Name: Wiederkehrende Herpetic Stromakeratitis in Mäuse, ein Modell für das Studium der menschlichen HSK (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: Lernen Sie ein wiederkehrendes Mausmodell für herpetische Stromakeratitis kennen, das durch UVB-induzierte Reaktivierung latenter HSV-Infektionen die menschliche Erkrankung nachahmt. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Krankheitsprogression und therapeutischen Ansätzen.

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Die Autoren bedanken sich bei Dr. Jay Pepose zu helfen lehrt das Modell bei uns zu bedanken. Diese Arbeit wurde von den National Institutes of Health Grants EY11885 (PMS), EY21247 (PMS) und einer uneingeschränkten Finanzhilfe aus Forschung zur Blindheit zu Department of Ophthalmology Prevent unterstützt.

Animal Care Hinweis: Analgetika werden in diesem Modell nicht verwendet, da sie entzündungshemmend und sind somit würde das Modell ungültig. Ein. Herstellung von Virus <ol><li> Wachsen HSV-1 in Vero-Zellen (80% konfluent) mit einem ausgehend von 0,01 Verdünnung Infektionsmultiplizität (in T-150-Kolben, etwa 5 x 10 5 Plaque-bildende Einheiten) für 3-4 Tage, bis alle Zellen abgerundet-up und sind leicht durch das Drücken der Flasche verdrängt. </li><li> Entfernen Sie das Medium in sterile Zentrifugenröhrchen und Zentrifuge Sorvall Legend RT bei 4 ° C und 3.500 rpm für 15 min. Nach dem Entfernen Überstand (siehe 1.3), resuspendieren großen Pellets aus je 50 ml Röhrchen mit 5 ml Medium total. Beschallen für 1 min in zwei 30 sec platzt. </li><li> Überstand abnehmen und in 50 ml steriler Oak Ridge Rohren und Zentrifuge bei 9000 rpm, 1 Stunde lang bei 4 ° C in einer Beckman J2-21 Zentrifuge. Dies ist, um eine kleine virale Pellet herzustellen. Überstand verwerfen. </li><li> Kombinieren Sie beschallen von 1,2 with Pellet aus 1,3 und beschallen wieder für 45 Sekunden. Zentrifuge Sorvall RT Legende bei 1.500 UpM für 5 min bei 4 ° C. Speichern Sie den Überstand. Dies stellt das Virus Lager, die aliquotiert und bei -70 ° C gelagert </li><li> Titer Virus auf Vero-Zellen. Ich in der Regel Platte 10 0 bis 10 -8 Verdünnung (jeweils eine 10-fache Verdünnung) 2x aus 2 separate Verdünnung Sets. Titration des Virus auf 12-Well-sterile Platten durchgeführt. </li></ol> 2. Maus Infektion <ol><li> Injizieren jede Maus mit 0,1 ml des Narkosemittels cocktail/20 g Maus Körpergewicht (Ketamin 60 mg / kg Xylazin + 5 mg / kg, die in HBSS verdünnt wird). Dieser Cocktail verwendet wird, weil es eines der sichersten Mittel der Narkose, wenn eine ordnungsgemäße Dosierungen verwendet werden, und die Auswirkungen dieser Droge sind sehr kurzlebig ist. </li><li> Wenn Mäuse anästhesiert sind Kratzer auf der Hornhaut des rechten Auges mit einer 30-Gauge-Nadel mit einem Präpariermikroskop um sicherzustellen, dass die Hornhaut nicht perforiert ist. </li><li> Jede Maus receIved eine intraperitoneale Injektion von 1 ml gepooltes humanes Serum (Sigma, Temecula, CA; Anti-HSV Reaktivität mit einer wirksamen Dosis für 50% Neutralisation der viralen 1:800), um vor einer Beschädigung während Hornhäute primären Infektion zu schützen. </li><li> Anzahl der Mäuse entweder mit Ohrbügel oder nach Gehör Punsch. </li><li> Nach all der Mäuse wurden nummeriert; mit einem 20 ul Pipette, infizieren wir jedes Auge mit 10 6 PFU (5 ul). Wir infizieren nur ein Auge und in der Regel das rechte Auge. Wir legen auch 5 ul HBSS auf das andere Auge zu feucht halten, während sie betäubt sind. 5 ul ausreicht, um die Hydratisierung der Augen zu halten, da die Verfahren in weniger als 10 min durchgeführt, und die Tiere werden mit Anästhetikum dosiert entsprechend. Infektion wird durch Abtupfen Mäuse 3 Tage nach der Infektion mit einer sterilen hydratisierten Baumwolle Applikator, in 1 ml Vero Medien wurde bestätigt. Dann wurden 100 ul wird Vero-Zellen in 48-well Platten kultiviert zugegeben. Diese Platten werden täglich überwacht für zytopathischen Effekte<html> (Cpe). </li></ol> 3. Reaktivierung der Mäuse aus Latency <ol><li> Mäuse sind betäubt mindestens 5 Wochen nach der primären Infektion. Es sei angemerkt, dass wir Mäuse reaktiviert bis zu einem Jahr nach Primärinfektion und haben keinen signifikanten Unterschiede in Reaktion beobachtet werden. </li><li> Sobald sie anästhesiert TM20 Chromato-Vu Transilluminator, der UV-B emittiert bei einer Spitzenwellenlänge von 302 nm, so dass nur ein einzelnes Auge auf die UV-B-Licht ausgesetzt ist, platziert. Jede Maus auf 250 mJ von UV-B-Licht cm 2 belichtet. </li><li> Reaktivierung durch Abtupfen Augen mit einer sterilen Watteträger, die zuerst in 1 ml Vero Medien am Tag 0 gesetzt (vor UV-B-Exposition für spontane Ausscheider kontrollieren) und dann an den Tagen 1 bis 7 post-UV-B-Bestrahlung bestimmt. Der Tupfer Material wird bewertet, wie in 2.5 beschrieben). Für die Abstriche, die infektiöse Virus haben die Virusmenge wird durch ein Standard-Plaque-Assay mit 12-Well-Platten kicherten. </li></ol>ove_title &quot;&gt; 4. Clinical Evaluation <ol><li> Mäuse werden zur klinischen Augenerkrankung durch einen maskierten Beobachter unter Verwendung einer binokularen Präpariermikroskop ausgewertet. </li><li> Hornhauttrübung auf einer Skala von 0 bis 4, wobei 0 bedeutet, klare Stroma bewertet, ein mildes Stromazellen Trübung zeigt, 2 mäßig Opazität zeigt mit erkennbaren Merkmalen Iris, zeigt 3 dichte Opazität unter Verlust von Iris definiert Detail außer Pupille Ränder, und 4 zeigt Insgesamt Deckkraft ohne Ansicht von dorsal. </li><li> Neovaskularisation wird auf einer Skala von 1 bis 8 durch Teilen der Hornhaut in 4 gleiche Quadranten und Bestimmen des Ausmaßes der Vaskularisierung in jedem dieser Quadranten bewertet. </li><li> Blepharitis wird wie folgt gemessen: 0, keine Läsionen, 1, minimal Augenlid Schwellung; 2, mäßige Schwellung und knusprigem Augenausfluss, 3, starke Schwellung, mäßige periokuläre Haarausfall und Hautveränderungen und 4, starke Schwellung mit den Augen verkrusteten geschlossen, schwere periokuläre Haarverlust und Hautläsionen. </li><li> Der Nachweis der Enzephalitis Inclusionded zurück, gebeugt zerzausten Haaren und offensichtliche neurologische Anomalien. Mäuse sind eingeschläfert, wenn sie deutliche Anzeichen von Encephalitis anzuzeigen. </li></ol> 5. Repräsentative Ergebnisse Das Modell, das wiederkehrende oben beschrieben wurde zuerst von Shimeld, et al. 1-3. Sie getestet und unserem Labor wurde mit einer modifizierten Version dieses Modells auf viele Manuskripte über die Jahre 4-15 veröffentlichen. Das Modell wurde verwendet, um die Rolle zu definieren, dass das Zytokin Interferon-γ spielt bei rezidivierenden HSV-1 Krankheit 10. Wie in Abbildung 3 gezeigt, hat Mäusen IFNgamma angezeigt schlimmer Hornhauterkrankung als Wildtyp-Mäusen 14. Es wurde auch erfolgreich auf den therapeutischen Wert von mehreren unterschiedlichen Vakzin-Konstrukte 6,10,11 definieren. Beachten Sie, dass in einem Fall der Impfstoff getestet gut funktioniert aber nicht prophylaktisch erweisen therapeutisch wirksame 6. Jedochwenn ein Replikations-inkompetent viraler Impfstoff getestet wurde, war es nicht nur wirksam, prophylaktisch, war aber auch sehr effektiv therapeutisch 10,11, siehe Abbildung 5 in Referenz 10. Vor kurzem haben wir dieses Modell verwendet werden, um festzustellen, ob Unterschiede zwischen den Geschlechtern bei Mäusen unterzogen wiederkehrende HSK nachweisbar waren. Wie Abbildung 1 zeigt, zeigen männliche C57BL / 6 Mäuse deutlich weniger Hornhauttrübung als weibliche C57BL / 6 Mäusen. Ebenso, wenn cornealer Neovaskularisierung wurde ausgewertet, nachgewiesen männlichen Mäusen signifikant weniger neue Gefäßwachstum in der Hornhaut als tat weiblichen Mäusen (Abbildung 2). Wir testen derzeit, ob dieser Phänotyp stammspezifische indem ähnliche Analyse in anderen Stämmen von Mäusen ist. Wir werden auch bestimmen, ob der Unterschied aufgrund des Fehlens von Testosteron oder der Gegenwart von Östrogen ist. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/4276/4276fig1.jpg" /> Abbildung 1. Corneal Krankheit in männliche und weibliche C57BL / 6 Maus-Stämme nach der UV-B induzierte Reaktivierung. Latent infizierten Mäusen induziert wurden mit UV-B-Bestrahlung und Mäuse wurden für Hornhauttrübung für 35 Tage überwacht reaktivieren. Die Zahl der Mäuse für diese Studien verwendet wurden, waren wie folgt: Männchen, n = 15; Weibchen n = 15. Die Ergebnisse zeigen den Mittelwert ± SEM. * Es war signifikant größer Virus-induzierte Erkrankung weibliche C57BL / 6 Mäuse für Tage 14-35 (P = 0,001 bis 0,01). <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/4276/4276fig2.jpg" /> Abbildung 2. Corneal Krankheit in männliche und weibliche C57BL / 6 Maus-Stämme nach der UV-B induzierte Reaktivierung. Latent infizierten Mäusen induziert wurden mit UV-B-Bestrahlung und Mäuse wurden für korneale Neovaskularisierung für 35 Tage überwacht reaktivieren. Die Zahl der Mäuse für diese Studien verwendet wurden, waren wie folgt: Männchen, n= 15; Frauen, n = 15. Die Ergebnisse zeigen den Mittelwert ± SEM. * Es war signifikant größer Virus-induzierte Erkrankung weibliche C57BL / 6 Mäuse für Tage 14-28 (P = 0,001 bis 0,01).

<ol><li>Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+model+of+recurrent+herpetic+eye+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice.</a> Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).</li>
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<li>Keadle, T. L., Alexander, D. E., Leib, D. A., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon+gamma+is+not+required+for+recurrent+herpetic+stromal+keratitis%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Interferon gamma is not required for recurrent herpetic stromal keratitis.</a> Virology. 380, 46-51 (2008).</li>
<li>Carr, D. J., Austin, B. A., Halford, W. P., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+Interferon-gamma+by+an+adenovirus+vector+blocks+herpes+simplex+virus+Type+1+reactivation+in+vitro+and+in+vivo+independent+of+RNase+L+and+double-stranded+RNA-dependent+protein+kinase+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Delivery of Interferon-gamma by an adenovirus vector blocks herpes simplex virus Type 1 reactivation in vitro and in vivo independent of RNase L and double-stranded RNA-dependent protein kinase pathways.</a> J. Neuroimmunol. 206, 39-43 (2009).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die wiederkehrende Modell Herpes Stromakeratitis (HSK) hier beschrieben ermöglicht die Ermittler auf die menschliche HSK in einem Modell, das mehr im Einklang mit dem, was während der Krankheit beim Menschen beobachtet wird, zu studieren. Somit sind das Modell der Stärken, die Krankheit im Zusammenhang mit einer Immunsystem, das bereits durch stimulierte während primäre Erkrankung auftritt. Da diese Mäuse bereits eine Immunantwort gegen HSV-1 hat, sind die Faktoren, die diese Immunantwort zu reaktivieren wahrscheinlich ...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>Menschen-Serum</td><td>Sigma</td><td>S7023</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Cellgro</td><td>25-005-C1</td><td></td></tr><tr><td>Penzillin/Streptomycin</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Fungizone</td><td>Invitrogen</td><td>15290018</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Sorvall</td><td>Legend RT</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Beckman</td><td>52-21</td><td></td></tr><tr><td>Transilluminator</td><td>UVP</td><td>95-0452-02</td><td></td></tr><tr><td>Sonikator</td><td>Branson</td><td>Sonifier 450</td><td></td></tr><tr><td>Flaschen nach Oak Ridge</td><td>Nalgene</td><td>Z 720410</td><td></td></tr><tr><td>Kolben – 7150</td><td>Corning</td><td>430823</td><td></td></tr><tr><td>Platten – 12-Loch</td><td>Corning</td><td>CLS 3513</td><td></td></tr><tr><td>Platten – 48-Loch</td><td>Corning</td><td>CLS 3548</td><td></td></tr><tr><td>Sterile kegelförmige Röhrchen – 30 ml</td><td>Corning</td><td>CLS 430828</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Wattestäbchen</td><td>Fisher</td><td>23-400-125</td><td></td></tr><tr><td>Nadeln 30G</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Nadeln 25G</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>10-ml-Spritze</td><td>BD</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>10-ml-Spritze</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr></tbody></table>

wiederkehrende herpetic stromakeratitis in mäuse, ein modell für das studium der menschlichen hsk

Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK

Herpetic Augenkrankheit, genannt Herpes Stromakeratitis (HSK), ist ein potentiell blendenden Infektion der Hornhaut, die zu über 300.000 klinische Besuche pro Jahr für die Behandlung. Zwischen 1 und 2 Prozent der Patienten mit klinischer Erkrankung erleben Verlust des Sehvermögens der infizierten Hornhaut. Die überwiegende Mehrheit dieser Fälle sind die Folge der Reaktivierung einer latenten Infektion durch Herpes simplex-Virus Typ I und nicht aufgrund einer akuten Erkrankung. Interessanterweise ist die akute Infektion das Modell häufig verwendet, um diese Krankheit zu studieren. Es wurde jedoch das Gefühl, dass ein immer wiederkehrendes Modell HSK wäre reflektiert, was geschieht, während der klinischen Erkrankung. Die wiederkehrenden Tiermodelle für HSK haben beide Kaninchen und Mäuse eingesetzt. Der Vorteil von Kaninchen ist, dass sie erleben Reaktivierung aus der Latenz abwesend alle bekannten Reiz. Das heißt, es ist schwierig, die Rolle, die viele immunologische Faktoren bei rezidivierendem HSK spielen zu erforschen, weil die Kaninchen-Modell nicht die immungische und genetische Ressourcen, die Maus hat. Wir wählten das Mausmodell für wiederkehrende HSK verwenden, weil es den Vorteil davon, dass es viele Ressourcen zur Verfügung hat und auch wir wissen, wann die Reaktivierung wird auftreten, da die Reaktivierung durch Bestrahlung mit UV-B-Licht induziert wird. Bisher hat dieses Modell der Laboratorien verwenden darf es zu mehreren immunologischen Faktoren, die wichtig für diese Erkrankung sind zu definieren. Es hat uns auch die Möglichkeit, sowohl therapeutische und Wirksamkeit des Impfstoffes zu testen.

Die meisten Studien über Herpes Hornhauterkrankung verwenden Primärinfektion Modell. Allerdings bedeutet primäre Infektion mit HSV-1 in der Regel nicht für die menschliche Erkrankung führen. Hier beschreiben wir ein wiederkehrendes Muster von herpetischer korneale Erkrankung, die näher Verhalten menschlicher Erkrankung.

Wiederkehrende Herpetic Stromakeratitis in Mäuse, ein Modell für das Studium der menschlichen HSK

Die herpetische Augenerkrankung, bezeichnet als herpetische stromale Keratitis (HSK), ist eine potenziell erblindende Infektion der Hornhaut, die zu über 300.000 klinischen ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine rezidivierende Infektion mit dem Herpes-simplex-Virus (HSV) zu untersuchen. Dies wird erreicht, indem Mäuse zunächst so infiziert werden, dass sie latent infiziert werden, ohne dass eine Hornhautschädigung auftritt. Nachdem die Latenz vollständig etabliert ist, erfolgt der nächste Schritt, das Virus durch Bestrahlung mit UVB-Licht zu reaktivieren. Im letzten Schritt wird der Tränenfilm zur Detektion einer viralen Ausscheidung gesammelt, und die Maus wird anschließend mindestens fünf Wochen lang beobachtet, um den Krankheitsverlauf zu überwachen.Letztendlich kann das Ausmaß der Erkrankung bei Mäusen durch die Bewertung der Herpetischen stromalen Keratitis beurteilt werden. Diese Erkrankung betrifft weltweit viele Menschen und ist eine der führenden Ursachen für infektiöse Erblindung.Wir verfügen über ein Modell, das wir bei Mäusen verwenden, um diese bestimmte Krankheit nachzuahmen. Es gibt andere Modelle, die diese Krankheit ebenfalls nachahmen können, aber wir sind der Ansicht, dass dieses Modell die beste Repräsentation dieser speziellen Erkrankung darstellt. Ich möchte heute einige Minuten nutzen, um die Personen vorzustellen, die Sie in diesem Video sehen werden.Dies ist Chloe, die seit mehreren Monaten mit mir zusammenarbeitet. Dies ist Nippo, ein Sommerpraktikant, der im Labor arbeitet. Beginnen Sie das Experiment, indem Sie HSV Typ 1 für drei bis vier Tage zu 80 % Konfluenz in einer T150-Flasche auf Vero-Zellen kultivieren.Zu diesem Zeitpunkt haben sich die Zellen aufgerundet und lassen sich leicht durch Anschlagen des Kolbens lösen. Überführen Sie die Zellsuspension in sterile konische 50-Milliliter-Röhrchen und zentrifugieren Sie die Zellen anschließend 15 Minuten lang. Fügen Sie 1.510 × g bei vier Grad Celsius in einer Tischzentrifuge hinzu.Überführen Sie anschließend den Überstand in 50-Milliliter-sterile Oak-Ridge-Röhrchen und verteilen Sie insgesamt fünf Milliliter Medium gleichmäßig auf die konischen Röhrchen für die Resus. Suspendieren Sie die großen Pellets und sonifizieren Sie die resuspendierten Pellets für eine Minute in zwei 32stel-Sekunden-Impulsen. Nach der Zentrifugation des Überstands in einer Hochgeschwindigkeitsboden-Zentrifuge entsteht ein kleines virales Pellet.Nach dem Verwerfen des Überstandes die Zellen mit den kleinen viralen Pellets kombinieren und erneut 45 Sekunden lang beschallen. Anschließend die beschallte Zell- und Viruslösung erneut fünf Minuten bei 280 × g und 4 °C in der Tischzentrifuge zentrifugieren und den Überstand für die Lagerung als Virusstamm bei −70 °C portionieren, um ihn später in der Titerplatte zu bestimmen.Zehnfache Verdünnungen des Virus aus dem Virusstammsupernatanten von 10 hoch null bis 10 hoch minus acht, jeweils zweifach aus zwei separaten Verdünnungsreihen, werden auf Vero-Zellen in 12er-Platten aufgetragen, um die Infektion zu beginnen. Beginnen Sie das Verfahren, indem Sie die Maus anästhesieren. Die Maus sollte vollständig anästhesiert bleiben für 20 bis 30 Minuten, damit das Virus absorbiert werden kann, bevor die Maus wieder aufwacht.Verwenden Sie dann unter einem Stereomikroskop eine Nadel mit 30 Gauge, um die Hornhaut des rechten Auges anzukratzen. Kennzeichnen Sie das Tier nun durch eine Ohrstanze. Injizieren Sie anschließend die Maus mit einem Milliliter gepooltem menschlichem Serum, um die Hornhäute während der primären Infektion vor Schäden zu schützen.Verwenden Sie dann einen 20-Mikroliter-Pipettierer, um das angeritzte Auge mit 10 hoch 6 Plaque-bildenden Einheiten zu infizieren, und geben Sie fünf Mikroliter HBSS in das andere Auge, um es feucht zu halten, während das Tier anästhesiert ist, um die Infektion zu bestätigen. Befeuchten Sie einen sterilen Wattetupfer mit einem Milliliter Vero-Medium. Drei Tage nach der Infektion beproben Sie das infizierte Auge mit dem Tupfer und übertragen anschließend 100 Mikroliter des abgestrichenen Mediums auf Vero-Zellen, die mindestens fünf Wochen nach der Erstinfektion in 48-Well-Platten kultiviert wurden.Beproben Sie das infizierte Auge einer anesthetisierten Maus wie gerade gezeigt mit einem Abstrich. Kennzeichnen Sie den Abstrich als Tag null auf dem Deckel einer 48-Loch-Platte, um spontane Schließbewegungen zu kontrollieren. Stellen Sie anschließend die Maus auf einen Transluminator, der UVB-Licht mit einer Spitzenwellenlänge von 302 Nanometern emittieren kann, sodass nur ein einziges Auge dem UVB-Licht ausgesetzt ist, und bestrahlen Sie die Maus mit 250 Millijoule UVB-Licht pro Quadratzentimeter.Befeuchten Sie das Auge anschließend täglich von Tag eins bis sieben mit einem Abstrich. Nach der UVB-Bestrahlung quantifizieren Sie die Virusmenge bei den Abstrichen, die infektiöses Virus enthalten, mittels eines standardisierten Plaque-Assays unter Verwendung von 12-Loch-Platten, um die Mäuse auf eine klinische Augenerkrankung zu untersuchen. Stellen Sie die Maus unter ein binokulares Stereomikroskop.Die Hornhauttrübung wird anhand einer Skala von null bis vier bewertet, wobei null eine klare S-Stroma, eins eine leichte stromale Trübung, zwei eine moderate Trübung mit erkennbarer Iris, drei eine dichte Trübung mit Verlust definierter Irisdetails – mit Ausnahme der Pupillenränder – und vier eine vollständige Trübung ohne Sicht auf die Hinteransicht anzeigt.Die Neovaskularisation wird anhand einer Skala von eins bis acht bewertet, indem die Hornhaut in vier gleiche Quadranten unterteilt und das Ausmaß der Vaskularisation in jedem dieser Quadranten bestimmt wird. In dieser ersten Abbildung wurden latent infizierte Mäuse mittels UVB-Bestrahlung zur Reaktivierung gebracht und anschließend über einen Zeitraum von 35 Tagen auf Hornhauttrübung überwacht. Diese Daten zeigen, dass männliche C57BL/6-Mäuse signifikant weniger Hornhauttrübung aufweisen als weibliche C57BL/6-Mäuse, da bei den weiblichen C57BL/6-Mäusen von Tag 14 bis Tag 35 eine signifikant stärkere virusinduzierte Erkrankung auftrat.Ebenso zeigten männliche Mäuse bei der Bewertung der Hornhautneovaskularisierung unter denselben Versuchsbedingungen signifikant weniger Neubildung von Blutgefäßen in der Hornhaut als weibliche Mäuse, und erneut kam es bei weiblichen C57BL/6-Mäusen an den Tagen 14 bis 28 zu einer signifikant stärkeren virusinduzierten Erkrankung. Beachten Sie beim Durchführen dieses Verfahrens, die Mäuse vollständig zu anästhesieren, sodass sie zwischen 20 und 30 Minuten lang schlafen. Nach dem Ansehen dieses Videos hoffe ich, dass Sie verstanden haben, wie das Mausmodell der rezidivierenden stromalen Keratitis verwendet werden kann, um diese menschliche Erkrankung zu untersuchen.

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Forschung

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Immunologie und Infektion

In diesem Video Artikel beschreiben wir die Verwendung eines...

Ex Vivo Organotypische Corneal Modell der akuten Epithelial Herpes Simplex Virus Typ I Infection

Dieses Video demonstriert eine Methode zur Generierung eines dualen humanisierten Mausmodells mit einem menschlichen Immunsystem und Leberzellen. Dabei werden menschliche Leberzellen und hämatopoetische Stamm- und Vorläuferzellen durch intrasplenische Injektion in eine transgene immundefiziente Maus transplantiert, was zur Transplantation von Leberzellen und zur Entwicklung menschlicher Immunzellen führt.

Entwicklung eines humanisierten Mausmodells mit menschlichen Leberzellen und Immunzellen

Chronische Augenhypertension induziert wird mittels Laserkoagulation der Trabekelnetzwerk in Maus Augen. Der Augeninnendruck (IOP) wird für mehrere Monate nach der Laser-Behandlung erhöht. Die Abnahme der Sehschärfe und Kontrastempfindlichkeit von Versuchstieren werden anhand des optomotor Test.

Ein Laser-induzierten Maus-Modell der chronischen Ocular Hypertension zu Sehfehler Charakterisierung

Wir haben eine Fluoreszenz-in situ-Hybridisierungsprotokoll für den Nachweis eines persistenten DNA-Virus-Genom in Gewebeschnitten von Tiermodellen. Dieses Protokoll ermöglicht das Studium Infektionsprozess von codetection des viralen Genoms, dessen RNA-Produkte, und viralen oder zellulären Proteinen in einzelnen Zellen.

Nachweis der Transkripte von Genom und einem Persistent DNA-Virus in einem neuronalen Gewebe Fluorescent In situ Hybridisierung Kombination mit Immunfärbung

Die Haut ist ein Zielgewebe des humanpathogenen Herpes-simplex-Virus Typ 1 (HSV-1). Um den Invasionsweg von HSV-1 in das Gewebe zu untersuchen, haben wir ein ex vivo Infektionsmodell von murinen Epidermisschichten etabliert, die die äußerste Hautschicht darstellen.

Ex vivo Infektion von murinen Epidermis mit Herpes Simplex Virus Typ 1

Dieses Protokoll stellt eine Methode zum humanisierten Mäuse (Hu-NSG) schaffen über intrahepatischen Injektion von humanen hämatopoetischen Stammzellen in Strahlung bedingt neonatale NSG Mäuse. Die Hu-NSG-Maus ist anfällig für HIV-Infektion und kombinatorische antiretrovirale Therapie (cART) und dient als ein geeignetes pathophysiologischen Modell für HIV-Replikation und Latenz-Untersuchungen.

Humanisierten NOD/SCID/IL2rγnull (Hu-NSG) Maus-Modell für HIV-Replikation und Latenz-Studien

Hier werden drei experimentelle Ansätze beschrieben, um die Dynamik der HIV-Infektion bei humanisierten Mäusen zu untersuchen. Die erste erlaubt die Untersuchung chronischer Infektionsereignisse, während letztere die Untersuchung akuter Ereignisse nach primärer Infektion oder viraler Reaktivierung ermöglicht.

Chronische, akute und reaktivierte HIV-Infektion in humanisierten immundefizienten Mausmodellen

Das Footpad-Impfmodell ist ein wertvolles Werkzeug zur Charakterisierung viral-induzierter neuroentzündlicher Reaktionen in vivo. Insbesondere bietet es eine klare Bewertung der viralen Kinetik und der damit verbundenen immunpathologischen Prozesse, die im peripheren Nervensystem eingeleitet wurden.

Maus Footpad Inokulation Modell zur Untersuchung viral-induzierte neuroentzündliche Reaktionen

Wir beschreiben die Verwendung einer Schweinehornhaut, um die antivirale Wirksamkeit experimenteller Medikamente zu testen.

Porcine Hornhautgewebe Explant, um die Wirksamkeit von Herpes Simplex Virus-1 Antiviralen zu untersuchen

Kontaktüberempfindlichkeit (CHS) ist ein murines experimentelles Modell der allergischen Kontaktdermatitis (ACD). CHS basiert auf der Sensibilisierung mit reaktivem Hapten durch Lackieren der rasierten Haut von Brust und Bauch, mit einer anschließenden Ohrhautherausforderung mit einem verdünnten Hapten, was eine Schwellungsreaktion verursacht, die auf verschiedene Arten beurteilt wird.

Kontaktüberempfindlichkeit als murines Modell der allergischen Kontaktdermatitis

In diesem Protokoll wird erklärt, wie ein hypertrophes Narbenmodell für Mausen etabliert werden kann, das die Mechanotransduktionssignalisierung erhöht, um menschenähnliche Narbenbildung zu simulieren. Bei dieser Methode wird die mechanische Spannung an einem Heilungsschnitt bei einer Maus erhöht und mit einem speziellen Gerät reproduzierbares, überschüssiges Narbengewebe für detaillierte histologische und bioinformatische Analysen erzeugt.

Ein Mausmodell für mechanotransduktionsgetriebene, menschenähnliche hypertrophe Narbenbildung

Lernen Sie ein wiederkehrendes Mausmodell für herpetische Stromakeratitis kennen, das durch UVB-induzierte Reaktivierung latenter HSV-Infektionen die menschliche Erkrankung nachahmt. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Krankheitsprogression und therapeutischen Ansätzen.

Wiederkehrende Herpetic Stromakeratitis in Mäuse, ein Modell für das Studium der menschlichen HSK

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