Name: Verfahren für Menschen V. saphena Ex-vivo- Perfusion und Außen Verstärkung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Erfahren Sie die Ex-vivo-Perfusion menschlicher Venen zur Untersuchung von Intima-Hyperplasie und die Wirkung externer Verstärkung. Diese Methode liefert wichtige Erkenntnisse für die Verbesserung von Bypass-Transplantaten.

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Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus dem SNF [31003A-138528], der Octav und Marcella Botnar Stiftung, der Novartis-Stiftung und der Emma Muschamp Stiftung. Wir danken Martine Lambelet, und Jean-Christophe Stehle für ihre ausgezeichnete technische Hilfe.

Die Ethikkommission der Universität Lausanne hat den Experimenten, die in Übereinstimmung mit den in der Deklaration von Helsinki 1975 dargelegten Prinzipien sind, wie im Jahr 1983 für die Verwendung von menschlichen Geweben überarbeitet. 1. Menschen Vena saphena magna Ernte <ol><li> Erhalten Überschuss Segmente von nicht-menschlichen Krampfadern Stammvenen von Patienten, die sich einer Bypass-Operation der unteren Extremitäten für Ischämie. Im Operationssaal, desinfizieren Sie die gesamte Bein mit einer Jod-Lösung und drapieren Sie den Patienten an das Bein von der Leiste bis zum Fuß aussetzen. </li><li> Machen Sie eine Medianschnitt von der Leiste bis zum Knie (Verlassen der Hautteil unterbrochen). </li><li> Ernten Sie die Vena saphena magna mit einem Stiel des umliegenden Gewebes (no-touch-Technik). Sichere Seitenäste der Venen mit 4-0 Seidenkrawatten. Mindestens 9 cm lang Überschuss Segment der Vena saphena magna, mit einem Außendurchmesser von 2,5-4 mm sofort bei 4 ° C in einem RPMI-1640-Glutamax Medium mit 12,5% fötalem Kälberserum und bringen sie zum Labor. </li></ol> 2. EVPS Design- <ol><li> Bauen Sie die in Abbildung 1 dargestellten allgemeinen Ausrüstung. Autoklav alle Geräte und halten alle Komponenten unter sterilen Bedingungen. Darüber hinaus muss das System ist wasserdicht und hat keine Chemikalien in das Medium austritt. Verwenden Polymethacrylat- Methyl (PMMA-GS) für die Abdeckung. Stahl (X5 Cr Ni 18 10) und Polyoxymethylen Kunststoff (POM), wie die Vene Unterstützung. </li><li> Entwerfen der Perfusionskammer der gewünschten Geometrie, um die Platzierung der Vene und der Verbindung zu ermöglichen. Sicherstellen, dass die Tiefe (oder Radius bei Verwendung von zylindrischen Aufbau) mindestens 2,5 cm, damit es ermöglicht minimale Biegung und Dilatation des Gefäßes mit konstanter Abdeckung durch das Kulturmedium (1). Dicht ist ein wichtiges Thema und ist der Grund, rechteckige PMMA-GS Bau verwendet wird. </li><li> Gestalten Sie das Venenstütze in die gewünschte geometry. Um Venen Knicken oder über Blähungen zu vermeiden, lassen Längenverstellung durch Drücken oder Ziehen (Schraube nicht zu diesem Zweck verwendet werden, da die Vene würde zusammen mit der Schraube gedreht werden). HINWEIS: Eine vollständige Stahlstange durch 2 verbunden Schiebe L-förmigen Stücke, die die Vene 2 Zylinder unterstützen (5 mm Durchmesser, das Schiff passen) und die Vene (Abbildung 1B und 2) wird hier verwendet. </li><li> Entwerfen der Drucksäule, so daß die &quot;Ruhedruck&quot; an das System angelegt ist: p = 0-10 = hx ρ · g, wobei p = Druck (N / m 2 Pa) h = Höhe der Flüssigkeitssäule (m) ρ = Dichte der Flüssigkeit (kg / m 3) und g = Gravitationskonstante (9,81 m / s 2). Design vier Verbindungskanäle, von oben nach unten: Druck ausüben, für den Austritt (aus der Vene), den Zufluss (auf die Vene) und Mediumwechsel zu ermöglichen. </li><li> Bereiten Sie das Medium. Basierend auf früheren Studien 5,11-14, wählen Sie RPMI-1640, mit Glutamax ergänzt, 12,5% Fötales Kälberserum und 1% Antibiotikum-Antimykotikum-Lösung (10.000 U / ml Penicillin G, plus 10 mg / ml Streptomycinsulfat, und 25 mg / ml Amphotericin B, plus 0,5 ug / ml: Gentamycin). Scherspannung (SS) ist durch SS = 4 μQ / π * r 3 Q angegeben ist die Flussrate (ml / s), R der Radius (cm) des Venensegments, und μ ist die Viskosität der Perfusionsmedium. <ol><li> SS modulieren, indem die Viskosität durch Zugabe von 70 kDa Dextran. Messung der Viskosität mit einem Viskosimeter. Hier, addieren 8% 70 kDa Dextran SS 9-15 eingestellt dyn / cm 2. </li></ol></li><li> Stellen Sie die Getriebepumpe, eine pulsatile Nierensignal von 60 Pulsen / min, und eine konstante Amplitude Erzeugen eines unidirektionalen Fluss von 150 ± 15 ml / min, unabhängig von dem Druck in dem System von einem Computer angelegt und kontrolliert zu induzieren. Sicherzustellen, dass die Antriebs Software integriert konstanten Erfassung und Überwachung von Druck, Strömungsgeschwindigkeit, Pulsrate und Signal. Wenn Sie möchten, können eine zweite Pumpe (nicht synchronized), um eine nicht-laminare, turbulente Strömung zu erzeugen. </li></ol> 3. EVPS Versammlung (Abbildung 1) <ol><li> Bevor Sie beginnen, stellen Sie sicher, alle Geräte steril ist. Führen Sie alle folgenden Schritte im Keimfreiheit in einer Steril. </li><li> Legen Sie die Vene in einer Petrischale mit Medium gefüllt. Verwenden Sie ein Skalpell und teilen Sie die Vene in 3 gleich große Segmente. </li><li> Ein Segment in PBS sofort ausspülen. Teilen Sie das Segment in 3 Teile, fix ein in Formalin für Morphometrie. Frieren die beiden anderen für die quantitative Transkript (RT-PCR) und Protein (Western-Blot) Analyse. Diese Segmente als Kontrolle, nicht-durchblutete Vene. </li><li> Verwenden Sie die 2 verbleibenden Segmente für die Perfusion. <ol><li> Sehr leicht zu injizieren Medium in die Vene und bestimmen die normale Strömungsrichtung; in Gegenwart von Ventilen die Vene wird umgekehrt. </li><li> Abdichten der Venen ist von größter Bedeutung für experimentelle Erfolg. Auf Dichtheit prüfen durch Sicherheiten. Sichern Sie alle Lecks mit 6-0 Seidenfäden. </li> &lt;/ Ol&gt; </li><li> Verbinden der Venenabschnitt zwischen den beiden metallischen Zylinder, dessen eines Ende zu einer Zeit (2.3, 1). Sichern Sie sich die Zylinder mit Ethibon 3-0 um die Vertiefungen (Abbildung 1A und B). <ol><li> Legen Sie die gesamte venöse Segment in der Perfusionskammer zuvor mit Medium gefüllt ist. Wiederholen Sie den Vorgang für das zweite Segment. HINWEIS: Eine fehlerhafte Abdichtung der Venen auf den Zylinder wird eine Quelle der Leck zu können, benötigen Reintervention, und das Risiko einer Infektion und experimentellen Ausfall deutlich zu erhöhen. </li></ol></li><li> Zur Verstärkung (Mesh) das zweite Segment, lassen Sie die beiden Zylinder (mit der Vene angebracht) von den L-förmigen Stücke (2.3 und Abbildung 1). <ol><li> Seien Sie sanft und die Vene nicht berühren mit allen Instrumenten. Schieben Sie die erste Masche auf dem Zylinder dann auf die Vene. Ein Push / Pull-Gedränge wird das Netz auf der Vene zu bekommen. </li><li> Sobald das Gitter auf der gesamten Oberfläche der Vene sichern jacketed Vene zu den Zylindern mit Ethibon 3-0. </li><li> Bauen Sie die Vene / Zylinder-Verbindung an die L-förmigen Träger und überträgt es auf die Perfusion Kammer, die zuvor mit Medium gefüllt ist. </li></ol></li><li> Verbinden jedes Metallzylinder (in-und Abfluss) zu einem Y-Verteiler mit Peroxid behandelten Silikonschlauch mit einem Innendurchmesser von 3,2 mm. </li><li> Verbinden der Ausflussteiler mit einem zweiten Y-Verteiler mit der gleichen Art von Schläuchen. Von diesem Y-Splitter, verwenden Sie ein Rohr, um den Druck durch Perfusion beider Schiffe zu messen. Das andere ein in die Kolonne, um einen geschlossenen Schleifensystem (Figur 2) zu bilden. </li><li> Im Inkubator, verwenden Sie eine lange (ein Meter Länge) Rohr, um die Drucksäule mit dem Pumpenkopf zu verbinden. </li><li> Füllen Sie das durch den Anschluss des Pumpenkopfes mit dem Zulauf Y-Splitter mit einem anderen großen Länge Schlauch-Set (Abbildung 1). </li></ol> 4. Veins Perfusion <ol><li> Nach der Montage ist EVPS Completed, füllen Sie die Spalte mit Medium (Aufenthalt unter der Vene Ablaufkanal, damit Nachfüllen). Noch ein Medium in die Spalte, bis das System voll ist. Bewegen ganze System in den Inkubator bei 37 ± 0,1 ° C bei einem pH-Wert gehalten wird konstant bei 7,40 ± 0,01 (unter Verwendung eines CO 2 / pH-Algorithmus auf der Grundlage der Henderson-Hasselbach-Gleichung). </li><li> Bringen Sie die Zahnradpumpe Kopf außerhalb des Inkubators und verbinden Sie es mit der Zahnradpumpe Laufwerk. Schrauben Sie die Stäbe, um die Montage zu sichern. </li><li> Schalten Sie die Pumpleistung, stellen Sie sicher, dass es auf der Driving-Software aktiviert und erhalten Sie 5 min für das Medium, das gleichermaßen in jedem Abteil verteilt werden. </li><li> Um den Druck zu überwachen, verwenden Sie einen arteriellen Leitungsüberwachung. Verbinden der EVPS Druckausgang (es den arteriellen Katheter entspricht), um den Druckwandler mit dem Computer verbunden ist. <ol><li> Sicherstellen, dass das Rohr vollständig mit Medium gefüllt ist und keine Luftblasen enthalten. De-Blase das Kultursystem durch die &quot;arterielle line &quot;Röhre (Abbildung 2). Achten Sie auf die Anzeige und suchen Sie nach einer pulsierenden Niere Signal von 60 Imp / min mit konstanter Amplitude. An diesem Punkt ist der durchschnittliche Druck zwischen 0-10 mm Hg. Wenn der Druck &lt;0, und die Säule schrittweise leert suchen Sie nach einem Leck (Vene Sicherheiten oder unzureichende Abdichtung zwischen der Vene und der Röhre). </li></ol></li><li> Stellen Sie den minimalen Druck bis 6 mm Hg für eine Venentest oder bei 90 mm Hg für eine arterielle Test. Unter diesen Bedingungen gilt für eine Lufteinspritzvorrichtung den erforderlichen Druck auf die Säule und System. </li><li> Ändern das Medium alle 2 Tage durch die Verwendung des Rohres an der Drucksäule verbunden ist. Um Schäden zu vermeiden Druckänderung, öffnen Sie die Spalte Stecker ersten. </li></ol> 5. Abschluss der Perfusion <ol><li> Nach 3 oder 7 Tage der Perfusion: Nehmen Sie die EVPS aus dem Inkubator und demontieren die Venen. Entsorgen Sie die 5 mm proximalen und distalen Venenenden am Gerät angebrachten. Schneiden Sie eine zentrale, 5 mm dick rings von der verbleibenden Segment und fixieren in Formalin (Morphometrie). Frieren Sie die verbleibenden Fragmente und zu Pulver für weitere molekulare Analysen zu reduzieren. </li></ol>

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<li>Longchamp, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+external+mesh+reinforcement+to+reduce+intimal+hyperplasia+and+preserve+the+structure+of+human+saphenous+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The use of external mesh reinforcement to reduce intimal hyperplasia and preserve the structure of human saphenous veins.</a> Biomaterials. 35, 2588-2599 (2014).</li>
<li>Saucy, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+pulsatile+perfusion+of+human+saphenous+veins+induces+intimal+hyperplasia+and+increased+levels+of+the+plasminogen+activator+inhibitor+1%5BTitle%5D)+AND+%22European+Surgical+Research.+Europaische+Chirurgische+Forschung.+Recherches+Chirurgicales+Europeennes%22%5BJournal%5D)">Ex vivo pulsatile perfusion of human saphenous veins induces intimal hyperplasia and increased levels of the plasminogen activator inhibitor 1.</a> European Surgical Research. Europaische Chirurgische Forschung. Recherches Chirurgicales Europeennes. 45, 50-59 (2010).</li>
<li>Dubuis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atorvastatin-loaded+hydrogel+affects+the+smooth+muscle+cells+of+human+veins%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+pharmacology+and+experimental%22%5BJournal%5D)">Atorvastatin-loaded hydrogel affects the smooth muscle cells of human veins.</a> The Journal of pharmacology and experimental. 347, 574-581 (2013).</li>
<li>Deglise, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+connexin43+expression+in+human+saphenous+veins+in+culture+is+associated+with+intimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Increased connexin43 expression in human saphenous veins in culture is associated with intimal hyperplasia.</a> Journal of Vascular Surgery. 41, 1043-1052 (2005).</li>
<li>Muto, A., Model, L., Ziegler, K., Eghbalieh, S. D., Dardik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+vein+graft+adaptation+to+the+arterial+circulation%3A+insights+into+the+neointimal+algorithm+and+management+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Journal+%3A+Official+Journal+of+the+Japanese+Circulation+Society%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of vein graft adaptation to the arterial circulation: insights into the neointimal algorithm and management strategies.</a> Circulation Journal : Official Journal of the Japanese Circulation Society. 74, 1501-1512 (2010).</li>
<li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+murine+intimal+hyperplasia+model+founded+on+a+focal+carotid+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">A simplified murine intimal hyperplasia model founded on a focal carotid stenosis.</a> The American Journal of Pathology. 182, 277-287 (2013).</li>
<li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salvage+treatment+for+venous+aneurysm+complicating+vascular+access+arteriovenous+fistula%3A+use+of+an+exoprosthesis+to+reinforce+the+vein+after+aneurysmorrhaphy%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Vascular+and+Endovascular+Surgery+%3A+the+Official+Journal+of+the+European+Society+for+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Salvage treatment for venous aneurysm complicating vascular access arteriovenous fistula: use of an exoprosthesis to reinforce the vein after aneurysmorrhaphy.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery : the Official Journal of the European Society for Vascular Surgery. 40, 100-106 (2010).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Diese Studie deckt eine Ex-vivo-Perfusion Venensystem (EVPS) zu umfangreichen hämodynamischen Studien in menschlichen Adern durchzuführen. Dieses System ermöglicht Saphenavenen Perfusion unter definierten hämodynamischen Parameter in Abwesenheit erschwerender entzündlichen und Wachstumsfaktoren von zirkulierenden Zellen, die in vivo freigesetzt wird. Somit stellt es ein besseres Verständnis der zugrundeliegenden Bahnen in der Steuerung der IH in menschlichen Venentransplantate 5,11,12,15 bet...

Herz-Kreislauf-Erkrankungen sind die häufigste Ursache von Morbidität und Mortalität in den westlichen Ländern 1. Trotz der Fortschritte in der endovaskulären Behandlungen gemacht, bleibt Bypass-Operation die Hauptstütze der modernen Therapien, also über eine halbe Million Venentransplantate werden jährlich in den Vereinigten Staaten durchgeführt. Trotz jahrzehntelanger Forschung, 30-60% der unteren Extremität Venentransplantate nicht jedoch innerhalb der ersten Jahre durch Intimahyperplasie (IH) 2. Mechanische Kräfte, besonders niedrige Schubspannung (SS) und hohe Wandspannung, sind ausschlaggebend für die Initiierung und Entwicklung dieser hyperplastische Reaktion 3,4. Um dieses Problem zu lösen, wurde eine Ex-vivo-Perfusion Venen-System (EVPS) erzeugt werden, um unter streng kontrollierten hämodynamischen Bedingungen (Druck und Scherbeanspruchung), das Verhalten des menschlichen Stammvenen untersuchen. In dieser Studie, nach dem Einsetzen in die arterielle Zirkulation artigen Hochdruck (Mittelwert = 100 mm Hg) war ausreichend, um prolif stimulierenZusammenarbeit und Migration glatter Muskelzellen in der Intima-Schicht (IH) 5. Säugetierstudien haben die Verwendung von externen Verstärkung als eine effiziente Methode, um die &quot;arterialisierten Vene&quot; unterstützt und wirken der akuten hämodynamischen Veränderungen der Vene Flächen einmal in einem arteriellen Milieu implantiert vorgeschlagen. Die Maschenüberdehnung verhindert, erhöhte Scherspannung und reduzierte Wandspannung und damit IH 6-10. Allerdings sind die zugrunde liegenden Mechanismen und ihre Anwendbarkeit auf die menschliche Venen in die Verbesserung der Durchgängigkeit Bypass noch nicht vollständig charakterisiert. Unsere EVPS wurde verwendet, um zu vergleichen, in der Bedingung imitiert die Änderungen eine Vene Gesichter einmal in einem arteriellen Therapie eingesetzt (hohe Scherbeanspruchung und Druck), die das Verhalten des menschlichen Stammvenen in Abwesenheit und Anwesenheit eines externen makroporöse Polyester Netzschlauch. Durch die Verhinderung der pathologischen Umbau-und IH, das Netz bereitgestellt Beweise für ihre mögliche klinische Effizienz 11 </sup&gt;. Diese Studie 1) stellt ein Modell der ex vivo Perfusion menschlichen Stammvenen unter kontrolliertem Druck und Scherspannung 2) zeigt, dass externe makroporöse Polyester-Mesh reduziert IH und liefert wichtige Informationen für die mögliche klinische Anwendung.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 - Glutamax</td><td>Life Technologies</td><td>61870-010</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin/Fungizone</td><td>Bioconcept</td><td>4-02F00-H</td><td></td></tr><tr><td>Dextran von Leuconostoc spp. 500 g</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31390</td><td></td></tr><tr><td>Tampon PBS CHUV pH 7,1-7,3 1 L</td><td>Laboratorium und Grosse Apotheke Dr. G. Bichsel AG</td><td>100 0 324 00</td><td></td></tr><tr><td>Einbettungsmedium für Kryosektionen - Tissue-Tek OCT Compound</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-373-65</td><td></td></tr><tr><td>Silikonschlauch (Peroxid) L/S 16 (96400-16 ) - 7,5 m</td><td>Idex Gesundheit & Gesundheit Science GMBH</td><td>MF0037ST</td><td></td></tr><tr><td>Y-Verteiler&nbsp;</td><td>Idex Gesundheit & Gesundheit Science GMBH</td><td>Y-Verbinder</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Kulturschale</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS430165-100EA</td><td></td></tr><tr><td>15 ml Falcon Röhrchen</td><td>BD Bioscence</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Falcon Röhrchen</td><td>BD Bioscence</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Zahnradpumpe - Reglo-Z</td><td>Idex Gesundheit & Gesundheit Science GMBH</td><td>SM 895&nbsp;</td><td>&nbsp; App-Nr 03736-00194</td></tr><tr><td>Pumpenkopf</td><td>Idex Health & Science GMBH</td><td>MI0008&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Monitoring Kit TRANSPAC IV</td><td>icumedical</td><td>011-0J736-01</td><td></td></tr><tr><td>20 ml Spritzen</td><td>B. Braun Medical SA</td><td>4612041-02</td><td></td></tr><tr><td>Etibon 3-0 FS-2</td><td>Ethicon- Johnson& Johnson</td><td>EH7346H</td><td></td></tr><tr><td>Mesh ProVena 6-8 mm</td><td>B. Braun Medical SA</td><td>1105012-14</td><td></td></tr><tr><td>NaCl: Perfusion in Natriumchloridlösung 0,9 % (100 ml)</td><td>B. Braun Medical SA</td><td>534534</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Standard Drive</td><td>Cole-Parmer Instrument Co</td><td>7521-10</td><td></td></tr><tr><td>Erfassungskarte</td><td>National Instruments</td><td>PCI-6024 E</td><td></td></tr><tr><td>Durchflussmesser Modul</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td>TS410 und T402</td><td></td></tr><tr><td>Absperrhahn mit 3-fach</td><td>BD Connexta Luerlock</td><td>394600</td><td></td></tr><tr><td>Millex Filter</td><td>Milian</td><td>SE2M229I04</td><td></td></tr></tbody></table>

verfahren für menschen v. saphena ex-vivo- perfusion und außen verstärkung

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Die Hauptstütze der modernen Therapien für umfangreiche arterielle Verschlusskrankheit ist venösen Bypass. Allerdings ist seine Haltbarkeit durch Intimahyperplasie (IH), die schließlich führt zu Gefäßverschluss und Transplantatversagen bedroht. Mechanische Kräfte, besonders niedrige Schubspannung und hohe Wandspannung, sind Gedanken zu initiieren und diese zellulären und molekularen Veränderungen zu erhalten, aber ihre genaue Beitrag bleibt entwirrt werden. Um wahlweise die Rolle von Druck und Scherbelastung auf die Biologie der IH zu bewerten, wurde eine Ex-vivo-Perfusion System (EVPS) geschaffen, um Segmente der menschlichen Stammvenen unter arterieller Therapie (hohe Schubspannung und Hochdruck) durchströmen. Weitere technische Innovationen erlaubt den gleichzeitigen Durchblutung der beiden Segmente aus der gleichen Ader, eine mit einem externen Netz verstärkt. Venen wurden mit einem No-Touch-Technik geerntet und sofort in das Labor für die Montage in der EVPS übertragen. Ein Segment des frisch isolATED Vene wurde nicht durchblutet (Kontrolle, Tag 0). Die beiden anderen Segmente wurden für bis zu 7 Tagen durchströmt, wobei ein vollständig mit einer 4 mm (Durchmesser) äußere Maschen geschützt. Der Druck, die Strömungsgeschwindigkeit und Pulsrate wurden kontinuierlich überwacht und eingestellt, um die in die Oberschenkelarterie vorherrschenden hämodynamischen Bedingungen nachzuahmen. Nach Beendigung der Perfusion wurden die Venen abmontiert und zur histologischen und molekularen Analyse verwendet. Unter Ex-vivo-Bedingungen, Hochdruck-Perfusion (arteriell, Mittelwert = 100 mm Hg) ist ausreichend, IH und Umbau der menschlichen Adern zu erzeugen. Diese Änderungen sind in der Gegenwart eines externen Polyesternetz reduziert.

Die EVPS bietet ein wertvolles Werkzeug, um eine unabhängige Beurteilung der hämodynamischen Kräfte auf die menschliche Vena saphena-Transplantate Umbau-und IH. Abbildung 1 zeigt die Perfusionskammer und die Vene Unterstützung. In den 1A und B, die Vene Träger vor (1A) und nach (Abbildung 1B) Anordnung bzw. abgebildet ist. Es ist zusammengesetzt (von oben nach unten) der Ebene 1 Edelstahlrohr Mess 9 cm, die ...

Die Mechanismen, die zur Entwicklung von Intimahyperplasie (IH) und Vene Transplantatversagen sind immer noch wenig verstanden. Diese Studie beschreibt eine Ex-vivo-System für die menschliche Venen unter kontrollierten Durchfluss und Druck durchströmen. Darüber hinaus die Effizienz der externen Mattenbewehrung zur Begrenzung der Entwicklung der IH bewertet.

Verfahren für Menschen V. saphena Ex-vivo- Perfusion und Außen Verstärkung

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, den Einfluss von Druck, reinem Stress und äußerer Verstärkung auf die menschliche Intimalhyperplasie zu untersuchen. Dies wird durch die gleichzeitige Hochdruckperfusion von zwei Segmenten aus derselben Ader erreicht. Während ein Segment durch ein externes Netz verstärkt wird, werden die Venensegmente anschließend für die histologische und molekulare Analyse in Abschnitte geschnitten.Diese Analysen werden verwendet, um die Wirkung einer externen Verstärkung auf die Intimahyperplasie zu bewerten. Die Ergebnisse zeigen, dass eine externe Verstärkung die Intimahyperplasie reduzieren kann, die normalerweise nach sieben Tagen Perfusion beobachtet wird. Das Seno van Bypass-Transplantat ist eine der Behandlungen der Wahl bei Patienten mit peripherer arterieller Verschlusskrankheit.Die Entwicklung einer t-Hyperplasie, die zum Versagen des Transplantats führt, ist jedoch der wichtigste limitierende Faktor bei solchen Handwerken. Dieser Umbau ist auf die Anpassung des Transporters an die arterielle Umgebung zurückzuführen, um neue Therapien zu entwickeln. Das Verständnis der molekularen Mechanismen, die an diesem Phänomen beteiligt sind, ist von entscheidender Bedeutung.Aus diesem Grund haben wir ein ex vivo-Modell der Perfusion entwickelt. Einer der Hauptvorteile unseres Systems besteht darin, dass es die Untersuchung hämodynamischer Parameter ohne andere verwirrende Immun- oder endokrine Faktoren ermöglicht. Ein MD-Doktorand aus unserem Labor wird die Technik demonstrieren.Humane Venenproben werden von Patienten entnommen, die sich einer Bypass-Operation der unteren Gliedmaßen unterziehen. Die Vene wird entnommen und unter sterilen Bedingungen ins Labor gebracht und unter eine Laminar-Flow-Haube gelegt. Die Mindestgröße solcher Venen beträgt neun Zentimeter Länge.Der Innendurchmesser liegt bei über 2,5 Millimetern und der Außendurchmesser bei über vier Millimetern. Die Ader ist in drei Teile unterteilt. Sogar die entnommenen Segmente werden in eiskalten RPMI 1640 Glut Max-Medien gelagert, die mit 12,5 % FBS ergänzt werden, spülen Sie ein Segment in PBS.Es ist die Steuerung wieder in drei Teile unterteilt. Fixieren Sie einen Teil in Formin für Morpho und frieren Sie die anderen beiden Teile für die molekulare Analyse ein. Das EVPS muss aus wasserdichtem Material bestehen, das keine Chemikalien wie Polymethylacryl, Methylpolyoxyethylen und Stahl auslaugt.Die Perfusionskammer muss mindestens 2,5 Zentimeter tief sein, um eine minimale Beugung und Erweiterung des Gefäßes zu gewährleisten und einen einfachen Medienwechsel zu ermöglichen. Die Venenstütze ist ein Stahlstab, der von oben nach unten mit L-förmigen Befestigungen verbunden ist. Die Verbindungskanäle an der Drucksäule ermöglichen die Einstellung des Drucks in und den Abfluss zur Vene sowie den Medienwechsel zur Bestimmung der normalen Strömungsrichtung.Die beiden verbleibenden Segmente für die Perfusion werden schonend mit dem Medium injiziert. Wenn das Segment über Ventile verfügt, ist der Durchfluss langsamer. Die Vene muss im EVPS umgekehrt werden, damit die Ventile den Durchfluss nicht behindern.Verbinden Sie die Ader mit den beiden metallischen Zylindern. Ein Ende nach dem anderen. Befestigen Sie die Zylinder mit Vicryl drei oh um die Vertiefungen herum mit einem festen Knoten.Übertragen Sie dann die Vene in die mit Medium beladene Perfusionskammer. Befestigen Sie für das dritte Venensegment ein Ende der Vene wie zuvor gezeigt am Zylinder. Schieben Sie dann das Netz vorsichtig auf die Vene.Befestigen Sie dann das Netz und die Vene mit Nähten auf dem Zylinder. Passen Sie abschließend die Maschenlänge an und befestigen Sie das andere Ende der Vene und das Netz am Zylinder. Verschieben Sie die Baugruppe in die zweite Perfusionskammer.Das EVPS wird in einem geschlossenen Kreislauf mit Silikonschlauch montiert. Verbinden Sie jeden Ausflusszylinder mit einem Y-Splitter unter Verwendung eines Segments aus peroxidbehandeltem Silikonschlauch. Machen Sie dasselbe für jeden Zufluss-Metallzylinder.Verbinden Sie als Nächstes den Abflusssplitter mit einem zweiten Y-Splitter. Von diesem Y-Splitter. Verbinden Sie einen Ausfluss mit dem Rohr, das mit dem Druckmessumformer verbunden ist, und um den anderen Ausfluss mit der Drucksäule zu verbinden, verwenden Sie ein ein Meter langes Rohr, um die Drucksäule mit der Pumpe zu verbinden.Schließen Sie die Einrichtung ab, indem Sie die Pumpe an den Zufluss y Splitter anschließen. Verbinden Sie mit einem weiteren Meter Schlauch die restlichen Schläuche mit der Drucksäule. Der unterste Kanal dient für den Medienwechsel.Füllen Sie nach dem Zusammenbau des EVPS die Säule mit Medium bis knapp unter den Venenabflusskanal. Schieben Sie das System nun in den Inkubator, der mit Kohlendioxid auf 37 Grad Celsius eingestellt ist. Halten Sie den pH-Wert außerhalb des Inkubators konstant bei 7,4.Befestigen Sie die Pumpengetriebeköpfe am Zahnradantrieb, um den Druck zu überwachen. Verbinden Sie den Druckausgang des EVPS mit dem Druckmessumformer. Vergewissern Sie sich, dass das Rohr vollständig gefüllt ist und keine Blasen aufweist.Über die Computersoftware wird ein pulsierendes Kardiosignal mit 60 Impulsen pro Minute mit konstanter Amplitude aufgebaut, die die Getriebepumpe selbstständig steuert. Der resultierende Durchfluss beträgt etwa 160 Milliliter pro Minute. Der Druck wird unabhängig von einer Kreiselpumpe in Reihe mit einem einstellbaren Druckregler eingestellt und geregelt, der vom Computer gesteuert wird.Beenden Sie nach drei bis sieben Tagen die Perfusion für jedes durchblutete Segment. Entfernen Sie fünf Millimeter von jedem Ende, um den ligierten Teil der Venen zu entsorgen. Schneiden Sie dann einen fünf Millimeter langen Ring zur Fixierung aus dem mittleren Abschnitt der Vene.Frieren Sie die restlichen Fragmente für die molekulare Analyse ein. Betten Sie das dritte Segment in Formin für die Histologie und molekulare Analyse ein. Nach sieben Tagen Hochdruckperfusion wurden Venenschnitte für die histologische Analyse vorbereitet.Unter allen Bedingungen zeigte die h- und e-Färbung Kerne von Endothelzellen, die das Lumen und die Kerne der SMCs in der Medienschicht auskleiden. Als das Gewebe mit V-Gel gefärbt wurde, um Elastin zu betrachten, zeigten perfundierte Venen eine Verdickung der Intima, eine pathologische äußere Umgestaltung und eine Medienausdünnung war offensichtlich. Die Masson-Trichom-Färbung zeigt, dass nur eine von drei Muskelschichten überlebte und sich in der inneren Schicht angesammelte glatte Muskelzellen ansammelte.Im Gegensatz dazu bewahrte die äußere Verstärkung der Vene die SMC-Verteilung und die Medienstruktur. Diese Technik erfordert eine rigorose Sepsis. Einmal gemeistert, kann es mit diesem System in weniger als zwei Stunden durchgeführt werden. Andere Bedingungen, wie z.B. turbulente Strömungen, können getestet werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten, wie z.B. die Effizienz der Netzverstärkung bei nicht-lanaren Strömungen.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Kapillaroskopie ist eine nicht-invasive, relativ kostengünstige Methode zur direkten Visualisierung der Mikrozirkulation. Der Unterarm Blutfluss Technik bietet akzeptiert nicht-invasive Maßnahmen der endothelialen Funktion.

Non-invasive Beurteilung der mikrovaskulären und Endothelfunktion

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Hier stellen wir ihnen ein Trainings- und Testsystem vor, bei dem ein Auszubildender die manuelle Gefäßrekonstruktion in vitro individuell mit einer magnetischen Verankerungstechnik durchführen kann. Das System kann auch verwendet werden, um die Qualität der Rekonstruktion zu testen.

Ein Trainings- und Testsystem zur Durchführung der Gefäßrekonstruktion in vitro

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Behandlung der großen Stammvene (GSV) und der kleinen Stammvene (SSV), die von schwerem pathologischen Reflux betroffen sind, mit einem originalen sklerosierenden und embolisierenden Cyanacrylat-basierten Klebstoff aus N-Butylcyanacrylat und Methacryloxysulfolan (NBCA + MS).

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Traditionell wird die tiefe Venenthrombose (DVT) der unteren Extremitäten durch radiologisch durchgeführten venösen Duplex-Ultraschall diagnostiziert. Anbieter, die entsprechend in fokussiertem Point-of-Care-Ultraschall (POCUS) geschult sind, können bei kritisch kranken Patienten eine schnelle Untersuchung am Krankenbett mit hoher Sensitivität und Spezifität durchführen. Wir beschreiben die Scantechnik für die fokussierte POCUS DVT Untersuchung der unteren Extremitäten.

Point-of-Care-Ultraschall-Screening für proximale tiefe Venenthrombose der unteren Extremität

Wir beschreiben ein Protokoll zur Isolierung und Kultivierung humaner Endothelzellen der Vena saphena (hSVECs). Wir stellen auch detaillierte Methoden zur Erzeugung von Scherspannung und Dehnung zur Verfügung, um mechanische Spannungen in hSVECs zu untersuchen.

Humane Endothelzellisolierung der Vena saphena und Exposition bei kontrollierter Scherspannung und Dehnung

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Technik der Subnormothermic<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Leberperfusion für die Lagerung, Bewertung, Reparatur von Marginal Lebertransplantate

Ex-vivo-Lung Perfusion (EVLP) konnten Lungentransplantation beim Menschen leichter, indem du die Fähigkeit, Organe zu bewerten und zu erweitern den Spenderkreis zur Verfügung stehen. Hier beschreiben wir die Entwicklung einer Ratte EVLP Programm und Verfeinerungen, die für ein reproduzierbares Modell für zukünftige Erweiterungen zu ermöglichen.

Methode Isolated<em&gt; Ex vivo</em&gt; Lung Perfusion in einem Rattenmodell: Lehren aus Entwicklung einer Ratte EVLP Programm gelernt

Erfahren Sie die Ex-vivo-Perfusion menschlicher Venen zur Untersuchung von Intima-Hyperplasie und die Wirkung externer Verstärkung. Diese Methode liefert wichtige Erkenntnisse für die Verbesserung von Bypass-Transplantaten.

Verfahren für Menschen V. saphena Ex-vivo- Perfusion und Außen Verstärkung

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