Name: Isolierung von CD4 + T-Zellen aus Maus-Lymphknoten mit Miltenyi MACS Purification (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-11-01T00:34:55.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Erfahren Sie die Isolierung von CD4+ T-Zellen aus Maus-Lymphknoten mit dem Miltenyi MACS-Kit. Diese negative Selektionsmethode liefert Zellen mit einer Reinheit von ≥96 % für immunologische Studien.

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Wir wollen Rebecca Paquett für die Herstellung von MACS-Puffer zu danken.

Bitte lesen und befolgen das Protokoll in der Miltenyi-Kit oder online unter einbezogen <a href="http://www.miltenyibiotec.com/">http://www.miltenyibiotec.com/</a> .

<ol><li>Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+repertoire+scanning+is+promoted+by+dynamic+dendritic+cell+behavior+and+random+T+cell+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).</li>
<li>Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Class+IA+phosphoinositide+3-kinase+modulates+basal+lymphocyte+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node.</a> J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine Offenlegungspflichten.

Isolierung von Zellen aus der Primärquelle ist ein notwendiger Schritt in viele weitere komplexe Protokolle. Miltenyi bietet Kits, um Zellen aus verschiedenen Organismen einschließlich des Menschen, nicht-menschlichen Primaten, Ratten-und, wie wir hier beschreiben, Mäuse zu isolieren. Magnetic Bead-basierten Zellseparation können entweder für eine positive Selektion (oder Zell-Depletion) sowie negative Selektion. Hier zeigen wir, negative Selektion von unberührter oder na ve CD4 + T-Helferzellen. Mit diesem Standard-Protokoll haben wir in d...

<table><tbody><tr><td>MACS-Puffer</td><td>Reagenz</td><td>Keine Angabe</td><td>Keine Angabe</td><td>Wie von Miltenyi beschrieben herstellen.</td></tr><tr><td>CD4+ T-Zell-Isolationskit: Unberührte Isolierung</td><td>Reagenz</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-860</td><td>Zur Verwendung mit dem Miltenyi-System.</td></tr><tr><td>Sterile phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Reagenz</td><td></td><td></td><td>Zur Herstellung des MACS-Puffers.</td></tr><tr><td>Corning 35-mm-Kulturschale, nicht TC-behandelt</td><td>Sonstiges</td><td>Corning</td><td>430588</td><td>Wird bei der Herstellung einer Einzelzell-Suspension verwendet.</td></tr><tr><td>70-Mikron-Zellsieb</td><td>Werkzeug</td><td>BD Biosciences</td><td>352350</td><td>Wird bei der Herstellung einer Einzelzell-Suspension verwendet.</td></tr><tr><td>6-mL-Spritze</td><td>Werkzeug</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881516051</td><td>Wird bei der Herstellung einer Einzelzell-Suspension verwendet.</td></tr><tr><td>10x Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphatgepufferte Salzlösung (DPBS)</td><td>Reagenz</td><td>Invitrogen</td><td>14200-075</td><td>Zur Verwendung bei der Lyse von roten Blutkörperchen (RBC-Lyse).</td></tr><tr><td>Steriles Wasser</td><td>Reagenz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502</td><td>Zur Verwendung bei der Lyse von roten Blutkörperchen (RBC-Lyse).</td></tr></tbody></table>

isolierung von cd4 + t-zellen aus maus-lymphknoten mit miltenyi macs purification

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Isolierung von Zellen aus der Primärquelle ist ein notwendiger Schritt in viele weitere komplexe Protokolle. Miltenyi bietet Kits, um Zellen aus verschiedenen Organismen einschließlich des Menschen, nicht-menschlichen Primaten, Ratten-und, wie wir hier beschreiben, Mäuse zu isolieren. Magnetic Bead-basierten Zellseparation können entweder für eine positive Selektion (oder Zell-Depletion) sowie negative Selektion. Hier zeigen wir, negative Selektion von unberührter oder na ve CD4 + T-Helferzellen. Mit diesem Standard-Protokoll haben wir in der Regel zu reinigen Zellen, die ≥ 96% reine CD4 + / CD3 + sind. Dieses Protokoll ist in Verbindung mit dem Protokoll Dissection und 2-Photonen-Imaging der peripheren Lymphknoten in Mäusen in Heft 7 des Jupiter veröffentlicht, für die Reinigung von T-Zellen und anderen Zelltypen zu adoptiv für bildgebende Zwecke übertragen werden. Obwohl wir nicht zeigen, FACS-Analyse in diesem Protokoll video, ist es dringend empfohlen, die gesamte Reinheit der isolierten Zellen mit den entsprechenden Antikörpern via FACS überprüfen. Darüber hinaus zeigen wir die nicht-sterile Methode der T-Zell-Isolierung. Wenn sterile Zellen für Ihre Endbenutzer-Anwendung benötigt werden, sollten Sie alle bewiesen Verfahren in der Gewebekultur Haube unter Standard-sterilen Bedingungen zu tun. Wir danken Ihnen für das Ansehen und viel Glück mit Ihrem eigenen Experimenten!

Isolation von Lymphozyten mit der Miltenyi MACs Kit ist eine zuverlässige Methode, um Zellen aus ganzen lymphatischen Gewebe-Homogenaten zu reinigen. Cells unter Verwendung der Miltenyi-System sind in der Regel ≥ 96% rein. Hier zeigen wir, welche Schritte unternommen wurden, um CD4 + T-Zellen, einer der vielen Kits von Miltenyi angeboten isolieren.

Isolierung von CD4 + T-Zellen aus Maus-Lymphknoten mit Miltenyi MACS Purification

Die Isolation von Zellen aus der Primärquelle ist ein notwendiger Schritt in vielen komplexeren Protokollen. Miltenyi bietet Kits zur Isolation von Zellen aus verschiedenen ...

Dies ist ein Max-MIDI-Magnet. Darauf steht: Vorsicht, extrem starke Magnetfelder. Hallo, ich bin Melanie Matthew aus dem Labor von Mike Collins an der Abteilung für Physiologie und Biophysik der University of California Irvine.Heute zeigen wir Ihnen die negativselektive Aufreinigung von CD4-positiven T-Zellen mithilfe der Kits von Milton Biotechnology. Hier haben wir den Minimax und die Minimax-Magnete. Der Minimax wird für größere Trennungen verwendet. Es können bis zu 10⁹ Zellen durch eine Säule geleitet werden, die in den Minimax passt. Der Minimax wird hingegen für deutlich geringere Zellvolumina verwendet.Je nachdem, ob eine positive oder negative Trennung durchgeführt wird, markieren Sie Ihre Zellen mit dem entsprechenden Antikörper. Diese besitzen ein magnetisches Kügelchen, das an den Magneten bindet. Im Fall einer negativen Selektion fließen die Zellen, an denen Sie interessiert sind, durch die Säule, und Sie können den Eluat sammeln, der Ihre Zellen von Interesse enthält.Ich sollte erwähnen, dass die Techniken, die ich Ihnen heute Abend zeige, nicht steril sind. Wenn Sie diese Zellen also für die Zellkultur verwenden möchten, sollten Sie alles unter der Gewebekulturhaube

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Ein hoch gereinigte Präparation von Mauslunge dendritischen Zellen beschrieben wird. Besonderer Nachdruck wird auf die Isolierung von konventionellen dendritischen Zellen Teilmenge gegeben.

Isolierung von Maus Lung Dendritischen Zellen

Dieses Video beschreibt die Anreicherung von T-Zellen aus der Milz einer Maus durch Negativselektion mit einem Magnetseparator. Bei der Technik werden die anderen Zellen in der Probe mit Antikörpern oder Liganden, die gegen spezifische Zelloberflächenantigene gerichtet sind, gezielt depletiert.

T-Zell-Anreicherung: Eine Technik zur Isolierung von T-Zellen aus gemischten Zellpopulationen durch magnetische Trennung

Dieses Video demonstriert ein Protokoll zur magnetischen Markierung einer niedrig konzentrierten Population von CD4+Vδ1+γδ T-Zellen aus humanen mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMCs). Mit einer Kombination aus FITC-konjugierten Anti-Vδ1-Antikörpern, magnetischen Anti-FITC-Mikrokügelchen und mit Anti-CD4-Antikörpern beschichteten superparamagnetischen Kügelchen können die CD4+Vδ1+ T-Zellen erfolgreich aus der PBMC-Population aufgereinigt werden.

Selektive Isolierung von CD4+ Vδ1+ γδ T-Zellen aus mononukleären Zellen des humanen peripheren Blutes

Mit Effektor-Funktionen deutlich von anderen T-Zell-Untergruppen, Th17-Zellen wurden zentral bei entzündlichen Autoimmunerkrankungen in Verbindung gebracht. Diese in vitro-Differenzierung Th17-Protokoll bietet die Möglichkeit, festzustellen, ob naiven CD4 +-T-Lymphozyten in Th17-Zellen zu differenzieren und ihre Rolle in der Autoimmun-und Wirtsantwort weiter zu prüfen.

Isolierung und Differenzierung von Th17 Naive CD4-T-Lymphozyten

Diese Protokollinformationen ein Verfahren zur Isolierung von Antigen-präsentierenden Zellen menschlichen Thymus über verschiedene Schritte der enzymatischen Verdauung des Gewebes, gefolgt von Dichtegradientenzentrifugation der Einzelzellsuspension und schließlich magnetisch und / oder FACS-Sortierung von Zellpopulationen von Interesse.

Isolierung von myeloider dendritischer Zellen und Epithelzellen Menschliche Thymus

Naive CD4+ T-Zellen polarisieren in verschiedene Untergruppen, abhängig von der Umgebung zum Zeitpunkt der Aktivierung.  Die Differenzierung naiver CD4+ T-Zellen zu verschiedenen Effektor-Untergruppen kann in vitro durch die Zugabe von T-Zell-Rezeptor-Stimuli und spezifischen Zytokinsignalen erreicht werden.

Maus Naive CD4<sup&gt; +</sup&gt; T-Zell-Isolierung und<em&gt; In-vitro-</em&gt; Differenzierung in T-Zell-Populationen

Unterschiedliche dendritische Zelluntergruppen existieren als seltene Populationen in lymphatischen Organen und sind daher für immunologische Experimente schwierig in ausreichender Anzahl und Reinheit zu isolieren. Hier beschreiben wir eine hocheffiziente Methode mit hoher Ausbeute zur Isolierung aller derzeit bekannten Hauptuntergruppen von dendritischen Milzzellen der Maus.

Eine effiziente und High-Yield-Methode zur Isolierung von Maus über dendritische Zellen Subsets

Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll für die Isolierung von Lymphozyten aus die induktive Stätten wie das Darm-assoziierte Lymphgewebe Peyer Patches und mesenterialen Lymphknoten und der Effektor-Websites einschließlich der Lamina Propria und der Darmepithel des kleinen intestinalen Immunsystems.

Isolieren von Lymphozyten aus der Maus kleinen intestinalen Immunsystems

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur dendritische Zellen aus murinen Milz von magnetischen Zellsortierung und späteren Adoptiveltern Übertragung ins naive Mäuse zu isolieren. Das Modell von hohem Salzgehalt aktivierten dendritischen Zellen wurde gewählt, um die schrittweisen Verfahren Adoptiv-Transfer und Durchflusszytometrie zu erklären.

Isolation und Adoptiveltern Übertragung von hohen Salz behandelt Antigen-präsentierende dendritische Zellen

Zwei-Photonen-Imaging hat Lymphozyten Motilität und zellulären Interaktionen im Lymphknoten unter basalen Bedingungen und während einer Immunantwort Antwort 1 aufgedeckt. Hier zeigen wir, adoptiven Transfer von T-Zellen, Isolierung von Lymphknoten und Imaging-Motilität der CD4 + T-Zellen in der explantierten Lymphknoten.

Dissection und 2-Photonen-Imaging der peripheren Lymphknoten in Mäusen

Erfahren Sie die Isolierung von CD4+ T-Zellen aus Maus-Lymphknoten mit dem Miltenyi MACS-Kit. Diese negative Selektionsmethode liefert Zellen mit einer Reinheit von ≥96 % für immunologische Studien.

Isolierung von CD4 + T-Zellen aus Maus-Lymphknoten mit Miltenyi MACS Purification

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