Name: Einsatz von künstlichen Sputum Mittlere bis antibiotische Wirkung gegen die getestet Pseudomonas aeruginosa AGB in einen engeren Bezug zu den Mukoviszidose-Lunge (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-05T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Erfahren Sie, wie Antibiotika-Empfindlichkeit von Pseudomonas aeruginosa-Biofilmen in künstlichem Sputum-Medium getestet wird. Diese Methode simuliert Mukoviszidose-Lungenbedingungen und ermöglicht realistischere Resistenztests.

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<li>Fouhy, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusible+signal+factor-dependent+cell-cell+signaling+and+virulence+in+the+nosocomial+pathogen+Stenotrophomonas+maltophilia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Diffusible signal factor-dependent cell-cell signaling and virulence in the nosocomial pathogen Stenotrophomonas maltophilia.</a> J. Bacteriol. 189, 4964-4968 (2007).</li>
<li>Winstanley, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newly+introduced+genomic+prophage+islands+are+critical+determinants+of+in+vivo+competitiveness+in+the+Liverpool+Epidemic+Strain+of+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Newly introduced genomic prophage islands are critical determinants of in vivo competitiveness in the Liverpool Epidemic Strain of Pseudomonas aeruginosa.</a> Genome Res. 19, 12-23 (2009).</li>
<li>Carter, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subtype+of+a+Pseudomonas+aeruginosa+cystic+fibrosis+epidemic+strain+exhibits+enhanced+virulence+in+a+murine+model+of+acute+respiratory+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">A subtype of a Pseudomonas aeruginosa cystic fibrosis epidemic strain exhibits enhanced virulence in a murine model of acute respiratory infection.</a> J. Infect. Dis. 202, 935-942 (2010).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

In dieser Studie verwendeten wir ein neues in vitro Modell basierend auf ASM zu replizieren P. aeruginosa Biofilm Bedingungen innerhalb der CF Lunge 4. Das Modell wurde erfolgreich für die kleinräumige, Hochdurchsatz-Screening von antimikrobiellen Wirkstoffen modifiziert. Die kritischen Schritte dieses Tests sind: <ol><li> Konsequente Vorbereitung der ASM Medien und Aufrechterhaltung der Sterilität. Wir haben viele Stunden, um die Optimierung des in der jede Komponente hinzugefügt, um reproduzierbare Ergebnisse jedes Mal gewidmet ist. Die Filtration des ASM ist langsam, ist aber vorzuziehen, Autoklavieren, die die Muzin-Komponente beschädigt werden kann. Wir raten den Zusatz von Antibiotika, wie von anderen vorgeschlagen 11, weil diese erheblichen Selektionsdruck, Antriebs-Mutationen auferlegen können, induzieren Prophagen Lyse 16 und signifikante Veränderung der Expression von mehreren bakteriellen Genen. </li><li> Der Test sollte nach dem Volumen o optimiert werdenf ASM verwendet. Shaking Geschwindigkeiten sind für kleinere Volumina erhöht und einen kürzeren Lebenszyklus Biofilm beobachtet wird. </li></ol> Eine naheliegende Anwendung der kleinräumigen ASM Biofilm-Modell ist die realistischere Bestimmung der Biofilm antimikrobiellen Empfindlichkeiten (BSMIC 90). Anaerobe und mikroaerophilen Nischen in der CF-Lunge und es gibt Belege dafür, dass Sauerstoff tief innerhalb reife Biofilme 2, 17 begrenzt. Hier zeigen wir, dass 10/14 klinischen P. aeruginosa-Isolaten von CF-Patienten weisen eine erhebliche Sputum (4 - ≥ 128-fach) Abnahme der Empfindlichkeit auf Tobramycin unter mikroaerophilen Bedingungen in ASM. Die Ergebnisse dieser Studie legen nahe, dass Antibiotika wie Tobramycin, möglicherweise weniger wirksam gegen P. aeruginosa-Infektionen in der Lunge CF als durch herkömmliche Methoden Empfindlichkeitsprüfung angegeben. Diese Ergebnisse spiegeln früheren Studien über die antimikrobielle Empfindlichkeit von Biofilmen 10. Klein-Maßstab ASM-Assays somit eine einfache Plattform mit hohem Durchsatz zur Erzeugung aussagekräftiger Antibiotikaempfindlichkeit Daten besser zu informieren therapeutische Entscheidungen. Der Test wird in der gleichen Weise wie herkömmliche Antibiotika Empfindlichkeitsprüfung, daß einzelne Kolonien für das Screening, die nicht repräsentativ für die gesamte Bevölkerung können aufgenommen beschränkt. Wir glauben jedoch, dass ein Ansatz, (i) Verwendung von nicht-Oberfläche befestigt Biofilmwachstum und (ii) für mikroaerophilen Bedingungen, eine klare Alternative und eine mögliche Verbesserung bestehender Methoden darstellt. Wir schließen daraus, dass dieser Test ein geeignetes Modell, um zu studieren, ist P. aeruginosa Biofilm Populationen. Weitere Tests im klinischen Umfeld würde prüfen, ob Antibiotika-Empfindlichkeiten auf Biofilm-Basis gewachsen P. aeruginosa könnte auf unterschiedliche Antibiotika-Entscheidungen mit möglicherweise verbessert mikrobiologischen und klinischen Ergebnissen führen. Ähnliche Untersuchungen mit klassischen Biofilm-Modelle haben gezeigt, dass BSMIC Werten führenverschiedene Empfehlungen zur antibiotischen Behandlung 5,17. Zusätzlich zur Prüfung der Wirksamkeit von Antiinfektiva, stellt der ASM-System eine billige, einfache und reproduzierbare Alternative zu Tiermodellen für Studien wie die im Verständnis der Diversifizierung der P. richtet aeruginosa Bevölkerungen. Wir haben umfangreiche Heterogenität in natürlichen Populationen von P. beobachtet aeruginosa aus CF-Patienten Sputum 18, 19 erholt. Ähnliche phänotypische und genotypische Diversifizierung kann während des Wachstums in ASM-4 (und unsere unveröffentlichte Daten) beobachtet werden, so dass es ein attraktives In-vitro-Modell der CF Lungenerkrankungen. Die relative Einfachheit des ASM-Modell macht es einfach zu entwerfen langfristige Anpassung Experimente sollen, zum Beispiel bei der Überwachung der Auswirkungen von Antibiotika oder anderen Belastungen auf P. aeruginosa Bevölkerung Divergenz. Darüber hinaus können andere bakterielle Erreger in angebaut werdenASM. Zum Beispiel, Fouhy et al. ASM 2007 verwendet haben, um die Biofilmbildung von S. studieren maltophillia 20.

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenz </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td></tr><tr><td> DNA aus Fischsperma </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 74782 </td></tr><tr><td> Mucin aus Schweine-Magen-, Typ-II- </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M2378 </td></tr><tr><td> L-Alanin </td><td> Acros Organics </td><td> 102830250 </td></tr><tr><td> L-Arginin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5006 </td></tr><tr><td> L (+)-Asparagin-Monohydrat </td><td> Acros Organics </td><td> 175271000 </td></tr><tr><td> L (+)-Asparaginsäure </td><td> Acros Organics </td><td> 105041000 </td></tr><tr><td> L-Cystein </td><td> Sigma-Adrich </td><td> 168149 </td></tr&gt; <tr><td> L (+)-Glutaminsäure </td><td> Acros Organics </td><td> 156211000 </td></tr><tr><td> L-Glutamin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G3126 </td></tr><tr><td> Glycine </td><td> Acros Organics </td><td> 220911000 </td></tr><tr><td> L-Histidin </td><td> Sigma-Adrich </td><td> H8000 </td></tr><tr><td> L-Isoleucin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> I2752 </td></tr><tr><td> L-Leucin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> L8000 </td></tr><tr><td> L (+)-Lysin-Monohydrochlorid </td><td> Acros Organics </td><td> 125222500 </td></tr><tr><td> L-Methionin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M9625 </td></tr><tr><td> L-Phenylalanin </td><td> Acros Organics </td><td> 130310250 </td></tr><tr><td> L-Prolin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P0380 </td></tr><tr><td> L-Serin </td><td> Acros Organics </td><td> 132660250 </td></tr><tr><td> L-Threonin </td><td> Acros Organics </td><td> 138930250 </td></tr><tr><td> L (-)-Tryptophan </td><td> Acros Organics </td><td> 140590250 </td></tr><tr><td> L-Tyrosin </td><td> Acros Organics </td><td> 140641000 </td></tr><tr><td> L-Valin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> V0500 </td></tr><tr><td> Diethylentriaminpentaessigsäure </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 32318 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Fisher Scientific </td><td> S/3160/60 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> BDH </td><td> BDH0258 </td></tr><tr><td&gt; KOH </td><td> BDH </td><td> BDH0262 </td></tr><tr><td> Eigelb-Emulsion </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 17148 </td></tr><tr><td> ME 2 Membran-Vakuumpumpe </td><td> Vacuubrand </td><td> 696126 </td></tr><tr><td> Steritop Filter (Porengröße: 0,22 um, Hals-Größe: 45 mm) </td><td> Millipore </td><td> SCGPT10RE </td></tr><tr><td> Luria-Bertani-Medium </td><td> Sigma </td><td> L2897 </td></tr><tr><td> 96-Well-Mikrotiterplatten </td><td> Sarstedt </td><td> 82,1581 </td></tr><tr><td> 24-Well-Gewebekultur-behandelten Platten </td><td> Iwaki </td><td> 3820-024 </td></tr><tr><td> CampyGen Gaserzeugung Packs </td><td> Oxoid </td><td> CN0025 </td></tr><tr><td> Microaerophilic Kammer </td><td> Oxoid </td><td> HP0011 </td></tr><tr><td> Tobramycin Sulfat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T1783 </td></tr><tr><td> Cellulase von Aspergillus niger </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 22178 </td></tr><tr><td> Resazurin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 199303 </td></tr><tr><td> Citrate.H 2 0 </td><td> BDH </td><td> BDH0288 </td></tr><tr><td> Fluostar Omega Mikroplatten-Reader </td><td> BMG-Labtech </td><td> SPECTROstar Omega </td></tr></tbody></table>

einsatz von künstlichen sputum mittlere bis antibiotische wirkung gegen die getestet<em&gt; pseudomonas aeruginosa</em&gt; agb in einen engeren bezug zu den mukoviszidose-lunge

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Es wächst die Besorgnis über die Relevanz der in vitro antimikrobielle Empfindlichkeitstests wann Isolate von P. angewendet aeruginosa von zystischer Fibrose (CF)-Patienten. Bestehende Methoden beruhen auf einzelne oder wenige Isolate wachsen aerob und planktonically. Vorgegebenen cut-offs werden verwendet, um festzulegen, ob die Bakterien empfindlich oder resistent gegenüber einem bestimmten Antibiotikum 1 sind. Doch während chronische Lungeninfektionen bei CF, P. aeruginosa in Biofilmen Populationen existieren und es gibt Hinweise, dass die Umwelt weitgehend mikroaerophile 2 ist. Der extreme Unterschied zwischen den Bedingungen in Bakterien in der Lunge und denen während der diagnostischen Tests haben Zweifel an der Zuverlässigkeit und sogar Relevanz dieser Tests 3 genannt. Künstliche Sputum Medium (ASM) ein Kulturmedium, das die Komponenten des CF-Patienten Sputum, einschließlich Aminosäuren, Mucin und freie DNA. S. aeruginosa &lt;/ Em&gt; Wachstum im ASM Mimik Wachstum während der CF-Infektionen, mit der Bildung von Selbst-Aggregation Biofilmstruktur und Bevölkerung Divergenz 4,5,6. Das Ziel dieser Studie war es, eine Mikrotiterplatte Assay gegen antimikrobielle Empfindlichkeit von P. studieren entwickeln aeruginosa auf das Wachstum in ASM, die für beide mikroaerophile und aeroben Bedingungen beruht. Ein ASM-Assay wurde in einem Mikrotiterplatten-Format entwickelt. P. aeruginosa Biofilme wurden für 3 Tage vor der Inkubation mit antimikrobieller Mittel zu entwickeln in verschiedenen Konzentrationen für 24 Stunden. Nach Biofilm Störung, die Lebensfähigkeit der Zellen wurde durch Färbung mit Resazurin gemessen. Dieser Assay wurde verwendet, um die sessile Zelle minimale Hemmkonzentration (SMIC) von Tobramycin für 15 verschiedene P. ermitteln aeruginosa-Isolaten unter aeroben und mikroaerophilen Bedingungen und SMIC-Werte wurden mit denen mit Standard-Brühe Wachstum verglichen. Zwar gab eseinige Hinweise für eine erhöhte MHK-Werte für Isolate in ASM gewachsen, wenn ihre planktonischen Gegenstücken verglichen wurden die grössten Unterschiede zu Bakterien in mikroaerophilen Bedingungen, die eine wesentlich erhöhte Resistenz zeigte, bis zu einer&gt; 128 fache gegenüber Tobramycin in der ASM-System getestet gefunden, wenn gegenüber Assays unter aeroben Bedingungen durchgeführt. Der fehlende Zusammenhang zwischen Anfälligkeit aktuellen Prüfmethoden und dem klinischen Ergebnis der Gültigkeit der aktuellen Methoden 3 in Frage gestellt. Mehrere in vitro-Modelle wurden bereits auf S. Studie verwendet aeruginosa Biofilm 7, 8. Allerdings beruhen diese Methoden auf Oberfläche befestigt Biofilmen, während die ASM-Biofilme, die auf der CF-Lunge 9 beobachtet ähneln. Darüber hinaus hat verringert Sauerstoffkonzentration im Schleim wurde gezeigt, dass das Verhalten von P. verändern aeruginosa 2 und beeinflussen Antibiotikaempfindlichkeit 10. Deshalb using ASM unter mikroaerophilen Bedingungen können vorsehen, eine realistischere Umgebung, in der Empfindlichkeit gegenüber antimikrobiellen Mitteln zu studieren.

Aktuelle Diagnostik antimikrobiellen Empfindlichkeitsprüfung beruht auf der Plankton-Wachstum von Isolaten in nährstoffreichen, aeroben Bedingungen. Hier beschäftigen wir eine Alternative künstliche Sputum mittel-bis Antimikrobielle Empfindlichkeit von Pseudomonas aeruginosa Biofilmen unter aeroben und mikroaerophilen Bedingungen mehr repräsentativ für die Mukoviszidose-Lunge zu untersuchen.

Einsatz von künstlichen Sputum Mittlere bis antibiotische Wirkung gegen die getestet<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; AGB in einen engeren Bezug zu den Mukoviszidose-Lunge

Es besteht eine zunehmende Besorgnis über die Relevanz von In-vitro-Antimikrobilitäts-Empfindlichkeitstests, wenn diese auf P. aeruginosa-Isolate aus zystischen ...

Das Ziel dieses Experiments besteht darin, die Wirksamkeit von Antibiotika gegen Pseudomonas-Aeruginosa-Biofilme unter Bedingungen zu bewerten, die chronischen Infektionen in der Lunge von Patienten mit zystischer Fibrose entsprechen, wobei ein definiertes künstliches Sputummedium verwendet wird. Bakterielle Biofilme werden in 24-Loch-Mikrotiterplatten kultiviert.Die Biofilme werden anschließend Antibiotika ausgesetzt. Danach werden die antibiotikabehandelten Kulturen mit Cellulase aufgelöst und mit einem metabolischen Farbstoff namens Srin inkubiert, der durch vitale Zellen von blau nach rosa reduziert wird. Durch die Messung der Extinktion der Vertiefungen kann die minimale hemmende Konzentration von Biofilm-Cecile-Zellen (B-S-M-I-C) bestimmt werden, um die Antibiotikasuszeptibilität unter nahezu physiologischen Bedingungen zu quantifizieren.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden, wie der Bestimmung minimaler Hemmkonzentrationen basierend auf planktonischen Kulturen, liegt darin, dass die Bakterien in einem speziellen Medium gezüchtet werden, das alle Bestandteile von Sputum enthält und somit die Biofilmbildung fördert. Diese Biofilme sind gegenüber Antibiotika weitaus resistenter. Um das Medium herzustellen, bereiten Sie zunächst zwei Flaschen vor, wobei die erste Flasche 250 Milliliter steriles Wasser enthält.Gegeben Sie langsam unter Rühren vier Gramm Fischsperma-DNA zu 250 Milliliter steriler Wasser hinzu. Rühren Sie die Lösung bei Raumtemperatur und lassen Sie die DNA im zweiten Gefäß auflösen. Fügen Sie anschließend langsam fünf Gramm Typ-2-Mucin aus Schweinemagen hinzu und rühren Sie erneut.Nachdem die DNA- und Mucin-Lösungen bereit sind, lösen Sie die Aminosäuren in 100 Milliliter steriler Wasser auf, mit Ausnahme von L-Tyrosin und L-Cystein, die jeweils in 25 Milliliter Wasser oder 25 Milliliter 0,5-molarer Kaliumhydroxidlösung gelöst werden sollten. Anschließend lösen Sie 5,9 Milligramm DTPA, fünf Gramm Natriumchlorid und 2,2 Gramm Kaliumchlorid in 100 Milliliter Wasser auf. Geben Sie alle verschiedenen Lösungen in eine Ein-Liter-Flasche, fügen Sie fünf Milliliter Eigelbemulsion hinzu und ergänzen Sie die Mischung mit Wasser bis auf 850 Milliliter auf.Unter Verwendung von einem molar Triss wird der pH-Wert auf 6,9 eingestellt und das Endvolumen mit Wasser auf einen Liter aufgefüllt. Um das Medium zu sterilisieren, wird es unter Verwendung einer Vakuumpumpe des Typs Vacuum Brand ME2 und einer Millipore-Sterilfiltereinheit mit 45 Millimeter Hals und einer Porengröße von 0,2 Mikron filtriert. Der Filtrationsvorgang kann über zwei Tage durchgeführt werden. Das ASM-Medium kann bis zu einem Monat bei vier Grad Celsius gelagert werden.Beginnen Sie damit, Übernachtkulturen von Pseudomona arosa in LB-Medium zu verdünnen, um einen OD-Wert von 0,05 zu erhalten. Verdünnen Sie die Bakterien anschließend im Verhältnis 1 zu 100 in SM-Medium; geben Sie 1,8 Milliliter der verdünnten Bakterienkultur in 21 Vertiefungen einer 24-Loch-Gewebekulturplatte und pipettieren Sie das gleiche Volumen an SM-Medium in die drei verbleibenden Vertiefungen, die als leere negative Kontrollen dienen. Verschließen Sie die 24-Loch-Platte mit Biofilm und stellen Sie sie unter mikroaerophile Bedingungen, um die Biofilmbildung zu ermöglichen. Diese Bedingungen können mithilfe von Campi-Gen-Gasgenerierungsbeuteln in großen anaeroben Gefäßen erzeugt werden.Inkubieren Sie die Kultur drei Tage lang auf einem Schüttler bei 75 U/min und 37 Grad Celsius. Nach drei Tagen bilden sich Biofilme als gallertartige Masse mit Bakterienzellen, die sich nicht durch Pipettieren aufbrechen lassen. Sobald die Biofilme gebildet sind, geben Sie 200 Mikroliter pro Vertiefung Antibiotikum in seriell verdünnten Konzentrationen hinzu. Stellen Sie sicher, dass für jede zu testende Wirkstoffkonzentration mindestens vierfache Wiederholungen eingerichtet werden, und belassen Sie vier Vertiefungen mit Biofilmen unbehandelt, sodass sie als negative Kontrollen dienen können.Anschließend die Platten nach der Inkubation mit Antibiotika weitere 24 Stunden vorinkubieren. Zur Auflösung der Biofilme jeweils 100 Mikroliter pro Vertiefung Cellulase verwenden, das in Citratpuffer auf eine Konzentration von 100 Milligramm pro Milliliter verdünnt wurde. Die Platten eine Stunde lang auf einem Schüttler bei 150 U/min unter aeroben Bedingungen bei 37 Grad Celsius inkubieren. Nach dieser Inkubation kann manuelles Pipettieren eingesetzt werden, um die Biofilme weiter aufzulösen, falls Zellklumpen im Medium sichtbar sind.Fügen Sie anschließend 100 µL Rezin pro Vertiefung hinzu, um die Vitalität der aus den Biofilmen freigesetzten Zellen zu quantifizieren, und inkubieren Sie die Zellen eine bis zwei Stunden lang. Bei 37 °C sind nur lebensfähige Zellen in der Lage, den blauen Zarin-Farbstoff in seine rosa fluoreszierende Form zu metabolisieren. Nach der Inkubation überführen Sie die Proben in eine 96-Vertiefungs-Platte und messen die Fluoreszenz der Vertiefungen mit einer Anregungswellenlänge von 540 nm und einer Emissionswellenlänge von 590 nm.Um die bakterielle Vitalität und Arzneimittelanfälligkeit zu quantifizieren, subtrahieren Sie zunächst die Hintergrundfluoreszenz der Leerprobe von den anderen Vertiefungen. Berechnen Sie anschließend die prozentuale Hemmung, indem Sie die mittlere Fluoreszenz jeder Konzentration durch die mittlere Fluoreszenz der unbehandelten Kontrollen dividieren und mit 100 multiplizieren. Die B-S-M-Y-C ist als die Antibiotikakonzentration definiert, die eine 90 %ige Hemmung der metabolischen Aktivität bewirkt, wie in diesen Elektronenmikrografien gezeigt; Zellen, die in Biofilmen wachsen, unterscheiden sich erheblich von Bakterien, die in planktischen Kulturen gezüchtet werden.Insbesondere umgeben große Mengen an extrazellulärer Matrix, dargestellt in Gelb, die Zellen im Biofilm in Grün, jedoch nicht in planktonischen Kolonien. Außerdem sind Bakterien in Biofilmen in diesem Experiment typischerweise resistenter gegenüber Antibiotika. Die minimale Hemmkonzentration von Tobramycin für die planktonische Kultur von Pseudomonas aeruginosa in Blau betrug etwa vier Mikrogramm pro Milliliter.Im Gegensatz dazu, wie rot dargestellt, überlebten 100 % der Bakterien in Biofilmen bis zu einer Konzentration von 512 Mikrogramm pro Milliliter Antibiotikum. Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man Bakterien in einem definierten, künstlichen Sputum-Medium kultiviert. Außerdem sollten Sie in der Lage sein, einen Antibiotikaresistenztest durchzuführen, um die minimale Hemmkonzentration zu bestimmen, die erforderlich ist, um das Bakterienwachstum unter Bedingungen zu hemmen, die der Umgebung in der Lunge von Patienten mit Mukoviszidose realistischer ähneln.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Quelle: Vieira, J., et al. Design und Entwicklung eines Modells zur Untersuchung der Wirkung von zusätzlichem Sauerstoff auf das Mikrobiom der Atemwege von Mukoviszidose.  J. Vis. Exp. (2021).Dieses Video zeigt die Herstellung eines künstlichen Sputummediums, das die Viskosität, die Nährstoffzusammensetzung und den pH-Wert des Mukoviszidose-Lungenauswurfs nachahmt. Das resultierende Medium bietet eine physiologisch relevante Plattform für ex vivo-Studien.

Herstellung von künstlichem Sputummedium zur Emulation von Mukoviszidose Lungenauswurf ex vivo

Source: Jackson, L., et al. Visualization of Pseudomonas aeruginosa within the Sputum of Cystic Fibrosis Patients. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the in situ visualization of Pseudomonas aeruginosa within chemically cleared cystic fibrosis sputum using fluorescent labeling and confocal microscopy to reveal bacterial localization and biofilm structure.

Visualization of Pseudomonas aeruginosa in Sputum Samples from Cystic Fibrosis Patients

Der Schleim verstopft die Atemwege von zystischer Fibrose (CF) Patienten sind eine ideale Umgebung für die mikrobielle Krankheitserreger zu gedeihen. Das Manuskript beschreibt ein neuartiges Verfahren der CF-Lunge microbiome in einer Umgebung für die Untersuchung, dass imitiert, wo sie Krankheit und wie Veränderungen der chemischen Bedingungen verursachen mikrobielle Dynamik antreiben kann.

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