Name: Hippocampus Insulin Mikroinjektion und In vivo Microdialysis Während Spatial Memory Testing (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-11T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: Erfahren Sie die Methode der Hippocampus-Mikroinjektion und In-vivo-Mikrodialyse zur Untersuchung des hippocampalen Stoffwechsels während Gedächtnistests bei bewussten Tieren.

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<ol><li>McNay, E. C., Fries, T. M., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreases+in+rat+extracellular+hippocampal+glucose+concentration+associated+with+cognitive+demand+during+a+spatial+task%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Decreases in rat extracellular hippocampal glucose concentration associated with cognitive demand during a spatial task.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97 (6), 2881(2000).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+differences+in+hippocampal+extracellular+fluid+glucose+concentration+during+behavioral+testing+and+following+systemic+glucose+administration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A.+Biol.+Sci.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Age-related differences in hippocampal extracellular fluid glucose concentration during behavioral testing and following systemic glucose administration.</a> J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 56 (2), 66(2001).</li>
<li>McNay, E. C., McCarty, R. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+brain+glucose+concentration+during+behavioral+testing%3A+dissociations+between+brain+areas+and+between+brain+and+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in brain glucose concentration during behavioral testing: dissociations between brain areas and between brain and blood.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 75 (3), 325(2001).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+glucose+concentrations+in+the+rat+hippocampus+measured+by+zero-net-flux%3A+effects+of+microdialysis+flow+rate%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Extracellular glucose concentrations in the rat hippocampus measured by zero-net-flux: effects of microdialysis flow rate.</a> 72 (2), 785(1999).</li>
<li>McNay, E. C., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+recurrent+hypoglycemia+on+spatial+cognition+and+cognitive+metabolism+in+normal+and+diabetic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Effect of recurrent hypoglycemia on spatial cognition and cognitive metabolism in normal and diabetic rats.</a> Diabetes. 53 (2), 418(2004).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>McNay, E. C., McCarty, R. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+brain+glucose+concentration+during+behavioral+testing%3A+dissociations+between+brain+areas+and+between+brain+and+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in brain glucose concentration during behavioral testing: dissociations between brain areas and between brain and blood.</a> Neurobiology of Learning & Memory. 75 (3), 325(2001).</li>
<li>McNay, E. C., Williamson, A., McCrimmon, R. J., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+and+neural+hippocampal+effects+of+long-term+moderate+recurrent+hypoglycemia%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Cognitive and neural hippocampal effects of long-term moderate recurrent hypoglycemia.</a> Diabetes. 55 (4), 1088(2006).</li>
<li>McNay, E. C., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+artificial+cerebro-spinal+fluid+%28aCSF%29+to+artificial+extracellular+fluid+%28aECF%29%3A+microdialysis+perfusate+composition+effects+on+in+vivo+brain+ECF+glucose+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">From artificial cerebro-spinal fluid (aCSF) to artificial extracellular fluid (aECF): microdialysis perfusate composition effects on in vivo brain ECF glucose measurements.</a> Journal of Neuroscience Methods. 132 (1), 35(2004).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>Benveniste, H., Drejer, J., Schousboe, A., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+cerebral+glucose+phosphorylation+and+blood+flow+after+insertion+of+a+microdialysis+fiber+through+the+dorsal+hippocampus+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Regional cerebral glucose phosphorylation and blood flow after insertion of a microdialysis fiber through the dorsal hippocampus in the rat.</a> Journal of Neurochemistry. 49 (3), 729(1987).</li>
<li>Benveniste, H., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+reactions+to+implantation+of+a+microdialysis+tube+in+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Cellular reactions to implantation of a microdialysis tube in the rat hippocampus.</a> Acta Neuropathologica. 74 (3), 234(1987).</li>
<li>McNay, E. C., Fries, T. M., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreases+in+rat+extracellular+hippocampal+glucose+concentration+associated+with+cognitive+demand+during+a+spatial+task%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Decreases in rat extracellular hippocampal glucose concentration associated with cognitive demand during a spatial task.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (6), 2881(2000).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiol. Learn Mem. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>Lonnroth, P., Jansson, P. -A., Smith, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microdialysis+method+allowing+characterization+of+intercellular+water+space+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">A microdialysis method allowing characterization of intercellular water space in humans.</a> American Journal of Physiology. 1987, E228(1987).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+glucose+concentrations+in+the+rat+hippocampus+measured+by+zero-net-flux%3A+effects+of+microdialysis+flow+rate%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Extracellular glucose concentrations in the rat hippocampus measured by zero-net-flux: effects of microdialysis flow rate.</a> 72 (2), 785(1999).</li>
<li>Lalonde, R. obert <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiological+basis+of+spontaneous+alternation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+%26+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The neurobiological basis of spontaneous alternation.</a> Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 26 (1), 91(2002).</li>
<li>Richman, C., Dember, W., Kim, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+alternation+behavior+in+animals%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Psychology%22%5BJournal%5D)">Spontaneous alternation behavior in animals: A review.</a> Current Psychology. 5 (4), 358(1986).</li>
<li>McNay, E. C., Canal, C. E., Sherwin, R. S., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+memory+with+septal+injections+of+morphine+and+glucose%3A+effects+on+extracellular+glucose+levels+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Modulation of memory with septal injections of morphine and glucose: effects on extracellular glucose levels in the hippocampus.</a> Physiol. Behav. 87 (2), 298(2006).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+modulation+across+neural+systems%3A+intra-amygdala+glucose+reverses+deficits+caused+by+intraseptal+morphine+on+a+spatial+task+but+not+on+an+aversive+task%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Memory modulation across neural systems: intra-amygdala glucose reverses deficits caused by intraseptal morphine on a spatial task but not on an aversive task.</a> Journal of Neuroscience. 18 (10), 3853(1998).</li>
<li>Rex, A., Bert, B., Fink, H., Voigt, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulus-dependent+changes+of+extracellular+glucose+in+the+rat+hippocampus+determined+by+in+vivo+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Stimulus-dependent changes of extracellular glucose in the rat hippocampus determined by in vivo microdialysis.</a> Physiol. Behav. 98 (4), 467(2009).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Alle Lösungen in Mikrodialyse verwendet sollte sofort filtriert werden vor der Verwendung mit einem 0,2 um Filter. Nach dem Einführen der Sonde in die Führungskanüle, beobachten zu bestätigen, dass Strömung ungehindert und Probensammelvorrichtung auftritt. Wenn der Durchfluss stoppt nach dem Einsetzen ist die wahrscheinlichste Ursache Beschädigung der Sonde Membran durch unzureichende Pflege beim Einsetzen verursacht, und ein frischer Sonde muss ersetzt werden. Wie oben erwähnt, ein wichtige...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> Die Mehrheit der Reagenzien sind Standard Laborreinheit und kann von einem Anbieter der Wahl erhalten werden. In ähnlicher Weise können Geräte wie Spritzenpumpen und Schläuche von einem von mehreren Herstellern verwendet werden. Bestimmte Elemente welche hier für die Details sind wichtig sind: </td></tr><tr><td> CMA 12 Mikrodialysesonden </td><td> CMA / Microdialysis </td><td> CMA-12-XXX </td><td> Diese sind in verschiedenen Membran Längen und Abschaltungen, die durch spezifische Codes in der angegebenen &#39;XXX. &quot; </td></tr><tr><td> Humaninsulin (Humulin) </td><td> Eli Lilly </td><td> N / a </td><td></td></tr><tr><td> Flüssige Schwenk </td><td> Instech </td><td> 375/D/22QM </td><td> Diese spezifische Drehgelenk hat sehr niedrige Drehmoment und Innenvolumen sowie einen nonreactive Quarz Futter. </td></tr></tbody></table>

hippocampus insulin mikroinjektion und<em&gt; in vivo</em&gt; microdialysis während spatial memory testing

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Glukosestoffwechsel ist ein nützlicher Marker für die lokale neuronale Aktivität, die die Grundlage von Methoden wie 2-Desoxyglucose und funktionelle Kernspintomographie. Allerdings solcher Methoden in Tiermodellen erfordert die Verwendung Anästhesie und damit sowohl verändert das Gehirn Zustand und verhindert Verhaltensmaßnahmen. Ein alternatives Verfahren ist die Verwendung von in vivo-Mikrodialyse zur kontinuierlichen Messung des Gehirns extrazellulären Flüssigkeit Konzentrationen von Glukose, Laktat, und verwandte Metaboliten an wachen, ungehemmte Tiere. Diese Technik ist besonders nützlich, wenn mit Aufgaben entworfen, um auf spezifische Hirnregionen und / oder akute pharmakologische Manipulation verlassen kombiniert, zum Beispiel, zeigen Hippocampus Messungen während einer räumlichen Arbeitsgedächtnis Aufgabe (spontane Wechsel) ein erfrischendes Bad im extrazellulären Glukose und Lactatanstiegs, die sind suggestive der verstärkten Glykolyse 1,2 und intrahippocampal Verabreichung von Insulin sowohl verbessert das Gedächtnis und erhöht Hippocampus Glykollyse 3. Substanzen wie Insulin kann der Hippocampus über den gleichen Mikrodialysesonde verwendet, um Metaboliten zu messen geliefert werden. Die Verwendung von spontanen Wechsels als Maß der Hippokampus-Funktion ausgelegt ist, jede von confound belastenden Motivatoren (zB Fußschock), Ruhigstellen oder Belohnungen (zB Nahrungsmittel), die alle beide Aufgabenleistung und Metabolismus verändern kann zu vermeiden; diese Aufgabe stellt auch eine Messung der motorischen Aktivität, die Steuerung ermöglicht für unspezifische Effekte der Behandlung. Zusammen ermöglichen diese Verfahren die direkte Messung der neurochemischen und metabolische Variablen Regelverhalten.

Ratten sollte rasch erholen sich von der Operation und wachsam sein, beweglich und aktiv innerhalb von 30 min nach Beendigung der Narkose. Die Auswirkungen der Kanülenkappe sollte minimal sein, wenn die Operation durchgeführt wird sauber und minimalen Dentalzement verwendet wird. Wenn Anzeichen einer Infektion während der postoperativen Überwachung aufgefallen ist, oder die Ratte ist in keiner Weise zeigt Anzeichen von Leiden oder Beschwerden, sofort beenden das Experiment, das sollte extrem selten. Bei der Handhabung v...

Modulation der hippocampally-abhängige räumliche Arbeitsgedächtnis durch direkte intrahippocampal Mikroinjektion, begleitet und gefolgt von<em&gt; In vivo</em&gt; Mikrodialyse für Metaboliten in der bewussten, sich verhaltenden Tier.

Hippocampus Insulin Mikroinjektion und<em&gt; In vivo</em&gt; Microdialysis Während Spatial Memory Testing

Der Glukosestoffwechsel ist ein nützlicher Marker für die lokale neuronale Aktivität und bildet die Grundlage für Methoden wie die 2-Desoxyglukose und die funktionelle Magnetresonanztomographie ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, den Stoffwechsel des Hippocampus während eines Verhaltensversuchs zu messen. Dies wird erreicht, indem ein gut abgerichtetes Tier chirurgisch mit einer Mikrodialysingleitkanüle präpariert wird. Am Tag der Untersuchung wird eine Mikrodialysisonde in die Kanüle eingeführt und der PERFUSE-eight-Fluss bestätigt.Anschließend wird der Sondensonde das Equilibrieren ermöglicht, während sich das Tier in einer Kontrollkammer befindet. Letztendlich kommen geeignete analytische Methoden zum Einsatz, beispielsweise eine Glucose-Oxidase-, NADP-, N-A-D-P-H-Reaktion und eine fluometrische Analyse. Wenn die Glucosemessung verwendet wird, um den Stoffwechsel- und/oder neurochemischen Freisetzungsgrad während der Testphase zu zeigen, ist einer der schwierigsten Aspekte dieser Technik die sorgfältige Handhabung der Mikrodialyseschläuche, da die Tiere diese oft durchbeißen oder die Leitungen verwickeln, falls nicht sorgfältig vorgegangen wird.Das erste Mal, als ich während eines Verhaltensversuchs eine hippocampale Mikrodialyse anwandte, war während meiner Doktorandenzeit. Wir wollten überprüfen, ob die bestehenden Modelle zur Glukoseversorgung ta

hippocampal-insulin-microinjection-vivo-microdialysis-during-spatial

Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Quelle: Provenzano, G., et al. Immunhistochemische Visualisierung der Neuronenaktivität im Hippocampus nach räumlichem Lernen in einem Mausmodell für neurologische Entwicklungsstörungen. J. Vis. Exp. (2015)Dieses Video demonstriert die immunhistochemische Bildgebung zur Visualisierung der neuronalen Aktivierung des Hippocampus. Gefärbte Hirnschnitte zeigen unter einem Hellfeldmikroskop dunklere Regionen, was auf aktivierte Neuronen hinweist.

Bildgebung der neuronalen Aktivierung im Hippocampus in Gehirnschnitten von Mäusen

MicroRNAs haben eine bedeutende Rolle in der Struktur des Gehirns und Funktion. Hier beschreiben wir eine Methode, um durchzusetzen Hippocampus miRNA-Überexpression mit stereotaktische Injektion eines gentechnisch miRNA-Expression lentivirus. Dieser Ansatz kann als eine relativ schnelle Weg zu der Beurteilung...

Stereotaktische Injektion von microRNA-exprimierenden Lentiviren der Maus Hippocampus CA1 Region und Beurteilung der Behavioral Outcome

Das Ziel dieses Protokolls ist es, die räumliche Wahrnehmung bei Nagetieren zu untersuchen. Das Doppel-H-Wasserlabyrinth ist ein neuartiger Test, der besonders nützlich ist, um die verschiedenen Komponenten des Lernens, der Konsolidierung und des Gedächtnisses sowie das Zusammenspiel der Gedächtnissysteme aufzuklären.

Die Doppel-H Maze: A Robust Verhaltenstest für Lernen und Gedächtnis in Nagetiere

Wir beschreiben ein Immunhistochemie Protokoll, um das Profil Hippocampus-Neuronen Aktivierung nach Exposition gegenüber einer räumlichen Lernaufgabe in einem Maus-Modell gekennzeichnet durch kognitive Defizite der Neuroentwicklungs Ursprung zu studieren. Dieses Protokoll kann sowohl genetische oder pharmakologische Mausmodellen, gekennzeichnet durch kognitive Defizite angewendet werden.

Immunhistochemische Visualisierung von Hippocampus-Aktivität nach Spatial Learning in einem Mausmodell für neurologische Entwicklungsstörungen

Während die Multiphotonen-Bildgebung nur in begrenzten Tiefen von der Gewebeoberfläche aus effektiv ist, ist es möglich, eine Bildgebung mit einer Auflösung von 3 μm in jeder Tiefe über pCLE zu erreichen. In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll zur Durchführung von pCLE-Bildgebung zur Messung der mikrovaskulären Dynamik im Hippocampus von iktalen und Wildtyp-Mäusen vor.

In vivo fasergekoppelte präklinische konfokale Laser-Scanning-Endomikroskopie (pCLE) von Hippocampus-Kapillaren bei wachen Mäusen

Diese Methode beschreibt eine chronische Zubereitung, die den optischen Zugang zum Hippocampus lebender Mäuse ermöglicht. Dieses Präparat kann verwendet werden, um längsinale optische Bildgebung der neuronalen strukturellen Plastizität und aktivitätsbeschworenen zellulären Plastizität über einen Zeitraum von mehreren Wochen durchzuführen.

Längs-Zwei-Photon-Bildgebung des Dorsal Hippocampal CA1 in lebenden Mäusen

Dieser Artikel stellt experimentelle Verfahren zur Beurteilung von Gedächtnisstörungen bei pilocarpine-induzierten epileptischen Mäusen vor. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um die pathophysiologischen Mechanismen der Epilepsie-assoziierten kognitiven Abnahme zu studieren, die eine der häufigsten Komorbiditäten bei Epilepsie ist.

Beurteilung der Gedächtnisfunktion bei Pilocarpin-induzierten epileptischen Mäusen

Das hier vorgestellte Protokoll liefert Informationen zur simultanen Elektroenzephalografie (EEG) und Verhaltensbeurteilung in Echtzeit. Wir haben alle Schritte, die mit diesem Protokoll verbunden sind, als attraktive Lösung für Forscher in vielen Bereichen der Neurowissenschaften diskutiert, insbesondere in Lern- und Gedächtnisbereichen.

Simultane Überwachung der drahtlosen Elektrophysiologie und des Gedächtnisverhaltenstests als Werkzeug zur Untersuchung der Neurogenese des Hippocampus

Dieser Artikel zielt darauf ab, ein systematisches Protokoll zu beschreiben, um horizontale Hippocampus-Gehirnscheiben bei Mäusen zu erhalten. Das Ziel dieser Methode ist es, die Integrität von Hippocampus-Faserwegen zu erhalten, wie dem Perforantenweg und dem moosigen Fasertrakt, um dentate Gyrus-bezogene neurologische Prozesse zu bewerten.

Horizontale Hippocampal Scheiben der Maus Gehirn

Dieser Artikel zeigt die Vorbereitung eines maßgeschneiderten Bildgebungsfensters, ergänzt mit Infusionskanüle und deren Implantation in die CA1-Region des Hippocampus bei Mäusen.

Kraniotomie-Verfahren zur Visualisierung neuronaler Aktivitäten im Hippocampus von sich benehmenden Mäusen

Diese Arbeit beschreibt eine Methode zur chronischen in vivo Beobachtung der ruhenden Mikroglia im Hippocampus CA1 der Maus mittels präzise kontrollierter Chirurgie und Zwei-Photonen-Mikroskopie.

Im lebenden Organismus Chronische Zwei-Photonen-Bildgebung von Mikroglia im Hippocampus der Maus

Erfahren Sie die Methode der Hippocampus-Mikroinjektion und In-vivo-Mikrodialyse zur Untersuchung des hippocampalen Stoffwechsels während Gedächtnistests bei bewussten Tieren.

Hippocampus Insulin Mikroinjektion und

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