Name: Bodenproben und Isolierung von Nematoden (Steinernematidae, Heterorhabditidae) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Lernen Sie die Isolierung entomopathogener Nematoden aus Bodenproben mit Insektenköderung und modifizierter White-Falle. Diese Methoden ermöglichen die erfolgreiche Etablierung von Nematodenkulturen für Laborstudien.

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Die Autoren möchten Vergangenheit Mitglieder der Auf-Labor bedanken: Sam-Kyu Kim, Kathryn Plichta und Victoria Miranda-Thompson für ihre Beiträge zur Verbesserung der viele dieser Protokolle. Wir erkennen die National Science Foundation Förderung (Zuschüsse IOS-0840932 und IOS-0724978) auf SP Lager.

1. Bodenprobenentnahme <ol><li> Betrachten Sie die eine Mindestfläche von 2 - 4 m 2 für jede Probennahmestelle. </li><li> Sammeln von Bodenproben in einer Tiefe von mindestens 15 cm (Fig. 4). </li><li> Nehmen Sie sich mindestens fünf Stichproben in diesem Bereich. </li><li> Nehmen Sie 3 Teilproben pro Probe. Je nach Ziel der Studie entweder kombinieren die Teilstichproben oder bewahren Sie diese getrennt. </li><li> Platzieren Sie jede Probe in einem Plastikbeutel. Betrachten Doppel Absacken zu Austreten von Proben (Abbildung 4) zu vermeiden. </li><li> Label-Proben mit einem wasserfesten Filzstift. Fügen Sie die folgenden Informationen von jeder Probenahmestelle: Site-Informationen (einschließlich Ort / Raum / Site-Namen und GPS-Koordinaten-Informationen), Datum, Lebensraum, verbunden Vegetation, Temperatur, Höhe, usw. HINWEIS: Falls zutreffend, sammeln und / oder aufzeichnen die Anwesenheit von Insekten oder anderen Wirbellosen mit der Probe zur späteren Identifizierung gesammelt. Sie können potenzielle natur stellenal EPN Gastgeber. </li><li> Saubere Sammel Werkzeuge zwischen den Proben durch gründliches Waschen mit Wasser und / oder Desinfektions sie mit 70% Ethanol oder 0,5% Bleichmittel-Lösung. </li><li> Halten Proben in einem Kühler (8-15 ° C) während des Transports zum Labor. </li><li> Nehmen Sie einen Teil der Bodenprobe für die Analyse von Informationen über Bodenbeschaffenheit, Beschaffenheit, Feuchtigkeit, elektrische Leitfähigkeit oder andere gewünschte Bodenparameter zu erhalten. </li></ol> . 2 Nematode Isolierung aus Bodenproben: Insect-Hetze Technik <ol><li> Entfernen Sie alle Fremdkörper (dh., Steine, Holzstücke oder Rinde, Blätter, etc.) Mit Ihren Proben gesammelt, um eine Kontamination mit Mikroorganismen saprobischen vermeiden. </li><li> Fügen Sie Wasser, um den Boden zu befeuchten und die Bewegung der Nematoden zu erleichtern. HINWEIS: Verwenden Sie eine Sprühflasche, um die Feuchtigkeit der Erde langsam zu erhöhen. </li><li> Es werden ca. 200 bis 250 ml feuchten Boden an einem sauberen Kunststoffbehälter mit einem Deckel. </li><li> In Insektenköder. Betrachten 5 bis 10 Insekten an der Bodenoberfläche jeder Probe (Abbildung 5). </li><li> Bedecken Sie den Behälter mit einem Deckel und schalten Behälter auf den Kopf. </li><li> Aufrechterhaltung Behälter im Dunkeln bei RT (es mindestens 22 - 25 ° C). </li><li> Prüfen Behälter alle 2 - 3 Tage und entfernen abgestorbene Insekten. HINWEIS: fügen Sie zusätzliche gesunde Insekten zu jedem Behälter zur weiteren Hetze der Bodenprobe. </li><li> Entfernen tote Insekten aus den Behältern. HINWEIS: Cadavers mit einem braunen oder ockerfarbenen Färbung in der Regel durch steinernematids parasitiert, während ziegelrot bis dunkelviolett Leichen werden von heterorhabditids parasitiert. </li><li> Spülen Leichen in sterilem Wasser. </li><li> Zeigen Leichen in einem modifizierten Weiß Falle zur Rückgewinnung von Nematoden Nachkommen (siehe Verfahren unten). </li></ol> . 3 Nematode Erholung von Infected Cadavers: Modifizierte Weiß-Falle <ol><li> Setzen Sie die Spitze einer 50 (oder 60) mm Durchm. Petrischale in eine größere Schale (100 mm). </li><li> Stellen Sie eine SündeGLE kreisförmigen Filterpapier (Whatman Nr. 1) in der kleineren Schale. </li><li> Platz Leichen auf dem Filterpapier des kleineren Gericht dafür, dass Leichen nicht gegenseitig berühren, um Verunreinigungen zu vermeiden. </li><li> Füllen Sie den äußeren (größeren) Petrischale mit ca. 20 ml steriles destilliertes Wasser. Kein Wasser in der Schale, die die Leichen hält nicht hinzu. </li><li> Decken Sie die große Petrischale und seinen Inhalt mit dem Deckel (Abbildung 6). </li><li> Beschriften Sie Gerichte entsprechend. Fügen Sie die folgenden Informationen: Name Nematode (Art / Isolat), Infektion (Datum Infektion wurde gesetzt) ​​und Trap-Datum (das ist das Datum, die Falle aufgestellt). </li><li> Halten Falle bei RT bis Entstehung von Infektionsjugendstadien (IJ) auftritt. 25 Tage abhängig von der Nematodenarten und / oder Belastung betrachtet - Dieser Prozess kann zwischen 10 nehmen. </li><li> Ernte mit Wasser IJs durch Entfernen des größeren Spiegel der Falle und gießt Wasser mit Nematoden in ein Becherglas. </li><li> Nematoden ermöglichen, um den Boden der Dekantier-bEaker. Dieser Vorgang kann einige Minuten dauern. </li><li> Gießen Sie Wasser sorgfältig darauf achten, Nematoden im Boden des Bechers zu bleiben. </li><li> Nematoden spülen, indem mehr Wasser und ermöglicht Nematoden zu dekantieren. 3-mal, bis das Wasser ist sauber - Dieser Schritt kann 2 wiederholt werden. </li><li> Platzieren Nematodensuspension in einer Gewebekulturflasche (250 ml). Halten Konzentration der Suspension auf 1000 - 3000 Nematoden / ml. </li><li> Speicher Kolben mit Nematodensuspension in einem Kühlraum oder Brutschrank zwischen 10 - 20 ° C. Hinweis: Überprüfen Sie gespeichert Kolben periodisch Haltbarkeit von EPN ist variabel. Normalerweise steinernematids kann für 6 gespeichert werden - 12 Monate ohne die Notwendigkeit von Subkultur, während heterorhabditids kann mehr regelmäßige Kontrolluntersuchungen erforderlich. </li></ol>

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</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Dieser Nachweis ist der erste von zwei Darstellungen, die eine Reihe von Techniken, die häufig zur Untersuchung EPN und ihrer symbiotischen Bakterien verwendet werden, zu beschreiben. Diese Techniken stellen wichtige Schritte für die erfolgreiche Etablierung von EPN Kulturen im Labor und bilden auch die Grundlage für andere Biotests, die EPN als Modellorganismen für die Forschung zu verwenden. Verschiedene Bodenuntersuchungen von EPN haben gezeigt, dass die Größe und Verteilung können über J...

Viele Nematoden mit Insekten verbunden, und ihre Wirt-Interaktionen reichen von Vorteil für schädlich. Hierbei konzentrieren wir uns auf eine Gruppe von Nematoden, die Krankheitserreger von Insekten sind, die auch als Nematoden (oder EPN) bekannt. Zwei Familien Nematoden gehören zu dieser Gruppe von Nematoden: Steinernematidae und Heterorhabditidae 11,13. Die pathogene Wirkung ist in der Tat durch ihre Interaktion mit fakultativ anaeroben Darmbakterien (Bakterien Xenorhabdus assoziieren mit steinernematids und Bakterien Photorhabdus assoziieren mit heterorhabditids) 2 erlassen. Die Bakterien werden von einem Host zu einem anderen Insekt von der einzigen frei lebenden Nematoden-Bühne, der dritten Stufe infektiöse juvenile (auch als dauer jugendlich, Jugend-oder Infektions IJ bekannt), die in der Erde lebt vektorisiert. Einmal in der Insekten, die Nematoden lösen die Bakterien in die Hämolymphe der Insekten, die die Insekten-Wirts durch massive Blutvergiftung zu töten. Die Bakterien auchdes Insekts Gewebe abbauen und sich der Nematoden Nahrungsquelle, so dass sie, um zu reifen und sich zu vermehren. Üblicherweise werden eine oder zwei Generationen wachsenen Nematoden im Insekten kadaver hergestellt. Die Nachkommen der letzten Erwachsenengeneration reassoziiert mit ein paar Bakterienzellen in eine Art und Weise zu spezialisieren, als ihre bisherigen Ernährungs Beziehung, und pflegen diese Zellen im Darm, als sie aus bewegen sich von der Insekten-Kadaver in den Boden, wo sie andere Insekten parasitieren zu erwarten 6,11,14 (Abbildung 1). Seit ihrer Entdeckung im Jahre 1927, EPN wurden als wertvolle Alternativen zu chemischen Pflanzenschutzmitteln, da sie eine Vielzahl von Insekten, die landwirtschaftliche Schädlinge 3,4,5 sind parasitieren. Doch in den letzten zwei Jahrzehnten, diese Nematoden und ihre symbiontischen Bakterien wurden als formbar Modellsystem zur Untersuchung der biologischen, ökologischen und evolutionären Aspekte der Wirt-Mikroben-interactio anerkannt14 ns. Das Ziel dieser Präsentation ist es, die Methoden und Techniken, die am häufigsten für Bodenproben und die Isolierung von EPN eingesetzt zu zeigen. Eine Vielzahl von Werkzeugen zur Verfügung und kann für das Sammeln von Bodenproben verwendet werden, einschließlich: Boden Loten, Spachtel, post-Erdbohrer, Schnecken, Probenahmerohre, Handschaufeln, unter anderem (Abbildung 2). Je nach Zweck der Untersuchung können zwei Verfahren für die Probenahme berücksichtigt werden: a) geschichtet, b) Zufallsauswahl (Fig. 3). Die geschichtete Stichprobe wird üblicherweise als Teil einer intensiven Studie in einem bestimmten Bereich oder abgegrenzt über einen bestimmten Zeitraum verwendet wird. Im allgemeinen wird ein transect abgegrenzt und Bodenproben werden in festgelegten Abständen in der transect über einen Zeitraum (3A) 15 genommen. Die Zufallsstichprobe wird in der Regel eingesetzt, wenn die sich auf ein weites Gebiet. Dieses Probenahmestrategie ist für die Untersuchung der Vielfalt der EPN f verwendetrom einen großen geographischen Bereich oder die Region (3B) 12. Je nach Schwerpunkt der Studie, die eine breite Palette von Höhen-, Boden-Texturen und Lebensräumen (z. B.., Feldern, Wäldern, Wiesen, Parks, Stränden, Uferbereiche, etc.) kann eine Reihe von Faktoren berücksichtigt werden. Wir zeigen die Insekten-Hetze Technik, die ursprünglich von Bettwäsche und Akhurst 1 beschrieben wurde, und stellt eine einfache und selektive Alternative für die Wiederherstellung EPN von Bodenproben. Dies ist ein selektives Verfahren, das auf der Prämisse, dass die Nematoden (IJ-Stufe) wird zu einem Insektenwirtszogen werden und parasitieren sie basiert. Diese Technik kann auch zur Isolierung von anderen Insektenpathogene wie Pilze, Bakterien und 8,10 zu berücksichtigen. Wir haben auch die modifizierte Weiß-Trap-Technik, die für das Abrufen von Nematoden Nachkommen von infizierten Insekten 7,14 Hosts verwendet wird, zu demonstrieren. Dies ist eine mühe erfüllthod, die den Vorteil von Abrufen einer &quot;sauberen&quot; Nematoden Nachkommen frei von Schmutz von den erniedrigenden Insektenkadaver bietet. Schließlich sind die beschriebenen und in diesem Artikel gezeigt Techniken entsprechen denen konzipiert und / oder im Labor als auch solche mit verschiedenen Kollegen und Mitarbeitern beschrieben.

<table><tbody><tr><td>Galleria mellonella</td><td>Timberline</td><td>http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG</td><td>Für die Insektenködertechnik</td></tr><tr><td>Filterpapier, 55 mm Grade 1 Cellulose</td><td>Whatman/VWR</td><td>28450-048</td><td>Infektionskammer und weiße Falle</td></tr><tr><td>60 x 15 mm Petrischalen</td><td>VWR</td><td>25384-092</td><td>Infektionskammer und weiße Falle</td></tr><tr><td>100 x 15 mm Petrischalen</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>Infektionskammer und weiße Falle</td></tr><tr><td>ZIPloc Plastiktüten</td><td>Ace Hardware oder örtlicher Baumarkt</td><td></td><td>Bodenprobenahme</td></tr><tr><td>Mechanischer Pipettierer P1000, P200 ml</td><td>VWR</td><td>89130-562; 89130-566&nbsp;</td><td>Infektionskammer und Anordnung der weißen Falle</td></tr><tr><td>Pippetor Spitzen 1000ml, 200 ml</td><td>VWR</td><td>16466-004 ; 53510</td><td>Infektionskammer und weiße Falle Baugruppe</td></tr><tr><td>Bleach</td><td>Ace Hardware oder örtlicher Baumarkt</td><td></td><td>Bodenprobenahme, Desinfektion</td></tr><tr><td>Natriumhypochlorit</td><td>Ace Hardware oder örtlicher Baumarkt</td><td></td><td>Bodenprobenahme, Desinfektion</td></tr><tr><td>70% Ethylalochol</td><td>AAPER 17212945</td><td></td><td>Bodenprobenahme, Desinfektion</td></tr><tr><td>Schaufeln</td><td>Ace Hardware oder örtlicher Baumarkt</td><td>N/A</td><td>Bodenprobenahme</td></tr><tr><td>Rohrförmiger Bodenprobenehmer</td><td>Accuproducts</td><td></td><td>Bodenprobenahme</td></tr><tr><td>Bodensonde, langer Griff</td><td>Nupla&nbsp;</td><td>PRB4T 69401 Classic</td><td>Bodenprobenahme</td></tr><tr><td>Maßband</td><td>Ace Hardware oder örtlicher Baumarkt</td><td></td><td>Bodenprobenahme</td></tr><tr><td>Markierungsband, verschiedene Farben</td><td>Ace Hardware oder örtlicher Baumarkt</td><td></td><td>Bodenprobenahme</td></tr><tr><td>Gewebekulturflaschen</td><td>VWR</td><td>Falcon, 29185-304&nbsp;</td><td>Weiße Falle, Sammlung von EPN</td></tr><tr><td>Spritzflaschen, Polyethylen, Weithalsflaschen</td><td>VWR</td><td>16650-107</td><td>Weiße Siphon, Sammlung von EPN</td></tr></tbody></table>

bodenproben und isolierung von nematoden (steinernematidae, heterorhabditidae)

Soil Sampling and Isolation of Entomopathogenic Nematodes (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Nematoden (aka EPN) stellen eine Gruppe von Bodenbewohner-Nematoden, die eine Vielzahl von Insekten parasitieren. Diese Nematoden gehören zu zwei Familien: Steinernematidae und Heterorhabditidae. Bisher wurden mehr als 70 Arten in der Steinernematidae beschrieben worden, und es sind etwa 20 Spezies in der Heterorhabditidae. Die Nematoden haben eine Partnerschaft mit mutualistic Enterobacteriaceae Bakterien und zusammen sind sie als starke insektizide Komplex, der eine Vielzahl von Insektenarten tötet handeln. Hierbei konzentrieren wir uns auf die am häufigsten verwendeten Techniken zum Sammeln von EPN Boden betrachtet. Der zweite Teil dieser Präsentation konzentriert sich auf die Insekten-Hetze Technik, einer weit verbreiteten Ansatz für die Isolierung von EPN aus Bodenproben, und die modifizierte Weiß-Trap-Technik, die für die Wiederherstellung dieser Nematoden aus infizierten Insekten verwendet wird. Diese Methoden und Techniken sind wichtige Schritte für die erfolgreiche Etablierung von EPN Kultnahmen im Labor und auch die Grundlage für andere Biotests, die diese Nematoden als Modellorganismen für die Forschung in anderen biologischen Disziplinen zu betrachten. Die in dieser Präsentation gezeigten Techniken entsprechen denen, durchgeführt und / oder entworfen von Mitgliedern der SP Auf Labor sowie diejenigen, die von verschiedenen Autoren beschrieben.

Bodenprobenentnahme Dritten Stufe infektiösen jungen EPN sind die einzigen frei lebenden Stadien in diesen Nematoden-Lebenszyklus, die im Boden (Abbildung 1) befinden. Daher sammeln Bodenproben ist eine sehr effiziente Methode, um diesen Nematoden erholen. 4 zeigt ein Bodenprofil, der die Tiefe an dem Proben zu entnehmen. Erhaltung der Feuchtigkeit einer Probe ist ein Schlüsselfaktor für das Überleben der Nematoden. Folglich ist es wichtig, Bodenproben in Ku...

Nematoden sind Bodenbewohner-Rundwürmer, die eine Vielzahl von Insekten parasitieren. Wir zeigen, Stichprobenverfahren zur Isolierung dieser Nematoden aus dem Boden mit zwei Techniken: das Insekt Hetze und die modifizierte Weiß Falle, für die Gewinnung von Nematoden aus Bodenproben und infizierten Insektenkadaver auf.

Bodenproben und Isolierung von Nematoden (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Entomopathogenic nematodes (a.k.a. EPN) represent a group of soil-inhabiting nematodes that parasitize a wide range of insects. These nematodes belong to ...

Ziel dieses Verfahrens ist es, die Methoden und Techniken zu demonstrieren, die üblicherweise für die Bodenprobenahme und Isolierung von enteropathogenen Nematoden verwendet werden. Dies wird erreicht, indem zunächst Bodenproben durch einen Transektansatz oder, wie gezeigt, durch einen Zufallsprobenansatz entnommen werden. Als nächstes wurden die Bodenproben mit Insekten abgestuft, um selektiv enteropathogene Nematoden zu gewinnen.Der letzte Schritt besteht darin, die Nematoden von infizierten Insekten mit einer modifizierten weißen Falle zu sammeln. Letztendlich stellen diese Techniken einen wichtigen Schritt für die erfolgreiche Etablierung enteropathogener Nematodenkulturen im Labor dar und bilden die Grundlage für nachgelagerte Bioassays. Der Vorteil der Bodenprobenahmetechnik besteht darin, dass wir auf das Feld gehen und reife Stadien von pathogenen Nematoden sammeln können.Ich suche lieber nach Insekten, die mit diesen Nematoden infiziert sind, was selten vorkommt. Die von uns angewandte Zufallsstichprobenstrategie wird häufig verwendet, um die Diversität pathogener Nematoden aus einer großen geografischen Region oder einem großen Gebiet zu bewerten. Diese Technik wurde erst

soil-sampling-isolation-entomopathogenic-nematodes-steinernematidae

Research

Forschung

JoVE Journal

Environment

Umwelt

Das Ziel dieser Präsentation ist es, in vivo und in-vitro-Techniken für die Aufzucht von insektenpathogenen Nematoden zu demonstrieren. In-vivo-Verfahren betrachten die Aufzucht dieser Nematoden mit einer Insektenwirts, während die in-vitro-Methoden zu nutzen reichen Agar-Medien.

In-vivo-und In-vitro-Aufzucht von Nematoden (Steinernematidae und Heterorhabditidae)

Hier stellen wir ein Protokoll vor, das auf dem Mehlwurm (Tenebrio molitor) -Ködersystem basiert, das zur Isolierung und Auswahl entomopathogener Pilze (EPF) aus Bodenproben verwendet wurde. Eine effektive Konidienzahlformel (ECN) wird verwendet, um einen hoch stresstoleranten EPF basierend auf physiologischen Eigenschaften für die mikrobielle Schädlingsbekämpfung im Feld auszuwählen.

Isolierung und Selektion entomopathogener Pilze aus Bodenproben und Bewertung der Pilzvirulenz gegen Schadinsekten

Dieses Protokoll skizziert eine Methode zur effizienten Extraktion lebender Nematoden aus natürlichen Substraten im Feld.

Schnelle Isolierung wilder Nematoden durch Baermann Funnel

Entomopathogene Pilzkolonien werden aus tropischen Bodenproben mit Tenebrio-Ködern, Galleria-Ködern sowie selektivem künstlichem Medium, d. H. Kartoffeldextrose-Agar, das mit Hefeextrakt angereichert ist, das mit Chloramphenicol, Thiabendazol und Cycloheximid (CTC-Medium) angereichert ist, isoliert.

Vergleich von Methoden zur Isolierung entomopathogener Pilze aus Bodenproben

Dieses Protokoll kann verwendet werden, um groß angelegte ökologische Untersuchungen von sich selbst lebenden Caenorhabditis-Nematoden durchzuführen. Der Hauptvorteil dieser Methode ist die effiziente Organisation und Analyse von ökologischen und molekularen Daten, die mit den aus der Natur gesammelten Nematoden verbunden sind.

Ein hochgradig skalierbarer Ansatz zur Durchführung ökologischer Untersuchungen von selbstsüchtigen Caenorhabditis-Nematoden

Entomopathogene Nematoden leben in Symbiose mit Bakterien und zusammen infizieren sie erfolgreich Insekten, indem sie ihr angeborenes Immunsystem untergraben. Um die Erforschung der genetischen Grundlagen der Nematodeninfektion zu fördern, werden Methoden zur Erhaltung und genetischen Manipulation entomopathogener Nematoden beschrieben.

Kultivierung und genetische Manipulation entomopathogener Nematoden

Caenorhabditis elegans ist eine der wichtigsten Modellarten in der Biologie, aber fast alle Forschungen werden in Abwesenheit ihrer natürlich assoziierten Mikroben durchgeführt. Die hier beschriebenen Methoden werden dazu beitragen, die Vielfalt assoziierter Mikroben als Grundlage für zukünftige funktionelle C. elegans-Forschung besser zu verstehen.

Isolierung und Charakterisierung der natürlichen Mikrobiota des Modellnematoden Caenorhabditis elegans

Wir stellen zwei Methoden vor, mit denen Landwirte entomopathogene Nematoden massenhaft als Bioinsektizide vermehren können. Die erste Methode verwendet Polyacrylamidgel als Nematoden-Kultivierungssubstrat, während die zweite polymerbeschichtete Baumwolle als Kultivierungssubstrat verwendet. Beide Methoden basieren auf der in vivo Vermehrung von Nematoden in Insektenkadaver.

Pflanzenbasierte in vivo Vermehrung entomopathogener Nematoden

Dieses Verfahren wird erläutert, wie Bau und Betrieb einer kontinuierlichen 13 C-und 15 N-Isotopenmarkierung Kammer für eine einheitliche oder Differenzpflanzengewebe Kennzeichnung. Repräsentative Ergebnisse aus Stoffwechsel-und Struktur Kennzeichnung von Andropogon gerardii werden diskutiert.

Aufbau und Betrieb einer Dauer<sup&gt; 13</sup&gt; C und<sup&gt; 15</sup&gt; N Labeling Kammer für Uniform oder Differential, Stoffwechsel-und Struktur, Pflanze Isotope Labeling

Feld Lysimetrie und Porenwasserprobennahme Forschern erlauben, die das Schicksal von Chemikalien, um Böden und Vegetation fest angewendet zu beurteilen. Das Ziel dieses Protokolls ist es, zu zeigen, wie erforderliche Instrumentierung installieren und sammeln Proben für die chemische Analyse im integrierten Feld Lysimetrie und Porenwasser-Probenahme Experimenten.

Integrierte Feld Lysimetrie und Porenwasserprobennahme für die Bewertung von Chemical Mobilität in Böden und Vegetation Gegründet

Lernen Sie die Isolierung entomopathogener Nematoden aus Bodenproben mit Insektenköderung und modifizierter White-Falle. Diese Methoden ermöglichen die erfolgreiche Etablierung von Nematodenkulturen für Laborstudien.

Bodenproben und Isolierung von Nematoden (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

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