Name: Quantitative Messung der Invadopodia-vermittelte extrazellulären Matrix Proteolyse in Einzel-und Multizelluläre Contexts (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 23 s
Description: Lernen Sie eine quantitative Methode zur Messung von Invadopodia-vermittelter Matrixdegradation mit fluoreszenzmarkiertem Gelatin. Diese Technik ermöglicht die Analyse einzelner Zellen und zellulärer Gruppen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Diese Arbeit wurde vom Stiftungsfonds von der West Virginia University Mary Babb Randolph Cancer Center unterstützt. Wir danken Susette Mueller (Georgetown University) und Laura Kelley für die frühe Beratung und Unterstützung. Die Verwendung der West Virginia University Microscopy Imaging Facility (unterstützt von der Mary Babb Randolph Cancer Center und NIH Zuschüsse P20 RR16440, P30 und P30 RR032138 GM103488) wird dankbar anerkannt.

<ol><li>Ridley, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+at+the+leading+edge%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Life at the leading edge.</a> Cell. 145, 1012-1022 (2011).</li>
<li>Murphy, D. A., Courtneidge, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27ins%27+and+%27outs%27+of+podosomes+and+invadopodia%3A+characteristics%2C+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The 'ins' and 'outs' of podosomes and invadopodia: characteristics, formation and function.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 12, 413-426 (2011).</li>
<li>Linder, S., Wiesner, C., Himmel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degrading+Devices%3A+Invadosomes+in+Proteolytic+Cell+Invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Cell.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Degrading Devices: Invadosomes in Proteolytic Cell Invasion.</a> Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. , (2010).</li>
<li>Chen, W. T., Chen, J. M., Parsons, S. J., Parsons, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+degradation+of+fibronectin+at+sites+of+expression+of+the+transforming+gene+product+pp60src%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Local degradation of fibronectin at sites of expression of the transforming gene product pp60src.</a> Nature. 316, 156-158 (1985).</li>
<li>Artym, V. V., Zhang, Y., Seillier-Moiseiwitsch, F., Yamada, K. M., Mueller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+interactions+of+cortactin+and+membrane+type+1+matrix+metalloproteinase+at+invadopodia%3A+defining+the+stages+of+invadopodia+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Dynamic interactions of cortactin and membrane type 1 matrix metalloproteinase at invadopodia: defining the stages of invadopodia formation and function.</a> Cancer Res. 66, 3034-3043 (2006).</li>
<li>Ayala, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+regulatory+inputs+converge+on+cortactin+to+control+invadopodia+biogenesis+and+extracellular+matrix+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Multiple regulatory inputs converge on cortactin to control invadopodia biogenesis and extracellular matrix degradation.</a> J. Cell Sci. , (2008).</li>
<li>Ammer, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saracatinib+impairs+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+invasion+by+disrupting+invadopodia+function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cancer+Sci.+Ther%22%5BJournal%5D)">Saracatinib impairs head and neck squamous cell carcinoma invasion by disrupting invadopodia function.</a> J. Cancer Sci. Ther. 1, 52-61 (2009).</li>
<li>Seals, D. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adaptor+protein+Tks5%2FFish+is+required+for+podosome+formation+and+function%2C+and+for+the+protease-driven+invasion+of+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The adaptor protein Tks5/Fish is required for podosome formation and function, and for the protease-driven invasion of cancer cells.</a> Cancer Cell. 7, 155-165 (2005).</li>
<li>Yamaguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+invadopodium+formation%3A+the+role+of+the+N-WASP-Arp2%2F3+complex+pathway+and+cofilin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of invadopodium formation: the role of the N-WASP-Arp2/3 complex pathway and cofilin.</a> J. Cell Biol. 168, 441-452 (2005).</li>
<li>Kopp, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinesin+KIF1C+and+microtubule+plus+ends+regulate+podosome+dynamics+in+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">The kinesin KIF1C and microtubule plus ends regulate podosome dynamics in macrophages.</a> Mol. Biol. Cell. 17, 2811-2823 (2006).</li>
<li>Oser, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortactin+regulates+cofilin+and+N-WASp+activities+to+control+the+stages+of+invadopodium+assembly+and+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cortactin regulates cofilin and N-WASp activities to control the stages of invadopodium assembly and maturation.</a> J. Cell. Biol. 186, 571-587 (2009).</li>
<li>Abramoff, M. D., Magalhaes, P. J., Ram, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image+Processing+with+ImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Biophotonics+International%22%5BJournal%5D)">Image Processing with ImageJ.</a> Biophotonics International. 11 (7), 36-42 (2004).</li>
<li>Kelley, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oncogenic+Src+requires+a+wild-type+counterpart+to+regulate+invadopodia+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Oncogenic Src requires a wild-type counterpart to regulate invadopodia maturation.</a> J. Cell Sci. 123, 3923-3932 (2010).</li>
<li>Chen, W. T., Singer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibronectin+is+not+present+in+the+focal+adhesions+formed+between+normal+cultured+fibroblasts+and+their+substrata%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Fibronectin is not present in the focal adhesions formed between normal cultured fibroblasts and their substrata.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 77, 7318-7322 (1980).</li>
<li>Chen, W. T., Olden, K., Bernard, B. A., Chu, F. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+transformation-associated+protease%28s%29+that+degrade+fibronectin+at+cell+contact+sites%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Expression of transformation-associated protease(s) that degrade fibronectin at cell contact sites.</a> J. Cell Biol. 98, 1546-1555 (1984).</li>
<li>Bharti, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Src-dependent+phosphorylation+of+ASAP1+regulates+podosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Src-dependent phosphorylation of ASAP1 regulates podosomes.</a> Mol. Cell Biol. 27, 8271-8283 (2007).</li>
<li>Albrechtsen, R., Stautz, D., Sanjay, A., Kveiborg, M., Wewer, U. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+engagement+of+ADAM12+induces+clusters+of+invadopodia+with+localized+ectodomain+shedding+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Extracellular engagement of ADAM12 induces clusters of invadopodia with localized ectodomain shedding activity.</a> Exp. Cell Res. 317 (10), 195-209 (2011).</li>
<li>Scott, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((kinases+are+required+for+invasive+path+generation+by+tumor+and+tumor-associated+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">kinases are required for invasive path generation by tumor and tumor-associated stromal cells.</a> J. Cell Biol. 191, 169-185 (2010).</li>
<li>Mueller, S. C., Yeh, Y., Chen, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tyrosine+phosphorylation+of+membrane+proteins+mediates+cellular+invasion+by+transformed+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Tyrosine phosphorylation of membrane proteins mediates cellular invasion by transformed cells.</a> J. Cell. Biol. 119, 1309-1325 (1992).</li>
<li>Bowden, E. T., Coopman, P. J., Mueller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invadopodia%3A+unique+methods+for+measurement+of+extracellular+matrix+degradation+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Invadopodia: unique methods for measurement of extracellular matrix degradation in vitro.</a> Methods Cell Biol. 63, 613-627 (2001).</li>
<li>Baldassarre, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamin+participates+in+focal+extracellular+matrix+degradation+by+invasive+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Dynamin participates in focal extracellular matrix degradation by invasive cells.</a> Mol. Biol. Cell. 14, 1074-1084 (2003).</li>
<li>Alexander, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+rigidity+promotes+invadopodia+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix rigidity promotes invadopodia activity.</a> Curr. Biol. 18, 1295-1299 (2008).</li>
<li>Artym, V. V., Yamada, K. M., Mueller, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ECM+degradation+assays+for+analyzing+local+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">ECM degradation assays for analyzing local cell invasion.</a> Methods Mol. Biol. 522, 211-219 (2009).</li>
<li>Schoumacher, M., Goldman, R. D., Louvard, D., Vignjevic, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin%2C+microtubules%2C+and+vimentin+intermediate+filaments+cooperate+for+elongation+of+invadopodia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Actin, microtubules, and vimentin intermediate filaments cooperate for elongation of invadopodia.</a> J. Cell Biol. 189, 541-556 (2010).</li>
<li>Clark, E. S., Whigham, A. S., Yarbrough, W. G., Weaver, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortactin+is+an+essential+regulator+of+matrix+metalloproteinase+secretion+and+extracellular+matrix+degradation+in+invadopodia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Cortactin is an essential regulator of matrix metalloproteinase secretion and extracellular matrix degradation in invadopodia.</a> Cancer Res. 67, 4227-4235 (2007).</li>
<li>Yamaguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphoinositide+3-kinase+signaling+pathway+mediated+by+p110alpha+regulates+invadopodia+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Phosphoinositide 3-kinase signaling pathway mediated by p110alpha regulates invadopodia formation.</a> J. Cell Biol. 193, 1275-1288 (2011).</li>
<li>Li, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+actin-bundling+protein+fascin+stabilizes+actin+in+invadopodia+and+potentiates+protrusive+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">The actin-bundling protein fascin stabilizes actin in invadopodia and potentiates protrusive invasion.</a> Curr. Biol. 20, 339-345 (2010).</li>
<li>Yamaguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphatidylinositol+4%2C5-bisphosphate+and+PIP5-kinase+Ialpha+are+required+for+invadopodia+formation+in+human+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate and PIP5-kinase Ialpha are required for invadopodia formation in human breast cancer cells.</a> Cancer Sci. , (2010).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die Fähigkeit, Zellen zu einer Verschlechterung der extrazellulären Matrix visualisieren hat die Entdeckung der molekularen Mechanismen in den frühen Schritten Zellinvasion beschäftigt unterstützt. Pionierarbeit von Wen-Tien Chen in den frühen 1980er Jahren 4,14,15 hat Beschichtung fluoreszenzmarkierten extrazelluläre Proteine ​​auf Deckgläsern für die anschließende mikroskopische Analyse als primäre Technik bei der Beurteilung invadopodia Funktion in einem breiten Spektrum von Zelltypen entstanden. Die vorge...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenz / Instrument </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Gelatine </td><td> Sigma </td><td> G1890 </td><td> Schweinehaut </td></tr><tr><td> Saccharose </td><td> Fischer </td><td> BP220 </td><td></td></tr><tr><td> 12 mm-Deckgläschen </td><td> Fischer </td><td> 50-121-5159 </td><td></td></tr><tr><td> Platten mit 24 Vertiefungen </td><td> Fischer </td><td> 08-772-1 </td><td> BD Falcon </td></tr><tr><td> Salpetersäure </td><td> Ricca </td><td> R5326000 </td><td> 20% ige Lösung </td></tr><tr><td> Poly-L-Lysin </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 19.320-B </td><td> 0,1% ige Lösung </td></tr><tr><td> Glutaraldehyd </td><td> Sigma </td><td> G7526 </td><td> 8% ige Lösung </td></tr><tr><td&gt; Oregon Green 488-konjugierten Gelatine </td><td> Invitrogen </td><td> G-13186 </td><td></td></tr><tr><td> Natriumborhydrid </td><td> Sigma </td><td> 213462 </td><td></td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Fischer </td><td> BP151 </td><td></td></tr><tr><td> Rhodamin-Phalloidin </td><td> Invitrogen </td><td> R415 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-Cortactin (Klon 4F11) </td><td> Millipore </td><td> 05-180 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-FLAG-Antikörper </td><td> Millipore </td><td> MAB3118 </td><td></td></tr><tr><td> Alexa Fluor 647 Ziege anti-Maus-IgG </td><td> Invitrogen </td><td> A21235 </td><td></td></tr><tr><td> ProLong Gold-antifade </td><td> Invitrogen </td><td> P36930 </td><td></td></tr><tr><td> LSM 510 Konfokale Mikroskop </td><td> Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ImageJ Software </td><td> Public Domain </td><td></td><td> <a href="http://www.macbiophotonics.ca/imagej/" target="_blank">http://www.macbiophotonics.ca/imagej/</a> </td></tr><tr><td> AutoQuant X2.2 Software </td><td> Media Cybernetics </td><td></td><td></td></tr><tr><td> NIS Elements Software </td><td> Nikon </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

quantitative messung der invadopodia-vermittelte extrazellulären matrix proteolyse in einzel-und multizelluläre contexts

Quantitative Measurement of Invadopodia-mediated Extracellular Matrix Proteolysis in Single and Multicellular Contexts 

Cellular Invasion in lokalen Gewebe ist ein Prozess wichtig in der Entwicklung und Homöostase. Malregulated Invasion und anschließende Zellbewegung ist charakteristisch für mehrere pathologische Prozesse, einschließlich Entzündung, kardiovaskulärer Erkrankung und Tumorzellenmetastase ein. Focalized proteolytischen Abbau der extrazellulären Matrix (ECM)-Komponenten in der epithelialen oder endothelialen Basalmembran ist ein kritischer Schritt bei der Einleitung Zellinvasion. In Tumorzellen hat umfangreiche in vitro-Analyse bestimmt, dass ECM Abbau durch ventralen Aktin Membranplattformen vorstehenden Strukturen bezeichnet invadopodia 2,3 bewerkstelligt wird. Invadopodia Form in engen Apposition zu dem ECM, wo sie mäßig ECM Durchschlag durch die Wirkung von Matrixmetalloproteinasen (MMPs). Die Fähigkeit von Tumorzellen gegenüber invadopodia bilden direkt korreliert mit der Fähigkeit, sich in lokalen Stroma und assoziierten vaskulären Bauteile 3 einzudringen. _CONTENT &quot;&gt; Visualisierung invadopodia-vermittelten Abbau von ECM Zellen durch Fluoreszenzmikroskopie unter Verwendung von Farbstoff-markierten Proteine ​​Matrix auf Glas-Deckgläschen beschichtet wurde als die am weitesten verbreitete Technik zum Auswerten des Grades der zellulären Matrix Proteolyse und invasive Potential 4,5 entstanden. Hier beschreiben wir eine Version des Standard-Methode zur Erzeugung fluoreszenzmarkierten Glasdeckgläser Verwendung eines kommerziell erhältlichen Oregon Green 488-Gelatine-Konjugat. Dieses Verfahren ist einfach skaliert rasch bringen zahlreiche beschichtete Deckgläser. Wir zeigen einige der üblichen mikroskopischen Artefakte, die häufig auftreten Während dieses Verfahrens und wie diese vermieden werden. Schließlich haben wir standardisierten Methoden unter Verwendung leicht verfügbarer Computersoftware zur Quantifizierung von markierten Gelatinematrix Abbau durch einzelne Zellen und zellulären Populationen von gesamte vermittelt ermöglichen beschreiben. Die beschriebenen Verfahren bieten die Möglichkeit, genau und reproduzierbar zu überwachen invadopodiaAktivität, und kann auch als Plattform zur Bewertung der Wirksamkeit des Modulierens Proteinexpression oder Testen von Anti-invasiver Verbindungen auf extrazelluläre Matrix Abbau in Einzel-und mehrzellige Einstellungen dienen.

Wir beschreiben die prototypische Verfahren zur Herstellung Mikroskop Deckgläser mit fluoreszierenden Gelatine zur Visualisierung invadopodia-vermittelte Matrixabbau beschichtet. Rechenverfahren Verwendung verfügbarer Software für die Quantifizierung der resultierenden Ebenen der Matrix Proteolyse durch einzelne Zellen innerhalb einer Mischpopulation und für Gruppen, die vielzelligen gesamte mikroskopische Felder dargestellt.

Quantitative Messung der Invadopodia-vermittelte extrazellulären Matrix Proteolyse in Einzel-und Multizelluläre Contexts

Die zelluläre Invasion in lokales Gewebe ist ein Prozess, der für die Entwicklung und Homöostase von Bedeutung ist. Eine fehlregulierte Invasion und die darauf folgende Zellbewegung ist ...

Diese Standardmethode erzeugt mit fluoreszenzmarkiertem Gelatin beschichtete Deckgläser, die für quantitative Assays zum Nachweis der Matrixdegradation durch Invadopodien geeignet sind. Nach der Beschichtung der Deckgläser mit fluoreszenzmarkiertem Gelatin werden die Zellen ausgesät und zur Matrixdegradation kultiviert. Anschließend fixieren und fluoreszenzmarkieren Sie die Zellen mit Markern für Invadopodien-Proteine, nehmen die Bilder auf und quantifizieren die Matrixdegradation.Typische Ergebnisse können die Unterschiede bei der Podien-vermittelten Matrixdegradation zwischen Zellen mit unterschiedlicher Manipulation ausgewählter Gene oder Behandlung mit pharmakologischen Substanzen quantifizieren. Die visuelle Darstellung dieser Methode ist entscheidend, da die Herstellung von mit Gelatine beschichteten Deckgläsern mit homogener Fluoreszenz aufgrund ungleichmäßiger Beschichtung mit fluoreszierender Gelatine oder unsachgemäßer Handhabung der gelatinebeschichteten Deckgläser schwierig ist. Die Durchführung der Methode wird von der wissenschaftlichen Assistentin Professorin Karen Martin, dem Postdoktoranden Mandy Ammer sowie den Doktoranden Elise Walk, Karen Hayes und Steve Markwel

quantitative-measurement-invadopodia-mediated-extracellular-matrix

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Models of Tumorzellinvasion in dreidimensionale extrazelluläre Matrix besser...

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Zellinvasion

Dieses Video beschreibt die Technik, eine native Matrix zu verwenden, um die Invasion von Tumorzellen zu untersuchen. Die in diesem Assay verwendete Technik bietet die Möglichkeit, epithelial-mesenchymale Zellinteraktionen in einer 3D-Umgebung zu bewerten, ohne dass eine synthetische oder fremde Matrix erforderlich ist.

Tumorzellinvasions-Assay: Eine native 3D-Matrix-basierte 3D-In-vitro-Methode zur Beurteilung von Epithel-mesenchymalen Zellinteraktionen

Dieses Video zeigt quantitative Zeitraffermikroskopie zur Bewertung der extrazellulären Matrixsteifigkeitsabhängigkeit von Listeria monocytogenes Verbreitung durch Endothelzellen. Ein weicheres Hydrogel ermöglicht eine schnellere bakterielle Ausbreitung durch Endothelzellen im Vergleich zu steiferen Gegenstücken, was den Einfluss der Matrixsteifigkeit auf die bakterielle Verbreitung unterstreicht.

Quantitative Zeitraffermikroskopie zur Beurteilung der Steifigkeitsabhängigkeit der extrazellulären Matrix

Partikel-Tracking Mikrorheologie können zerstörungs quantifizieren und räumlich zuordnen Veränderungen in der extrazellulären Matrix mechanische Eigenschaften im 3D-Tumormodelle verwendet werden.

Längs Messung der extrazellulären Matrix Steifigkeit in 3D Tumormodelle mit Particle-Tracking Mikrorheologie

Die Zellmigration ist ein biologisches Phänomen, das in einer Vielzahl von physiologischen beteiligt ist, wie der Wundheilung und Immunreaktionen und pathophysiologischen Prozessen, wie Krebs. Die 3D-Kollagen-Matrix Migrationstest ist ein vielseitiges Werkzeug, um die Migrationseigenschaften der verschiedenen Zelltypen innerhalb in einer 3D-physiologischen Umgebung wie zu analysieren.

Analyse der Zellmigration in eine dreidimensionale Kollagenmatrix

Mechanische Steifigkeit in der Tumor-Mikroumgebung spielt eine entscheidende Rolle bei der malignen Verhalten durch Erhöhung invadopodia Aktivität und Actomyosin Kontraktilität. Verwendung Polyacrylamidgelen (PAAs), kann invadopodia und Zugkraft-Assays verwendet werden, die invasive und kontraktilen Eigenschaften von Krebszellen in Reaktion zu untersuchen, um die Steifigkeit Matrix.

Polyacrylamidgelen für Invadopodia und Traction Force-Assays auf Krebszellen

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um kontinuierlich zu quantifizieren Zelladhäsion und de-Klebeprozesse mit hoher zeitlicher Auflösung in eine nicht-invasive Weise durch Zell-Substrat-Impedanz und Live Cell Imaging analysiert. Diese Ansätze zeigen die Dynamik der Zelladhäsion / de-Klebeverfahren durch Matrixmodifikation und ihre zeitliche Beziehung, um die Haftung abhängige Signalereignisse ausgelöst.

Benutzen Sie die Cell-Substrat-Impedanz und Live Cell Imaging, um Echtzeit-Änderungen in der Zelladhäsion und De-Haftung durch Matrix Änderung Induzierte Messen

Dieses Protokoll beschreibt, wie man eine 2D-Mischmatrix, bestehend aus Gelatine und Kollagen I, und einem 3D-Kollagen-I-Plug, um lineare Invadosomen zu studieren, vorzubereiten. Diese Protokolle erlauben die Untersuchung der linearen Invadosomenbildung, der Matrixabbauaktivität und der Invasionsfähigkeit von Primärzellen und Krebszelllinien.

2D- und 3D-Matrizen zur Untersuchung der linearen Invadosomenbildung und -aktivität

Viele hochregulierte Gene stimulieren die Migration und Invasion von Tumorzellen, was zu einer schlechten Prognose führt. Es ist entscheidend zu bestimmen, welche Gene die Migration und Invasion von Tumorzellen regulieren. Dieses Protokoll stellt eine Methode vor, um die Auswirkungen der erhöhten Expression eines Gens auf die Migration und Invasion von Tumorzellen in Echtzeit zu untersuchen.

Quantitative Echtzeitmessung der Tumorzellmigration und -invasion nach synthetischer mRNA-Transfektion

Die Invasion ist ein wichtiges biologisches Phänomen bei der Entstehung und dem Fortschreiten von Krebs. Dieser Prozess wird durch nicht-neoplastische Zellen und Bestandteile der Tumormikroumgebung beeinflusst. Das Ziel dieser Arbeit ist es, eine alternative Methode zur Analyse der Tumorzellinvasion in vitro mit Hilfe von dreidimensionalen (3D) Kulturen zu beschreiben.

Alternative Strategie zur Analyse der in vitro Zellinvasion von 3D-Kulturen

Lernen Sie eine quantitative Methode zur Messung von Invadopodia-vermittelter Matrixdegradation mit fluoreszenzmarkiertem Gelatin. Diese Technik ermöglicht die Analyse einzelner Zellen und zellulärer Gruppen.

Quantitative Messung der Invadopodia-vermittelte extrazellulären Matrix Proteolyse in Einzel-und Multizelluläre Contexts

Weitere Videos entdecken