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DOI: 10.3791/52054-v
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This article presents a straightforward method for preparing mica-supported lipid bilayers suitable for high-resolution microscopy. The technique enhances the usability of mica, which is typically challenging to handle, by ensuring even deposition and minimizing material usage.
Wir präsentieren ein Verfahren zur Herstellung von Glimmer unterstützt Lipid-Doppelschichten für die hochauflösende Mikroskopie. Mica ist durchsichtig und flach auf atomarer Skala, aber nur selten in der Bildgebung aufgrund der Handhabungsschwierigkeiten verwendet werden; unserer Zubereitung ergibt sogar Abscheidung der Glimmerschicht und reduziert die Doppelschicht in Herstellung verwendeten Material ab.
Das hier vorgestellte Verfahren zeigt eine einfache Methode zur Herstellung von MICA-gestützten Lipiden durch Schichten, die für hochauflösende Bildgebung, wie z.B. Tur-Einzelmolekül-Tracking-Studien, geeignet sind. Die MICA-Oberfläche wird vorbereitet, indem ein Sandwich aus einer einzelnen MICA-Folie, die zwischen dem Glasobjektträger und dem Deckglas geklebt ist, mit optischem Klebstoff abgespalten wird, der eine flache und extrem dünne frische Glimmeroberfläche freilegt. Durch die Montage einer kleinen Kunststoffkammer aus einem eineinhalb Milliliter großen Fläschchenbecher kann das Volumen der Lipidvesikel, das für die Bildung von Doppelschichten benötigt wird, nur 30 Mikroliter betragen.
Nehmen Sie im ersten Schritt die mehrlagige Platte von MICA, wie sie vom Lieferanten stammt und schneiden Sie sie mit einer Schere in kleinere Stücke. Al Leaflet mit einer frischen Messerklinge in zwei oder drei dünnere Leaflets zerlegen. Reinigen Sie nun den Bezug schläft gründlich.
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