Name: Einfrieren menschlicher ES-Zellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-10-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Lernen Sie das effektive Einfrieren von menschlichen embryonalen Stammzellen (HuES) mit Kryoprotektiva und kontrollierter Kühlrate. Diese Methode sichert hohe Lebensfähigkeit und Differenzierungspotenzial für die regenerative Medizin.

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<ol><li> Eine gesunde, exponentiell wachsenden Kultur wird mit PBS gewaschen, um restliches Medien, die sonst stillen konnte die Trypsin-Reaktion zu entfernen. </li><li> Erwärmt 0,05% Trypsin-EDTA zugegeben, um die Zellen bedecken, und die Platte für bis zu 5 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Während dieser Zeit-Zellen können Rundungsdifferenzen beobachtet werden, und Kolonien Abheben der Plattenoberfläche. </li><li> Sanfte wiederholtes Pipettieren löscht Zellen und Kolonien von der Plattenoberfläche. </li><li> Trypsiniert Zellen sind in einem Standard-konische Röhre mit vorgewärmten hES-Zell-Medien, um die verbleibenden Trypsin stillen gelegt und dann gesponnen. </li><li> Die Zellen sind Nährmedien bei einer Konzentration von etwa einer Million Zellen resuspendiert in einem mL der Medien. </li><li> Nachdem die Zellen ausreichend resuspendiert, ist eiskalt Freezing Media bei gleichem Volumen aufgenommen. </li><li> Zellsuspensionen werden gründlich gemischt aliquotiert in Einfrierröhrchen, und langsam eingefroren, um-80C über 24 Stunden. </li><li> Gefrorene Zellen können dann in die Dampfphase von flüssigem Stickstoff für die langfristige Lagerung verschoben oder bleiben bei -80 für ca. 6 Monate. </li></ol><p> Hinweis: wie eine gefrorene Aliquot bei einer Konzentration von 106 Zellen / ml ist ausreichend, um eine Kultur auf einer 10cm Platte wieder zu beleben. </p>

<ol>
	<li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts.">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li></ol>

<p> Die Technik, die wir beschreiben, für das Einfrieren FARBEN Zelllinien funktioniert gut für die effiziente Speicherung und Wiederbelebung FARBEN Zell-Linien und auch keine Säugetierzellen von Interesse. Freezing ein kleiner Teil der Zellen bei jeder Passage ist ein wichtiger Aspekt bei der Arbeit mit hES-Zelllinien, als Karyotyp Anomalien auftreten können und abnormale Zellen kann schnell über die Linie. So ist mit gefrorenen spaltet bei jedem Durchgang neben großen Banken an bestimmten Stellen sehr wünschenswert. </p>

<table><tbody><tr><td>HuES-Medium</td><td>Medium</td><td></td><td></td><td>Geben Sie insgesamt 651,5 mL hinzu: 500 mL KO-DMEM + 6,5 mL PenStrep + 6,5 mL L-Glut + 6,5 mL NEAA 6,5 mL + Beta-Mercapto&amp;#8211;ethanol 0,6 &amp;micro;L (14,3 M-Stammlösung) + 65 mL Serumersatz + 65 mL Plasmanate + 0,65 mL bFGF2 (~10 ng/mL endgültig)</td></tr><tr><td>Tiefkühlmittel</td><td>Medium</td><td></td><td></td><td>80 % FCS (fetales Kälberserum) + 20 % DMSO (Dimethylsulfoxid). Bei 4 &amp;deg;C gelagert.</td></tr></tbody></table>

einfrieren menschlicher es-zellen

Freezing Human ES Cells

<p class="jove_content">Hier zeigen wir, wie unser Labor FARBEN humanen embryonalen Stammzelllinien gefriert. Eine gesunde, exponentiell wachsenden Kultur wird mit PBS gewaschen, um restliches Medien, die sonst stillen konnte die Trypsin-Reaktion zu entfernen. Erwärmt 0,05% Trypsin-EDTA zugegeben, um die Zellen bedecken, und die Platte für bis zu 5 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Während dieser Zeit-Zellen können Rundungsdifferenzen beobachtet werden, und Kolonien Abheben der Plattenoberfläche. Sanfte wiederholtes Pipettieren löscht Zellen und Kolonien von der Plattenoberfläche. Trypsiniert Zellen sind in einem Standard-konische Röhre mit vorgewärmten hES-Zell-Medien, um die verbleibenden Trypsin stillen gelegt und dann gesponnen. Die Zellen sind Nährmedien bei einer Konzentration von etwa einer Million Zellen resuspendiert in einem mL der Medien, eine Konzentration, so dass eine gefrorene Aliquot ausreichen, um eine Kultur, die auf eine 10 cm Platte wieder auferstehen wird. Nachdem die Zellen ausreichend resuspendiert, ist eiskalt Einfrieren Medien bei gleichem Volumen aufgenommen. Zellsuspensionen werden gründlich gemischt aliquotiert in Einfrierröhrchen, und langsam eingefroren, um-80C über 24 Stunden. Gefrorene Zellen können dann in die Dampfphase von flüssigem Stickstoff für die langfristige Lagerung verschoben oder bleiben bei -80 für ca. 6 Monate.</p>

<p class="jove_content">Hier zeigen wir, wie unser Labor FARBEN humanen embryonalen Stammzelllinien gefriert.</p>

Einfrieren menschlicher ES-Zellen

Hier demonstrieren wir, wie unser Labor HuES-menschliche embryonale Stammzelllinien einfriert. Eine gesunde, exponentiell expandierende Kultur wird mit PBS gewaschen, um ... zu entfernen.

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Forschung

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Biologie

Hier zeigen wir, wie unser Labor eine FARBEN menschliche embryonale Stammzell-Linie Kultur beginnt aus einem gefrorenen Lager.

Humane ES-Zellen: Starting Kultur aus eingefrorenen Zellen

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Einfrieren, Auftauen und Packaging Cells für Verkehr

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Einfrieren und Auftauen humanen embryonalen Stammzellen

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Einrichtung von Genom bearbeitet humanen pluripotenten Stammzelllinien: Von Targeting zur Isolation

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Lernen Sie das effektive Einfrieren von menschlichen embryonalen Stammzellen (HuES) mit Kryoprotektiva und kontrollierter Kühlrate. Diese Methode sichert hohe Lebensfähigkeit und Differenzierungspotenzial für die regenerative Medizin.

Einfrieren menschlicher ES-Zellen

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