Name: Einem orthotopen Blasentumor Modell und der Auswertung der intravesikalen Behandlung SÄRNA (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Lernen Sie die Herstellung eines orthotopen Blasentumormodells bei immungeschwächten Mäusen. Diese Methode ermöglicht die intravesikale Behandlung mit saRNA und die Überwachung durch Ultraschall sowie Biolumineszenzbildgebung.

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Diese Forschung wird von der AACR Henry Shepard Blasenkrebs Research Grant (09-60-30-LI) gefördert.

Verfahren mit tierischen Probanden wurden von der Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) an der University of California, San Francisco genehmigt worden. 1. Zellpräparation <ol><li> Das menschliche Blasenkarzinom-Zelllinie KU-7-luc2-GFP (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) in RPMI-1640-Medium mit 10% fötalem Rinderserum und 50 ug / ml Gentamicin ergänzt war. </li><li> Die Kulturen werden bei 37 ° C, 5% CO 2 mit Medien wechselt alle zwei bis drei Tage. </li><li> Die Zellen wurden durch Trypsin-Verdau geerntet und unter Verwendung eines Hämozytometers. Eine einzelne Zellsuspension von 2 × 10 6 Zellen in 50 l wurde in Phosphat-gepufferter Salzlösung hergestellt und auf Eis gehalten. </li></ol> 2. Orthotopen Blasentumor Modell <ol><li> Weiblicher Akt (nu / nu) Mäuse 8-10 Wochen alt (Simonsen Laboratory, Gilory, CA) verwendet wurden. </li><li> Setzen Sie ein steriles Tuch über einem Heizkissen dienen, einsa chirurgischen Plattform. Sterile Gleitgel, 24-che Katheter mit Stilett Nadeln, Silbernitrat-Lösung, und steriles Wasser hergestellt. </li><li> Vollnarkose ist bei den Mäusen mit inhalativen Isofluran (3% für Induktion, 1-2% für die Wartung) und-wartung über Nasenkonus induziert. Sterile ophthalmische Salbe wird auf die Augen des Tieres angelegt wird, und ein Heizkissen verwendet wird, um die Körperwärme zu halten. </li><li> Platzieren Sie die Maus in Rückenlage. </li><li> Fassen Sie das Tier Vulva mit einer Pinzette zur Stabilisierung. </li><li> Mit einem 24-che intravenösen Katheter mit der Nadel Stilett entfernt wird, wird die Maus Harnröhre katheterisiert. Eine ausreichende Schmierung verwendet werden sollte. Mit der Maus auf dem Rücken, wird die Harnröhre liegt unmittelbar hinter der Vulva Falten und anterior der Vagina. Eine 45-Grad-Winkel wird vorgelegt, um die Harnröhre kanülieren und unterhalb des Schambeins besteht. Eine flachere Neigung wird dann genommen, um durch die Harnröhre in die Blase besteht. Sanfte Becken-presSie glätten die Harnröhre kann oft helfen. Es ist darauf zu vermeiden, zu hart gegen einen Widerstand, da dies zu urethralen oder Perforation Blase führen kann. Urin im Katheter gesehen bestätigt seine Position innerhalb der Blase Lumen. </li><li> Saugen Urin von den Katheter und Blasenlumens mit der Sondennadel. Die Sondennadel wird für alle nachfolgenden Streben und Injektionen verwendet wird, wobei der Katheter an Ort und Stelle. Dies ermöglicht genaue Volumina Injektion von durch den Wegfall der Totraum innerhalb des Katheters, und es wird wiederholt Katheterisierungen unnötig. </li><li> Um die Glykosaminoglykan Schicht der Blase Urothel beeinträchtigen, wird 10 ul 0,5 M Silbernitrat injiziert und man ließ sie für 10 Sekunden zu verweilen. Dies kann zur Bildung eines weißen Niederschlags mit den restlichen Urin. </li><li> Absaugen und entsorgen Sie die Inhalte Niederschlag und der Blase mit einem Sondennadel. </li><li> Waschen Sie die Blase durch Injektion von 100 ul sterilem Wasser. Absaugen und verwerfen das Wasser. Repebei Waschen mit sterilem Wasser 3-mal für insgesamt 4 Wäschen. </li><li> Legen Sie eine 4-0 Seidenkrawatte rund um die Harnröhre, um die Harnröhre in Vorbereitung auf Entfernung des Katheters zu verschließen. </li><li> Zuvor hergestellten Spritzen 2 x 10 6 KU-7-luc2-GFP-Zellen in 50 ul mit der Sondennadel. </li><li> Gleichzeitig nehmen Sie den Katheter und Sondennadel, so dass die Harnröhre durch die Seidenkrawatte verschlossen. </li><li> Die Maus wird unter Vollnarkose für 2 Stunden gehalten werden, bevor die Seidenkrawatte wird entfernt und das Tier ist erwacht. </li></ol> 3. Ultraschall <ol><li> Vollnarkose mit Isofluran verdampfte und-wartung über Nasenkonus induziert. </li><li> Ein VisualSonics Vevo 770 In Vivo High-Resolution Micro-Imaging System (VisualSonics Inc, Toronto, Ontario, Kanada) mit dem RMV-704 40-MHz-Sonde verwendet wurde. </li><li> Platzieren Sie die Maus in Rückenlage auf dem Ultraschall-Plattform. </li><li> Sichern des Tieres Hinterbeinemit Klebeband übermäßige Bewegung während der Manipulation der Ultraschall-Sonde zu vermeiden. </li><li> Bewerben Ultraschall-Gel auf die Maus Becken. </li><li> Senken Sie eine RMV-704 (40 MHz) Ultraschallsonde auf die Maus, um das Becken quer oder längs Bilder zu erhalten. </li><li> Wenn Tumor gefunden wird, können Bilder für die Messung des Tumors Dimensionen gespeichert werden. </li></ol> 4. Bioluminescent Imaging <ol><li> Führen intraperitoneale Injektion von 200 ul (150 mg / kg) Luciferinsubstrat. </li><li> Induzieren Vollnarkose mit Isofluran und pflegen verdampften über Bugspitze. </li><li> Platzieren Sie Mäuse in Rückenlage in der Biolumineszenz-Imager. </li><li> Fünf Minuten nach der Injektion Luciferin, messen Sie die Biolumineszenz von dem Tier in Photonen pro Sekunde. </li></ol> 5. SÄRNA Vorbereitung <ol><li> Synthetisieren RNA-Oligonukleotiden auf einer Skala von 50 bis 100 mmol. </li><li> Glühen komplementäre einzelsträngige Oligonukleotide iNTO-Duplex saRNAs. </li><li> [1,3]-dioxolan (DLinKC2-DMA), disteroylphosphatidyl Cholin, Cholesterin und PEG-DMG - Lipid-Nanopartikel (LNP)-SÄRNA mit dem ionisierbaren Lipids 1,2-Dilinoleyl-4-(- Dimethylaminoethyl 2) hergestellt Verwendung eines spontanen Vesikelbildung Formulierung Verfahren wie zuvor beschrieben. 1 </li></ol> 6. Intravesikale Verabreichung formuliertes SÄRNA <ol><li> Nach Gründung der orthotopen Blasentumor Modell werden Mäuse mit intravesikale kleine aktivierende RNA (SÄRNA) in Lipid-Nanopartikel (LNPs) (Tabelle 1) formuliert behandelt. </li><li> Vollnarkose wird aufgebaut und mit verdampfte Isofluran aufrechterhalten, und sterile ophthalmische Schmiermittel aufgetragen wird. </li><li> Platzieren Sie das Tier in Rückenlage. </li><li> Führen Katheterisierung der Harnröhre, wie zuvor beschrieben. </li><li> Legen Sie eine 4-0 Seidenkrawatte um die Harnröhre und Katheter. </li><li> Saugen sie die gesamte Urin aus dem Katheter undBlase mit einer leeren Spritze und Sondennadel. </li><li> Spritzen-LNP SÄRNA intravesikal für eine Gesamtdosis von 50 ml (3 mg / kg). Gleichzeitig nehmen Sie den Katheter und Sondennadel, so dass die Harnröhre durch die Seidenkrawatte verschlossen. </li><li> Die Maus bleibt anästhesiert mit der Harnröhre für 2 Stunden verschlossen. </li><li> Die Behandlung mit intravesikale LNP-SÄRNA wurde am Tag 4 nach der Tumorimplantation begonnen. Die Mäuse wurden seriell behandelt alle 3 Tage, für insgesamt 14 Behandlungen. </li></ol> 7. Repräsentative Ergebnisse Blasen, die aus Tumoren KU-7-luc2-GFP-Zellen kann mittels Luciferase-Biolumineszenz-Bildgebung (1A und C) und der Blase Ultraschall (1B und D) überwacht werden. Tumoren sind oft innerhalb von 3-5 Tagen nachweisbar nach Zellinokulation. Wir fanden erfolgreiche Blasentumor Implantation in über 90% der Mäuse. Da die Behandlung mit intravesikale dsRNA erfolgt, kann das Fortschreiten des Tumors wi überwacht werdenth dieser Modalitäten. Nachdem das Tier geopfert wird, kann das Tumorwachstum bestätigte auch mit GFP-Fluoreszenz werden. In der Regel bedeuten, Biolumineszenz mit mittleren Abmessungen für Ultraschall Blasentumoren korreliert, wie visuell in den Abbildungen 1C und 1D gesehen. Jedoch, nachdem die Tiere getötet und Tumor wurde durch GFP bestätigt, fanden wir, dass Biolumineszenz enger mit der Anwesenheit von lebensfähigen Tumor als hat Ultraschallmessungen korreliert. Dies war besonders deutlich bei den Mäusen mit Sarna (als Gegensatz zu den Kontrollen) behandelt, da die verbleibende Narbengewebe im behandelten Mäuse war oft durch Ultraschall sichtbar gemacht, konnte aber nicht von Live-Tumor zu unterscheiden. <img src="/files/ftp_upload/4207/4207fig1.jpg" alt="1" /> Abbildung 1. Das Tumorwachstum Kinetik von Blasentumoren. (A) Biolumineszenz-Bildgebung misst die Luciferaseaktivität innerhalb Blasentumoren zu deren Standort und Wachstumsbedingungen zu bestätigen. (B) In-vivo-Blase ultrasound mit einem 40MHz-Sonde erzeugt Tumor Bilder, deren Abmessungen genau gemessen werden kann. (C) graphische Darstellungen des Tumors progressiver Anstieg der Biolumineszenz-und Ultraschall-Dimensionen. Die Werte stellen Mittelwert (+ / - Standardabweichung) Messungen von 6 Tieren. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4207/4207fig1large.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Abbildung anzuzeigen</a> .

<ol><li>Semple, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+design+of+cationic+lipids+for+siRNA+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Rational design of cationic lipids for siRNA delivery.</a> Nature. 28, 172-176 (2010).</li>
<li>Li, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+dsRNAs+induce+transcriptional+activation+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 17337-17342 (2006).</li>
<li>Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+effect+of+dsRNA-induced+p21%28WAF1%2FCIP1%29+gene+activation+in+human+bladder+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+cancer+therapeutics%22%5BJournal%5D)">Antitumor effect of dsRNA-induced p21(WAF1/CIP1) gene activation in human bladder cancer cells.</a> Molecular cancer therapeutics. 7, 698-703 (2008).</li>
<li>Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+results+of+myoblast+injection+into+the+urethra+and+bladder+wall%3A+a+possible+method+for+the+treatment+of+stress+urinary+incontinence+and+impaired+detrusor+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourology+and+urodynamics%22%5BJournal%5D)">Preliminary results of myoblast injection into the urethra and bladder wall: a possible method for the treatment of stress urinary incontinence and impaired detrusor contractility.</a> Neurourology and urodynamics. 19, 279-287 (2000).</li>
<li>Hadaschik, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumour+inoculation+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+international%22%5BJournal%5D)">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU international. 100, 1377-1384 (2007).</li>
<li>Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Bladder+Wall+Injection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse Bladder Wall Injection.</a> J. Vis. Exp. (53), e2523(2011).</li>
<li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Orthotopic+Model+of+Murine+Bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An Orthotopic Model of Murine Bladder.</a> Cancer. J. Vis. Exp. (48), 2535(2011).</li>
<li>Dinney, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+metastatic+variants+from+human+transitional+cell+carcinoma+passaged+by+orthotopic+implantation+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+urology%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice.</a> The Journal of urology. 154, 1532-1538 (1995).</li>
</ol>

LCL ist ein benannter Erfinder auf anhängige Patentanmeldungen in Bezug auf SÄRNA, die von der University of California San Francisco eingereicht worden sind und in Lizenz an Alnylam Pharmaceuticals.

Wir präsentieren ein Protokoll für die Errichtung eines Maus-Xenograft orthotopen Tumormodell Blase durch intravesikale Behandlung der Tumoren mit LNP SÄRNA formuliert, die den Promotor von p21 CIP1/WAF1 (p21) Zielen für die Aktivierung der Transkription gefolgt. 2, 3 Die entstehenden Tumoren können bestätigt und mit Biolumineszenz-Bildgebung und Blase Ultraschall überwacht. Orthotopische Modellen überlegen sein kann intraperitoneale, subkutane oder intravenöse Modellen durch ein Milieu von Urin un...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare (optional) </td></tr><tr><td> KU-7-Luc-GFP-Zellen </td><td> Caliper </td><td> 128091 </td><td></td></tr><tr><td> Thymus Nacktmäusen (nu / nu) </td><td> Simonsen Laboratories </td><td> 6-7 Wochen alt </td><td> Sim: (NCR) nu / nu fisol </td></tr><tr><td> Ultraschall-Gerät </td><td> VisualSonics </td><td> Vevo 770 </td><td> RMV-704-Sonde </td></tr><tr><td> Biolumineszenz-Einheit </td><td> Caliper </td><td> IVIS Spectrum </td><td></td></tr><tr><td> Exel safelet Katheter </td><td> Fischer </td><td> 14-841-21 </td><td> 24G x ¾ &quot; </td></tr><tr><td> Silbernitrat </td><td> Sigma </td><td> S8157 </td><td></td></tr><tr><td> Hamilton-Spritze </td><td> Hamilton CoHat Ihr Unternehmen </td><td> 80301 </td><td></td></tr><tr><td> LNP-SÄRNA </td><td> Alnylam Pharmaceuticals </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Spezifischen Reagenzien und Geräte.

einem orthotopen blasentumor modell und der auswertung der intravesikalen behandlung sÄrna

An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment

Wir stellen eine neue Methode zur Behandlung von Blasenkrebs mit intravesikal geliefert kleine aktivierende RNA (SÄRNA) in einem orthotopen Xenograft Maus Blasentumor Modell. Das Maus-Modell wird durch Katheterisierung der Harnröhre unter inhalativen Vollnarkose eingerichtet. Verätzung wird dann auf der Blasenschleimhaut mit intravesikale Silbernitratlösung, um die Blase eingeführt Glycosaminoglycan Schicht zu stören und erlaubt den Zellen zu befestigen. Nach mehrmaligem Waschen mit sterilem Wasser, die menschliche Blasenkarzinom KU-7-luc2-GFP-Zellen durch den Katheter in die Blase instilliert für 2 Stunden zu verweilen. Anschließende Wachstum von Blasentumoren wird bestätigt und überwacht durch In-vivo-Blase Ultraschall und Biolumineszenz Bildgebung. Die Tumoren werden dann mit intravesikal SÄRNA in Lipid-Nanopartikel (LNPs) formuliert behandelt. Das Tumorwachstum wird mit Ultraschall und Biolumineszenz überwacht. Alle Schritte dieses Verfahrens sind in der beigefügten Video demonstriert.

Gründung einer orthotopen Tumormodell Blase zu Antitumor-Wirkung von intravesikal geliefert Sarna und Überwachung des Tumorwachstums durch Ultraschall und Biolumineszenz-Bildgebung zu beurteilen.

Einem orthotopen Blasentumor Modell und der Auswertung der intravesikalen Behandlung SÄRNA

Wir präsentieren eine neuartige Methode zur Behandlung von Blasenkrebs mittels intravesikal verabreichter small activating RNA (saRNA) in einer orthotopen Xenograft-Mausblase ...

Wir stellen eine Methode zur Erstellung eines orthotopen Blasentumormodells bei immundefizienten Mäusen vor. Die Behandlung dieser Tumore erfolgt mittels intravasal verabreichtem kleinem doppelsträngigen RNA-Molekül, und die Überwachung der Tumore erfolgt durch Blasenultraschall und Biolumineszenz-Bildgebung. Eine Allgemeinanaesthesie wird mit verdampftem Isofluran induziert, und ein steriler Augensalbe wird appliziert.Der Maus wird anschließend eine Rückenlage eingeräumt, und die Anästhesie wird mittels Isofluran über eine Nasenmaske aufrechterhalten. Danach muss die Maus katheterisiert werden. Wir verwenden einen 24-Gauge-Intravenöskatheter, bei dem der Nadelstil abgenommen wurde.Katheterisierung ist oft der schwierigste und unvorhersehbarste Schritt des Protokolls. Eine ausreichende Schmierung mit KY-Gel und die korrekte Technik sind entscheidend für eine erfolgreiche Katheterisierung. Hier ist der Bereich der Vulva der Maus dargestellt.Die Harnröhre liegt direkt unterhalb der Vulvafalten. Nach der Gleitmittelanwendung werden die Katheterpinzette verwendet, um die Vulva und Harnröhre vorsichtig zu fassen und zu stabilisieren. Zunächst wurde ein steilerer Winkel von 45 Grad verwendet, um die Harnröhre zu kanülieren; sobald jedoch die Harnröhre erreicht ist, wird ein flacherer Winkel gewählt, um sanft in die Harnblase übergehen zu können.Wir zeigen hier diesen Vorgang. Erneut kann sanfter Beckendruck, um die Harnröhre zu entflechten, oft hilfreich sein, und es ist Vorsicht geboten, um zu vermeiden, zu stark gegen einen Widerstand zu drücken, da dies zu einer Perforation von Harnröhre oder Blase führen kann. Das hier im Katheter sichtbare Urin bestätigt die Lage innerhalb des Blasenlumens.Der Urin im Katheter wird anschließend mit der Drahtsonde abgesaugt, und der Katheter verbleibt nun an Ort und Stelle. Etwa fünf Millimeter des Katheters sollten außerhalb der Harnröhre sichtbar bleiben, damit die Katheterspitze im Blasenlumen und nicht an der Blasenwand anliegt. Wenn der Katheter zu tief eingeführt wird, kann sich die Spitze in der Blasenwand verfangen und Injektionen verhindern.Für alle nachfolgenden Injektionen wird eine auf die Kanüle aufgesetzte Spritze durch den Katheter eingeführt. Dies ermöglicht die Injektion genauer Volumina, da der Totraum innerhalb des Katheters eliminiert wird, und macht wiederholte Katheterisierungen überflüssig, um eine Verbrennungsverletzung der Blasenwand zu erzeugen.10 µL einer 0,5 molaren Silbernitratlösung werden injiziert und 10 Sekunden lang belassen. Das Silbernitrat kann mit restlichem Urin in der Harnblase einen weißen Niederschlag bilden. Dieser Niederschlag und jegliche verbleibende Lösung werden über den Katheter abgesaugt.Anschließend spülen wir die Harnblase viermal hintereinander mit jeweils 100 µL steriler Wasser aus und entfernen jedes Mal die Flüssigkeit aus dem Katheterlumen. Nach dem ersten Spülvorgang ist das weiße Präzipitat im Katheter weiterhin sichtbar, doch mit jedem weiteren Spülschritt wird die Flüssigkeit klarer. Eine 4-0-seidene Ligatur wird verwendet, um die Harnröhre zu verschließen, und nun sind wir bereit, die Krebszellen zu injizieren.Die Zellen werden in eine Spritze geladen, die an eine Stilettnadel angeschlossen ist, und die Zellen werden in die Harnblase injiziert. Der Katheter wird entfernt, und die Harnröhre bleibt für zwei Stunden lang unter Narkose an das Tier gebunden. In vordefinierten Zeitabständen wird das Tumorwachstum überwacht.Mithilfe der in-vivo-Biolumineszenz-Bildgebung erhalten die Mäuse zunächst eine Injektion von Lucifer und Substrat über eine intraperitoneale Applikation. Nach Einleitung einer Vollnarkose mit verdampftem Isofluran werden die Mäuse in Rückenlage innerhalb der IVUS-Maschine positioniert. Die Biolumineszenz wird in Einheiten von Photonen pro Sekunde gemessen.Das Vorhandensein von KU-sieben-Zellen in den Mausblasen ist leicht erkennbar, und die Biolumineszenzintensität kann über die Zeit verfolgt werden. Das Vorhandensein und das Fortschreiten von Harnblasentumoren können zudem mittels Ultraschallbildgebung überwacht werden. Nach Einleitung einer Vollnarkose mit verdampftem Isofluran wird ein steriler Augensalbe aufgetragen.Die Maus wird in Rückenlage auf dem Ultraschalltisch platziert. Die Aufrechterhaltung der Anästhesie erfolgt mittels Isofluran über eine Nasenkonne. Die Hinterbeine der Maus können am Tisch fixiert werden, um übermäßige Bewegungen des Körpers während der Handhabung des Ultraschallkopfs zu vermeiden.Wenn dies abgeschlossen ist, wird Ultraschallgel auf den mittigen Bereich des Beckens des Tieres aufgetragen. Nach dem Auftragen des Gels wird eine 40-Megahertz-Sonde an der Haltevorrichtung befestigt und langsam auf den Körper des Tieres abgesenkt. Die Harnblase ist als runde, mittig gelegene, echoarme Struktur leicht sichtbar.Falls das Tier vor der Anästhesie keine erhebliche Reizung aufwies, ist die Harnblase in der Regel bereits gedehnt, und wir haben festgestellt, dass eine Katheterisierung der Maus zur Dehnung der Harnblase nicht erforderlich ist. Sowohl transversale als auch longitudinale Bilder können hierauf aufgenommen werden. Ein Tumor ist leicht im Lumen der Harnblase sichtbar.Wenn ein Tumor gefunden wird, können Bilder zur Messung der Tumorgröße gespeichert werden. Nach der Induktion des Blasentumors werden die Mäuse intravesikal mit kleinen doppelsträngigen RNA-Molekülen in Lipid-Nanopartikeln behandelt. Eine Vollnarkose wird eingeleitet und erneut ein Augensalbe aufgetragen.Der Maus wird dann in Rückenlage gebracht und eine Harnröhrenkatheterisierung durchgeführt. Wie zuvor beschrieben, wird ein Seidennetz aus vierfachem Seidenfaden verwendet, um die Harnröhre um den Katheter herum zu verschließen. Typischerweise werden zwei Knoten wie hier gezeigt angelegt.Eine leere Spritze, die auf eine Stilettnadel aufgesetzt wird, dient zur vollständigen Entleerung der Harnblase. 50 Mikroliter kleiner doppelsträngiger RNA werden intravesikal appliziert, was einer Gesamtdosis von drei Milligramm pro Kilogramm entspricht. Anschließend werden die Nadel und der Katheter entfernt.Die Maus bleibt zwei Stunden lang anästhesiert, wobei die Harnröhre verschlossen ist. Nach dem Anschauen dieses Videos sollten Sie ein gutes Verständnis für eine Methode zur Erzeugung eines orthotopen Maus-Blasentumormodells haben, bei der das Tumorwachstum mittels Biolumineszenz-Bildgebung und Ultraschall überwacht und das Tumor mittels intravesikal verabreichter kleiner RNA behandelt wird. Es gibt einige Feinheiten bei dieser Technik, die etwas Übung erfordern, insbesondere bei der Katheterisierung; insgesamt handelt es sich jedoch um ein leicht replizierbares Protokoll.Wir haben gute Erfolge bei der Einpflanzung von Blasentumoren in Mäuse erzielt, und die Behandlungseffekte mit dem kleinen RNA-Molekül sind vielversprechend. Doch am aufregendsten an diesem Protokoll ist, dass, während wir die Mäuse mit kleinem RNA-Molekül behandelten, dieselbe Technik zur Prüfung jeder intravesikalen Therapie bei Blasenkrebs verwendet werden kann.

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Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Blasentumoren sind bei weiblichen Mäusen in eine minimal-invasive Weise durch Katheterisierung, lokale Verätzungen und späteren Haftung von Karzinomzellen, um den Brennvorgang Standorten etabliert.

Einem orthotopen Modell des Murine Blasenkrebs

In diesem Video beschreiben wir die orthotope Transplantation von kultivierten Blasentumor-Organoiden in die Mausblase, um die Rolle der Organumgebung bei der Entwicklung von Tumoren zu untersuchen.

Blasentumor-Organoidmodell: Eine Methode zur orthotopen Transplantation von Blasenorganoiden in die Empfänger-Mausblase

In diesem Video beschreiben wir den intravesikalen Ablauf der Abgabe von Krebszellen in die Blase eines Mausmodells. Dieses Verfahren hilft dabei, ein orthotopes Blasentumormodell zu generieren, das zur Entwicklung therapeutischer Strategien verwendet werden kann.

Modellierung eines orthotopen Blasentumors im Mausmodell: Ein Verfahren zur intravesikalen Verabreichung von Krebszellen in die Blase von Mäusen

Implantation von Krebszellen in das Ursprungsorgan als nützliches präklinischen Modell, um neue Therapien zu evaluieren zu dienen. MB49-Blasenkarzinomzellen in der Blase nach intravesikale Instillation gezüchtet werden. Dieses Protokoll zeigt, Katheterisierung der Blase der Maus für die Zwecke der Tumorimplantation und adenoviraler Lieferung.

Ein orthotopen Blasenkrebs-Modell für Gene Delivery Studies

Die etablierte Technik, um primäre invasive orthotopen Blasenkrebs Xenografts impfen erfordert Laparotomie und Mobilisierung der Blase. Dieses Verfahren verursacht eine signifikante Morbidität auf Mäuse, ist technisch anspruchsvoll und zeitaufwendig. Wir haben deshalb eine hohe Präzision, die perkutane Ansatz verwendet Ultraschallkontrolle.

Minimal Invasive Gründung von murinen orthotopen Blasen Xenografts

Hier wird die Methode zur Etablierung eines syngenen Mausmodells eines orthotopen Blasentumors beschrieben, um die Anti-Tumor-Wirksamkeit des bakteriellen Proteins HP-NAP zu bewerten.

Bewertung der Wirksamkeit der<em&gt; H. pylori</em&gt; Protein HP-NAP als therapeutisches Werkzeug zur Behandlung von Blasenkrebs in einem orthotopen Mausmodell

Dieses Protokoll beschreibt die Erzeugung von murinen orthotope Blasentumoren in weiblichen C57BL / 6J-Mäusen und für die Überwachung des Tumorwachstums.

Ein Murine Orthotopische Blasentumormodell und Tumor Detection System

Murine Blase Tumoren werden mit dem N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) Nitrosaminen karzinogen (BBN) induziert. Blase Tumor Generation ist heterogen; Daher ist eine genaue Beurteilung der Tumorlast vor Randomisierung, experimentelle Behandlung erforderlich. Hier präsentieren wir Ihnen eine schnelle und zuverlässige MRI-Protokoll zur Beurteilung der Tumorgröße und Bühne.

Magnet-Resonanz-Tomographie Bewertung der murinen Blase Karzinogen-induzierte Tumoren

Dieses Protokoll beschreibt die Erzeugung von orthotopischen Xenograft-Modellen durch intravesische Instillation hochwertiger urotheliaaler Zellkarzinomzellen oder intrarekt injizierende Darmkrebszellen in nicht-fettleibige diabetische/schwere kombinierte Immundefizienz (NOD/SCID) Mäuse für primäres Tumorwachstum und spontane Metastasen unter dem Einfluss von Lymphknoten-Stromalzellen, die das Fortschreiten menschlicher metastasierender Erkrankungen imitieren.

Patientenabgeleitete orthotopische Xenograft-Modelle für humanes Urotheliale Zellkarzinom und Kolorektalkrebs-Tumorwachstum und spontane Metastasierung

Einen umfassenden Überblick über die Techniken bei der Erzeugung von einem Maus-Modell von Mundkrebs und quantitative Überwachung der Tumorinvasion in die Zunge durch Multi-Photonen-Mikroskopie markierter Zellen beteiligt wird vorgestellt. Dieses System kann als eine nützliche Plattform für die molekulare Beurteilung und Wirksamkeit von Medikamenten von anti-invasive Verbindungen dienen.

Multi-Photonen-Imaging der Tumorzellinvasion in einem orthotopen Mausmodell des oralen Plattenepithelkarzinoms

Lernen Sie die Herstellung eines orthotopen Blasentumormodells bei immungeschwächten Mäusen. Diese Methode ermöglicht die intravesikale Behandlung mit saRNA und die Überwachung durch Ultraschall sowie Biolumineszenzbildgebung.

Einem orthotopen Blasentumor Modell und der Auswertung der intravesikalen Behandlung SÄRNA

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