Das Kaninchen Blut-Shunt-Modell für die Untersuchung von akuten und Spätfolgen Subarachnoidalblutung: Technische Aspekte

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein untersucherunabhängiges intrakranielles Druck- oder ICP-kontrolliertes Blutshunt-, akutes Subarachnoidalblutungs- oder SAH-Modell beim Kaninchen zu etablieren. Dies wird erreicht, indem zunächst die Arteria subclavia kanüliert wird. Im zweiten Schritt wird eine digitale Subtraktionsangiographie durchgeführt, im letzten Schritt werden Neuromonitoring-Sonden und eine Wirbelsäulenzugangsnadel platziert.

Die Spinalzugangsnadel und die Arteria subclavia werden mit einem Shunt verbunden, um den Untersucher zu induzieren, eine unabhängige ICP-kontrollierte akute SAB und schließlich den ICP-zerebralen Blutfluss (CBF) und die kardiorespiratorische Reaktion des Tieres auf die akute SAB zu überwachen. Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen im neurovaskulären Bereich zu beantworten, z. B. wie eine frühe Hirnverletzung und eine verzögerte Gefäßprobe zum Abferkelergebnis und zur Mortalität beitragen. Nach einer aneurysmatischen subischen Blutung: Beginnen Sie damit, das sedierte Kaninchen in Rückenlage zu bringen, wobei sowohl die Vorder- als auch die Hinterbeine an der Operationsfläche befestigt sind.

Installieren Sie ein Dreikanal-Elektrokardiogramm als solches. Platzieren Sie drei subkutane Elektroden in dreieckiger Form auf der ventralen Seite des Kaninchens. Desinfizieren Sie anschließend die Haut mit Povidon, Jod oder ähnlichem über dem rechten Piktoralmuskel um das mittlere Drittel des Schlüsselbeins und decken Sie das Tier mit sterilen Tüchern ab.

Nachdem Sie den Brustmuskel mit Lokalanästhetika infiltriert haben, machen Sie einen seitlichen paramosen Hautschnitt und legen Sie den Brustmuskel frei. Spaltung der Muskelfaser durch stumpfe Dissektion superior und inferior, bis die Arteria subclavia sichtbar gemacht werden kann. Präparieren Sie dann unter dem Mikroskop die Arteria subclavia mit zwei geraden Mikrozangen und ligieren Sie sie dann distal und platzieren Sie eine Ligatur um das freiliegende proximale Ende mit vier polyfilen O-Nähten und einer gebogenen Mikrozange

Verwenden Sie anschließend eine gebogene Mikroschere, um die Wand der Arteria subclavia einzuschneiden und die Arterie retrograd zu kanülieren. Befestigen Sie dann den Katheter durch eine Doppelknotenligatur in Richtung der proximalen Ligatur und zusätzlich den Katheter durch eine Doppelknotenligatur in Richtung der distalen Ligatur, um eine arterielle Verdrehung oder Biegung der proximalen Teile der Arterie zu verhindern und ein Verrutschen oder massive Blutungen zu vermeiden. Sammeln Sie dann Blutproben für den Status der arteriellen Blutgasanalyse und überwachen Sie kontinuierlich die Standard-Herz-Kreislauf- und Atemwegsparameter.

Platzieren Sie ein externes Messgerät über den Winkeln des Unterkiefers, um das Angiogramm zu kalibrieren und einen genauen Vergleich der Post-hoc-Messungen des Basis- und des Folgegefäßdurchmessers zu ermöglichen. Führen Sie dann eine retrograde intraarterielle Bolusinjektion einer nichtionischen IOD-IOL durch die kanülierte Arterie durch und spülen Sie die Kanüle sofort mit Kochsalzlösung, um einen Verschluss der Leiter zu verhindern. Nach der Angiographie der digitalen Subtraktionsangiographie ist das Kaninchen wieder in Bauchlage zu bringen und darauf zu achten, dass der intraarterielle Katheter nicht manipuliert oder verschoben wird.

Schließen Sie die arterielle Blutdruckmessung an und beginnen Sie mit der kontinuierlichen Überwachung der kardiovaskulären und respiratorischen Standardparameter, einschließlich Elektrokardiogramm, arterieller Blutdruck, peripherer Sauerstoffsättigung, exspiratorischem Kohlendioxid und Kerntemperatur. Übertragen Sie die Daten über die analoge Ausgangsschnittstelle an einen Analog-Digital-Wandler, Datenlogger und -speicher. Legen Sie den Kopf in einem 30-Grad-Winkel nach unten in eine Halterung und desinfizieren Sie dann die Haut über Kopf und Hals dreimal für jeweils eine Minute mit Povidon-Jod.

Nachdem Sie den neuen Operationsbereich mit sterilen Tüchern abgedeckt haben, machen Sie einen Hautschnitt in der Mittellinie. Setzen Sie einen kleinen chirurgischen Retraktor ein, um drei runde Osteotomien entsprechend den äußeren Schädelmarkierungen zu erstellen, und kalibrieren Sie die Neuromonitoring-Sonden. Platzieren Sie den interkraniellen Druck und die interparenchymalen Laserdoppler-Blutfluss-Neuromonitoring-Spitzen und versiegeln Sie die Bohrlöcher mit Knochenwachs, um die Schädelflüssigkeit dicht zu halten und einen geschlossenen Schädelzustand zu ermöglichen, um den stationären Zustand von I-C-P-C-P-P und MAP zu erhalten.

Führen Sie als Nächstes eine 22 Gauge 40 Millimeter große pädiatrische Nadel für den Wirbelsäulenzugang transkutan in die Cisterna magna ein. Schieben Sie dann die Nadel entlang der knöchernen äußeren Hinterhauptsprotuberanz nach unten, bis eine Lücke erkannt wird. Bestätigen Sie die korrekte Positionierung der Nadel, indem Sie einige Minuten lang das spontane Tropfen von zerebraler Rückenmarksflüssigkeit beobachten, während der Kopf des Kaninchens in einem Winkel von 20 bis 30 Grad nach unten geneigt ist.

Verwenden Sie nun einen blutgefüllten Druckmessschlauch, um die Spinalzugangsnadel in der Cisterna magna mit dem Drei-Wege-Stopphahn zu verbinden, der an der zuvor katheterisierten Schlüsselbeinarterie befestigt ist. Öffnen Sie dann die Shunt-Verbindung zwischen der Arteria subclavia und dem CI sternum magna, um eine Subarachnoidalblutung zu induzieren. Nach dem Öffnen des Shunts beginnt der intrakranielle Druck auf Werte nahe dem diastolischen Blutdruck anzusteigen.

Zu diesem Zeitpunkt stoppt der Fluss im Shunt, wenn das interkranielle Plateau länger als 10 Sekunden aufrechterhalten wird oder wenn der Druck spontan abnimmt, schließen Sie den Shunt, nachdem der interkranielle Druck seinen Höhepunkt erreicht hat, und halten Sie die Spinalzugangsnadel an Ort und Stelle, bis der Druck wieder in einen stationären Zustand nahe den Ausgangswerten zurückkehrt. Entfernen Sie abschließend die zerebrale Blutfluss-Feinnadel und die Hirndrucksonde. Verstopfen Sie die Bohrlöcher mit Knochenwachs und verwenden Sie dann Neomycinsulfat, um eine strenge Wundspülung durchzuführen und die Haut zu vernähen.

Zuerst nähen Sie die Haut über die Bohrlöcher. Nach der Repositionierung des Kaninchens in Rückenlage und der Entfernung des Katheters der Arteria subclavia wird der Brustmuskel und die Haut vernäht. Das in diesem Bericht beschriebene tollwütige Blut-Shunt-Modell der SAB führt bereits 24 Stunden nach der Verletzung zu einer frühen Hirnschädigung im Hippocampus, in der Basalrinde und im zerebralen Gefäßsystem, was zu einer charakteristischen Blutverteilung führt.

Darüber hinaus löst dieses Modell einen mittelschweren bis schweren Grad eines verzögerten zerebralen Vasospasmus am dritten Tag aus. Nach der SAH-Induktion liegt die Mortalitätsrate des Eingriffs bei etwa 20 %, was auf einen Atemstillstand oder eine schwere Bradykardie zum Zeitpunkt der akuten SAB zurückzuführen ist, während der die Tiere unter vollständiger Narkose stehen. Aus technischer Sicht ermöglicht dieses Blutshuntmodell sowohl eine untersucherunabhängige als auch eine kontrollierbare SAH-Induktion.

Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, diese Subclavonarterie fest zu befestigen, ein großartiges Auto zu nehmen und das Tier neu zu positionieren und während der Cy Sternum-Akupunktur sehr sanft und geduldig zu sein.