Name: Eine Methode, um die Auswirkungen der Chemisch-induzierte Ovarialinsuffizienz on Exercise Cardiac Kapazität und Anpassung in Mäusen untersucht (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 26 s
Description: Lernen Sie eine Methode zur Untersuchung von Übungskapazität und kardialer Anpassung bei chemisch induzierter Ovarialinsuffizienz in Mäusen. Diese Technik nutzt VCD und vaginale Zytologie.

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Diese Arbeit wurde vom NIH (HL 098256), von einem National-und Mentored Forschung Wissenschaft Development Award (K01 AR052840) und Unabhängige Scientist Award (K02 HL105799) von der NIH JP Konhilas und der interdisziplinären Ausbildung Grant Herz-Kreislauf Wissenschaften (HL007249 ausgezeichnet unterstützt ). Unterstützung wurde von der Sarver Herzzentrum an der Universität von Arizona und von Steven M. Gootter-Stiftung.

Alle Versuche, Wohnen und Pflege von Tieren wurde mit Protokollen, die Richtlinien eingehalten werden und der Institutional Animal Care und Verwenden Ausschuss an der Universität von Arizona zugelassen und bis 2011 NIH-Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Labortieren. 1. Die Behandlung mit 4-Vinylcyclohexendiepoxid <ol><li> VCD Dosierungsprotokoll: In einer chemischen Abzugshaube, hinzufügen, 0,587 ml VCD auf einen sauberen Kolben, bringen das endgültige Volumen auf 10 ml mit Sesamöl, und dann mischen durch Invertieren vorsichtig, Abdeckung und Abdichtung mit Parafilm. Die Lösung wird in einem Dosierungsfläschchen, mit Parafilm verschließen und bei 4 ° C für bis zu 7 Tage. Seien Sie sicher, dass alle Reagenzien sind steril. <ol><li> Verwenden Sie Sesamöl als Fahrzeugsteuerung als VCD wird in Sesamöl gelöst. Speicher VCD (MW = 140.2 g / mol, Dichte = 1,09 g / ml) bei -20 ° C. </li><li> VCD Injektionsprotokoll: Im Alter von 2 Monaten, wiegen und zu verwalten tägliche intraperitoneale Injektionen von Raumtemperaturratur VCD in einer Dosis von 160 mg / kg an 20 aufeinanderfolgenden Tagen. Injizieren Kontrollmäusen in einer ähnlichen Weise mit der Trägerlösung, Sesamöl, in einem Volumen von 2,5 ml / kg. Hinweis: Während der Einspritzdauer, versuchen, die Injektionsstellen abzuwechseln, um die Chancen der lokalen Infektion. Verwenden Sie die folgende Gleichung, um die für die Injektion benötigte Volumen berechnen: Körpergewicht (g) x kg / 1000 gx 2,5 ml / kg = Volumen (ml) der Lösung, was zu etwa 50 ml / Injektion mit einer 27 G-Nadel zu injizieren. Aufgrund der Größe der Nadel Lokalanästhetika sind nicht erforderlich. </li><li> Sexualzyklus Überwachung: Nach der Einspritzdauer abgeschlossen ist, überwachen die Ovarialzyklen täglich durch den Erhalt Vaginalabstrichen. Rain Mäuse mit dem Rücken scruff Methode. Legen Sie eine Pipette mit 0,2 ml steriler Kochsalzlösung in die Scheidenöffnung bis zu einer Tiefe von 0,5 cm. Man reibt Salzlösung (3x) und 1 Tropfen auf eine leere Folie. Unmittelbar bewerten Proben mikroskopisch mit Hilfe eines Standard-Licht Microscope bei 100-facher Größe. Hinweis:. Vaginal Zytologie ist entschlossen, Verlust von Regeln sicherzustellen und damit zu validieren Ovarialinsuffizienz 2A zeigt typische Vaginalzytologie in verschiedenen Phasen des Sexualzyklus bei Mäusen, nämlich Proestrus, Brunst, Metöstrus, Diöstrus 17-19. Während Proestrus, kernhaltigen Zellen sind Epithelzellen (2A, Pfeile zeigen kernhaltigen Zellen); während der Brunst werden die Zellen überwiegend verhornten Plattenepithel Epithelzellen; Metöstrus wird durch eine Mischung von Zelltypen ist, mit einer Vorherrschaft von Leukozyten; Diöstrus wird von Leukozyten dominiert. Einstellung der Brennebene erforderlich sein, um Zellen und Zellkerne in der Probe zu visualisieren. Wie in 2B dargestellt ist, ist eine typische Maus Östruszyklus 4-5 Tage. Die Mäuse werden nach 15 aufeinander folgenden Tagen in persistent diestrus als azyklisch. Ovarialzyklen während der gesamten Dauer der Studie pro Kontinuierliche Überwachungiod Mangel an Ovarialzyklen in VCD behandelten Mäusen bestätigen. </li></ol></li></ol> 2. Freiwillige Cage-Rad-Übung Inzuchtstamm C57BL / 6 und B6C3F1 weibliche Mäuse im Alter von 7 Monaten, sind die freiwillige Radfahr Käfig ausgesetzt. Haus Tiere einzeln in einem Käfig (47 cm x 26 cm x 14,5 cm) mit unbelasteten Zugang zu einem Käfig Rad für 28 Tage. <ol><li> Geräte-Setup: Der Käfig Rad Vorrichtung besteht aus einem 11,5 cm Scheibendurchmesser mit einer 5,0 cm breite Lauffläche mit einem digitalen Zähler, der durch magnetische Radumdrehung aktiviert ausgestattet. Vor jedem Rad Lauftest, kalibrieren Sie den Käfig Rad nach den Richtlinien des Herstellers. Den Innendurchmesser des Laufrades, berechnen Sie den Umfang und geben Sie diesen Wert in die digitale Zähler als Radgröße. <ol><li> Befestigen Sie den Computer Teil des digitalen Magnet Zähler auf dem Rad Stand mit Klebeband. </li><li> Befestigen Sie den Computer-PortIon der digitalen Magnet Zähler auf dem Rad Stand mit Klebeband. </li><li> Schließen Sie das freie Magnet der digitalen Magnet gegen die zentrale Bar auf der gleichen Seite wie der Magnet mit dem Computer verkabelt, wieder Taping ausreichend, um den Magneten vom Kauen Schäden zu schützen. Die Magnete sollten so positioniert werden, dass jede Drehung des Rades durch den Computer ohne Störung oder Widerstand zur Raddrehung vervollständigen aufgezeichnet. Hinweis: Klebeband wurde erfolgreich verwendet, um die Komponenten des digitalen magnetischen entgegen der Laufrad befestigen. Taping sollte ausreichend sein, um den Magneten vollständig bedecken und Schäden durch Kauen durch das Tier zu verhindern. Der Magnet so nahe wie möglich an dem Rad ohne Behinderung seiner Bewegung positioniert werden. Jedoch sollte die Einrichtung täglich Fraß überwacht und bei Bedarf repariert werden. </li><li> Montieren Sie das Rad, um den Käfig, indem das Rad durch die obere Verdrahtung des Tierkäfig stehen. Sichern Sie die Schleifbock zu ter Käfig Verdrahtung mit Bindemittel Clips. Anmerkung: der Clip auf der Oberseite des Verdrahtungs vom Tier sein. Führen Sie das Computerbereich und keine zusätzlichen Kabel durch die Verdrahtung des Käfigs. Stellen Sie den Computer und das überschüssige Kabel außerhalb der Reichweite des Tieres. Dies kann, indem man eine mittelgroße Plastikschüssel wiegen auf der Verdrahtung des Käfigs, um den Computer und das überschüssige Kabel zu halten erreicht werden. </li></ol></li><li> Übung: Für einen bestimmten Wurf, nach dem Zufallsprinzip vergeben Mäuse entweder mit dem sitzenden Steuer-oder Trainingsprogramm. Geben Sie allen Tieren Wasser und Standard-Festnagetierfutter ad libitum. <ol><li> Manuell aufzeichnen Tageswerte für den Abstand ran (km / Tag) und die Gesamtzeit für das Ausführen (h / Tag), durch die magnetische Gegen gegeben. Jeden Tag für genaue und konsistente Werte während der 28 Tage Dauer der Ausübungsfrist Rekord Distanz und Zeit-Werte innerhalb der gleichen Stunde ein Zeitrahmen. Clear (Null) die magnetische Zähler nach jeden Tag der Aufnahme um genaue Messwerte für die Folgeten Tag. </li><li> Berechnen der Durchschnittswerte von Entfernung und Geschwindigkeit für jede Gruppe. Berechnen Geschwindigkeit basierend auf den gegebenen Werten von Entfernung und Zeit jeden Tag für jede Maus. Die Daten können für jeden gemessenen Parameter als tägliche oder wöchentliche Durchschnittswerte angezeigt werden. </li></ol></li><li> Tissue Ernte: Am Ende des jeweiligen Ausübungszeitraum, innerhalb von 30 Minuten der Entfernung aus Käfigen durch Genickbruch unter inhalativen Anästhesie ausgeübt einschläfern und sitzende Kontrolltieren. Wiegen Körpermasse und schnell Verbrauch Herz, Skelettmuskel, und der Eierstöcke. <ol><li> Zum Zeitpunkt der Ernte Gewebe, montieren und färben die Eierstöcke mit Hemotoxylin gesammelt und Eosin (H &amp;E; 2C). Unter Vergrößerung, zu zählen und zu klassifizieren Follikel als ursprüngliche, primäre, sekundäre oder Antrum für jeden VCD-behandelten und unbeTier 20. Ein Primordialfollikel enthält eine kleine primäre Oozyte, eine einzelne Schicht aus flachen oder Plattenepithelkarzinom Granulosazellen eng mit der Eizelle gegenüberliegt und eine basaleLamina. Eine primäre Follikel wird durch die Anwesenheit von einem oder mehreren quaderförmigen Granulosa-Zellen, die in einer einzigen Schicht um die Eizelle angeordnet sind, definiert. Eine sekundäre Follikel enthält Granulosazellen, die mehrere Schichten um die Eizelle, und eine Theca bilden. Ein antralen Follikel durch einen Hohlraum oder &quot;Antrum&quot; enthaltende Flüssigkeit ist. </li><li> Um das Herz herauszuschneiden, machen Sie eine mediale Inzision an der Bauchseite und visualisieren das Herz nach dem Öffnen der Membran. Schnell das Herz herauszuschneiden an der Basis und in kaltem Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung ausreichend Wash-out-Rest ventrikuläre Blut. Schneiden Sie die Herzen der überschüssiges Gewebe, wiegen das ganze Herz und Snap-in flüssigem Stickstoff einfrieren. </li><li> Mit einem modifizierten eiskalten Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS) Waschen Sie alle anderen herausgeschnitten Gewebe und Snap-in Isopentan Einfrieren in flüssigem Stickstoff gekühlt. </li></ol></li></ol> 3. Zwangslaufband Übung <ol><li> Beim Einsatz einer Übung gezwungen Paradigma to Messung der körperlichen Leistungsfähigkeit, verwenden Sie ein Laufband und setzen sich wie folgt: <ol><li> Legen Sie einen elektrischen Schlag Gitter an der Basis des Lauframpe. Dieser Schock erzeugt dient als Anregung für die Übung. Die Intensität und die Frequenz der elektrischen Impulse werden manuell durch den Benutzer gesteuert. Grids kann aktiviert oder individuell für jede Spur deaktiviert zu sein. Die Datenerhebung erfolgt manuell. </li><li> In regelmäßigen Abständen kalibrieren das Laufband nach den Richtlinien des Herstellers. <ol><li> Stellen Sie sicher, dass das Laufband Frontplatte des Reglers Knie auf &quot;STOP&quot;. </li><li> Platz Geschwindigkeitssensor am Laufband lane1 und sicher zu befestigen mit Schraubverschluss unten in Position. </li><li> Mit dem Rad auf der Vorderseite Laufband-Controller, passen Sie die Geschwindigkeit auf 88,7 m / min Sie dann die elektrische Reizfrequenz bis 2 Hz auf Laufband-Controller Frontplatte. </li><li> Drücken Sie die &quot;ODOMETER RESET&quot; drücken, um Kalibrierung zu initialisieren. <strong&gt; Hinweis: Sitzende oder Nichtausübung Kontrollgruppen müssen in der Versuchsplanung einbezogen werden. Die sitzende Gruppe ist das Alter für die Ausübung Gruppe abgestimmt. Wir haben vorher, dass die Gehäuse sitzende Mäuse einzeln in Käfigen gleicher Größe auf die Ausübung Mäuse keine Auswirkungen auf die Parameter von Interesse im Vergleich zu Mäusen, die mit Bewegungsmangel Geschwister untergebracht gezeigt. Daher wurden sitzende Mäuse mit Geschwistern im selben Raum wie die Ausübung Mäuse gehalten. </li></ol></li></ol></li><li> Akklimatisierung: Akklimatisieren Mäusen auf dem Laufband 3-7 Tage vor dem Experiment täglich. Um dies zu tun, statt Mäuse im Laufband mit der Band unbeweglich und Schocknetze aus, aber mit der Bandmotor auf (Rauschen). Verlassen Mäuse für mindestens 15 min ungestört. </li><li> Warm up: Aufwärmen Schritte wie in diesem Protokoll verwendet werden, sind wie folgt: <ol><li> Platzieren Sie jede Maus auf dem Laufband. Deaktivieren Sie den Schock Gitter und erhöhen Bandgeschwindigkeit bis 4 m / min für 15 min. </li><li> Aktivieren Sie den Schock Gitter und pflegen Bandgeschwindigkeit an4 m / min Bandgeschwindigkeit für weitere 10 min. </li></ol></li><li> Übung Trainingsprogramme <ol><li> Nach Warm-up, halten Schock Gitter auf und erhöhen die Bandgeschwindigkeit bis 5 m / min für 15 min. </li><li> Erhöhung der Bandgeschwindigkeit auf 15 m / min für weitere 15 min. </li><li> Nach Ausbildung, übertragen Mäuse zurück in ihre Käfige. Hinweis: In dieser Studie wurde die Bewegungstraining täglich für 1 Woche durchgeführt. </li><li> Akute Trainingsprogramm: Eine akute Trainingsprogramm wurde entwickelt, um die kurz-und langfristigen Auswirkungen von extremen Belastungs bestimmen. <ol><li> Nach Warm-up, erhöhen Bandgeschwindigkeit von 5 m / min bis 10, 15, 20, 25 und 30 m / min in 10-Minuten-Intervallen. Hinweis: Beenden Übung, wenn Mäuse sind nicht in der Lage zu laufen oder zeigen Anzeichen von Erschöpfung oder Stress weiter. In der vorliegenden Studie wurden die meisten Tiere bei 25 m / min gestoppt und kein Tier geleitet, die 30 m / min Stufe. </li><li> Testen Sie jede Maus drei Mal, so dass 2-3 Tage zwischen den Tests. Berechnen Durchschnittswerte über alle Exerpräzise Sitzungen für jede Maus. </li></ol></li><li> Trainingsprogramm für Ausdauer: Ein Ausdauertraining Protokoll wurde entwickelt, um Mäuse für eine längere Exposition gegenüber dem Laufband trainieren Reiz. Diese Art von Protokoll testet die Kapazität, um die langfristigen Auswirkungen von moderater Bewegung Stress zu tolerieren. <ol><li> Beginnen Sie mit der Bandgeschwindigkeit während der Aufwärmphase, 4 m / min dargestellt. </li><li> Schrittweise Erhöhung der Bandgeschwindigkeit von bis zu einer endgültigen 1m/min Geschwindigkeit von 20 m / min erreicht wird. Gesamtdauer eines typischen Studienprotokoll ist 50 min. </li><li> Nach dem Trainingsprogramm, Transfer Mäuse zurück in ihre Käfige. Hinweis: Laufen Mäuse bis zur Erschöpfung wird vermieden. Wenn zu irgendeinem Zeitpunkt während des Experiments eine Maus zeigt Anzeichen von Erschöpfung, deaktivieren Sie den Schock Netz und lassen Sie die Maus, um sich auszuruhen und zu erholen. </li></ol></li></ol></li></ol> 4. Daten und statistische Analyse <ol><li> Anwesend Ergebnisse als Mittelwert ± SEM und benutzen 2-Wege-ANOVA (Behandlungsgruppe und exercise als Hauptfaktoren), gefolgt von einem Student-Newman Keuls post-hoc-Test oder ein Student t-Test, um Unterschiede zwischen Mittelwerten zu vergleichen. </li><li> Bestimmen Sie die prozentuale Veränderung der Herzmasse mit Übung, indem die Masse jedes Tier ausgeübt auf die mittlere Herz Masse der sitzenden Gruppe. Der Unterschied in der Herzmasse wird dann als eine prozentuale Änderung von sitz Tiere für jeden entsprechenden Tier exprimiert. P-Werte &lt;0,05 werden als statistisch signifikant betrachtet. </li></ol>

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Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Sowohl Käfig Rad Bewegung und Laufband Übung Therapien haben in unseren früheren Studien 16,21,22 verwendet. Alle Tiere werden in speziellen Übungsräumen gehalten werden, um die Umwelt oder die menschliche Störungen zu minimieren. Jede Störung der Tiere biologischen Rhythmus kann erhebliche Auswirkungen auf Tiere Trainingsleistung. Daher sollten die gesamte Tierpflege, Leistungsüberwachung, Aufzeichnung und Bewegung Therapien innerhalb der gleichen Tageszeitrahmen durchgeführt werden. Die Ermittler sollten sich bemühen, zusätzliche Belastung für die Tiere durch Ausstellen Vorsichtsmaßnahmen wie Begrenzung der Dauer der Stressbelastung und gegebenenfalls für die Käfige zu vermeiden. Cage Rad Übung Bei der Vorbereitung der Käfig Rad Gerät, sollte das Rad leicht zugänglich sein für die Maus zu montieren und zu beenden. Es sollte minimal Betten auf dem Boden des Käfigs, Mäuse vor Verschachtelung um das Rad zu behindern und verhindern free-Rad-Bewegung. Der Magnetsensor auf dem feststehenden Teil des Rades und dem Magneten, um das freie Rad gesichert angeordnet, so dass jede Drehung des Rads zu zählen, wenn die Maus ausgeübt. Die Aufzeichnungseinrichtung zu dem Magnetsensor befestigt ist, sollte über dem Draht Deckel des Käfigs angeordnet sein, und alle freiliegenden Drähte entweder abgeklebt werden oder außerhalb der Reichweite aus den Mäusen gehalten, um eine Barriere gegen Fraßstellen zur Verfügung stellen müssen. Der Magnet und Magnetsensor wurden auch die entsprechenden Strukturen aufgezeichnet, um sowohl Schäden und ungewollte Bewegung zu verhindern. Bei der täglichen Datenerfassung, müssen alle Leitungen dicht mit Klebeband überprüft werden, um sicherzustellen, die Drähte intakt bleiben und sollte retaped wie nötig. Da es kann mehrere Tage für Mäuse an die neue Umgebung zu gewöhnen und beginnen, regelmäßig trainieren, sollten die Datenaufzeichnung zu jedem einzelnen Tier zugeschnitten werden. Obwohl Tiere neigen dazu, viele Stunden auf dem Rad zu verbringen, kommt der größte Teil der Lauf in der Nacht. Daher können einige Tiere hig zeigenh Leistungstätigkeit, auch wenn sie tagsüber ruhen, angezeigt. Darüber hinaus ist es nicht ungewöhnlich, dass einige Tiere begrenzt Käfig Radfahr aufweisen. Typischerweise Käfig Rad Aktivität, die auf durchschnittlich 1 km / Tag oder weniger beträgt ist das Ergebnis von zufälligen Käfig Aktivität und nicht mit einer erheblichen Lauf Reiz verbunden. Daher sollten die Tiere, deren Laufparameter 1 km / Tag oder 1 h / Tag oder weniger in der endgültigen Datenanalyse nonrunners ausgeschlossen. Je nach den speziellen Anforderungen von einer einzelnen Studie und Stämme von Mäusen beteiligt sind, kann die Länge der Bewegung geändert werden. Unsere frühere Studie zeigte, dass für beide Mäusestämme beteiligt, die durchschnittlichen Rad-Laufgeschwindigkeiten und die Dauer der Übung auf den Käfig Rad allmählich erhöht und über die Zeit bis zur 4. Woche Plateau. Cage Radfahr ist eine Art freiwillige Übung in Tiermodellen, die in der Regel als weniger stressig, die unter Bedingungen durchgeführt wird, übernommen. Unlike Laufband-Training, in dem bestimmte Parameter vorgegeben werden, die alle im Testkäfig ausgeführt ist freiwillig und leicht durch Umwelt-oder Verhaltens Hinweise betroffen. Daher werden die Vergleiche zwischen experimentellen Einstellungen typischerweise vermieden werden, wenn große Zahlen Versuchsgruppen eingesetzt werden. Weitere potentielle Forschungsbereiche, die von dieser Art von Übung Paradigma profitieren können, sind Studien, die Verhaltensreaktionen mit physiologischer Konsequenzen wie den kognitiven Neurowissenschaften zu integrieren. Für Studien mit den freiwilligen Käfig Rad Paradigma sind die wichtigsten Schritte Käfig einzurichten und Überwachung der Tätigkeiten ausüben. Laufband-Training Akklimatisierung Schritte sind notwendig, um Tiere für die Laufband-Protokoll vorzubereiten. Je nach dem spezifischen Zweck der einzelnen Studie kann die Dauer der Akklimatisierung variieren. In dieser Studie wurde ein Zeitraum von einer Woche gewählt, damit die Tiere acclimaß auf die Laufbandvorrichtung und Motorgeräusche in den Käfig, aufwärmen Zeiten sind ein wichtiger Schritt der Übung Trainingsplan. Ähnlich wie bei menschlichen Kollegen, muss die Mäuse sich, bevor man in irgendwelche intensive Übung Regime, um Verletzungen und möglichen Daten Artefakte zu vermeiden erwärmt werden. In dieser Studie haben wir begonnen, den Gürtel mit der niedrigsten Geschwindigkeit möglich (4 m / min) mit den Schocknetze ausgeschaltet für 15 min. Alle Mäuse beteiligt begann, auf und neben dem Riemen laufen. Die Stoß Gitter wurden dann eingeschaltet, und die Bandgeschwindigkeit auf 4 m / min gehalten. Um eine Überbeanspruchung der Mäuse zu vermeiden, setzen wir den Stromschlag an einer milden Ebene (1 Hz). Innerhalb von ein paar Tagen, alle Mäuse angepasst an das Laufband. Die Dauer der laufenden wie auch die Beschleunigung kann auch auf jedem Versuchsdesign angepasst werden. Eine empfohlene Startbeschleunigung beträgt 1 m / min. Die Laufbahnen der Mäuse Anzeichen von Erschöpfung muss sofort abgeschaltet werden. Typischerweise Anzeichen von Erschöpfung durch mi ausgestelltce auf dem Laufband sind wie folgt: <ol><li> Ständige Einwirkung des Schockgitter für&gt; 5-10 sec, </li><li> Verlust der Laufleistung, was zu Stoß Gitter Exposition&gt; 5x während einer einzigen Trainingsprogramm, und </li><li> Verlust der Laufleistung, was zu Stoß Gitter Exposition&gt; 2 Sek. mindestens 3x während einer einzigen Trainingsprogramm. </li></ol> Die oben genannten Werte sind in erster Linie als Richtlinien für einen bestimmten Versuch verwendet werden. Diese Parameter müssen für jede Übung Protokoll bestimmt werden, da es variiert von Mausstamm zu Mausstamm, Versuch zu Versuch und Ermittler Ermittler. Anders als Käfig Rad Bewegung, Laufband müssen Studien mehrmals wiederholt werden, um die Auswirkungen von Umwelt-und biologischen Faktoren auf die Laufleistung zu beseitigen. Es ist nicht ungewöhnlich, dass Schwankungen in der Laufleistung zwischen den Tests selbst für das gleiche Tier zu sehen. Da jeder Trainingsprogramm aussetzt läuft Mäusen zu einer stress, eine angemessene Warteintervall zwischen den Tests notwendig. Nach unserer Erfahrung 2-3 Tage Ruhezeit zwischen den einzelnen Test war ausreichend für Mäuse zu erholen. Wie menschliche Laufband wird die Geschwindigkeit für Ausdauertraining am besten durch die Herzfrequenz oder Sauerstoffsättigung des Blutes, ein technisch schwieriges Unterfangen mit Maus-Studien bestimmt. Der wichtigste Schritt der Laufband-Studien ist die Bestimmung der Erschöpfung, die in der Regel variiert zwischen einzelnen Mäusen und wurde als 80% der maximalen Drehzahl. In unserer eigenen Erfahrung die Aufzeichnung der Ergebnisse können signifikant zwischen einzelnen Forschern, da die Kriterien für die Erschöpfung sind meist subjektiv. Somit ist die konsequente Anwendung der gleichen Kriterien bei der Aufnahme entscheidend.

Der natürliche Beginn der Wechseljahre ist durch die Erschöpfung der Eierstock Primordialfollikel durch Atresie gekennzeichnet, die später in Eierstock Seneszenz. In den Vereinigten Staaten, werden über 30% der eine Frauen-Lebensdauer nach der Menopause ausgegeben werden. In Reaktion auf eine Abnahme der Eierstockfunktion, können mehrere physiologische und psychologische Konsequenzen auftreten, einschließlich erhöhter Adipositas, vaskulärer Instabilität und Stimmung oder Schlafstörungen. Aufgrund der erhöhten Fettleibigkeit / Adipositas, verglichen mit 1,2 prämenopausalen Pendants, sind Frauen nach der Menopause besonders anfällig für metabolische Syndrom und die damit verbundenen Begleiterkrankungen, einschließlich Herz-Kreislauf-Erkrankungen (CVD) 3. Darüber hinaus wird es immer deutlicher, dass erfolgreiche kardiologische Rehabilitation für Patienten mit CVD beinhaltet regelmäßige Aerobic-Übungen, und dass die Ausübung reduziert kardiovaskuläre Morbidität und Mortalität bei diesen Patienten 4,5. Doch wie körperliche Belastbarkeit changes während der Pre-bis Post-Menopause noch nicht gut untersucht. Noch wichtiger ist, bleibt die Rolle der Bewegung als vorbeugende Maßnahme für CVD-Risiko bei postmenopausalen Frauen bemerkenswert under. Das am häufigsten verwendete induzierbare Modell zur Nachahmung der Menopause bei Frauen ist die ovariektomierten (OVX) Nagetier. Vor kurzem hat die Arbeits chemische 4-Vinylcyclohexendiepoxid (VCD) hat sich gezeigt, dass vor allem auf kleine und ursprüngliche Primär Eibläschen durch die Beschleunigung der natürlichen Prozess der Atresie, was letztlich zu einer Eierstockversagen ohne erkennbare Toxizität in anderen Geweben 6 gefunden. Der Sexualzyklus der VCD-behandelten Mäusen, die analog zu einem menschlichen Menstruationszyklus ist, hört innerhalb von 2-3 Monaten nach dem Abschluss des VCD-Injektionen, die wiederum führt zu einer allmählichen Rückzug von Östrogen, imitiert den peri-zu post-menopausalen Übergang. So ein Follikel-Abbau-, Eierstock-intakten Tier sehr nahe der natürlichen menschlichenProgression durch die Pre-peri-Post-Menopause 7-9. Darüber hinaus bietet sie eine nicht-chirurgische Alternative zur OVX-Modell reduziert Komplikationen von Operationen, wie beispielsweise Infektion. In dieser Studie verwendeten wir VCD-induzierten Menopause Mäusen, um die Auswirkungen von Bewegung auf die Herz Anpassung in der Menopause Mäusen untersucht. Es gibt mehrere Fälle, die den Zusammenhang zwischen Östrogen und Käfig-Rad in Bewegung Nagetiere beider Geschlechter 10-13 vorschlagen. Östrogenentzug durch chirurgische OVX nimmt freiwillige Übung Aktivität bei Mäusen und Ratten 14,15. Zwei Methoden der Übung wurden in dieser Studie verwendet, um die Belastungsfähigkeit der VCD-induzierten Menopause Mäusen testen. Cage Radfahr wird allgemein als eine Art freiwillige Übung in Tiermodellen betrachtet und durchgeführt wird, vermutlich unter weniger stressigen Bedingungen. Allerdings Käfig Radfahr nicht, der die relative Belastungsfähigkeit von Tieren, die Tiere benötigt, um Exercise in viel höheren Mengen. Zwangslaufband wurde zur körperlichen Leistungsfähigkeit, gemessen als einer Toleranz, um die Intensität und Ausdauer trainieren zu bestimmen. Darüber hinaus haben wir bereits gezeigt, dass Käfig Rad Übung stellt einen Anreiz für Herzhypertrophie und das hypertrophe Wachstum ist Sex-abhängige 16. Deshalb haben wir auch Herz Anpassung an Käfig Rad Übung in VCD-induzierten Menopause Mäusen gemessen.

<table><tbody><tr><td>4-Vinylcyclohexendiepoxid (VCD)</td><td>Sigma</td><td>V-3630</td><td></td></tr><tr><td>Rad mit 11,5 cm Durchmesser und 5,0 cm breiter Lauffläche</td><td>Petsmart</td><td>Modell 6208</td><td></td></tr><tr><td>Digitaler Magnetzähler</td><td>Sigma Sport</td><td>Modell BC 600</td><td></td></tr><tr><td>Laufband Übung</td><td>Columbus Instruments</td><td>Modell 1055SDRM</td><td></td></tr></tbody></table>

eine methode, um die auswirkungen der chemisch-induzierte ovarialinsuffizienz on exercise cardiac kapazität und anpassung in mäusen untersucht

A Method to Study the Impact of Chemically-induced Ovarian Failure on Exercise Capacity and Cardiac Adaptation in Mice

Das Risiko von Herz-Kreislauf-Erkrankungen (CVD) erhöht bei postmenopausalen Frauen, doch die Rolle der Übung, als vorbeugende Maßnahme für CVD-Risiko bei postmenopausalen Frauen wurde nicht ausreichend untersucht. Daher untersuchten wir die Auswirkungen der freiwilligen Käfig-Rad-Bewegung und gezwungen Laufband auf die kardiale Anpassung in der Menopause Mäusen. Das am häufigsten verwendete induzierbare Modell zur Nachahmung der Menopause bei Frauen ist die ovariektomierten (OVX) Nagetier. Allerdings hat das Modell OVX ein paar Unterschiede von den Wechseljahren in den Menschen. In dieser Studie haben wir verabreichten 4-Vinylcyclohexendiepoxid (VCD) zu weiblichen Mäusen, die Eierstockversagen als Alternative Menopause-Modell, um die Auswirkungen von Bewegung in der Menopause Mäusen untersucht werden beschleunigt. VCD selektiv beschleunigt den Verlust von primären und Primordialfollikeln was in einer endokrine Zustand, imitiert den natürlichen Verlauf von der Vor-peri-bis Post-Menopause beim Menschen. Um die Auswirkungen von Bewegung auf die Bewegung bestimmenKapazität und Herz Anpassung in VCD-behandelten weiblichen Mäusen wurden zwei Methoden verwendet. Zunächst ausgesetzt wir eine Gruppe von VCD-behandelten und unbehandelten Mäusen zu einer freiwilligen Käfig-Rad. Zweitens haben wir gezwungen Laufband Übung zu Übung Kapazität in einer separaten Gruppe VCD-behandelten und unbehandelten Mäusen gemessen als Toleranz, um die Intensität und Ausdauer trainieren zu bestimmen.

Ein typischer Versuchsprotokoll, wie das in dieser Studie verwendet wird, ist in Fig. 1 dargestellt. Nach 20 aufeinanderfolgenden Tagen VCD Behandlung wurde Vaginalzytologie verwendet, um die Anwesenheit oder Abwesenheit von Zyklizität in der VCD-injizierten Mäusen zu bestimmen; Fahrzeug-injizierten Mäusen wurden ebenfalls überwacht. Die Bühne in der Rosse wurde durch den Anteil der Epithelzellen, verhornten Epithelzellen und Leukozyten in der vaginalen Abstrich (2A) bestimmt. Die Anwesenheit von nur verhornten Epithelzellen angegeben die Maus war in der Brunst, und wurde daher noch Radfahren. Der Sexualzyklus bei Mäusen dauert in der Regel 4 Tage, also VCD injizierten Tiere wurden azyklische nach 15 Tagen der anhaltenden diestrus, in der Vaginalzytologie ergab eine Mehrheit der Leukozyten (2A) berücksichtigt. Der Sexualzyklus der VCD-behandelten Mäusen wurde unregelmäßig, und dann nicht mehr innerhalb von 2-3 Monaten nach Beginn der VCD-Injektionen (2B) </strong&gt;. VCD Eierstockgewebe zeigten signifikante Atrophie, im Vergleich zu Kontrollen. Bei hoher Vergrößerung, sehen wir eine vollständige Erschöpfung der Primär-und Primordialfollikel (Abbildung 2C). Um die Wirkung der VCD-induzierte Ovarialinsuffizienz auf die Trainingsleistung zu testen, randomisierten es 7 Monate alten VCD-und Vehikel-behandelten Mäusen (zwei Stämme C57BL / 6 und B6C3F1) entweder sesshaft oder Käfig Rad Übungsgruppen 4-6 Wochen nach der Aufhören Radfahren (Abbildung 1). Tägliche Bewegung Werte wurden für Zeit und Distanz für jedes ausgeübte Tier in der gesamten 4 Wochen Ausübungszeitraum erfasst. Wochenmittelwerte der täglichen Betrieb Werte für Entfernung, Zeit und Geschwindigkeit sind in Fig. 3 für C57BL / 6 Mäusen, die mit Vehikel behandelt oder VCD gezeigt. Wir hatten keine signifikanten Unterschiede in der Trainingsleistung von durchschnittlichen Tageszeit, Distanz und Geschwindigkeit auf dem Käfig Rad zwischen VCD-und Vehikel-behandelten Gruppen entweder in C57BL / 6 oder B6C3F1 Maus, gemessen anStamm (Fig. 4A). Die berechneten Rad-Laufgeschwindigkeiten allmählich über die 4-Wochen-Laufzeit, wie zuvor gezeigt 16 erhöht, aber waren nicht signifikant unterschiedlich zwischen experimentellen Gruppen. Diese Studien zeigen die Auswirkungen der VCD-induzierte Ovarialinsuffizienz auf freiwilligen Käfig Rad Übung transzendiert mindestens zwei Mausstämme. Nach der Dauer des freiwilligen Käfig Rad Übung Protokoll wurden Morphometrie Körper aufgenommen und die Herzen wurden schnell ausgeschnitten und gewogen. Wir haben bereits gezeigt, dass die freiwillige Käfig Rad Übung bewirkt eine Zunahme der Herzmasse 16. Hier zeigen wir auch Herzhypertrophie in Reaktion auf Käfig-Rad Ausübung absolute Herzgewicht (HW) gemessen und HW normalisiert, um Schienbeinlänge (TL) (Tabelle 1). Im Vergleich zu sesshaften Kollegen Das absolute Herzmasse und HW / TL-Verhältnis waren signifikant höher im Fahrzeug-und VCD-behandelten Mäusen. Es gab jedoch keine Messbare Unterschiede in der Herzhypertrophie zwischen Kontroll-und VCD-induzierte Ovarialinsuffizienz Mäusen nach freiwilligen Käfig Rad Übung. Weiter haben wir unfreiwillig (Zwangs-) Laufband, um die körperliche Belastbarkeit zu ermitteln. Wir zuerst zu einem Hochintensitäts Protokoll, Durchschnittsgeschwindigkeit schrittweise bis zur Erschöpfung erhöht alle 10 min unterworfen Mäusen. Im Durchschnitt beträgt die maximale Geschwindigkeit des Fahrzeugs behandelten Mäusen betrug 26,7 ± 0,95 m / min und die maximale Geschwindigkeit der VCD-behandelten Mäusen war 28 ± 1,4 m / min vor Erschöpfung. Wir verwendeten niedrigeren Intensität läuft bei 20 m / min (etwa 80% der maximalen), die für die Ausdauerleistungsfähigkeit zu untersuchen. Wie in 4B gezeigt, wurde kein signifikanter Unterschied in hoher oder niedriger Intensität der körperlichen Leistungsfähigkeit zwischen Fahrzeug und VCD behandelten Gruppe gefunden, was darauf hinweist, dass VCD-induzierte Ovarialinsuffizienz hatte keine Auswirkung auf die körperliche Belastbarkeit der Maus. Abschließend hat der Menopause von VCD Behandlung induziert keine Auswirkungen auf entweder freiwillig oder gezwungen r<html> unning Kapazität sowie die Herz adaptive Reaktion ausüben. <img alt="Figur 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51083/51083fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51083/51083fig1.jpg" /> Fig. 1 ist. VCD-Verwaltung und Versuchsprotokoll. Mäuse wurden VCD (160 mg / kg) oder Sesamöl (MFK) ab Alter von 2 Monaten für 20 aufeinanderfolgende Tage verabreicht. Nach VCD-oder Fahrzeug Injektionen wurden Ovarialzyklen überwacht und cyclicities wurden wie im Methodenteil beschrieben. Verlust der Eierstockfunktion traten innerhalb 60-90 Tage und wurde von Vaginalzytologie bestätigt. Am Alter von 7 Monaten wurden die Mäuse auf freiwillige Käfig Rad Übung für 4 Wochen ausgesetzt oder zum Laufband-Protokoll unterzogen. oad/51083/51083fig2highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51083/51083fig2.jpg &quot;/&gt; . Abbildung 2 VCD-induzierte Eierstockversagen bei Mäusen A:. Zytologie einer ungefärbten vaginalen Abstrich von einem Fahrzeug eingespritzt Maus zeigt die vier Phasen des Sexualzyklus: 1) proestrous, überwiegend bestehend aus kernhaltige Epithelzellen 2) Brunst, gekennzeichnet durch un kern verhornten Zellen; 3) Metöstrus, bestehend aus kernhaltige Epithelzellen (Pfeile), un-kern verhornten Epithelzellen (Pfeile) und Leukozyten; 4) diestrus, vor allem bestehend aus Leukozyten; und B:. Durchschnittliche Länge (Tage) des Sexualzyklus des Fahrzeugs-und VCD-injizierten Gruppen. Ein Zyklus ab dem ersten Tag der Brunst bei dem ersten Tag der nächsten Periode in Östrus gemessen. Vaginalzytologie begann ca. 6 Wochen nach Beginn der Injektionen. Die Ovarialzyklen der VCD-injizierten Tieren unregelmäßig werden, im Vergleich zu Fahrzeug-injizierte Tiers, und nach 12 Zyklen Brunst, Zytologie aller VCD injizierten Tiere nicht mehr angezeigt Radfahren C:. H &amp; E-Färbung von Eierstockgewebe bei 8 Monate alt. Querschnitte bei 5 um Dicke für Vehikel-behandelten (links) und VCD-behandelten (rechts) Mäusen bei 20X (oben) und 200-facher (unten) Vergrößerung gemacht. Eierstockgewebe bei 200-facher Vergrößerung zeigt die Anzahl der Follikel in Fahrzeug-Vergleich zum VCD-behandelten Mäusen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51083/51083fig2highres.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Fig. 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51083/51083fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51083/51083fig3.jpg" /> Abbildung 3. Freiwillige Käfig Rad Leistung im Fahrzeug-oder VCD-behandelten C57Bl/6J weiblichen Mäusen. Left Panel: Durchschnittliche Fahrstrecke (km /Tag) für jeden Zeitraum, über 1 Woche im 4-Wochen-Studie Zeitraum mittlere Platte:. Durchschnittliche Laufzeit (h / Tag) für jeden Zeitraum, über 1 Woche im 4-Wochen-Studie Zeitraum rechten Panel:. mittlere Fahrgeschwindigkeit (km / h) für jede 1 Woche Zeitraum, der 4-wöchigen Untersuchungszeitraums. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51083/51083fig3highres.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <img alt="Fig. 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51083/51083fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51083/51083fig4.jpg" /> Abbildung 4. Freiwillige Käfig Rad und Laufband Leistung im Fahrzeug-und VCD-behandelten Mäusen. A: (Top Panel) C57BL / 6 durchschnittliche Laufstrecke (km / Tag) und die Zeit auf dem Rad (Stunden / Tag) für jeden 24 h über der 4-wöchigen Untersuchungszeitraums verbracht. (An der Unterseite) &amp; #160; B6C3F1 durchschnittliche Laufstrecke (km / Tag) und die Zeit auf dem Rad (h / Tag) für jeden 24 h über der 4-wöchigen Untersuchungszeitraums B verbracht: C57BL / 6 Laufband-Parameter.. Maximale Zeit (Top Panel) und maximale Geschwindigkeit (botoom Panel) unter Verwendung von Protokollen im Methodenteil beschrieben.

Zwei Paradigmen Übung wurden auf einem neu entwickelten chemisch induzierte Menopause Mausmodell getestet werden, um die Auswirkungen der Wechseljahre auf die körperliche Belastbarkeit und Herz Anpassung ausüben zu untersuchen.

Eine Methode, um die Auswirkungen der Chemisch-induzierte Ovarialinsuffizienz on Exercise Cardiac Kapazität und Anpassung in Mäusen untersucht

The risk of cardiovascular disease (CVD) increases in post-menopausal women, yet, the role of exercise, as a preventative measure for CVD risk in ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, den natürlichen Prozess der follikulären Atresie in den Eierstöcken zu beschleunigen, wodurch ein Ovarialversagen, ein Abbau von Östrogen und eine nicht zyklische weibliche Person entstehen – ein Zustand, der der Menopause stark ähnelt. Dies wird erreicht, indem zunächst 15 bis 20 aufeinanderfolgende Tage lang die beruflich relevante chemische Substanz Vinylcyclohexendioxid oder VCD verabreicht wird, die nachweislich gezielt kleine primäre und primordiale Eierstockfollikel angreift und zerstört, indem sie deren natürlichen Atresieprozess beschleunigt. Der zweite Schritt besteht darin, den Östruszyklus und die Ovarialzyklizität mittels Vaginalzytologie zu bestimmen, die etwa sechs Wochen nach Beginn der VCD-Injektionen beginnt.Um den Verlust des Zyklus und ein Ovarialversagen zu bestätigen, müssen 15 bis 20 Tage anhaltender Diöstrus oder Nicht-Zyklus mittels vaginaler Zytologie überprüft werden. Der letzte Schritt besteht darin, eine Intervention durchzuführen, die von der Menopause oder dem Übergang zur Menopause beeinflusst werden könnte, wie beispielsweise freiwillige Laufradaktivität im Käfig oder kardiale Anpassung. Letztendlich wird die freiwillige Laufradaktivität im Käfig und die kardiale Anpassung genutzt, um zu zeigen, ob die Menopause die Laufradaktivität im Käfig verringert.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie der Ovariectomy besteht darin, dass die Ovariectomy ein chirurgisches Verfahren ist, das zu einer plötzlichen Abnahme des Östrogens führt, was sich von dem natürlichen, progressiven Östrogenverlust unterscheidet, wie er während des Übergangs von der Prä- zur Postmenopause auftritt. Die Implikationen dieser Technik reichen bis zur Therapie von Stoffwechsel- und Herz-Kreislauf-Erkrankungen bei postmenopausalen Frauen, da postmenopausale Frauen im Vergleich zu prämenopausalen Frauen besonders anfälliger für das metabolische Syndrom und die damit verbundenen Komorbiditäten, einschließlich Herz-Kreislauf-Erkrankungen, sind. Eine visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend, da die Schritte der Vaginalzytologie schwer zu erlernen sind, weil sorgfältig auf die korrekte Ausstrichtechnik und die Identifizierung des EST-Zyklus geachtet werden muss.Vier, Vinylcyclindioxid oder VCD wird bei minus 20 Grad Celsius gelagert. Um VCD für das Injektionsprotokoll vorzubereiten, geben Sie 0,587 Milliliter VCD in ein sauberes Dosierfläschchen und stellen Sie das Endvolumen auf 10 Milliliter mit Sesamöl ein, decken und versiegeln Sie mit Parafilm und mischen Sie durch vorsichtiges Umstülpen. Lagern Sie bei vier Grad Celsius bis zu sieben Tage lang.Um das VCD-Injektionsprotokoll zu beginnen, wiegen Sie zwei Mäuse im Alter von zwei Monaten an 20 aufeinanderfolgenden Tagen, verabreichen Sie täglich intraperitoneale Injektionen von VCD bei Raumtemperatur in einer Dosis von 160 Milligramm pro Kilogramm unter Verwendung einer 27-Gauge-Nadel während des Injektionszeitraums. Versuchen Sie, die Injektionsstellen abzuwechseln, um die Wahrscheinlichkeit einer lokalen Infektion auf ähnliche Weise zu verringern. Injizieren Sie Kontrollmäuse nach Abschluss des Injektionszeitraums mit der Trägerlösung Sesamöl in einem Volumen von 2,5 Milliliter pro Kilogramm.Überwachen Sie den Östruszyklus täglich durch Entnahme von Vaginalabstrichen. Einer der entscheidenden Faktoren für den Erfolg dieser Studie ist die Gewinnung hochwertiger Vaginalabstriche zur zytologischen Bestimmung. Fixieren Sie die Mäuse mithilfe der Nackenfellschlaufen-Methode.Fügen Sie einen Pipettenkopf mit 0,2 Milliliter steriler Kochsalzlösung in die Vaginalöffnung bis zu einer Tiefe von 0,5 Zentimetern ein. Mischen Sie die injizierte Kochsalzlösung dreimal mit der Pipette und geben Sie anschließend einen Tropfen auf einen leeren Objektträger. Untersuchen Sie jede Probe unverzüglich mikroskopisch mit einem herkömmlichen Lichtmikroskop bei 100-facher Vergrößerung, um einen Ovarialversagen zu bestätigen.Anschließend werden die durch VCD induzierten menopausalen Mäuse für die Trainingsversuche verwendet. Die Laufradvorrichtung besteht aus einem Rad mit einem Durchmesser von 11,5 Zentimetern und einer fünf Zentimeter breiten Lauffläche, die mit einem digitalen magnetischen Zähler ausgestattet ist, der durch die Radrotation aktiviert wird. Kalibrieren Sie das Käfiglaufrad vor jedem Laufradtest gemäß den Herstelleranweisungen.Messen Sie den Innendurchmesser des Laufrads. Berechnen Sie den Umfang und geben Sie diesen Wert als Radgröße in den digitalen Zähler ein, um das Rad an der Käfigseite anzubringen. Führen Sie das Rad durch die obere Verdrahtung des Tierkäfigs.Befestigen Sie den Laufradständer mit Kabelbindern am Käfiggitter. Die Binder sollten sich oben am Gitter befinden, weg von dem Tier. Führen Sie den Computer-Teil und jedes zusätzliche Kabel durch das Gitter des Käfigs.Platzieren Sie den Computer und ein überschüssiges Kabel so, dass das Tier nicht darauf zugreifen kann. Dies kann erreicht werden, indem eine mittelgroße, plastische Wiegeschale auf die Verkabelung des Käfigs gestellt wird, um den Computer und das überschüssige Kabel zu fixieren. Befestigen Sie anschließend den Computerteil des digitalen magnetischen Zählers an der Laufradhalterung.Befestigen Sie mit Klebeband den freien Magneten des digitalen Magnetzählers an der zentralen Stange auf der gleichen Seite wie das Magnetkabel zum Computer. Kleben Sie erneut ausreichend, um den Magneten vor Beschädigungen durch Kauen zu schützen. Der Magnet sollte so positioniert sein, dass jede Umdrehung des Rades vom Computer erfasst wird, ohne dass eine Störung oder Behinderung einer vollständigen Radumdrehung auftritt.Befestigen Sie das Laufrad an dem Rad, indem Sie die Ständerpfosten in die Befestigungslöcher an den zentralen Stäben des Rads einsetzen. Stellen Sie sicher, dass sich das Rad frei drehen kann.Die Anlage sollte täglich auf Beschädigungen durch Nagen überprüft und bei Bedarf für die Dauer des Experiments repariert werden. Sieben Monate alte, inzüchtige C57, schwarze Sechs- und B6C3F1-weibliche Mäuse aus einem bestimmten Wurf werden zufällig entweder dem Trainingsprogramm oder der sitzenden Kontrollgruppe zugewiesen. Wie werden die Versuchstiere einzeln gehalten? In einem 47 × 26 × 14,5 cm großen Käfig mit ungehinderter Nutzung eines Laufrades für 28 Tage. Kontrolltiere werden gemeinsam in einem Käfig ohne Rad gehalten.Stellen Sie allen Tieren Wasser und standardmäßiges Hartfutter für Nagetiere zur Verfügung. Fügen Sie Lido manuell hinzu und notieren Sie täglich die vom magnetischen Zähler angegebenen Werte für die gelaufene Distanz und die gesamte Laufzeit. Erfassen Sie Distanz- und Zeitwerte stets innerhalb desselben einstündigen Zeitfensters, um über die gesamte 28-tägige Trainingsdauer hinweg genaue und konsistente Werte zu erhalten. Löschen Sie nach jeder täglichen Aufzeichnung den magnetischen Zähler, um am folgenden Tag genaue Messwerte sicherzustellen.Am Ende der bestimmten Trainingsphase werden die Körpergewichte der euthanasierten Tiere vor der Gewebeentnahme aufgezeichnet. Um das Herz zu präparieren, führen Sie einen medianen Schnitt an der ventralen Seite durch, öffnen das Zwerchfell und visualisieren das Herz rasch. Entfernen Sie das Herz an der Basis und legen Sie es in kalte, phosphatgepufferte Kochsalzlösung, um verbleibendes ventrikuläres Blut ausreichend auszuwaschen. Entfernen Sie überschüssiges Gewebe am Herzen, wiegen Sie das gesamte Herz ab und tiefgefrieren Sie es gegebenenfalls augenblicklich in flüssigem Stickstoff.Sammlen Sie zusätzliche Exzisate, waschen Sie diese mit einer modifizierten eiskalten phosphatgepufferten Kochsalzlösung, schockfrieren Sie sie und kühlen Sie sie in Isopentan, das mit flüssigem Stickstoff gekühlt wurde. In dieser Studie wurde ein Ovarialversagen durch eine VCD-Behandlung induziert und durch mikroskopische Untersuchung von Vaginalabstrichen bestätigt. Der Stadium im Östruszyklus wird anhand des Anteils epithelialer Zellen bestimmt, wobei quantifizierte epitheliale Zellen und Leukozyten in PROEs kernhaltige epitheliale Zellen überwiegen.Hier zeigen die Pfeile nukleierte Zellen, während während der Östrophasen überwiegend nicht nukleierte, quantifizierte plattenepitheliale Zellen vorliegen. Das Mastrum zeichnet sich durch eine Mischung von Zelltypen mit einer Vorherrschaft von Leukozyten aus. Das Diestrus wird von Leukozyten dominiert.Der Östrogenzyklus bei Mäusen dauert normalerweise vier Tage, bevor VCD injiziert wird. Tiere wurden nach 15 Tagen anhaltender Diöstrus als azylisch betrachtet. Diese Abbildung zeigt die durchschnittliche Dauer in Tagen des östrogenen Zyklus der mit Fahrzeugmittel und VCD behandelten Gruppen.Ein Zyklus wird vom ersten Tag der ES bis zum ersten Tag der nächsten Periode gemessen. Die vaginale Zytologie begann in der ES etwa sechs Wochen nach Beginn der Injektionen. Es wurde beobachtet, dass die Östrogenzyklen der mit VCD behandelten Tiere im Vergleich zu den mit Vehicle behandelten Tieren unregelmäßig wurden und nach 12 Östrogenzyklen die Zytologie aller mit VCD behandelten Tiere am Ende des VCD-Injektionsprotokolls nicht mehr auf einen zyklischen Verlauf hindeutete. Die H- und E-Färbung von Querschnitten des Ovarialgewebes zeigte eine signifikante Atrophie des mit VCD behandelten Ovarialgewebes im Vergleich zu den Kontrollen. Bei einer Vergrößerung von 20x bei 200facher Vergrößerung wurde eine vollständige Ausschöpfung der primären und primordialen Follikel im mit VCD behandelten Gewebe beobachtet. Im Gegensatz zum mit Vehicle behandelten Gewebe wurde der Effekt eines VCD-induzierten Ovarialversagens auf die sportliche Leistung bei sieben Monate alten Mäusen zweier Stämme getestet, denen VCD bzw. Vehicle verabreicht worden war; die täglichen Werte für Käfigradlauf wurden über einen Zeitraum von vier Wochen für Zeit und Distanz für jedes trainierende Tier aufgezeichnet. Diese Abbildung zeigt die wöchentlichen Durchschnittswerte der täglichen Laufleistungen bezüglich Distanz, Zeit und Geschwindigkeit.Bei C57BL/6-Mäusen, die entweder mit Vehicle oder VCD behandelt wurden, zeigten sich keine signifikanten Unterschiede in der körperlichen Leistungsfähigkeit, gemessen an der täglichen durchschnittlichen Laufdistanz und der Zeit, die auf dem Laufrad verbracht wurde, zwischen den mit VCD und den mit Vehicle behandelten Gruppen – weder bei der C57BL/6- noch bei der B6C3F1-Mausrasse. Dies deutet darauf hin, dass die Auswirkung des durch VCD induzierten Ovarialversagens auf die freiwillige Laufradaktivität mindestens zwei Mausrassen überdauert, und zwar über die gesamte Dauer des Protokolls zur freiwilligen Käfiglaufradaktivität hinweg. Körperliche Morphometrie-Daten wurden erfasst, und die Herzen wurden rasch entnommen und gewogen, was mit früheren Beobachtungen übereinstimmt.Kardiomegalie als Reaktion auf Laufradtraining, gemessen anhand des absoluten Herzgewichts und des auf die Schienbeinlänge normalisierten Herzgewichts, wurde beobachtet. Obwohl die absolute Herzmasse sowie das Verhältnis von Herzgewicht zur Schienbeinlänge bei mit Fahrzeuglösung und VCD behandelten Mäusen im Vergleich zu inaktiven Tieren signifikant höher waren, zeigten sich keine messbaren Unterschiede bezüglich der kardialen Hypertrophie zwischen der Kontrollgruppe und der durch VCD induzierten Ovarialinsuffizienz. Mäuse nach freiwilligem Laufradtraining wurden abschließend einer erzwungenen Laufbandbelastung unterzogen, um die Leistungsfähigkeit bei intensiver und leichter körperlicher Belastung zu bestimmen.Beim Hochintensitätsprotokoll wurde die durchschnittliche Laufbandgeschwindigkeit schrittweise alle 10 Minuten erhöht, bis die Mäuse Anzeichen von Erschöpfung zeigten. Im Durchschnitt betrug die maximale Geschwindigkeit bei mit Vehicle behandelten Mäusen 26,7 ± 0,95 Meter pro Minute und die maximale Geschwindigkeit bei mit VCD behandelten Mäusen 28 ± 1,4 Meter pro Minute vor der Erschöpfung. Eine niedrigere Laufintensität von 20 Metern pro Minute wurde verwendet, um die Ausdauerleistungsfähigkeit zu bestimmen.Im Durchschnitt betrug die maximale Laufzeit der mit Vehicle behandelten Mäuse 28,3 ± 1,3 Minuten und die der mit VCD behandelten Mäuse 29,7 ± 1,4 Minuten vor der Erschöpfung. Es wurden keine signifikanten Unterschiede in der Belastungsfähigkeit bei hoher oder niedriger Intensität zwischen den mit Vehicle und VCD behandelten Gruppen gefunden, was darauf hindeutet, dass die durch VCD induzierte Ovarialinsuffizienz keinen Einfluss auf die körperliche Leistungsfähigkeit der Mäuse hatte. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher in den Bereichen der zellulären, molekularen und physiologischen Wissenschaften, um die Rolle der Menopause bei Nagetieren zu untersuchen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man die korrekten VCD-Injektionen durchführt, die vaginale Zytologie ausführt und eine physiologische Intervention durchführt.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Eine Methode zur Beurteilung der Belastungsausdauer bei Labormäusen ohne die Verwendung eines Schockgitters wird demonstriert. Diese Methode ist eine humane Verfeinerung, die die verwirrenden Effekte von Stress auf experimentelle Parameter verringern kann.

Beurteilung der Murine sportliche Ausdauer, ohne die Verwendung eines Shock Grid: Eine Alternative zur Zwangsübung

High-Intensity-Training in Hypoxie ist ein Protokoll, die potenziell vorteilhaft bei einigen Patienten vaskuläre Anpassungen zu induzieren und Athleten zu verbessern Sprint Fähigkeit wiederholt bewährt hat. Hier testen wir die Machbarkeit der Ausbildung Mäuse verwenden, das Protokoll und die vaskulären Anpassungen mit ex-Vivo Gefäßfunktion Bewertung zu identifizieren.

Supramaximalen hypoxischer Intensität und Gefäßfunktion Bewertung bei Mäusen

Kurze Session (≤10 min) hohe Intensität Intervall-Training (HIIT) erweist sich als eine Alternative zu längeren Übung Modalitäten, doch die kürzeren Varianten sind selten in tierexperimentellen Studien modelliert. Hier beschreiben wir eine 10 min, 3 Tage pro Woche, bergauf Laufband HIIT Protokoll verbessert, die körperliche Leistungsfähigkeit in männlich und weiblich im Alter von Mäusen.

Kurze Sitzung High Intensity Intervalltraining und Laufband-Beurteilung im Alter Mäuse

Klinisch, Östrogenmangel bei Frauen in der Wechseljahre kann die Inzidenz von Lipidstörungen und Arteriosklerose verschlimmern. Wir etablierten ein In-vivo-Östrogen-Mangelmodell durch bilaterale Ovariektomie über einen doppelten dorsal-lateralen Schnitt bei ApoE-/- Mäusen. Das Mausmodell ist für das Screening exogener Östrogenbehandlungen von kardiovaskulärer Dysfunktion nach den Wechseljahren anwendbar.

Ein In Vivo Östrogen-Mangel-Maus-Modell zum Screening exogener Östrogen-Behandlungen von Kardiovaskulärer Dysfunktion nach den Wechseljahren

Die Aufbereitung von mit Mitochondrien angereicherten Proben aus zuvor gefrorenem archiviertem festem Gewebe ermöglichte es den Forschern, sowohl funktionelle als auch analytische Bewertungen von Mitochondrien in verschiedenen experimentellen Modalitäten durchzuführen. Diese Studie zeigt, wie man mit Mitochondrien angereicherte Präparate aus gefrorenem Herzgewebe herstellt und analytische Bewertungen von Mitochondrien durchführt.

Measuring Mitochondrial Electron Transfer Complexes in Previously Frozen Cardiac Tissue from the Offspring of Sow: A Model to Assess Exercise-Induced Mitochondrial Bioenergetics Changes

Die Etablierung einer Schwangerschaft ist ein dynamischer Prozess, bei dem es zu komplexen Wechselwirkungen zwischen Embryo und Gebärmutter kommt. Der genaue Beitrag der mütterlichen Gebärmutterumgebung zu diesen Prozessen ist nach wie vor ein aktives Forschungsgebiet. Hier werden detaillierte Protokolle zur Verfügung gestellt, die bei der Entwicklung von In-vivo-Tiermodellen helfen, um diese Forschungsfragen zu beantworten.

Methoden zur Untersuchung des Beitrags der Gebärmutter zur Schwangerschaftsbegründung in einem ovariektomierten Mausmodell

Das follikelstimulierende Hormon (FSH) in verschiedenen extragonadalen Geweben und Organen wird mit der Pathogenese mehrerer Krankheiten in Verbindung gebracht. Das ovariektomierte und FSH-behandelte Mausmodell (OVF) kann verwendet werden, um die extragonadalen Wirkungen von FSH zu untersuchen.

Untersuchung unabhängiger Effekte des follikelstimulierenden Hormons in vivo in einem Mausmodell

Dieses Protokoll stellt eine Technik zur Induktion von Modellen des polyzystischen Ovarialsyndroms (PCOS) bei Mäusen durch kontrollierte Letrozolfreisetzung mit Minipumpen vor. Unter adäquater Anästhesie wurde die Minipumpe subkutan implantiert, und PCOS wurde bei den Mäusen nach einer bestimmten Zeit der Freisetzung der Minipumpe erfolgreich induziert.

Eine modifizierte Technik zur Induktion des polyzystischen Ovarialsyndroms bei Mäusen

Dieser Artikel beschreibt die Messung der linksventrikulären Funktion von Mäusen mittels Druck-/Volumenanalyse bei verschiedenen Herzfrequenzen.

Herzkatheter in Mäuse, um den Druck Volumen Relationship Maßnahme: Untersuchung der Bowditch Effect

Diese Arbeit demonstriert die Machbarkeit einer in vivo Phosphor-31-Magnetresonanzspektroskopie (31PMRS) Technik zur Quantifizierung der mitochondrialen oxidativen Phosphorylierungskapazität (OXPHOS) in der menschlichen Skelettmuskulatur.

Phosphor-31 Magnet-Resonanz-Spektroskopie: Ein Werkzeug zur Messung In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylierung Kapazität im menschlichen Skelettmuskel

Lernen Sie eine Methode zur Untersuchung von Übungskapazität und kardialer Anpassung bei chemisch induzierter Ovarialinsuffizienz in Mäusen. Diese Technik nutzt VCD und vaginale Zytologie.

Eine Methode, um die Auswirkungen der Chemisch-induzierte Ovarialinsuffizienz on Exercise Cardiac Kapazität und Anpassung in Mäusen untersucht (Video) | JoVE Journal

Eine Methode, um die Auswirkungen der Chemisch-induzierte Ovarialinsuffizienz on Exercise Cardiac Kapazität und Anpassung in Mäusen untersucht

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