Mitochondrien-assoziierte ER Membranen (MAMs) und Glycosphingolipid Angereichert Mikrodomänen (GEM): Isolation aus Mäusehirn

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die Mitochondrien, die endoplasmatische retikuläre Membran, die Mikrodomänen oder MAMs aus dem Gehirn der Maus zu isolieren. Aufgereinigte MAMs werden weiter extrahiert, um die mit Glykofingerlipiden angereicherten Mikrodomänenfraktionen oder Edelsteine zu erhalten. Dazu wird zunächst das Gehirn der Maus präpariert, das dann mit einem Tanzhomogenisator in einem speziellen Puffer homogenisiert wird. Das resultierende Homogenat wird bei niedriger Geschwindigkeit zentrifugiert, um Zellkerne, Unlizellen und Tagesablagerungen zu entfernen.

Der zweite Schritt besteht darin, eine rohe mitochondriale Fraktion herzustellen. Durch weitere Zentrifugation des Supinats wird das resultierende Pellet resuspendiert und unter Verwendung eines diskontinuierlichen Saccharosegradienten weiter getrennt. Als nächstes wird die rohe mitochondriale Fraktion auf einen peralen Gradienten aufgebracht.