknotens einer Maus gewonnen, der am Tag vor der Bildgebung eine Million GFP-positiver Lymphozyten übertragen bekommen hatte. Selbst ohne weitere Orientierungspunkte.Strukturen wie die hier durch die gestrichelten Linien gekennzeichneten B-Zell-Follikel können leicht anhand der runden, kugelförmigen Zellen erkannt werden. In dieser Abbildung sind die Bewegungsspuren von Lymphozyten während einer Stunde kontinuierlicher Bildgebung dargestellt. Dies ermöglicht die Verfolgung von Zellwanderungsmustern sowie eine detaillierte Analyse des Zellverhaltens, wie beispielsweise Geschwindigkeit, Richtungskontinuität und Zell-Zell-Interaktionen.Beachten Sie die OID-Form der wandernden Lymphozyten. Hier wird eine Verteilung der Gesamtwanderungsgeschwindigkeit von adoptiv übertragenen Lymphozyten gezeigt, die in einer Probe eines Lymphknotens verfolgt wurden, insgesamt 15.125 Spuren analysiert. Die mittlere Geschwindigkeit betrug zwischen sechs und 14 Mikrometer pro Minute.Dieses Diagramm zeigt die unterschiedliche Verteilung der zellulären Migrationsgeschwindigkeit von Zellen im B-Zell-Follikel, dargestellt durch die offenen Datenbalken, und in der T-Zell-Zone, dargestellt durch die geschlossenen Datenbalken. Im Durchschnitt überstieg die Häufigkeit der zellulären Migration im B-Zell-Follikel jene der in der T-Zell-Zone verfolgten zellulären Migration. Obwohl sich die Zellen in der T-Zell-Zone in diesem Zeitraum mit höheren durchschnittlichen Geschwindigkeiten bewegten, basierend auf einer zeitraffenden intravitale Zwei-Photonen-Laser-Scanning-Mikroskopie-Aufnahme eines murinen Lymphknotens der Leistenregion, wurden insgesamt 1 × 10⁷ Lymphozyten von einer Ubiquitin-GFP-positiven Spendermaus isoliert und 24 Stunden vor der Bildgebung wie im Film gezeigt adoptiv intravenös in die Empfängermaus übertragen.Mithilfe dieser Technik lässt sich das Verhalten von Lymphozyten im Lymphknoten dynamisch visualisieren. Hier wird eine vergrößerte Ansicht der Bildsequenz aus dem Grenzbereich zwischen B-Zell-Follikel und T-Zell-Zone des vorherigen Videos gezeigt. Durch sorgfältige Analyse können unterschiedliche Zellverhalten in den jeweiligen Mikroumgebungen des Lymphknotens voneinander abgegrenzt werden.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man einen geeigneten Maushalter zum Abbilden des poplitealen Lymphknotens anfertigt, wie man den poplitealen Lymphknoten chirurgisch freilegt und wie man eine intravitale Mikroskopie durchführt, um das Verhalten von Immunzellen in C zwei zu beobachten.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Zwei-Photonen-Imaging hat Lymphozyten Motilität und zellulären Interaktionen im Lymphknoten unter basalen Bedingungen und während einer Immunantwort Antwort 1 aufgedeckt. Hier zeigen wir, adoptiven Transfer von T-Zellen, Isolierung von Lymphknoten und Imaging-Motilität der CD4 + T-Zellen in der explantierten Lymphknoten.

Dissection und 2-Photonen-Imaging der peripheren Lymphknoten in Mäusen

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Eine Dissektionsmethode zur Entnahme von murinen Kniekehle-Drainagelymphknoten für die ex vivo-Bildgebung

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Dieses Protokoll beschreibt eine Technik, um verschiedene Zellpopulationen in entwässernden Lymphknoten ohne Veränderungen in der Organstruktur abzubilden.

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Dieses Protokoll beschreibt die Generation der gemischten murinen Knochenmark Chimären mit spontanen autoimmune germinal Zentren, in denen, die autoreaktive Lymphozyten Photoactivatable grün fluoreszierendes Protein (PA-GFP) Reporter tragen. Dies bietet die Möglichkeit, zelluläre Lage in Geweben mit nachgeschalteten molekulare und funktionelle Analysen zu verknüpfen.

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Ein Protokoll zur Blockierung des Lymphflusses durch chirurgische Saat ierung von afferent lymphatischen Gefäßen wird vorgestellt.

Blockierung des Lymphflusses durch Suieren von afferenten Lymphgefäßen bei Mäusen

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Bildgebung des dem Maus-Kniekehlen-Lymphknoten

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