Name: Extrazellulär identifizieren Motor Neurons für einen Muscle Motor Pool in Aplysia californica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-25T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 37 s
Description: Lernen Sie die extrazelluläre Identifizierung von Motorneuronen in Aplysia californica für Neurophysiologie und Motorik. Diese Methode ermöglicht die Überwachung neuronaler Aktivität während Fütterungsmustern.

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Diese Arbeit wurde von NIH NS047073 und NSF DMS1010434 unterstützt.

<ol><li>McCrohan, C. R., Benjamin, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+relationships+of+the+cerebral+giant+cells+with+motoneurones+in+the+feeding+system+of+Lymnaea+stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Synaptic relationships of the cerebral giant cells with motoneurones in the feeding system of Lymnaea stagnalis.</a> J. Exp. Biol. 85, 169-186 (1980).</li>
<li>Benjamin, P. R., Rose, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+generation+of+bursting+in+the+feeding+system+of+the+snail%2C+Lymnaea+stagnalis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Central generation of bursting in the feeding system of the snail, Lymnaea stagnalis.</a> J. Exp. Biol. 80, 93-118 (1979).</li>
<li>Peters, M., Altrup, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+organization+in+pharynx+of+Helix+pomatia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Motor organization in pharynx of Helix pomatia.</a> J. Neurophysiol. 52 (3), 389-409 (1984).</li>
<li>Church, P. J., Cohen, K. P., Scott, M. L., Kirk, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptidergic+motoneurons+in+the+buccal+ganglia+of+Aplysia+californica%3A+immunocytochemical%2C+morphological%2C+and+physiological+characterizations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Peptidergic motoneurons in the buccal ganglia of Aplysia californica: immunocytochemical, morphological, and physiological characterizations.</a> J. Comp. Physiol. A. 168 (3), 323-336 (1991).</li>
<li>Lu, H., Chestek, C. A., Shaw, K. M., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+extracellular+stimulation+of+individual+neurons+in+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neural.+Eng%22%5BJournal%5D)">Selective extracellular stimulation of individual neurons in ganglia.</a> J. Neural. Eng. 5 (3), 287-309 (2008).</li>
<li>Church, P. J., Lloyd, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+diverse+neuropeptide+cotransmitters+by+identified+motor+neurons+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Expression of diverse neuropeptide cotransmitters by identified motor neurons in Aplysia.</a> J. Neurosci. 11 (3), 618-625 (1991).</li>
<li>Church, P. J., Lloyd, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+multiple+identified+motor+neurons+recorded+intracellularly+during+evoked+feedinglike+motor+programs+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Activity of multiple identified motor neurons recorded intracellularly during evoked feedinglike motor programs in Aplysia.</a> J. Neurophys. 72 (4), 1794-1809 (1994).</li>
<li>McManus, J. M., Lu, H., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+In+Vitro+Preparation+for+Eliciting+and+Recording+Feeding+Motor+Programs+with+Physiological+Movements+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An In Vitro Preparation for Eliciting and Recording Feeding Motor Programs with Physiological Movements in Aplysia californica.</a> J. Vis. Exp. (70), e4320(2012).</li>
<li>Cullins, M. J., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrode+fabrication+and+implantation+in+Aplysia+californica+for+multi-channel+neural+and+muscular+recordings+in+intact%2C+freely+behaving+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Electrode fabrication and implantation in Aplysia californica for multi-channel neural and muscular recordings in intact, freely behaving animals.</a> J Vis. Exp. (40), e1791(2010).</li>
<li>Zhurov, Y., Weiss, K. R., Brezina, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tight+or+loose+coupling+between+components+of+the+feeding+neuromusculature+of+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Tight or loose coupling between components of the feeding neuromusculature of Aplysia.</a> J. Neurophysiol. 94 (1), 531-549 (2005).</li>
<li>Hurwitz, I., Goldstein, R. S., Susswein, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartmentalization+of+pattern-initiation+and+motor+functions+in+the+B31+and+B32+neurons+of+the+buccal+ganglia+of+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Compartmentalization of pattern-initiation and motor functions in the B31 and B32 neurons of the buccal ganglia of Aplysia californica.</a> J. Neurophysiol. 71 (4), 1514-1527 (1994).</li>
<li>Morton, D. W., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+timing+of+activity+in+motor+neurons+that+produce+radula+movements+distinguishes+ingestion+from+rejection+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">The timing of activity in motor neurons that produce radula movements distinguishes ingestion from rejection in Aplysia.</a> J. Comp. Physiol. A. 173 (5), 519-536 (1993).</li>
<li>Iles, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+synaptic+activation+of+the+fast+coxal+depressor+motoneurone+of+the+cockroach.+Periplaneta+americana%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Structure and synaptic activation of the fast coxal depressor motoneurone of the cockroach. Periplaneta americana.</a> J. Exp. Biol. 56 (3), 647-656 (1972).</li>
<li>Westerfield, M., McMurray, J. V., Eisen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identified+motoneurons+and+their+innervation+of+axial+muscles+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Identified motoneurons and their innervation of axial muscles in the zebrafish.</a> J. Neurosci. 6 (8), 2267-2277 (1986).</li>
<li>Susswein, A. J., Rosen, S. C., Gapon, S., Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+buccal+motor+programs+elicited+by+a+cholinergic+agonist+applied+to+the+cerebral+ganglion+of+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Characterization of buccal motor programs elicited by a cholinergic agonist applied to the cerebral ganglion of Aplysia californica.</a> J. Comp. Physiol. A. 179 (4), 509-524 (1996).</li>
<li>Hurwitz, I., Neustadter, D., Morton, D. W., Chiel, H. J., Susswein, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+patterns+of+the+B31%2FB32+pattern+initiators+innervating+the+I2+muscle+of+the+buccal+mass+during+normal+feeding+movements+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophys%22%5BJournal%5D)">Activity patterns of the B31/B32 pattern initiators innervating the I2 muscle of the buccal mass during normal feeding movements in Aplysia californica.</a> J. Neurophys. 75 (4), 1309-1326 (1996).</li>
<li>Morton, D. W., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+buccal+nerve+activity+that+distinguishes+ingestion+from+rejection+can+be+used+to+predict+behavioral+transitions+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">In vivo buccal nerve activity that distinguishes ingestion from rejection can be used to predict behavioral transitions in Aplysia.</a> J. Comp. Physiol. A. 172 (1), 17-32 (1993).</li>
<li>Warman, E. N., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+chronic+single-unit+extracellular+recording+in+freely+behaving+animals+using+pipette+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A new technique for chronic single-unit extracellular recording in freely behaving animals using pipette electrodes.</a> J. Neurosci. Methods. 57 (2), 161-169 (1995).</li>
<li>Nargeot, R. N., Baxter, D. A., Byrne, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contingent-dependent+enhancement+of+rhythmic+motor+patterns%3A+an+in+vitro+analog+of+operant+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Contingent-dependent enhancement of rhythmic motor patterns: an in vitro analog of operant conditioning.</a> J. Neurosci. 17 (21), 8093-8105 (1997).</li>
<li>Kandel, E. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKandel%2C+ER+%22Behavioral+biology+of+Aplysia%22">Behavioral biology of Aplysia</a>. , Freeman. San Francisco. (1979).</li>
<li>Scott, M. L., Govind, C. K., Kirk, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+organization+of+the+buccal+system+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular organization of the buccal system in Aplysia californica.</a> J. Comp. Neurol. 312 (2), 207-222 (1991).</li>
<li>Rosen, S. C., Miller, M. W., Cropper, E. C., Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outputs+of+radula+mechanoafferent+neurons+in+Aplysia+are+modulated+by+motor+neurons%2C+interneurons%2C+and+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Outputs of radula mechanoafferent neurons in Aplysia are modulated by motor neurons, interneurons, and sensory neurons.</a> J. Neurophysiol. 83 (3), 1621-1636 (2000).</li>
<li>Rosen, S. C., Miller, M. W., Evans, C. G., Cropper, E. C., Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+synaptic+connections+between+peptidergic+radula+mechanoafferent+neurons+and+neurons+in+the+feeding+system+of+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Diverse synaptic connections between peptidergic radula mechanoafferent neurons and neurons in the feeding system of Aplysia.</a> J. Neurophysiol. 83 (3), 1605-1620 (2000).</li>
<li>Weiss, K. R., Chiel, H. J., Koch, U., Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+an+identified+histaminergic+neuron%2C+and+its+possible+role+in+arousal+of+feeding+behavior+in+semi-intact+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Activity of an identified histaminergic neuron, and its possible role in arousal of feeding behavior in semi-intact Aplysia.</a> J. Neurosci. 6 (8), 2403-2415 (1986).</li>
<li>Rosen, S. C., Teyke, T., Miller, M. W., Weiss, K. R., Kupfermann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+cerebral-to-buccal+interneurons+implicated+in+the+control+of+motor+programs+associated+with+feeding+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of cerebral-to-buccal interneurons implicated in the control of motor programs associated with feeding in Aplysia.</a> J. Neurosci. 11 (11), 3630-3655 (1991).</li>
<li>Jing, J., Weiss, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+variants+of+a+motor+act+in+a+modular+and+hierarchical+motor+network%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of variants of a motor act in a modular and hierarchical motor network.</a> Curr. Biol. 15 (19), 1712-1721 (2005).</li>
<li>Azizi, F., Lu, H., Chiel, H. J., Mastrangelo, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+neurostimulation+using+pulse+code+modulation+%28PCM%29+microfluidic+chips%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Chemical neurostimulation using pulse code modulation (PCM) microfluidic chips.</a> J. Neurosci. Methods. 192 (2), 193-198 (2010).</li>
<li>Zhurov, Y., Proekt, A., Weiss, K. R., Brezina, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+of+internal+state+are+expressed+in+coherent+shifts+of+neuromuscular+activity+in+Aplysia+feeding+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Changes of internal state are expressed in coherent shifts of neuromuscular activity in Aplysia feeding behavior.</a> J. Neurosci. 25 (5), 1268-1280 (2005).</li>
<li>Baker, B. J., Kosmidis, E. K., Vucinic, D., Falk, C. X., Cohen, L. B., Djurisic, M., Zecevic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+brain+activity+with+voltage-+and+calcium-sensitive+dyes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Imaging brain activity with voltage- and calcium-sensitive dyes.</a> Cell. Mol. Neurobiol. 25 (2), 245-282 (2005).</li>
<li>Fejtl, M., Stett, A., Nisch, W., Boven, K. -H., Möller, A. On Micro-Electrode Array Revival. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFejtl%2C+M+%22Advances+in+Network+Electrophysiology+Using+Multi-Electrode+Arrays%22">Advances in Network Electrophysiology Using Multi-Electrode Arrays</a>. Baudry, M., Taketani, M. , Springer Press. New York. 24-37 (2006).</li>
</ol>

Wir haben nichts zu offenbaren.

Bei Tieren mit großen identifizierten Neuronen, wie Weichtiere (z. B. Lymnaea, Helix und Aplysia), Analyse von Fuhrparks erfolgt typischerweise mittels intrazellulärer Aufnahme 1,2,3,4. In diesem Protokoll beschreiben wir ein Verfahren zum eindeutigen Identifizieren der Motoneuronen für einen Fuhrpark mit einer extrazellulären Technik. Wir verwendeten die Kraftmessungen als Illustration dieses Prozesses. Man könnte auch EMG, um Muskeln Innervationen messen. Kurz gesagt, dies zu tun, muss das...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name </td><td> Firma </td><td> Catalog Number </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Kochsalz </td><td> Fisher Scientific </td><td> S671 </td><td> Biologische, Certified </td></tr><tr><td> Kaliumchlorid </td><td> Fisher Scientific </td><td> P217 </td><td> Certified ACS </td></tr><tr><td> Magnesiumchloridhexahydrat </td><td> Acros Organics </td><td> 19753 </td><td> 99% </td></tr><tr><td> Magnesiumsulfatheptahydrat </td><td> Fisher Scientific </td><td> M63 </td><td> Certified ACS </td></tr><tr><td> Calciumchloriddihydrat </td><td> Fisher Scientifc </td><td> C79 </td><td> Certified ACS </td></tr><tr><td> Glucose (Traubenzucker) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G7528 </td><td> BioXtra </td></tr><tr><td> MOPS Buffer </td><td> Acros Organics </td><td> 17263 </td><td> 99% </td></tr><tr><td> Carbachol </td><td> Acros Organics </td><td> 10824 </td><td> 99% </td></tr><tr><td> Natriumhydroxid </td><td> Fisher Scientific </td><td> SS255 </td><td> Bescheinigt </td></tr><tr><td> Salzsäure </td><td> Fisher Scientific </td><td> SA49 </td><td> Bescheinigt </td></tr><tr><td> Mit einem Lauf Kapillargläser </td><td> AM-Systems </td><td> 6150 </td><td></td></tr><tr><td> Flaming-Brown Feinpipettenziehvorrichtung Modell P-80/PC </td><td> Sutter Instruments </td><td></td><td> Filament verwendet: FT345B </td></tr><tr><td> Enamel Edelstahlseil </td><td> California Fine Wire </td><td></td><td> 0.001D, Beschichtung h </td></tr><tr><td> Haushalt Silikon II Kleber </td><td> GE </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Duro Quick-Gel Superkleber </td&gt; <td> Henkel Corp. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AM Systems Modell 1700 Verstärker </td><td> AM-Systems </td><td></td><td> Filtereinstellungen: 10-500 Hz für die I2 Nerv / Muskel; 300-500 Hz für alle anderen Nerven </td></tr><tr><td> PulseMaster Multi-Channel Stimulator </td><td> World Precision Instruments </td><td> A300 </td><td></td></tr><tr><td> Stimulus Isolator </td><td> World Precision Instruments </td><td> A360 </td><td></td></tr><tr><td> AxoGraph X </td><td> AxoGraph Scientific </td><td></td><td> Software für Aufnahmen </td></tr><tr><td> Gold Connector Pins </td><td> Bulgin </td><td> SA3148 / 1 </td><td></td></tr><tr><td> Gold Connector Sockets </td><td> Bulgin </td><td> SA3149 / 1 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard 184 Siliconelastomer </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 100 x 15 mm Kristallisieren Dish </td><td> Pyrex </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Hochvakuumfett </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pipettenspitzen </td><td> Fisher Scientific </td><td> 21-375D </td><td></td></tr><tr><td> Minutien Pins </td><td> Fine Science Tools </td><td> 26002-10 </td><td></td></tr><tr><td> Modelliermassen </td><td> Sargent Art </td><td> 22-4400 </td><td></td></tr><tr><td> Whisper Air Pump </td><td> Tetra </td><td> 77849 </td><td></td></tr><tr><td> Aquarium Tubing </td><td> Eheim </td><td> 7783 </td><td> 12/16 mm </td></tr><tr><td> Elite Ausströmer </td><td> Hagen </td><td> A962 </td><td></td></tr><tr><td> Vannas Federschere </td><td> Fine Science Tools </td><td> 15000-08 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont Nr. 5 feinen Pinzette </td><td> Feine Science-Tools </td><td> 11254-20 </td><td></td></tr><tr><td> Kimwipes </td><td> Kimberly-Clark </td><td> 34155 </td><td></td></tr></tbody></table>

extrazellulär identifizieren motor neurons für einen muscle motor pool in<em&gt; aplysia californica</em

Extracellularly Identifying Motor Neurons for a Muscle Motor Pool in Aplysia californica

Bei Tieren mit großen identifizierten Neuronen (zB Weichtiere), Analyse von Fuhrparks erfolgt über intrazelluläre Techniken 1,2,3,4. Vor kurzem haben wir eine Technik, um extrazellulär stimulieren und aufzeichnen einzelnen Neuronen in Aplysia californica 5. Wir beschreiben nun ein Protokoll für die Verwendung dieser Technik zur eindeutigen Identifizierung und Charakterisierung Motoneuronen in einem Fuhrpark. Diese Technik hat extrazellulären Vorteile. Erstens extrazellulären Elektroden stimulieren kann und aufzuzeichnen Neuronen durch die Hülle 5, so dass es nicht entfernt werden müssen. So wird Neuronen gesünder in der extrazellulären Experimenten als im intrazellulären diejenigen. Zweitens, wenn Ganglien gedreht werden durch geeignete Pinning der Hülle können extrazelluläre Elektroden zuzugreifen Neuronen auf beiden Seiten des Ganglion, das es einfacher und effizienter zu mehreren Neuronen in der gleichen Präparation zu identifizieren. Drittens extrazellulärenlar Elektroden brauchen nicht in Zellen eindringen, und somit leicht hin und her bewegt werden zwischen Neuronen, was zu weniger Schäden an ihnen. Dies ist besonders nützlich, wenn man mehrere Neuronen während wiederholenden Bewegungsmuster, die nur für Minuten andauern kann aufzuzeichnen versucht. Viertens extrazellulären Elektroden sind flexibler als intrazelluläre Wieder während Muskelbewegungen. Intrazelluläre Elektroden können herausziehen und beschädigen Neuronen während Muskelkontraktionen. Da im Gegensatz dazu extrazellulären Elektroden sanft auf der Hülle oberhalb Neuronen gedrückt werden, sie in der Regel oberhalb derselben Neuron bleiben während Muskelkontraktionen, und können daher in mehreren intakten Zubereitungen verwendet werden. Zur eindeutigen Identifizierung Motoneuronen für einen Motor Pool (insbesondere die I1/I3 Muskel in Aplysia) mit extrazellulären Elektroden, kann man Funktionen, die keine intrazelluläre Messungen Kriterien: soma Größe und Lage, axonale Projektion und Muskelinnervation 4, 6,7. Für den bestimmten Motor Pool verwendet, um die Technik zu veranschaulichen, wiesen wir von bukkal Nerven 2 und 3, die Axon-Vorsprünge zu messen, und die gemessene Kontraktionskräfte des I1/I3 Muskel um das Muster der Muskelinnervation für die einzelnen Motoneuronen zu bestimmen. Wir zeigen den kompletten Prozess der ersten Identifizierung von Motoneuronen mit Muskelinnervation, dann Charakterisierung ihrer Zeit während Bewegungsmuster, die Schaffung eines vereinfachten diagnostisches Verfahren zur schnellen Identifizierung. Die vereinfachte und schnelle diagnostische Verfahren überlegen ist für mehr intakt Zubereitungen, z. B. in der suspendierten bukkalen Masseaufbereitung 8 oder 9 in vivo. Dieses Verfahren kann auch in anderen Motor-Pools aufgebracht werden, 10,11,12 Aplysia oder in anderen tierischen Systemen 2,3,13,14.

Abbildungen 4 und 5 zeigen typische Ergebnisse verwendet, um zwei I1/I3 Motoneuronen zu identifizieren. Abbildung 4 zeigt die soma-Aufnahmen eines großen Motoneuronen, B3, während egestive-like und ingestive-ähnliche Muster (4C, 4D). Die Eins-zu-eins entsprechende Spikes auf der soma-Kanal und der ipsilateralen BN2 Kanal (4E) zeigen, dass die Spezifität der B3 soma Aufnahme während Mustern wurde beibehalten. B3 feuert während der Mitte ...

Bei Tieren mit großen identifizierten Neuronen (<em&gt; ZB</em&gt; Weichtiere), wird die Analyse des Fuhrparks erfolgt über intrazelluläre Techniken<sup&gt; 1,2,3,4</sup&gt;. Vor kurzem haben wir eine Technik, um extrazellulär stimulieren und aufzeichnen einzelnen Neuronen in<em&gt; Aplysia californica</em<sup&gt; 5</sup&gt;. Wir beschreiben nun ein Protokoll für die Verwendung dieser Technik zur eindeutigen Identifizierung und Charakterisierung Motoneuronen in einem Fuhrpark.

Extrazellulär identifizieren Motor Neurons für einen Muscle Motor Pool in<em&gt; Aplysia californica</em

In animals with large  identified neurons (e.g. mollusks), analysis of motor pools is done using  intracellular techniques1,2,3,4. Recently,  we developed ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, einzelne Motoneurone für einen Motoneuronenpool extrazellulär zu identifizieren und sie während motorischer Muster zu überwachen und zu steuern. Dies wird erreicht, indem zunächst die präparierte Buccalmasse von Plegia mit an wichtige Nerven angebrachten Hookelektroden in eine spezielle Ableitungsschale platziert wird und anschließend die Buccalganglien sowie das zerebrale Ganglion für die extrazelluläre Stimulation und Ableitung vorbereitet werden. Der zweite Schritt besteht darin, Saugelektroden an die wichtigen Nerven und Muskeln der Buccalmasse anzubringen, Krafttransducer am Zielmuskel zu befestigen und extrazelluläre Glaselektroden auf die Hülle der Buccalganglien zu platzieren.Als Nächstes lokalisieren Sie die Zielmotoneurone mit extrazellulären Glaselektroden. Der letzte Schritt besteht darin, die Zielmotoneurone extrazellulär zu stimulieren und aufzuzeichnen, während gleichzeitig die Muskelkontraktionskräfte gemessen werden. Letztendlich dient die extrazelluläre Stimulations- und Ableitungstechnik dazu, die Identifizierung einzelner Motoneurone und ihrer neuralen Aktivität während verschiedener, fütterungsähnlicher mo

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Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Vorbereitung der Aplysia Sensory-Motor neuronalen Zellkulturen

Die Experimente zeigen, eine einfache Möglichkeit für Studenten, um Erfahrungen bei der Prüfung Muskulatur, synaptische Antworten, die Auswirkungen der Ionengradienten und Durchlässigkeit auf Membranpotentiale zu gewinnen. Auch ist ein sinnlich-ZNS-motor-Muskel-Schaltung vorgestellt, um ein Mittel, um Wirkungen von Verbindungen auf einem neuronalen Schaltkreis-Test zeigen.

Membranpotentiale, Synaptic Responses, neuronalen, Neuromodulation und Muscle Histologie Mit dem Crayfish: Schülerlabor Übungen

Dieses neue Verfahren erlaubt die gleichzeitige intrazelluläre Aufnahme eines einzigen erwachsenen Maus Motoneuron und die Messung der Kraft, die von seiner Muskelfasern hergestellt. Die kombinierte Untersuchung der elektrischen und mechanischen Eigenschaften der Motoreinheiten in normalen und genetisch modifizierten Tieren ist ein Durchbruch für das Studium des neuromuskulären Systems.

Gleichzeitige Intrazelluläre Aufnahme eines Lumbar Motoneuron und dem Force durch seine Motor Unit in der adulten Maus Produziert<em&gt; In vivo</em

Meeresschnecke Aplysia californica wurde weithin als neurobiologisches Modell für die Studien auf zellulärer und molekularer Basis des Verhaltens verwendet. Hier wird eine Methodik zur Erforschung des Nervensystems von Aplysia für die elektrophysiologischen und molekularen Analysen einzelner Neuronen identifizierter neuronischer Schaltkreise beschrieben.

Aplysia Ganglien-Vorbereitung für elektrophysiologische und molekulare Analysen einzelner Neuronen

Hier beschreiben wir die Dissektion des Bauchnervenstrangs der Krebse. Wir demonstrieren auch eine elektrophysiologische Technik zur Aufzeichnung der fiktiven Fortbewegung von Swimmeret-Motoneuronen.

Die swimmeret System der Crayfish: Ein praktischer Leitfaden für die Dissektion der Nervenstrang und extrazellulären Recordings der Motor Pattern

Die Wirksamkeit der intramuskulären Aufnahme und des retrograden Transports von Molekülen zu den entsprechenden Motoneuronen hängt von der Lage der Injektionsstellen in Bezug auf die motorischen Endplatten (MEPs) ab. Hier beschreiben wir, wie MEPs auf der Skelettmuskulatur lokalisiert werden können, um den retrograden Transport von Tracern in die Motoneuronen zu optimieren.

Intramuskuläre Injektionen Entlang der motorischen Endplatten: eine minimal-invasive Ansatz zur Shuttle Tracers Direkt in Motoneuronen

Diese Arbeit beschreibt eine Standard-Immunhistochemie-Methode zur Visualisierung von Motor-Neuronen-Projektionen von späten Stadium-16 Drosophila Melanogaster Embryonen . Die gefilterte Präparation von festen Embryonen, die mit FasII-Antikörper gefärbt wurden, bietet ein leistungsfähiges Werkzeug, um die Gene zu charakterisieren, die für die motorische Axon-Pathfindung und die Zielerkennung während der neuronalen Entwicklung erforderlich sind.

Visualisierung des axonalen Projektionsmusters der embryonalen motorischen Neuronen in<em&gt; Drosophila</em

Hier stellen wir ein Protokoll zur minimalinvasiven chirurgischen Läsion von Muskeln vor, die dem Fütterungsapparat der Meeresmolluske Aplysia californica innewohnen, um die Rolle dieser Muskeln während des Fütterungsverhaltens zu verstehen.

Eine minimalinvasive Läsionstechnik für Muskeln, die dem Odontophore von Aplysia californica innewohnen

Wir beschreiben eine Methode zur retrograden Rückverfolgung der embryonalen motorischen Neuronen Von Drosophila mit lipophilen Fluoreszenzfarbstoffen.

Retrograde Tracing von Drosophila Embryonal Motor Neuronen mit lipophilen fluoreszierenden Farbstoffen

Dieses Protokoll stellt eine Methode zur Abbildung der neuronalen Populationsaktivität mit Einzelzellauflösung in nicht-transgenen wirbellosen Spezies unter Verwendung von absorptionsspannungsempfindlichen Farbstoffen und einem Photodiodenarray dar. Dieser Ansatz ermöglicht einen schnellen Workflow, bei dem Bildgebung und Analyse im Laufe eines einzigen Tages verfolgt werden können.

Photodiodenbasierte optische Bildgebung zur Aufzeichnung der Netzwerkdynamik mit Einzelneuronauflösung bei nicht-transgenen Wirbellosen

Wir beschreiben eine Methode zur Erzeugung menschlicher motorischer Einheiten in kommerziell erhältlichen mikrofluidischen Geräten durch Kokulturierung von humanen induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Motoneuronen mit humanen primären Mesoangioblasten-abgeleiteten Myotuben, was zur Bildung funktionell aktiver neuromuskulärer Verbindungen führt.

Erzeugung humanmotorischer Einheiten mit funktionellen neuromuskulären Verbindungen in mikrofluidischen Geräten

Lernen Sie die extrazelluläre Identifizierung von Motorneuronen in Aplysia californica für Neurophysiologie und Motorik. Diese Methode ermöglicht die Überwachung neuronaler Aktivität während Fütterungsmustern.

Extrazellulär identifizieren Motor Neurons für einen Muscle Motor Pool in

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