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DOI: 10.3791/50647-v
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Wir skizzieren Methoden für die effiziente und schnelle Isolierung / Kultur lebensfähiger Mikroglia aus dem Neugeborenen Hirnrinde und erwachsenen Rückenmark. Die Präparation und Beschichtung der kortikalen Mikroglia kann innerhalb von 90 Minuten erreicht werden, mit der anschließenden Mikroglia Ernte stattfindet ~ 10 Tage nach der ersten Sektion.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, primäre Mikrogliazellen aus der Rinde einer neonatalen Maus oder dem Rückenmark einer erwachsenen Maus zu isolieren. Dies wird erreicht, indem zuerst das Gehirn eines postnatalen Tages null oder zwei Mäusewelpen oder eines erwachsenen Rückenmarks entfernt wird. Als nächstes werden entweder die Kortikale aus dem Gewebe des Neugeborenen entnommen oder das Rückenmarksgewebe verdaut.
Die kortikalen und spinalen Gewebezellen werden dann bis zur experimentellen Verwendung kultiviert. Letztendlich können die entnommenen neonatalen und adulten Mikrogliazellen mittels Immunfluoreszenzmikroskopie analysiert werden. Der Hauptvorteil unseres Mikrogliakulturprotokolls für Neugeborene gegenüber bestehenden Methoden, wie z. B. dem Schütteln von Mikrogliazellen für gemischte kortikale Platten, besteht darin, dass die Zellen leicht in einen Ruhezustand zurückkehren und ein genaueres Bild des Verhaltens von Mikrogliazellen in vivo liefern können.
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