1: Eine Einführung in Mikropipetten

Die Mikropipette ist ein wichtiges Instrument zur präzisen Messung kleiner Flüssigkeitsmengen. Dieses Forschungsinstrument, das in zahlreichen Forschungslabors auf der ganzen Welt zu finden ist, gibt es in verschiedenen Formen und Größen. Trotz der Unterschiede zwischen den Mikropipetten funktionieren alle auf ähnliche Weise, um Mikrolitermengen an Flüssigkeit genau zu messen. Mikropipetten werden mit Einwegspitzen verwendet, die wie Mikropipetten in verschiedenen Größen erhältlich sind.

Alle Mikropipetten verfügen über die gleichen Grundkomponenten für das Ansaugen und Dispensieren von Flüssigkeiten. Der Kolben befindet sich an der Oberseite des Pipettengeräts und dient zum Aufsaugen oder Ausstoßen von Flüssigkeit, je nachdem, in welche Position sie gedrückt oder losgelassen wird.

Der Lautstärkeregler wird verwendet, um das Volumen der zu übertragenden Flüssigkeit zu ändern.

Die Anzeige der Volumenanzeige wird von oben nach unten ausgelesen. Je nach verwendetem Mikropipetten spiegeln die Zahlen unterschiedliche Größenordnungen in Ihrer Volumenmessung wider. Hier sehen Sie ein Maß für 370 Mikroliter.

Einwegspitzen werden auf die Unterseite der Mikropipettur geladen.

Der Spitzenabwurfknopf und der Spitzenabwurfschaft arbeiten zusammen, um Pipettenspitzen auszuwerfen, wenn sie entsorgt werden müssen.

Die Familie der Mikropipetten umfasst mehrere Mitglieder unterschiedlicher Größe, die einen präzisen Volumenbereich übertragen.

Hier sehen Sie, wie sich die Familie entsprechend den Lautstärkebereichen anordnet, die sie jeweils übertragen können. Zum Beispiel liefert Papa P-1000 zwischen 200 und 1000 μl, während das Baby im Bunde, der P-2, zwischen 0,2 und 2 μl überträgt.

Jedes der Familienmitglieder ist an einer Zahl am oberen Rand des Kolbens und an der Farbe zu erkennen, die deutlich macht, wer sie sind und wie viel Volumen sie bequem übertragen können.

Gelegentlich tauchen andere Verwandte von Mikropipetten für ein Experiment auf, wie Onkel P5000, Tante P100 und Cousin P10. Zusammen kann diese erweiterte Familie beim Bewegen von Flüssigkeiten mit einem Volumen von 0,2 bis 5000 μl helfen.

Um einen genauen und präzisen Transfer von Flüssigkeit zu gewährleisten, sind Pipettenspitzen in verschiedenen Größen, oft, aber nicht immer, zur leichteren Erkennung farbcodiert und werden für verschiedene Größen von Pipettieren verwendet. In Bezug auf das übertragene Volumen übertragen weiße Mikropipettenspitzen in der Regel zwischen 0,5 und 2,5 μl, gelbe Spitzen 1 bis 200 μl und blaue Spitzen 200 bis 1000 μl.

Wenn Sie eine Mikropipette verwenden, wählen Sie zunächst das Instrument mit dem geeigneten Bereich für das Volumen, das Sie übertragen möchten. Die richtige Wahl des Pipettierers kann den Unterschied zwischen einem erfolgreichen oder fehlgeschlagenen Experiment ausmachen.

Stellen Sie zunächst den Drehregler auf die gewünschte Lautstärke ein. Um das Aspirationsvolumen zu erhöhen, drehen Sie den Drehregler gegen den Uhrzeigersinn, überschreiten Sie das gewünschte Volumen um eine Dritteldrehung und verringern Sie es dann langsam bis zur Endmarkierung. Um die Lautstärke zu verringern, drehen Sie das Einstellrad im Uhrzeigersinn.

Beachten Sie, dass diese Ziffern in der Volumenanzeige je nach Mikropipettor unterschiedliche Größenordnungen haben. Auf der linken Seite sehen wir zum Beispiel den P1000 mit dem Wert 370 μl. Es gibt eine Null an der Tausenderstelle, eine 3 an der Hunderterstelle und eine 7 an der Zehnerstelle. Auf der rechten Seite befindet sich der P200, der 159 μl mit einer 1 im Hunderterfeld, einer 5 im Zehnerfeld und einer 9 im Einerfeld anzeigt.

Sobald die Lautstärke eingestellt ist, wählen Sie einen Tipp aus.

Halten Sie nun die Mikropipette in einer aufrechten Position, mit dem schmalen Teil des Körpers in der Handfläche und dem Überhang über Ihrem Zeigefinger,

Drücken Sie den Kolben mit leichtem Druck etwa auf halbem Weg zum ersten Anschlag oder wenn Sie beginnen, mehr Widerstand zu spüren.

Dadurch wird Luft aus der Pipettenspitze verdrängt.

Halten Sie den Kolben gedrückt und tauchen Sie die Spitze zwischen 1 und 3 mm in die Probe ein. Lassen Sie den Kolben sanft wieder in die Ruheposition zurück, warten Sie eine Sekunde, bis die Flüssigkeit in die Spitze gelangt ist, und entfernen Sie dann die Pipette aus der Probe.

Wenn der Kolben wieder in die Ruheposition gelassen wird, wird die Flüssigkeit in das Vakuum gezogen, das durch die verdrängte Luft erzeugt wird.

Überprüfen Sie die Spitze, um sicherzustellen, dass die gewünschte Flüssigkeitsmenge aufgezogen wurde und dass die Spitze keine Luftblasen enthält.

Halten Sie die Mikropipette beim Umfüllen der Probe in das gewünschte Gefäß auf einer Temperatur von 10-45? Winkel gegen die Innenwand des Aufnahmegefäßes. So verhindern Sie, dass sich Blasen an der Spitze bilden. Um die Flüssigkeit auszustoßen, drücken Sie den Kolben leicht bis zum 1. Anschlag, um mit der Abgabe der Flüssigkeit zu beginnen, und drücken Sie dann mit stärkerem Widerstand den Kolben bis zum zweiten Anschlag, um "auszublasen". das letzte bisschen Flüssigkeit aus der Spitze.

Entfernen Sie die Spitze vollständig aus dem Gefäß und lassen Sie den Kolben wieder in die Ruheposition zurück.

Verwenden Sie nun die Auswurftaste, um die Pipettenspitze vorsichtig in den entsprechenden Behälter zu entsorgen. Achte darauf, was du tust, denn ausgeworfene Spitzen können als Projektile wirken und möglicherweise deine Laborkollegen verletzen.

Damit die Mikropipetten weiterhin gut funktionieren und der interne Volumeneinstellmechanismus erhalten bleibt, drehen Sie den Lautstärkeregler niemals über oder unter den spezifischen Bereich des Mikropipettors. Es kann sein, dass das Instrument kaputt geht.

Um Kreuzkontaminationen zwischen den Proben zu vermeiden, wechseln Sie die Spitze nach jedem Volumentransfer.

Bei der Arbeit mit Mikropipetten ist die Konsistenz des Bedieners wichtig. Ein gleichmäßiger Kolbendruck führt zu optimalen experimentellen Ergebnissen. Denken Sie schließlich daran, dass Sie Ihre Mikropipetten immer in einer aufrechten Position aufbewahren sollten, wenn sie nicht verwendet werden, um Ihre Mikropipetten in einem leistungsstarken Zustand zu halten.

Nachdem wir nun die grundlegende Funktionsweise und die Prinzipien der Verwendung von Mikropipetten behandelt haben, wollen wir einige gängige Laboranwendungen für Mikrovolumentransfers sowie Variationen dieses Instruments besprechen.

Mikropipetten werden häufig zum Transfer von Zellsuspensionen auf Kulturplatten für eine Vielzahl von Experimenten verwendet.

In Verbindung mit speziellen Spitzen können Mikropipetten verwendet werden, um Proben für Analysetechniken wie die DNA-Gelelektrophorese sorgfältig zu laden.

Mikropipetten können auch verwendet werden, um Gewebe mechanisch aufzubrechen, um Einzelzellsuspensionen zu erhalten.

Varianten des Mikropipetters, die auf Basis der Luftverdrängung arbeiten, sind ebenfalls im Labor zu finden.

Repeater-Pipetten ermöglichen das serielle Pipettieren kleinerer Volumina nach einer anfänglichen Aspiration eines größeren Lösungsvolumens. Die Pipetten sind sehr nützlich, um das gleiche Probenvolumen auf eine große Anzahl von Behältern zu übertragen.

Mehrkanalpipetten werden in der Regel zum Übertragen von Volumina im Volumenbereich von 20 bis 200 μl verwendet und sind hilfreich für das Laden ganzer Reihen von 96-Well-Platten.

Sie haben gerade JoVE Einführung in Mikropipetten gesehen.

In diesem Video haben wir uns angesehen: was ein Mikropipetter ist und wie er funktioniert, wie man eine flüssige Volumenprobe aspiriert und dispensiert, einige Sicherheitsvorkehrungen und verschiedene Anwendungen Ihrer Mikropipetten. Vielen Dank fürs Zuschauen und denken Sie daran, die richtige Pipette für Ihre Experimente auszuwählen.