Isolation und Kultur der Dissoziierte sensorischen Neuronen aus Hühnerembryonen

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine angereicherte Population dissoziierter primärer sensorischer Neuronen aus Hühnerembryonen zu kultivieren. Dies wird erreicht, indem intakte dorsale Wurzelganglien vom embryonalen Tag an, sieben bis 10 Hühnerembryonen in eine konische Röhre gesammelt und anschließend in ihre dissoziierte Zellsuspension zerlegt werden. In einem zweiten Schritt werden dissoziierte DRG-Zellen zur Inkubation auf einer Kulturschale plattiert.

Danach wird die Kulturschale sanft gespült, um die Neuronen bevorzugt zu entfernen. Der letzte Schritt umfasst das Plattieren der dissoziierten sensorischen Neuronen auf den gut definierten Substraten, wie z. B. säuregewaschene und gebackene Deckgläser, die mit hohen oder niedrigen Lamininkonzentrationen vorcodiert sind. Eine Immun-Zytochemie wird verwendet, um das Vorhandensein von NCA und aktivierten Beta-One-Integrinen in den Zellkörpern, Neuriten und Wachstumskegeln der dissoziierten kultivierten embryonalen sensorischen Hühnerneuronen nachzuweisen.