Name: Corneal Spendergewebe Vorbereitung für Endothelial Keratoplasty (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Lernen Sie die Präparation von Spenderhornhautgewebe für die endotheliale Keratoplastik mit Mikrokeratom-Dissektion. Diese Methode ermöglicht präzise, dünne Lamellen und verbessert chirurgische Ergebnisse.

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1. Setup: aseptische Arbeitsweise 11 <ol><li> Schalten Sie Laminar Flow Hood (LFH). </li><li> Schalten Sie das Stickstoffgas Steuereinheit. Stellen Sie sicher, dass Schlauch wird zwischen Konsole und Stickstoff-Tank-Einheit verbunden. Schalten Sie auf Gas. Gas-Einstellung sollte auf 50-60 PSI am Tank Regler eingestellt werden. Turbine Druck auf die Einheit lesen sollten 3,3 bis 3,4 Bar. </li><li> Drücken Sie auf die Schaltfläche Test. Luftdruck wird in den 700er und Pumpen 1 und 2 lesen sollte unter 200. Das Gerät piept, wenn die Tests abgeschlossen sind. Don Maske mit Augenschutz, soweit anwendbar, und die Kappe. Hände waschen und Don nicht-sterile Handschuhe. Legen Sie sterile Sets innerhalb LFH und offene Packungen zu sterilen Bereich zu etablieren. </li><li> Legen Sie eine sterile Medizin Tasse und einem sterilen Kunststoff-Becken mit steriler Gaze neben dem etablierten sterilen Bereich. Gießen Sie sterile Isopropylalkohol in die Medizin-Cup. Wischen Pachymetrie Sonde mit Alkoholtupfer / Pad und Sonde, nach unten, in die Medizin Tasse kippen. Die Sondenspitze sollte in Isopropylalkohol für 10 m einweicheninuten. Nach Pachymetrie Sonde für 10 Minuten eingeweicht hat, spülen Sie die Sondenspitze mit sterilem Wasser aus der Fertigspritze zu Alkohol-und Platz-Sonde in der Kunststoff-Becken zu entfernen. </li><li> Unter aseptischen Bedingungen öffnen und fallen lassen sterile Gegenstände (Messer, sterile Handschuhe, und der Hornhaut Betrachten Kammern) auf sterilen Bereich sofern nicht bereits Teil der vorgefertigten Packung. </li><li> Erhalten Hornhautgewebe in Medien und Erhaltung Ort innerhalb LFH (Abbildung 2). </li><li> Öffnen Sie Durchstechflasche (n) und entsorgen Sie den Deckel (s) in einen geeigneten Behälter Biohazard. Entsorgen Sie nicht sterile Handschuhe. </li><li> Don sterile Handschuhe. Platzieren Sie vorverpackte Plastikschüssel auf der Seite des Feldes, wo Pachymeter befindet. Schließen Sie Infusionsleitung an Hahn und Platz Spike Ende der Infusion Linie außerhalb der Haube die Sicherung der Linie in einer Weise, die Linie außerhalb der Haube verhindern, dass Sie wieder ins Kapuze und Berühren des sterilen Feldes. </li><li> Führen Hornhautgewebe Transfer. Vorsichtig gießen Sie das Gewebe und Medium, in einer Si-NGLE Bewegung, aus der vorhandenen Fläschchen in eine sterile Kammer Anzeige. Achten Sie darauf, um die endotheliale Seite mithalten. Setzen Sie die Kappe auf der Kammer. Halten Kammern, die Gewebe und Medien auf sterilen Bereich. Entfernen Fläschchen (e) von LFH. Entfernen und entsorgen Sie sterile Handschuhe. </li><li> Spike ausgewogene Salzlösung (BSS) Flasche mit Infusionsleitung. Hängen Flasche steril BSS etwa vier Fuß vom Arbeitsbereich Oberfläche. </li><li> Öffnen Sie zwei Paar sterile Handschuhe und sterile Kittel mit Handtuch. </li><li> Führen Sie 6 Minuten chirurgische Macchia und trockene Hände. </li><li> Setzen Sie auf sterilen Kittel, dann werden beide Paar sterile Handschuhe. </li><li> Öffnen Instrument Boxen und Ort die Inhalte auf den sterilen Bereich. </li><li> Dispense 10-20 ccm BSS-Lösung in Metall-Becken oder Medizin Tasse. Füllen sterilen Pipette mit BSS-Lösung. Schließen Sie Hahn und Infusionsleitung an Infusionsanschluss der Vorderkammer und bündig mit BSS, so dass eine kleine Menge sichtbar oben auf dem Kolben ist. </li><li> Position künstliche Kammer in LFH aufTop of Mull. Der untere Kolben durch Drehen Graft-Dichtring gegen den Uhrzeigersinn. </li></ol> 2. Verfahren <ol><li> Mit einer Pinzette vorsichtig fassen Hornhaut durch Sklerarand. Öffnen Sie zum Hahn-System mit BSS spülen, während sorgfältig Zentrierung Hornhaut auf der Oberseite des Kolbens mit der endothelialen Seite nach unten. Wenn sich Blasen unter der Hornhaut sichtbar sind, die Infusion mit BSS und leichtes Verschieben der Hornhaut zu entfernen. Unterbrechen Infusion einmal Luftblasen entfernt sind. Stellen Sie sicher, dass die Hornhaut auf den Kolben (3a) zentriert ist. </li><li> Position Vorderkammer Abdeckung auf Basis Sicherungsring so dass die Laschen der Abdeckung passen in die Freiflächen an der Basis. Verriegeln Sie decken in den Sockel durch Drehen im Uhrzeigersinn Abdeckung 15 °. Raise Kolben nach oben und ziehen Sie vollständig (Abbildung 3b). </li><li> Mit einem sterilen behandschuhten Finger berühren oben Hornhaut um sicherzustellen, dass ausreichender Druck vorhanden ist, um den Vorgang durchzuführen. </li><li> Prüfen Sie, indem Sie Pachymetrie Sonde auf der Oberfläche of Hornhaut an Dicke Ablesung zu erhalten (Abbildung 4). Die Standardabweichung muss kleiner als 10 ist. Wenn nicht, wiederholen die Messung. Mit dem sterilen Handschuhen, die nicht verwendet wurde, um die Pachymetrie durchführen, vorbei an der Turbine Schlauch an die Hand, die Pachymetrie durchgeführt und schrauben Sie die Turbine Schlauch in die Steuereinheit. Haben Sie die Unterstützung Techniker Rekord Pachymetrie Lesen. </li><li> Kontaminierte Handschuhe. </li><li> Mit einer sterilen Markierstift, ziehe eine Linie von 4mm Limbus in Richtung Zentrum der Hornhaut (oder markieren Sie nicht, wenn Chirurgen lieber keine Markierung). Mit der bereitgestellten Pipette fünf Tropfen der BSS auf der Hornhaut zu platzieren. </li><li> Sofern nicht besondere Anweisungen durch den Chirurgen erbracht werden, werden die 300 um Schneidkopf verwendet, wenn der Zuschnitt Pachymetrie Messung ist weniger als 600 um betragen. Wenn mehr als 600 um, wird der 350 um Schneidkopf eingesetzt werden. </li><li> Mit Gewinde zugewandt Sie und Zahl nach oben, laden Klinge in die rechte Seite des Kopfes Mikrokeratom, spitzen Ende zuerst, die Vermeidung von Kontakt with der Klinge. </li><li> Halten Sie den Kopf auf jeder Seite, schrauben Sie den Kopf auf die Turbine. Ziehen Sie die künstliche Kammer mit den Fingern. </li><li> Schrauben Sie auf Turbine Turbine Schlauch. </li><li> Testen Sie die Klinge Schwingung durch Drücken der Vakuum-Pedal einmal, Eintauchen der Schneidkopf in sterilem Wasser und Impuls die Turbine für 5 Sekunden. </li><li> Ziehen Kolben. </li><li> Ort Mikrokeratom auf den Sockel mit Aufbaupfosten und Position um fünf Uhr. Drücken und halten Turbine Blade Pedal zu (Abbildung 5a) oszillieren. </li><li> Mit Zeigefinger und Daumen halten Mikrokeratom auf halbem Weg zwischen der Basis und der Spitze der Turbine. Drehen Sie am Handgelenk, um einen reibungslosen, selbst durch und über die Hornhaut geschnitten zu machen. Release-Turbine treten und heben Mikrokeratom Anhieb Einheit. Drücken Sie Vakuum-Pedal zum Ausschalten Vakuum (Abbildung 5b). </li><li> Don eine sterile Handschuhe und überprüfen Sie noch einmal nach Hornhaut-Pachymetrie Lesen Kappe wird erreicht, indem Sonde auf Hornhautoberfläche zu zweiten Dicke Lektüre sein zu erhalten entferntbewusst, dass das Gewebe sehr dünn und leicht beschädigt ist. Verunreinigte Handschuhe. Viel Unterstützung techniker Rekord Pachymetrie zweiten Lesung. </li><li> Mit einer sterilen Markierstift, setzen Sie ein Zeichen auf Wunsch von Chirurgen, auf der Mitte der peripheren Rand der Rest Stromabett in der künstlichen Kammer. Geben Sie einige Tropfen von steriler BSS auf Rest-Stroma-Bett. </li><li> Entfernen Sie die vordere Kappe von der Hornhaut Mikrokeratom (Abbildung 6) und ersetzen Sie es auf die Hornhaut vor dem Entfernen von Hornhaut künstlichen Vorderkammer. Cap sollte auf der Hornhaut zentriert werden mittels peripherer Kennzeichnung an die Kappe richtig ggf. ausrichten. Verwenden Sie Tupfer Speer sanft positionieren Sie die Kappe auf der Hornhaut. Verwenden Sie frische Speer, jede BSS unter vordere Kappe zu absorbieren. </li><li> Absperrhahn öffnen, drehen Kammer Upside-Down-und untere Kolben langsam genug, um eine Verformung zu verhindern Hornhaut. Schalte Basis und ermöglichen dem Druck der BSS-Flow, um die künstliche Kammer-Becher von der Basis zu schieben. Mit Zange, ziehen eint die Cornea-Rand an 9, 12 und 3 Uhr-Position, um es von der Schale zu lösen. Einmal gelöst, verwenden Pinzette an der 12-Uhr-Position, um Hornhaut zu entfernen. Legen Sie die Hornhaut in der Anzeigen-Kammer-, Endothel-Seite nach oben (Abbildung 7). Setzen Sie den Deckel nach Betrachtungswinkel Kammer. Entfernen Sie sterile Handschuhe. </li><li> Ziehen Sie Sichtkammer Deckel. </li><li> Führen Sie die nach-cut Spaltlampe Auswertung und spiegelnde Mikroskopie der Hornhaut und der Rekord Erkenntnisse. </li><li> Ort Kammer (n) in entsprechenden Abschnitt des Kühlschranks. </li><li> Verpackung für den Transport zum Arzt (Abbildung 8). </li></ol> 3. Repräsentative Ergebnisse Richtiger mechanischen Mikrokeratom Dissektion der Spender-Hornhaut führt zu glatten, gleichmäßigen Lamellen der Hornhaut Spendergewebe. Dies wird durch eine optische Kohärenztomographie (OCT) Bild der Hornhaut im Querschnitt (9) gezeigt. Die endgültige hinteren Hornhautgewebe sollten ausreichend dick sein, wie durch pachymet gemessenry. Im Laufe der letzten 6 Monate an der Michigan Eye Bank, betrug die mittlere Pre-Processing Hornhautdicke 558 Mikron und Post-Processing Dicke der posterioren Hornhaut betrug 158 Mikron. Siebenundachtzig Prozent der Mikrokeratom-seziert Spendergewebe zwischen 100-200 Mikrometer, 10,9% gemessen&gt; 200 Mikrometer und 2,1% gemessen &lt;100 Mikrometer gemessen. Der hintere Hornhautgewebe muss beibehalten hohe Endothelzelldichte (ECD) zur Verbesserung der endothelialen Funktion, um das Transplantat Empfänger liefern. Specular-Mikroskopie wird verwendet, um ECD zu messen. In den letzten 6 Monaten hatten alle das Hornhautgewebe als förderfähig für endothelialen Keratoplastik von der Michigan-Eye Bank eine ECD von&gt; 2200 Zellen / mm 2. Neunundneunzig Prozent der vorgeschnittenen DSAEK Gewebe hatte ein Post-Processing ECD&gt; 2400 Zellen / mm 2, und 19% hatten eine ECD&gt; 3000 Zellen / mm 2. Die mittlere Veränderung in der Vor-bis Post-Processing ECD war mit 1,2% (p = 0,0003, gepaarter zweiseitiger t-Test) zu vernachlässigen.Komplikationen, die während des Eingriffs auftreten können, gehören der Verlust von Druck, asymmetrische Dissektion, und der wesentlichen Gewebe Einbuchtung (resultierend in Hornhautendothelzellzahlbestimmung Verlust). Unsachgemäße Dissektion kann auch im Gewebe Perforation führen. <img alt="1" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig1.jpg" /> 1. Gesamtsystem der Hornhautgewebe Vorbereitung Endothelial Keratoplasty 1a bis 1e sind Querschnittsansichten Darstellungen der Spender-Hornhaut Herstellung. Figuren 1f bis 1i sind Querschnittsansichten Darstellungen des Transplantat-Empfängers der Hornhaut während DSAEK Chirurgie. <ol class="lalpha"><li> Die Spender-Hornhaut wird auf einer künstlichen Vorderkammer montiert und seziert mit dem Mikrokeratom Kopf. </li><li> Nach Gewebedissektion, sind die beiden Lamellen getrennt, aber die vordere Lamelle (GAP) wird wieder auf die Hornhaut blieb Bett für den Transport zum Arzt positioniert. </li><li> ImOP, verwendet der Chirurg einen Trepan, um die zentrale Hornhaut senkrecht durchschneiden beide vorderen und hinteren Lamelle. </li><li> Nach dem Trepan Schnitt wird die periphere Spenderhornhaut vom Spielfeld entfernt. </li><li> Die hintere Lamelle vorsichtig aus dem vorderen Lamelle mit einem Spatel entfernt. Der Spender hinteren Lamelle (DSAEK Gewebe) ersetzt den erkrankten Abschnitt des Empfängers Hornhaut (1i). </li><li> Der Patient hat einen kranken posterioren Hornhaut entfernt werden soll. </li><li> Die erkrankten hinteren Hornhaut wird mit einer intraokularen Instrument (Reverse Sinsky Haken) in einem großen Kreis mit einem Durchmesser erzielt. </li><li> Nach der Wertung des erkrankten Hornhaut, wird die Cornea-Membran entfernt. </li><li> Der Spender hinteren Lamelle (DSAEK Gewebe) wird für den Empfänger ein Auge platziert. </li></ol><img alt="2" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig2.jpg" /> Abbildung 2. Hornhautgewebe in Media. Hornhautgewebe ist in Konservierungsmedien nach harvesting vom Spender. <img alt="Abbildung 3" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig3.jpg" /> Abbildung 3. Hornhautgewebe auf künstliche Vorderkammer. <ol class="lalpha"><li> Hornhautgewebe wird auf die künstliche Vorderkammer vor Basis Sicherungsring oder Gewebedissektion montiert. </li><li> Hornhautgewebe wird auf künstliche Vorderkammer mit Sockel Klemmring über das Gewebe versiegelt montiert. </li></ol><img alt="Abbildung 4" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig4.jpg" /> Abbildung 4. Hornhautgewebe Dicke Prüfen. Die Hornhautdicke mittels Ultraschall überprüft wird Pachymetrie Sonde auf der Oberfläche der Hornhaut. <img alt="Abbildung 5" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig5.jpg" /> Abbildung 5. Hornhautgewebe Dissection. <ol class="lalpha"><li> Mikrokeratom Klinge ist an der Basis mit Montage-und post-Position um fünf Uhr gestellt. </li><li> Mikrokeratomwird durch Hornhaut geleitet, um das lamellare Dissektion zu machen. </li></ol><img alt="6" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig6.jpg" /> Abbildung 6. Anterior Cap, der Hornhaut nach der Sektion. Der vordere Hornhaut Kappe ist nach dem Mikrokeratom Sezieren frei ist abgeschlossen. <img alt="7" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig7.jpg" /> Abbildung 7. Seziert Hornhaut in Sichtkammer. Nach Präparation abgeschlossen ist, wird die Hornhaut an den Sichtkammer für den Transport wird zurückgegeben. <img alt="8" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig8.jpg" /> 8. Hornhaut in Verpackungen für den Transport. Die Hornhaut in der Anzeigen-Kammer wird dann sicher für den Transport zum Arzt verpackt. <img alt="Abbildung 9" src="/files/ftp_upload/3847/3847fig9.jpg" /> Abbildung 9. Oktober Aussehen der Cornea. Der Oktober von derendgültige seziert Hornhaut (im Querschnitt) zeigt, dass die Hornhaut in zwei Hälften geteilt wird. Die Schnittstelle ist stärker reflektiert als das umgebende Gewebe, wie durch den Pfeil angedeutet.

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</ol>

Drs. Woodward und Shtein haben nichts zu offenbaren. Herr Mavin und Herrn Titus sind Angestellte der Midwest Hornhautbanken.

Die innerste Schicht der Hornhaut, das Endothel, hält die optische Klarheit der Cornea durch Aufrechterhalten Hornhaut Dehydratisierung. Zahlreiche Erkrankungen gezielt Einfluss auf die Gesundheit und Lebensfähigkeit des Hornhautendothels einschließlich Dystrophien, Infektionen, entzündliche Prozesse und Degenerationen. Bis vor kurzem erforderlich Hornhauttransplantation um erkranktes Hornhautendothels ersetzen gesamten Dicke der Hornhaut-Transplantation. Im vergangenen Jahrzehnt hat gezielte Austausch der hinteren Hornhaut durch partielle Dicke Hornhaut-Transplantation, wie DSAEK Chirurgie, in der Lage, das gleiche Ziel mit einer kürzeren Erholungszeit zu erreichen. Unabhängig von Technik muss transplantierter Gewebe halten eine gesunde Endothel, um optische Klarheit in der transplantierten Hornhaut zu halten, was dazu führt, haben alle Gewebe Verarbeitungstechniken zusätzliche Schritte, um das Hornhautendothel schützen. Automatisierte Mikrokeratom dissection ist derzeit thE-Standard für Hornhautgewebe Vorbereitung auf endothelialen Keratoplastik. Die Nutzung der Mikrokeratom wurde gezeigt, dass Spendergewebe Perforation zu verringern und zu beschleunigen visuelle Erholung als in den manuellen Dissektion 5 verglichen. Wenn DSAEK ursprünglich eingeführt wurde, kaufte einige Chirurgen Mikrokeratom Geräte und Spender durchgeführt lamellare Dissektion im OP-Saal zu Beginn der Operation. Wenn Gewebe Vorbereitung gescheitert, wäre die Operation müssen storniert werden verursacht Unannehmlichkeiten und Kosten für den Patienten und den Chirurgen werden. Im Jahr 2006 begann die Durchführung Auge Banken Mikrokeratom dissection &quot;off site&quot; unter kontrollierten Bedingungen im Auge Bank Labor einen Tag vor der Operation 12. Wenn Gewebe Vorbereitung nicht in dieser Einstellung gibt es Zeit, eine weitere Dissektion mit frischem Gewebe durchzuführen. Mikrokeratom Dissektion der Spender posteriore lamellare Hornhautgewebe erfordert schonende und präzise Technik, um Komplikationen zu minimieren. Die Hornhaut muss gelegt werden GenTLy auf der künstlichen Vorderkammer (AAC), um Schäden an den empfindlichen Endothelzellen zu vermeiden. Sobald die Hornhaut angebracht und ausgerichtet auf die AAC, muss der Verriegelungsring angeordnet und angepasst für eine Abdichtung zu hohen Druck in der Kammer aufrecht zu erhalten und wird die Wahrscheinlichkeit von Gewebe Zusammenbruch während der Dissektion Mikrokeratom. Um eine einheitliche Dissektion gewährleisten, sollte das Mikrokeratom Kopf gedreht in einem ständigen, glatte Art und Weise zu sein. Nach Dissektion, muss das Gewebe wieder vorsichtig gehandhabt werden, um Endothelzellen Schaden zu minimieren. Ferner ist es wichtig, zu bestätigen, dass die lamellare Schnitt zentriert und abgeschlossen ist, um sicherzustellen, dass die hintere Lamelle geeignet sein zur Verwendung in der Chirurgie 13. Hornhaut-Spender Perforation ist eine gefürchtete Komplikation dieses Verfahrens, es wird weniger häufig mit Erfahrung. Wenn wiederholte Perforationen während Mikrokeratom Pässe auftreten, ist es wichtig, mehrere Schritte des Verfahrens zu überprüfen. Der Maisea muss ordnungsgemäß montiert und ausgerichtet auf die AAC. Die Dichtheit und hohem Druck sollte vor Mikrokeratom Durchlauf erhalten werden und während des gesamten Verfahrens. Gelegentlich existiert Rest Bindehaut auf der Sklera Felge und muss weg vor der Montage zerlegt werden. Das Mikrokeratom Klinge sollte scharf sein und ohne Kerben. Die richtige Dicke Mikrokeratom Kopf sollte basierend auf der geschätzten Hornhautdicke ausgewählt werden. Das Mikrokeratom Kopf muss einwandfrei schwingen vor dem Anstich. Mit weiteren Probleme mit dieser Technik finden Sie in der Mikrokeratom-Provider, um sicherzustellen, dass alle Geräte ordnungsgemäß funktioniert. Selbst wenn durchgeführt perfekt, es gibt jedoch einige Einschränkungen zu dieser Technik. Mikrokeratom Köpfe sind von Hornhautgewebe bei verschiedenen Dicken geschnitten, jedoch ist das Verhältnis der Mikrokeratom Kopf bis zur endgültigen Gewebedicke ungenau mit dem gleichen Kopf Bereitstellen einer Vielzahl von endgültigen Gewebedicke7. Darüber hinaus, wird ein erheblicher Lernaufwand existiert und Komplikationen in der Vorbereitung häufiger für neue Benutzer. Die Durchführung der lamellaren Dissektion im Auge Bank-Einstellung können geschulte Techniker, die dieses Verfahren durchführen viele Male pro Tag, um ihre Technik zu optimieren und minimiert dadurch Komplikationen aufgrund von Unerfahrenheit. Modifikationen der Technik für Mikrokeratom-assisted Hornhaut-Dissektion für endothelialen Keratoplastik existieren. Einige ziehen es vor viskoelastischen Materials oder Hornhaut-Speichermedien statt ausgewogener Salzlösung unter der Hornhaut-Taste auf der künstlichen Vorderkammer mit der Absicht, die erhöhten Schutz der Hornhautendothels verwenden. Es gibt auch Variationen in dem Verfahren zum Bestimmen des Ortes, in dem das Mikrokeratom Einschnitt eingeleitet werden sollte. Verschiedene Banken und andere Auge Hornhaut-Chirurgie kann bestimmte Vorlieben, wie die Hornhaut wird zur Identifizierung der markierten habendie Hornhautvorderfläche Kappe oder posteriore lamellare Orientierung. Es wird darauf hingewiesen, dass die Hersteller ähnliche Geräte zu machen, dass in diesem Protokoll verwendet werden. Die besonderen Anweisungen des Herstellers sollten je nachdem mit Ausrüstung verwendet wird folgen. Zuverlässig Auge Bank Vorbereitung seziert Hornhautgewebe für DSAEK Chirurgie, hat sich für die breite Akzeptanz dieser relativ neuen Operationstechnik. Einmal wurde Chirurgen zuversichtlich in Auge Banken Durchführung der &quot;erste Schritt&quot; in Hornhauttransplantation - nämlich Gewebe Vorbereitung, viele praktische Einschränkungen DSAEK wurden gelindert. Eye Banken waren in der Lage zuverlässig zu halten mit der Nachfrage nach veredelten Gewebe mit sicheren, wirksamen und rechtzeitige Bereitstellung von Spendergewebe. Hochwertige DSAEK Gewebe können nun im Voraus und OP Zeit und Gewebe Vorbereitung Komplikationen verringert haben 9, 14-15 bestellt werden. Dieses Protokoll beschreibt die Preparatiauf der DSAEK Transplantate aus der Perspektive des Auges Bank Verarbeitung von Hornhaut Spendergewebe, allerdings ist diese Technik direkt für Chirurgen bei der Vorbereitung ihrer eigenen lamellare Hornhaut Spendergewebe sowie interessierte die Interessenten bei der Durchführung von Labor-oder klinischen Studien auf lamellare Hornhaut Transplantation. Zukünftige Richtungen für Hornhaut-Lamellen-Vorbereitung gehören der Einsatz des Femtosekunden-Lasers für Tissue-Verarbeitung, Schaffung von &quot;ultradünnen&quot; DSAEK Hornhautgewebe, oder die Zubereitung von Hornhaut-Endothel Schriftrollen für Descemet-Membran Endothel Keratoplastik (DMEK) Chirurgie. Endothelial Keratoplastik ist eine OP-Feld in der Evolution und die symbiotische Beziehung zwischen dem Auge und der Hornhaut Bank Chirurg wird sich weiter verändern, wie chirurgische Techniken optimiert sind.

<table border="1"><tbody><tr><td> Bezeichnung des Geräts </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> Mikrokeratom </td><td> Moria </td><td> 1021174 </td></tr><tr><td> Künstliche Vorderkammer Basis </td><td> Moria </td><td> 19161-562 </td></tr><tr><td> Künstliche Vorderkammer Kappe </td><td> Moria </td><td> 19172-220 </td></tr><tr><td> Mikrokeratom Kopf 300 </td><td> Moria </td><td> O304 </td></tr><tr><td> Mikrokeratom Leiter 350 </td><td> Moria </td><td> N791 </td></tr><tr><td> Konsole </td><td> Moria </td><td> 19360-3482 </td></tr></tbody></table>

corneal spendergewebe vorbereitung für endothelial keratoplasty

Corneal Donor Tissue Preparation for Endothelial Keratoplasty

In den vergangenen zehn Jahren haben die Hornhauttransplantation chirurgischen Techniken revolutionäre Veränderungen durchgemacht 1,2. Seit ihrer Gründung hat die traditionelle volle Dicke Hornhaut-Transplantation war die Behandlung in den Augen, die von Hornhauterkrankung beschränkt wiederherzustellen. Einige Nachteile dieser Vorgehensweise sind die ein hohes Maß an postoperativen Astigmatismus, fehlende vorhersehbare refraktive Ergebnis, und eine Störung auf der Augenoberfläche. Die Entwicklung der Stripping Endothelial Descemet-Keratoplastik (DSEK), die Transplantation nur die hintere Hornhautstroma, Descemet-Membran und Endothel, hat sich dramatisch Behandlung von Hornhaut-Endothel Krankheit verändert. DSEK wird durch einen kleineren Einschnitt durchgeführt; diese Technik vermeidet &quot;Open Sky&quot; Chirurgie mit seinem Risiko von Blutungen oder Vertreibung, verringert die Inzidenz des postoperativen Wunddehiszenz, reduziert refraktive Ergebnisse unvorhersehbar und kann die Rate der Transplantat-Abstoßung 06.03 verringern. ove_content &quot;&gt; Zunächst wurde Hornhaut Spender posteriore lamellare Dissektion für DSEK manuell durchgeführt 1, die sich in variablen Transplantat Dicke und Schäden an der empfindlichen Hornhaut-Endothel Gewebe während der Gewebe-Verarbeitung. Automatisierte lamellare Dissektion (Descemet-Stripping automatisierte endothelialen Keratoplastik, DSAEK) wurde entwickelt, um diesen zu begegnen Fragen. Automatisierte Dissektion nutzt die gleiche Technologie wie LASIK Hornhaut-Flaps Schöpfung mit einem mechanischen Mikrokeratom Klinge, die gleichmäßige und dünne Gewebe-Transplantaten für DSAEK Chirurgie mit minimalem Hornhautendothelzellzahlbestimmung Verlust im Gewebe Verarbeitung erstellen können. Eye Banken bieten bereits volle Dicke Hornhäute für chirurgische Transplantation für viele Jahre. Im Jahr 2006 begann Auge Banken zu Methoden für die Versorgung vorgeschnittenen Hornhautgewebe für endothelialen Keratoplastik zu entwickeln. Mit dem Eingang des Hornhaut-Chirurgie, Augen-Banken haben gründliche Protokolle entwickelt, um sicher und effektiv vorbereiten posteriore lamellare Gewebe foder DSAEK Chirurgie. Dies kann präoperativ am Auge Bank durchgeführt werden. Die Forschung zeigt sich kein signifikanter Unterschied in Bezug auf die Qualität der Gewebe 7 oder Behandlungsergebnisse mit 8,9 Auge Bank vorgeschnittene Gewebe im Vergleich zu Chirurgen präparierten Gewebe für DSAEK Chirurgie. Für die meisten Chirurgen Hornhaut, speichert die Verfügbarkeit von vorgeschnittenen DSAEK Hornhautgewebe Zeit und Geld 10 und reduziert die Belastung des Durchführens der Donor Hornhaut Präparation im Operationssaal. Zum Teil wegen der Fähigkeit des Auges, die Banken zur Bereitstellung eines hochwertigen hinteren Lamellen der Hornhaut in einer fristgerechten Weise, hat sich zum Standard DSAEK der Pflege für chirurgische Behandlung von Hornhaut-Endothel Krankheit. Das Verfahren, das wir beschreiben, ist die Vorbereitung der hinteren lamellare Hornhaut am Auge Bank für die Transplantation in DSAEK Chirurgie (Abbildung 1).

Endothelial Hornhauttransplantation ist eine chirurgische Technik zur Behandlung von Krankheiten Hornhautrückfläche. Mechanischen Mikrokeratom Dissektion von Gewebe führt zu dünneren, symmetrische Transplantate vorzubereiten mit weniger Endothelzellverlust und verbesserten Ergebnissen. Dissektionen können am Auge durchgeführt Bank vor der Hornhaut-Transplantation Chirurgie werden.

Corneal Spendergewebe Vorbereitung für Endothelial Keratoplasty

In den letzten zehn Jahren haben die chirurgischen Techniken der Hornhauttransplantation revolutionäre Veränderungen erfahren1,2. Seit ihrem Beginn hat die traditionelle Voll-...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, lamellares Hornhauttransplantatgewebe zuverlässig herzustellen, das für eine Transplantation geeignet ist. Dies wird erreicht, indem zunächst ein steriles Feld im laminaren Flusswerk eingerichtet wird. Anschließend wird die Hornhaut in einer künstlichen Vorderkammer fixiert.Anschließend wird ein Mikrokeratom verwendet, um eine gleichmäßige Passage durch die Hornhaut zu führen. Der letzte Schritt besteht darin, die Hornhaut vorsichtig aus der künstlichen Vorderkammer in das Lagermedium zu überführen. Letztendlich wird die erfolgreiche Vorbereitung der lamellären Transplantation durch Betrachtung der Hornhaut am Spaltlampenmikroskop und durch Spiegelmikroskopie der endothelialen Zellen überprüft.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie der penetrierenden Keratoplastik besteht darin, dass bei DSEK nur der hintere Teil der Hornhaut ersetzt wird, wodurch ein chirurgischer Eingriff mit kleinem Schnitt, weniger Nähten, schnellerer Genesung und verbesserten refraktiven Ergebnissen möglich ist. Eine visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend. Die lamellären Dissektionsschritte bei der endothelialen Keratoplastik sind schwer zu erlernen.Bei der Gewebeschnittführung sind Präzision und Sorgfalt erforderlich, um gesundes Hornhautgewebe zu erhalten. Schalten Sie zunächst das Stickstoffgas in der sterilen Arbeitsbank auf 50 bis 60 PSI ein. Der Turbinendruck am Gerät sollte 3,3 bis 3,4 bar betragen.Stellen Sie sicher, dass der Druck auf der Moria-Konsole bei den Pumpen eins und zwei im Bereich der siebenhundert liegt. Der Druck sollte unter 200 PSI liegen. Unter Verwendung aseptischer Technik bereiten Sie ein steriles Feld mit geöffneten sterilisierten Sets und dem Spenderhornhautgewebe vor und vergewissern Sie sich, dass die Pachymetrie-Sonde mit Isopropanol sterilisiert und gereinigt wurde.Danach, nachdem der Inhalt aus dem sterilen Tablett entfernt wurde, die Infusionsleitung mit dem Hahn verbinden und das Spitzenende der Leitung aus dem Haube herausführen. Die Infusionsleitung ablegen und das sterile Tablett entfernen. Als Nächstes eine Flasche mit isotonischer Salzlösung anstechen und etwa vier Fuß über dem Arbeitsbereich aufhängen.Führen Sie nun eine sechsminütige chirurgische Desinfektion durch und trocknen Sie sich mit einem sterilen Tuch ab. Ziehen Sie im Haubenfeld einen sterilen Kittel und zwei Paar sterile Handschuhe an. Öffnen Sie die Instrumentenkästen und legen Sie deren Inhalt auf das sterile Feld.Geben Sie 10 bis 20 cm³ BSS in ein Metallbecken oder Medikamentenbecher und füllen Sie eine sterile Pipette. Verbinden Sie damit das Stopcock und die Infusionsleitung mit dem Infusionshafen der vorderen Augenkammer und spülen Sie diesen mit BSS aus. Beenden Sie das Spülen, wenn BSS auf der Oberseite des Kolbens sichtbar wird.Platzieren Sie nun die künstliche Kammer auf steriler Gaze und senken Sie den Kolben ab, indem Sie den Transplantat-Verdrehring mit einer Pinzette etwa fünf Millimeter gegen den Uhrzeigersinn drehen. Zentrieren Sie die Hornhaut über dem Kolben, wobei die endotheliale Seite nach unten zeigt, und spülen Sie das System mit BSS, bis sich keine Luftblasen unter der Hornhaut befinden. Bewegen Sie die Hornhaut bei Bedarf vorsichtig.Setzen Sie nun die Vorderkammerabdeckung in die offenen Stellen des Basisverriegelungsrings ein und verriegeln Sie sie durch eine kleine Drehung um 15 Grad im Uhrzeigersinn. Heben Sie anschließend den Kolben an und befestigen Sie die Kammer vollständig an der Basis, indem Sie mit einem sterilen, behandschuhten Finger nachziehen. Berühren Sie die Hornhautoberfläche, um zu überprüfen, ob ausreichend Druck vorhanden ist, um den Eingriff durchzuführen.Platzieren Sie nun die Pachymetrie-Sonde auf der Hornhautoberfläche und lassen Sie einen Assistenten den Messwert aufzeichnen. Wenn die Standardabweichung mehr als 10 Mikrometer beträgt, wiederholen Sie die Messung mit einer sterilen, behandschuhten Hand. Reichen Sie den Turbinenschlauch an die andere Hand weiter und schrauben Sie den Turbinenschlauch in die Steuereinheit ein.Nachdem die kontaminierten Handschuhe entsorgt wurden, einige Tropfen BSS auf die Hornhaut geben, es sei denn, der Chirurg gibt etwas anderes vor. Andernfalls eine Schneidklinge entsprechend der Dicke der Hornhaut auswählen, wobei der Faden zu Ihnen zeigt und die Nummer nach oben weist. Die Klinge mit der Spitze zuerst in die rechte Seite des Mikrokeratoms einlegen.Vermeiden Sie stets den Kontakt mit der Klinge, indem Sie den Kopf an jeder Seite halten. Schrauben Sie ihn auf die Turbine und schrauben Sie die Turbine auf den Turbinenschlauch. Prüfen Sie die Klingenoszillation, indem Sie das Vakuum-Pedal einmal betätigen, während sich der Schneidkopf in BSS befindet, und pulsen Sie die Turbine für fünf Sekunden.Jetzt den Kolben fingerfest anziehen. Anschließend das Mikrokeratom an der Säule auf dem Sockel montieren und in die Position fünf Uhr bringen. Danach das Turbinenpedal drücken und gedrückt halten, um die Klinge zu oszillieren.Halten Sie das Mikrokeratom mit Zeigefinger und Daumen in der Mitte zwischen der Basis und der Oberseite der Turbine. Drehen Sie das Handgelenk, um einen gleichmäßigen, glatten Schnitt durch die Hornhaut und darüber hinaus auszuführen. Stellen Sie sicher, dass der Durchgang des Mikrokeratoms glatt und gleichmäßig verläuft, indem Sie eine konstante Geschwindigkeit beibehalten; andernfalls kann dies zu einer ungleichmäßigen Transplantatdicke führen.Lösen Sie das Turbinenpedal und heben Sie das Mikrokeratom direkt nach oben von dem Gerät ab. Schalten Sie es dann aus. Ziehen Sie einen sterilen Handschuh an und überprüfen Sie mithilfe eines Assistenten erneut die Pachymetrie-Messung, wobei Sie darauf achten sollten, dass das Gewebe sehr dünn und leicht beschädigt werden kann.Danach einige Tropfen steriler BSS auf das verbleibende stromale Bett geben. Anschließend die vordere Kappe wieder in der Kammer auf die Hornhaut aufsetzen. Mit einer Tupferkugel die Kappe anhand der vorhandenen Markierungen zentrieren und jegliche BSS unterhalb der vorderen Kappe aufsaugen.Öffnen Sie nun den Hahn, drehen Sie die Kammer seitlich und senken Sie den Kolben langsam genug ab, um eine Verformung der Hornhaut zu verhindern. Entriegeln Sie die Basis und lassen Sie den Druck des BSS-Durchflusses die künstliche Kammertasse so wirken, dass die Hornhaut sich von der Tasse löst. Ziehen Sie vorsichtig mit einer Pinzette am Rand der Hornhaut an den Positionen 9, 12 und 3 Uhr.Wenn die Hornhaut gelockert ist, fassen Sie den Rand an der 12-Uhr-Position und übertragen die Hornhaut vorsichtig in die Beobachtungskammer, wobei die endotheliale Seite nach oben zeigt. Schließen Sie anschließend die Beobachtungskammer. Lassen Sie langsam zu, dass sich die Kappe von der vorderen Augenkammer löst.Dadurch wird sichergestellt, dass die Hornhaut nicht einstürzt, was zu Schäden am Endothel führen könnte. Führen Sie abschließend eine Spaltlampenuntersuchung und eine Spiegelmikroskopie der Hornhaut durch. Anschließend kühlen Sie die Kammern und verpacken die Hornhaut für den Transport zum Chirurgen. Eine korrekte mechanische Mikrokeratom-Dissektion der Spenderhornhaut führt zu einer glatten, gleichmäßigen lamellären Spenderhornhaut. Bei sechsmonatigen Aufzeichnungen betrug die mittlere Hornhautdicke vor der Aufbereitung 558 Mikrometer und die Dicke des hinteren Hornhautgewebes nach der Aufbereitung 158 Mikrometer. Das hintere Hornhautgewebe muss eine hohe endotheliale Zelldichte aufweisen, um eine verbesserte endotheliale Funktion für den Transplantatempfänger sicherzustellen. Dies wurde in den letzten sechs Monaten mittels Spiegelmikroskopie gemessen.Alle als geeignet erachteten Hornhautgewebe für die endotheliale Keratoplastik wiesen mehr als 2.200 endotheliale Zellen pro Quadratmillimeter auf. Die mittlere Veränderung der endothelialen Zelldichte (ECD) von vor zu nach der Aufbereitung war mit 1,2 % vernachlässigbar. Nachdem Sie dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man LA-melo-Gewebe für eine Daic-Chirurgie vorbereitet. Sobald diese Technik beherrscht ist, kann sie innerhalb von 20 Minuten durchgeführt werden, sofern sie korrekt ausgeführt wird.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Das Papier beschreibt ein vereinfachtes Verfahren zur Hornhaut-und Verbrauchssteuern zu retinalen Gewebe aus dem Augapfel von menschlichen Leichen Spendern auszuhöhlen. Die hier beschriebene Technik wird verbrauchsteuerpflichtige guter Qualität zu Geweben zur Transplantation oder chirurgische Zwecke oder Forschungszwecke ohne Beschädigung anderer Gewebe des Augapfels verwendet werden zu helfen.

Ein vereinfachtes Verfahren für<em&gt; In-situ</em&gt; Exzision der Hornhaut und der Netzhaut Ausweiden von Gewebe aus menschlichen Augapfel

Mäuse wurden als Modell für die Untersuchung vieler Formen der Transplantation verwendet, einschließlich der Hornhauttransplantation.  In diesem Bericht beschreiben wir ein Mausmodell sowohl für die akute als auch für die späte Hornhauttransplantation.

Murine Hornhauttransplantation: Ein Modell, das die häufigste Form der Organtransplantation Studieren

Endothelialen Keratoplastik ist eine chirurgische Technik ständig weiterentwickelt, wie Fortschritte in der Transplantations führen dünnere Transplantate mit jeder Folge ein. Hier präsentieren wir eine Technik zur kontrollierten Hand Gewebedissektion, um sichere und reproduzierbare Trennung von Endothel und Descemet-Membranen von Spender korneoskleralen Tasten für die Transplantation 2 zu ermöglichen.

Hornhautspendergewebe Vorbereitung für Descemetschen Membrane Endothelial Keratoplastik

Bei der Endotheltransplantation wird ein reines Laserverfahren vorgeschlagen. Die Operationstechnik basiert auf der Verwendung eines Femtosekundenlasers zur Aufbereitung des Spendergewebes. Anschließend wird die Laserschweißtechnik verwendet, um das Donorenendothel in der richtigen Position zu fixieren.

Ein &quot;All-Laser&quot; Endothelial Transplant

Ein Beispiel für eine adenovirale Gentherapie bei menschlichen diabetischen Organkulturen wird vorgestellt, um die verzögerte Wundheilung und die deutlich reduzierte Expression von epithelialen Stammzellmarkern in diesen Hornhäuten zu normalisieren. Es wird auch die Optimierung dieses Prozesses in stammzellangereicherten limbalen Epithelkulturen beschrieben.

Adenoviralen Gentherapie für diabetische Keratopathie: Auswirkungen auf die Wundheilung und Zellmarker Expression in Human Organ kultivierten Hornhäute und Limbale Epithelial Stammzellen

Dieses Protokoll beschreibt eine neuartige dreidimensionale in-vitro- Modell, wo Stromazellen Hornhautzellen und differenzierten neuronalen Zellen zusammen kultiviert werden, bei der Untersuchung und das Verständnis der Wechselwirkungen der beiden Zelltypen zu unterstützen.

Hornhautgewebe Engineering: Eine In-vitro- Modell der Stromazellen Nerv Interaktionen der menschlichen Hornhaut

Wir beschreiben den Einsatz der optischen Vollfeld-Kohärenzmikroskopie als eine Methode zur qualitativ hochwertigen Beurteilung des Hornhautspenderstromas. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um Merkmale zu identifizieren, die auf Gesundheit oder Krankheit hinweisen, und zielt darauf ab, das Screening und die Auswahl von Spendergewebe und damit die Ergebnisse der Keratoplastik zu verbessern.

Optische Vollfeld-Kohärenzmikroskopie zur histologischen Analyse von Stromamerkmalen in Hornhauttransplantaten

Hier wird ein Schritt-für-Schritt-Protokoll zur Herstellung und Kultivierung von Schweinespaltenhornknöpfen vorgestellt. Da dieses organotypisch kultivierte Organkulturmodell innerhalb von 15 Tagen Zellsterblichkeitsraten zeigt, vergleichbar mit menschlichen Spenderhornhäuten, stellt es das erste Modell dar, das eine langfristige Kultivierung nichtmenschlicher Hornhäuten ohne Zugabe von giftigem Dextran ermöglicht.

Ein Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Modell mit Split Corneal Buttons

Hier stellen wir ein Protokoll zur Ablösung von hornhauten Endothelzellen (CEC) von Descemets Membran (DM) unter Verwendung eines Neodym:YAG (Nd:YAG) Lasers als Ex-vivo-Krankheitsmodell für bullöse Keratopathie (BK) vor.

Entwicklung eines nichtinvasiven, laserunterstützten Versuchsmodells des cornealen Endotheliaalzellverlustes

Dieses Protokoll beschreibt die kritischen Schritte, die erforderlich sind, um hornhaut-Endothelzellkulturen aus Expflanzen von menschlichem oder Schafgewebe zu etablieren und zu züchten. Ein Verfahren zur Subkulierung von kornealen Endothelzellen auf membranösen Biomaterialien wird ebenfalls vorgestellt.

Wachstum von Human- und Schafhornhaut-Endothelzellschichten auf Biomaterialmembranen

Descemet's Stripping Only ist ein experimentelles Verfahren, bei dem Patienten mit zentralen Hornhautguttae, die aus Fuchs Endothelial Corneal Dystrophy resultieren, Descemets Membran für periphere Zellen abgestreift haben, um die Endothelschicht zu regenerieren. Wir stellen eine neuartige Methodik vor, die DSO in dystrophischen menschlichen Hornhäuten ex vivo mit beschleunigter Heilung simuliert, die durch eFGF1 (NM141) stimuliert wird.

Ein menschliches Hornhautorgan-Kulturmodell des Descemet-Strippings nur mit beschleunigter Heilung, stimuliert durch den künstlichen Fibroblasten-Wachstumsfaktor 1

Lernen Sie die Präparation von Spenderhornhautgewebe für die endotheliale Keratoplastik mit Mikrokeratom-Dissektion. Diese Methode ermöglicht präzise, dünne Lamellen und verbessert chirurgische Ergebnisse.

Corneal Spendergewebe Vorbereitung für Endothelial Keratoplasty

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