Name: Stretching-Cells auf einer mikrostrukturierten PDMS-Membran (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-22T13:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Lernen Sie die Methode zur Dehnung von Zellen auf mikrostrukturierten PDMS-Membranen für Zellbiologie und Biomechanik. Diese Technik ermöglicht die kontrollierte mechanische Stimulation von Zellen zur Untersuchung ihrer Reaktion auf externe Kräfte.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Diese Arbeit wurde vom Institut Curie, Paris, Frankreich gegründet. Die mechanische Bahre wurde von Damien Cuvelier (Institut Curie) entworfen und wird von GREM hergestellt (mecanique-grem.com). Die Strukturierung auf PDMS wurde von Ammar Azioune (Bordeaux II University) entwickelt.

1. Passivierung der PDMS <ol><li> Ein Stück des PDMS ca. 35 mm x 20 mm aus einer bereits geformten Folie (zum Beispiel GelPak, wie in der Tabelle aufgeführten Materialien). </li><li> Entfernen Sie die obere und die untere Schutzschichten aus Kunststoff (falls erforderlich) und mit Hilfe einer Pinzette, um die PDMS in einer Kunststoff legen (nicht zellkulturbehandelte) Petrischale. </li><li> Waschen Sie die PDMS mit 70% Ethanol für 5 Minuten auf einem Schüttler bei 30 Schwingungen / min. </li><li> Trocknen Sie die Oberfläche durch strömende Luft auf sie. </li><li> Illuminate mit tiefen UV (λ = 180 nm) für 5 min bei einem Abstand von den UV-Lampen von etwa 5 cm (siehe Materialien Blatt für Lampe Referenz; Parameter für verschiedene Lampen variieren). </li><li> Planen 200 ul EDC / NHS-Lösung für jedes Stück PDMS (muss unmittelbar vor der Verwendung hergestellt, da die Reaktivität der Lösung zerfällt in wenigen Stunden werden). Für 1 ml 0,05 M MES + 0,5 M NaCl-Puffer bei pH 6,0, fügen 11,5 mg Sulfo-NHS und 19,2 mg EDC. </li><li> Übertragen Sie diePDMS Blätter von der Petrischale mit dem Deckel der Petrischale, die nicht belichtet worden ist. Dadurch wird sichergestellt, dass die Umgebung des PDMS sind sehr hydrophob und ermöglichen den nächsten Schritt. </li><li> In EDC / NHS-Lösung und Inkubation für 15 min bei Raumtemperatur. </li><li> Spülen EDC / NHS mit Wasser. </li><li> Hinzufügen PLL-g-PEG-Lösung (0,5 mg / ml in 10 mM HEPES pH 8.6) und Inkubation von 3 h bis über Nacht bei Raumtemperatur. </li><li> Spülen Sie die PLL-g-PEG mit Wasser. Passi PDMS (mit PLL-g-PEG funktionalisiert) kann für mehrere Tage bei 4 ° C gelagert werden </li></ol> 2. Strukturieren der PDMS <ol><li> Nehmen Sie ein PDMS Blatt und legen Sie es auf einem synthetischen Quarzphotomaske tragen die Mikroformen zur Strukturierung (siehe Abbildung 1). Legen Sie die PDMS seitigen Lager die PLL-g-PEG mit Blick auf den Chrom Seite der Photomaske. </li><li> Beleuchten 7 Minuten durch die Photomaske in einem Abstand von der UV-Lampen von etwa 5 cm.</li><li> Fügen Sie Wasser auf die Maske + PDMS und schälen Sie die PDMS langsam aus der Maske. </li><li> Inkubieren mit Fibronectin-Lösung bei 50 mg / ml in HEPES-Puffer bei pH 8,6 für 1 Stunde bei Raumtemperatur. Es ist möglich, andere ECM-Proteine ​​zu verwenden, aber diese sind nicht mit diesem Protokoll getestet. </li><li> Spülen mit PBS. </li></ol> 3. Das Gerät montieren <ol><li> Montieren Sie die zuvor passivierten PDMS auf die Spannvorrichtung (siehe Diskussion zur Fehlersuche). <ol><li> Befestigen einer Seite des PDMS zu dem feststehenden Teil der Trage. </li><li> Befestigen Sie die andere Seite mit dem Mobilteil der Trage ohne Spann zu viel von der PDMS Blatt. </li></ol></li><li> Schneiden Sie ein Rechteck von PDMS (22 mm x 19 mm) in einer dicken PDMS Stich-und Schnitt ein weiteres Rechteck im Inneren, um einen Pool (oder Rahmen) haben, die die Zellen-und Medien behalten werden (siehe Abbildung 2). </li><li> In Silikonfett unter diese PDMS Pool und legen Sie es auf der PDMS-Blatt zu erstellen med.ium Haltebecken. Das Fett wird die Gleitfähigkeit des Pools über das PDMS Blatt beim Strecken zu ermöglichen. </li></ol> 4. Strukturieren der Zellen <ol><li> Lösen Sie die Zellen aus einer 50% Konfluenz Kulturflasche mit Versene. </li><li> Zähle die Zellen zu resuspendieren und diese in einer Konzentration von 200.000 Zellen / ml. </li><li> 1 ml der Zellsuspension in den Pool (siehe Diskussion für weitere Details). </li><li> Sei (je nach Zelltyp, RPE-1-Zellen werden 10 min und HeLa-Zellen 20 min dauern) die Zellen zu binden, um die Muster für 10-30 min. </li><li> Vorsichtig spülen Sie die schwimmenden Zellen mit ins Gleichgewicht Medium (ins Gleichgewicht mittel Inkubator). </li><li> Lassen Sie die Zellen verteilt für ein paar Stunden auf die Muster (RPE-1 ist mindestens 2 Stunden brauchen, HeLa-Zellen wird 3 Stunden brauchen). </li><li> Fügen Sie ein Deckglas auf den Pool, um Verdunstung und mittlere Leckage bei der PDMS Pausen zu vermeiden. </li><li> Legen Sie das Gerät auf einem inversen Mikroskop und starten Bildgebung. Vermeiden Sie die Verwendung von Ölimmersion objectives, da es nicht durch Fokussierung Probleme funktionieren. </li></ol> 5. Dehnung <ol><li> Die Mikrometerschraube drehen, während die Korrektur der Tischposition in x-, y-und z-Achse (hauptsächlich x). Die Bühnenposition muss korrigiert, die Erweiterung des PDMS und den Verlust des Fokus entgegenzuwirken. (Siehe &quot;Bei der Strecke&quot; Absatz in der Diskussion). </li></ol>

<ol><li>Vogel, V., Sheetz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+force+and+geometry+sensing+regulate+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Local force and geometry sensing regulate cell functions.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 265-275 (2006).</li>
<li>Terenna, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+mechanisms+redirecting+cell+polarity+and+cell+shape+in+fission+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Physical mechanisms redirecting cell polarity and cell shape in fission yeast.</a> Curr. Biol. 18 (22), 1748-1753 (2008).</li>
<li>Guillot, C., Lecuit, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+of+epithelial+tissue+homeostasis+and+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mechanics of epithelial tissue homeostasis and morphogenesis.</a> Science. 340 (6137), 1185-1189 (2013).</li>
<li>Bosveld, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+control+of+morphogenesis+by+Fat%2FDachsous%2FFour-jointed+planar+cell+polarity+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mechanical control of morphogenesis by Fat/Dachsous/Four-jointed planar cell polarity pathway.</a> Science. 336 (6082), 724-727 (2012).</li>
<li>Farhadifar, R., Roper, J. C., Aigouy, B., Eaton, S., Julicher, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+cell+mechanics%2C+cell-cell+interactions%2C+and+proliferation+on+epithelial+packing%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">The influence of cell mechanics, cell-cell interactions, and proliferation on epithelial packing.</a> Curr. Biol. 17, 2095-2104 (2007).</li>
<li>Rauzi, M., Verant, P., Lecuit, T., Lenne, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nature+and+anisotropy+of+cortical+forces+orienting+Drosophila+tissue+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nature and anisotropy of cortical forces orienting Drosophila tissue morphogenesis.</a> Nat. Cell Biol. 10, 1401-1410 (2008).</li>
<li>Mitrossilis, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+single-cell+response+to+stiffness%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Real-time single-cell response to stiffness.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107 (38), 16518-16523 (2010).</li>
<li>Irimia, D., Charras, G., Agrawal, N., Mitchison, T., Toner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polar+stimulation+and+constrained+cell+migration+in+microfluidic+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Polar stimulation and constrained cell migration in microfluidic channels.</a> Lab Chip. 12, 1783-1790 (2007).</li>
<li>Fink, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((External+forces+control+mitotic+spindle+positioning%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">External forces control mitotic spindle positioning.</a> Nat. Cell. Biol. 13 (7), 771-778 (2011).</li>
<li>Azioune, A., Storch, M., Bornens, M., Théry, M., Piel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+rapid+process+for+single+cell+micro-patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Simple and rapid process for single cell micro-patterning.</a> Lab Chip. 9 (11), 1640-1642 (2009).</li>
<li>Azioune, A., Carpi, N., Tseng, Q., Théry, M., Piel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+micropatterns%3A+A+direct+printing+protocol+using+deep+Uvs%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Protein micropatterns: A direct printing protocol using deep Uvs.</a> Methods Cell Biol. 97, 133-146 (2010).</li>
<li>Azioune, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+method+for+high-throughput+surface+patterning+of+deformable+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Robust method for high-throughput surface patterning of deformable substrates.</a> Langmuir. 27 (12), 7349-7352 (2011).</li>
<li>Carpi, N., Piel, M., Azioun, A., Cuvelier, D., Fink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterning+on+silicon+elastomer+%28PDMS%29+with+deep+UVs%5BTitle%5D)+AND+%22Protoc.+Exch%22%5BJournal%5D)">Micropatterning on silicon elastomer (PDMS) with deep UVs.</a> Protoc. Exch. , (2011).</li>
<li>Sinha, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+respond+to+mechanical+stress+by+rapid+disassembly+of+caveolae%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cells respond to mechanical stress by rapid disassembly of caveolae.</a> Cell. 144 (3), 402-413 (2011).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Obwohl diese Technik wurde mehrfach verwendet und wird gründlich getestet, gibt es mehrere kritische Schritte, die zu einem fehlgeschlagenen Experiment führen kann. Über die PDMS: Für diese Arbeit GelPak ein handelsüblicher Dünn PDMS Blatt, verwendet. Alternativ PDMS Blätter können direkt von PDMS-Mischung gegossen werden. Wir empfehlen die Verwendung GelPak, weil es mehr reproduzierbar, und ist weniger wahrscheinlich zu brechen Vergleich zu maßgeschneiderten PDMS. ...

Die Zellen Zusammensetzen eines Gewebe in höheren Organismen unterliegen mechanischen Spannungen und Dehnungskräfte kommen entweder von der äußeren Umgebung oder von umgebenden Zellen 1,2. Die Zellen müssen sich anzupassen und zu widerstehen, diese Kräfte, um die Gewebeintegrität aufrecht zu erhalten. Solche Kräfte sind auch für Gewebe-Morphogenese während der Entwicklung 3,4. Anwenden von mechanischen Kräften auf kultivierte Zellen ist ein Weg, zu imitieren, was in einem Gewebe passieren könnte, aber mit einer quantitativen und unabhängige Steuerung der Zellform und Zellverformung 5,6. Hierzu könnten verschiedene Techniken verwendet werden. Man kann auf die Zellen (die ganze Zelle oder einen Teil davon), beispielsweise mit AFM oder Derivate 7,8 oder strecken das Substrat die Zellen wachsen auf zu drücken. Die in diesem Dokument beschriebenen Verfahren zeigt, wie ein Flugzeug Substrat mit Zellen plattiert dehnen. Auf m Diese Technik wurde ursprünglich entwickelt, um beurteilen die Rolle der Streitkräfte ausgeübtitotic Säugetierzellen 9. Mitotische Zellen bleiben mit dem Substrat verbunden, durch Zurückziehen und Strecken der Fasern Membran ausgeübt wird, eine Kraft auf jene Fasern, die wiederum provozierte die Rotation der mitotischen Spindel. Das Interesse der Kombination von Klebstoff und Mikro Recken um eine unabhängige Steuerung von Kräften und Form der einzelnen Zellen zu erreichen. Es ist beispielsweise möglich, eine eiförmige Zelle in eine perfekt runde Form isotropen strecken, während einachsige Dehnung angewendet wird. Wenn die Zellen nicht auf Mikro geflochten, uniaxiales Strecken Ergebnisse in Zellstreckung, wobei die meisten Zellen, die ein mit dem Streckachse ausgerichtet langen Achse. Es ist dann schwierig, den Effekt der Ausrichtung der langen Achse und der Wirkung der Ausdehnung auf die Zellen zu trennen. Das Gerät eignet sich für alle lebenden Zellen, einschließlich Langzeitablauf Fluoreszenz-Mikroskopie, und Medikamente können während des Experiments hinzugefügt werden. Die tiefe Mikrostrukturierungsverfahren 10 UVswurde im Detail in Azioune et al. 11 Musterung auf PDMS wurde beschrieben in Azioune et al. 12 Die vorliegende Streck Protokoll ist ein Video-Version Carpi et al. 13

<table><tbody><tr><td>GelPak</td><td>GelPak</td><td>PF-60-X4</td><td>Verschiedene Dicken/Klebrigkeiten sind erhältlich. Eine Alternative könnte darin bestehen, Ihr PDMS zu casten&nbsp; dich.</td></tr><tr><td>Silikonfett</td><td>GE Bayer Silikone</td><td>Baysilone-Paste</td><td>Dies ist biokompatibel</td></tr><tr><td>Dehnungsgerät</td><td>GREM m&eacute; canique</td><td>Stretcher 2011</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>EDC (N-(3-Dimethylaminopropyl)-N&prime;-ethylcarbodiimidhydrochlorid)</td><td>Sigma</td><td>3450</td><td>Stabil 6 Monate bei -20 &de; C</td></tr><tr><td>NHS (N-Hydroxysulfosuccinimid-Natriumsalz)</td><td>Sigma</td><td>56485</td><td>Vor Feuchtigkeit schützen</td></tr><tr><td>Pll-g-peg (PLL(20)-g[3.5]-PEG(2) 20 mg)</td><td>SurfaceSolutions (Zürich)</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Synthetische Quarz-Photomaske</td><td>Toppan</td><td></td><td>Nehmen Sie die binäre Standard-Fotomaske in</td></tr><tr><td>Quarz-Fibronektin aus Rinderplasma</td><td>Sigma</td><td>F1141</td><td>&nbsp;</td></tr></tbody></table>

stretching-cells auf einer mikrostrukturierten pdms-membran

Stretching Micropatterned Cells on a PDMS Membrane

Mechanische Kräfte auf Zellen ausgeübt und / oder Gewebe spielen eine wichtige Rolle in zahlreichen Prozessen. Wir haben ein Gerät an Zellen auf einer Polydimethylsiloxan (PDMS)-Membran, mit bildgebenden kompatibel vernickelt strecken entwickelt. Dieses Verfahren ist reproduzierbar und vielseitig. Die PDMS-Membran, um Zellen oder Gewebe zu einem bestimmten Geometrie beschränken mikrostrukturiert werden. Der erste Schritt ist die Mikrostrukturen auf den PDMS-Membran mit einem tiefen UV-Technik gedruckt. Die PDMS-Membran wird dann auf einer mechanischen Trage befestigt. Eine Kammer ist auf der Oberseite der Membran mit biokompatiblen Fett damit Gleiten während der Strecke gebunden. Die Zellen werden ausgesät und für mehrere Stunden auf den Mikro verbreiten. Die Probe kann mehrere Male unter Verwendung einer Mikrometerschraube gespannt und ungestreckte werden. Es dauert weniger als eine Minute, um die Strecke in vollem Umfang (rund 30%) anzuwenden. Die hier vorgestellte Technik nicht eine motorisierte Vorrichtung, die für eine erforderliche umfassenpplying wiederholter Dehnungszyklen schnell und / oder Computer-kontrolliertes Recken, aber dies kann realisiert werden. Dehnen von Zellen oder Gewebe kann von Interesse für die Fragen, um die Zellkräfte, Zell-Antwort gegen mechanische Beanspruchung oder Gewebemorphogenese bezogen werden. Diese Video-Präsentation wird zeigen, wie die typischen Probleme, die, wenn Sie diese Art von scheinbar einfachen Experiment entstehen könnten.

<html> Die in diesem Video-Protokoll vorgestellte Technik erlaubt die Anwendung von Kräften auf die Rückzugs Fasern mitotischer Säugerzellen. In der Tat, während der Zellteilung, bei der mitotischen Phase, Säugetierzellen zurückziehen, um die Form einer Kugel nehmen und hinterlassen dünnen Aktin-Kabel von Membran umgeben, die auf dem Substrat befestigt sind. Diese Kabel (Rückzug Fasern), sind die Erinnerung an die Zellgeometrie, bevor er in Division. Machen Mikro mit tiefen UV durch eine Photomaske auf PDMS Dünnschicht <...

Dieses Manuskript stellt eine Technik, um auf adhärenten Zellen oder Gewebe gelten oder freiKräfte mit unidirektionalen Stretching.

Stretching-Cells auf einer mikrostrukturierten PDMS-Membran

Mechanical forces exerted on cells and/or tissues  play a major role in numerous processes. We have developed a device to stretch  cells plated on a ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, Musterzellen auf einer elastischen Membran aus Polydimethylsiloxan oder PDMS zu dehnen. Dies wird erreicht, indem zunächst eine PDMS-Schicht hergestellt und anschließend ein Mikromuster auf das PDMS aufgebracht wird. Die mikrostrukturierte PDMS-Schicht wird dann auf die Dehneinrichtung montiert, und ein Medium-haltender Pool wird darauf platziert.Anschließend werden die Zellen auf die Oberfläche des mikrostrukturierten PDMS-Blattes aufgebracht und an das Muster anhaften lassen, bevor nicht angeheftete Zellen durch Spülen entfernt werden. Im letzten Schritt wird eine Dehnung auf das zellhaltige PDMS ausgeübt, um die Zellen zu strecken. Letztendlich wird mittels Videomikroskopie gezeigt, dass die Anwendung von Kräften auf die Retraktionsfasern mitotischer Säugetierzellen während der Zellstreckung zu einer Verformung der Zelle führt.Mit dieser Methode lassen sich zentrale Fragen im Bereich der Biomechanik beantworten, beispielsweise welche Auswirkungen äußere Kräfte auf zelluläre Prozesse wie die Teilung haben. Die Idee zu dieser Methode entstand, als wir Kräfte auf eine sich teilende Zelle ausüben wollten, um damit zu beginnen,

stretching-micropatterned-cells-on-a-pdms-membrane

Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Wir stellen in diesem Artikel ein neues Streck Plattform, die verwendet werden können, um einzelne Zellantworten auf komplexe anisotropen biaxiale mechanische Verformung zu untersuchen und zu quantifizieren, die mechanischen Eigenschaften von biologischen Geweben.

A Novel Stretching-Plattform für Anwendungen in der Zell-und Gewebe Mechanobiologie

Wir beschreiben die Herstellung von mikrostrukturierten Hydrogelplatten mit einem einfachen Prozess, der in einer freistehenden Form zusammengesetzt und manipuliert werden kann. Unter Verwendung dieser modularen Hydrogel-Platten kann ein einfaches makroskaliertes 3D-Zellkultursystem mit einer kontrollierten zellulären Mikroumgebung erzeugt werden.

Bau von Modular Hydrogel Blätter für mikrostrukturierten Makro skaliert 3D Cellular Architektur

Humanen pluripotenten Stammzellen (hPSCs) haben die intrinsische Fähigkeit zu differenzieren und sich selbst zu organisieren in verschiedene Gewebemuster; obwohl dies erfordert die Darstellung der räumlichen Umweltgradienten. Wir präsentieren Schablone Mikro als einfache und robuste Methode biochemische und mechanische Gradienten zu erzeugen, für HPSC Differenzierungsmuster zu steuern.

Stencil Mikrostrukturierung von humanen pluripotenten Stammzellen für die Sondierung räumliche Organisation Differenzierung Fates

Es wird ein Protokoll zur Herstellung einer großen Fläche von nanostrukturiertem Substrat aus kleinen nanostrukturierten Formen zur Untersuchung der nanotopographischen Modulation des Zellverhaltens vorgestellt.

Der Ausbau nano Substraten Stichtechnik für Nanotopographical Modulation des Zellverhaltens

Dieser Bericht beschreibt eine einfache, leicht durchzuführende Technik, die Niederdruckvakuum verwendet, um mikrofluidische Kanäle mit Zellen und Substraten für die biologische Forschung zu füllen.

Eine vielseitige Methode von Patterning Proteinen und Zellen

Hier stellen wir ein Protokoll für Mikrostrukturzellen mit Einzelzellauflösung unter Verwendung von DNA-programmierter Adhäsion vor. Dieses Protokoll verwendet eine Benchtop-Photolithographie-Plattform, um Muster von DNA-Oligonukleotiden auf einem Glasobjektträger zu erzeugen und dann Zellmembranen mit kommerziell erhältlichen komplementären Oligonukleotiden zu markieren. Die Hybridisierung der Oligos führt zu einer programmierten Zelladhäsion.

Einfache, erschwingliche und modulare Musterung von Zellen mit DNA

Wir beschreiben Verbesserungen an einer Standardmethode zur Messung zellulärer Zugkräfte, die auf dem Mikrokontaktdruck mit einem einzigen subtraktiven Musterungsschritt von Punktarrays extrazellulärer Matrixproteine auf weichen Hydrogelen basiert. Diese Methode ermöglicht eine einfachere und konsistentere Herstellung von Inselmustern, die für die Steuerung der Zellgruppenform unerlässlich sind.

Mustergenerierung für die Mikromuster-Traktionsmikroskopie

Traditionell wird die Zellkultur auf planaren Substraten durchgeführt, die die natürliche Umgebung von Zellen in vivo schlecht nachahmen. Hier beschreiben wir eine Methode zur Herstellung von Zellkultursubstraten mit physiologisch relevanten gekrümmten Geometrien und mikrostrukturierten extrazellulären Proteinen, die systematische Untersuchungen der zellulären Erfassung dieser extrazellulären Hinweise ermöglicht.

Erzeugung von Multicue-Zellmikroumgebungen durch UV-Photostrukturierung von dreidimensionalen Zellkultursubstraten

Dieses Protokoll beschreibt eine tintenfreie, markierungsfreie, substratunabhängige Hochdurchsatz-Zellstrukturierungsmethode, die auf dem magnetischen Archimedes-Effekt basiert.

Zellstrukturierung mit der Magnetic-Archimedes-Strategie

Hier präsentieren wir ein vielseitiges äquibiaxiales Streckgerät, das pneumatisch betätigt wird und mit der hochauflösenden Mikroskopie kompatibel ist.

Äquibiaxiales Stretching-Gerät für die konfokale Fluoreszenzmikroskopie mit lebenden Zellen mit hoher Vergrößerung

Wir präsentieren eine dynamische und reversible Steifigkeitsassay-Plattform, die aus einem ultraweichen Silikonelastomer (Polydimethylsiloxan, PDMS) mit eingebetteten Eisenpartikeln hergestellt wird. Dieser neuartige Assay eignet sich für die Untersuchung emergenter zeitabhängiger physikalischer Veränderungen in Zellphänotypen, einschließlich der Kontaktführung. Hier messen wir die Ausrichtung der Kardiomyozyten von neonatalen Ratten nach der Matrixversteifung mit Hilfe von Magneten.

Mikrostrukturierte magnetorheologische Elastomere zur Verbesserung der Kardiomyozytenausrichtung

Lernen Sie die Methode zur Dehnung von Zellen auf mikrostrukturierten PDMS-Membranen für Zellbiologie und Biomechanik. Diese Technik ermöglicht die kontrollierte mechanische Stimulation von Zellen zur Untersuchung ihrer Reaktion auf externe Kräfte.

Stretching-Cells auf einer mikrostrukturierten PDMS-Membran

Weitere Videos entdecken