تحقيقات بشأن التعديلات من وظيفة الدائرة الحصين عقب معتدل إصابات في الدماغ

الهدف العام من التجربة التالية هو التحقيق في التغييرات في وظيفة الشبكة لمناطق الدماغ المتأثرة بنموذج تجريبي لإصابات الدماغ الرضحية الخفيفة تبدأ التجارب بإعطاء إصابة قرع سائل جانبية للفأر ، والتي تحاكي كل من علم الأمراض وأعراض إصابات الدماغ الرضحية الخفيفة البشرية. كخطوة ثانية ، السلوك المعتمد على الحصين ، يتم استخدام استجابة الخوف السياقية المشروطة لتقييم الضعف الإدراكي الناجم عن إصابات الدماغ. بعد ذلك ، يتم استخدام التسجيلات خارج الخلية وداخل الخلايا جنبا إلى جنب مع الأصباغ الحساسة للجهد لتحديد التغييرات المحددة إقليميا في التوازن المشبكي بين الإرسال المشبكي المثير والمثبط في المنطقة ذات الأهمية ، الحصين ، تظهر النتائج تغيرات محددة في المنطقة الفرعية في صافي الفعالية المشبكية في الحصين بناء على الاختلافات بين الفئران المصابة بالدماغ والدماغ عبر تقنيات التسجيل الثلاث الموصوفة.

الميزة الرئيسية لهذا النهج هي القدرة على تمييز تأثيرات كل من الحالة المرضية والعلاجات المحتملة على مقاييس فسيولوجية متعددة ، مما يسمح بصورة أكثر تماسكا لأوجه القصور في هذه الدائرة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية حول إصابات الدماغ الرضحية ، مثل الخلايا العصبية الأكثر عرضة للإصابة على وجه التحديد ، وبالتالي تقديم أكبر مساهمة في الخلل الوظيفي في الحصين بعد الإصابة. تمتد الآثار المترتبة على نهجنا نحو علاج إصابات الدماغ الرضحية لأنها تسمح لنا بتحديد الآليات الأساسية أولا ، ثم تطوير علاجات محتملة لإعادة فسيولوجيا الروبوت في المناطق التي تضررت من إصابة الدماغ.

في هذا الإجراء ، قم بتخدير الفأر باستخدام مزيج من الكيتامين والزيلازين الذي يعطى داخل الصفاق. بعد ذلك ، قم بإجراء استئصال Ccraniectomy فوق المنطقة الجدارية اليمنى باستخدام سن بقطر خارجي ثلاثة ملليمترات. ثم قم بتأمين محور إبرة قفل الإغراء فوق استئصال التقرن C باستخدام السيانواكريلات والأكريليك الأسنان.

بعد 24 ساعة تخدير الفأر باستخدام الفلور عن طريق الاستنشاق بمجرد استئناف التنفس الطبيعي ، ولكن قبل أن يصبح الفأر حساسا للتحفيز ، قم بتوصيل نبضة 20 مللي ثانية من المحلول الملحي إلى الجمجمة عبر جهاز إصابة الإيقاع السائل. قم بإزالة المحور مباشرة بعد الإصابة. بعد ذلك إعادة تخدير الفأر باستخدام isof الفلور وخياطة فروة الرأس.

تعامل مع الماوس في يومين متتاليين قبل التدريب المشروط على الاستجابة للخوف. في يوم التدريب ، ضع الماوس في غرفة التكييف لمدة ثلاث دقائق قبل إعطاء صدمة أرضية لمدة 1.5 دقيقة لمدة ثانيتين. ثم اترك الماوس في الغرفة لمدة 30 ثانية إضافية قبل الإزالة.

بعد فترة تأخير مدتها 24 ساعة ، أعد الفأر إلى غرفة التكييف لمدة خمس دقائق ، ثم قم بتقييم التجميد على فترات خمس ثوان بعد سبعة أيام من الإصابة. تحضير لتر واحد من السائل الشوكي الدماغي الاصطناعي و 250 مل من محلول قطع السكروز. تأكد من أن جميع الأدوات والمحاليل المستخدمة أثناء تحضير شريحة الدماغ باردة مع الثلج.

قم بتخدير الماوس باستخدام الفلور بسرعة وبلطف. أخرج الدماغ من الفأر وضعه في السكروز. بعد ذلك ، قم بقص الدماغ.

ضع سطح الدماغ المقطوع حديثا على قطرة من الغراء الفائق على مسرح Vibram أمام كتلة أجار. قطع شرائح إكليلية بسمك 350 ميكرون. يجب أن تكون قادرا على الحصول على أربع أو خمس شرائح مع دائرة الحصين السليمة.

بعد ذلك ، احتضن الشرائح لمدة ساعة على الأقل عند 37 درجة مئوية. الآن قم بإعداد حوالي اثنين إلى خمسة أقطاب زجاجية ميجا أوم بو سيليكات. باستخدام الساحب الرأسي ، انقل شريحة إلى الغرفة ، ثم ضع قطبا كهربائيا على حامل القطب الكهربائي لتسجيل إمكانات المجال خارج الخلية.

ضع القطب الكهربائي المحفز فوق المسلك المحوري على الشريحة ، مثل المسار البيرينت أو ضمانات Shafer. ثم استمر في خفض قطب التسجيل في الشريحة. بعد ذلك ، قم بتوصيل نبضة كهربائية واحدة لاستحضار المجال خارج الخلية بعد المشبكي.

استمر في التحفيز مع تغيير عمق قطب التسجيل بين المحفزات عند تحقيق الاستجابة القصوى. هذا مؤشر على أن الأقطاب الكهربائية في نفس الطريقة. يتكون تحليل مستوى Z عادة من قياسات ، ومقارنة سعة الوابل الليفي في كل من الفئران المصابة في الدماغ والفئران التي تم تشغيلها بشكل وهمي لتقييم التنشيط قبل التشابك ، بالإضافة إلى مقارنة منحدر F-E-P-S-P لتقييم التنشيط بعد التشابك لتسجيل مشبك التصحيح مرة أخرى ، ونقل شريحة إلى الغرفة وخفض قطب التسجيل.

اقترب من خلية ذات ضغط إيجابي على القطب الكهربائي للتأكد من عدم انسداد قطب التسجيل أثناء تحركه لأسفل عبر الأنسجة. عندما يلامس القطب الخلية برفق ، استخدم ضغطا سلبيا لإنشاء ختم جيجا بين القطب وغشاء البلازما. بعد ذلك ، قم بتطبيق رشقات نارية قصيرة من الضغط السلبي من أجل تمزق غشاء البلازما لتحقيق تكوين الخلية بالكامل.

تخلص من عابر السعة باستخدام مكبر الصوت وتعويض مقاومة السلسلة لضمان قياسات دقيقة. ثم حدد وقارن معدل وحجم التيارات المشبكية العفوية في كل من الفئران المصابة في الدماغ والضوابط التي يتم تشغيلها بشكل زائف. في هذه الخطوة ، قم بإعداد مخزون الصبغة عن طريق خلط ملليغرام واحد من الصبغة ثلاثة onap DHQ في 50 ميكرولتر من الإيثانول.

قم بتوزيع اثنين من الأجزاء الصغيرة في أنابيب ملفوفة بورق الألمنيوم ، وقم بتخزينها عند سالب 20 درجة مئوية. اصنع محلول صبغة العمل يوميا في تخفيف واحد إلى 200 في السائل الدماغي النخاعي. ثم احتضن شريحة على ورق الترشيح المبلل بالسائل الدماغي النخاعي وصمة عاره ب 90 ميكرولتر من الصبغة لمدة 16 دقيقة.

بعد ذلك ، اشطفه وضعه في غرفة تسجيل الواجهة. ضع الأقطاب الكهربائية المحفزة والتسجيل كما هو موضح في المجال خارج الخلية. التسجيل المحتمل.

اضبط شدة تحفيز الضوء حتى تتمركز الاستجابة في منتصف الكاميرا. عادة ما يتم الحصول على صور النطاق بمعدل 500 إلى 1000 إطار في الثانية. قم بتشغيل الغالق لتحفيز الضوء قبل 200 مللي ثانية من التحفيز الكهربائي للسماح بتبييض الصورة السريع الأولي بالاستقرار.

الإيقاف المؤقت لمدة 10 ثوان بين التجارب. قم بتبديل تجارب الاستحواذ بين التحفيز الكهربائي والتحفيز غير الكهربائي للسماح بالطرح اللاحق لخلفية التحفيز غير الكهربائي. ثم سجل شدة ضوء الراحة قبل فتح الغالق.

يمكن تحليل كل تجربة VSD كفيلم لقراءات التألق. أي أن كل تجربة عبارة عن مصفوفة ثلاثية الأبعاد من البيانات بقيم في الأبعاد المكانية X و Y عبر الزمن. سجل من 10 إلى 12 تجربة VSD في كل حالة اختبار واحسب التغيير الفلوري الطبيعي للإضاءة المسبقة داخل البكسل وفقا للمخطوطة المصاحبة.

يوضح هذا الشكل مثالا على تسجيل F-E-P-S-P في المنطقة CA الأولى. الانحراف الهبوطي الأول هو القطعة الأثرية المحفزة متبوعة بكرة الألياف قبل المشبكية ، ثم F-E-P-S-P. فيما يلي منحنيات إخراج الإدخال التي تصور انخفاضا في صافي الفعالية المشبكية في CA واحد بعد إصابة قرع السوائل.

وإليك منحنيات إخراج الإدخال التي تصور زيادة في صافي فعالية التشابك في التلفيف المسنن بعد FPI. فيما يلي مثال على تيار مثير تلقائي لما بعد التشابك من خلية شبه معدنية واحدة CA معروضة. فيما يلي مثال على قطار جهد الفعل من خلية CA واحدة شبه معدنية وخلية عصبية سريعة الارتفاع بين الخلايا العصبية.

هذا هو خلية عصبية بين الخلايا العصبية المثبطة لوسيفر المملوءة باللون الأصفر بدون أشواك شجيرية ، وهنا خلية عصبية شبه معدنية مملوءة باللون الأصفر لوسيفر مع أشواك شجيرية. تظهر هذه الأشكال شريحة الحصين الإكليلية للفأر. تمثل وحدات البكسل الصفراء إلى الحمراء النشاط الاستثاري في المنطقة تقريبا بعد 14 مللي ثانية من التحفيز الجانبي لماكينة الحلاقة الواردة.

يشير اللون الأحمر إلى مزيد من إزالة الاستقطاب بينما يشير اللون الأصفر إلى إزالة الاستقطاب الأقل ولكن لا يزال كبيرا. تمثل وحدات البكسل الزرقاء مواقع النشاط المثبط في المنطقة حوالي 1 56 مللي ثانية بعد نفس التحفيز الجانبي لماكينة الحلاق الواردة بينما يشير اللون الأزرق الداكن إلى مزيد من فرط الاستقطاب. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية الجمع بين تقنيات التسجيل المتعددة خارج الجسم الحي لمعالجة حالة مرضية ذات صلة سريريا تنطوي على خلل وظيفي في الدائرة.