Name: Darstellende Subretinale Injektionen in Nagetiere zu retinalen Pigmentepithelzellen in Suspension liefern (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Lernen Sie die subretinale Injektion von RPE-Zellen bei Nagetieren mit minimaler Traumatisierung. Diese Methode ermöglicht präklinische Studien zur Zelltherapie bei retinalen Degenerationen.

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Wir möchten Alison Dorsey für ihre Hilfe bei der Entwicklung der subretinalen Injektionstechnik danken. Wir danken auch dem National Eye Institute (NEI-Zuschüsse EY11254 und EY021416), dem California Institute for Regenerative Medicine (CIRM-Zuschuss TR1-01219) und dem Lowy Medical Research Institute (LMRI) für die sehr großzügige Finanzierung dieses Projekts.

HINWEIS: Alle Tiere wurden in Übereinstimmung mit den ethischen Richtlinien des Scripps Research Institute gegründet behandelt. 1. Vorbereitung der Materialien für die Injektion (~ 20 min) <ol style="margin-left: 40px;"><li> Vorwärmen Zelldissoziationslösung (vorzugsweise eine, die durch den Verdünnungs inaktiviert wird, nicht mit Serum), sterile PBS und Kulturmedien (Tabelle 1). </li><li> Sterilisieren Sie die Spritze mit einer stumpfen Nadel durch Demontage und es Kochen Sie die Teile in Wasser 15 min. </li></ol> 2. Herstellung der RPE-Zellen für die Injektion (~ 30 min bis 1 h) <ol style="margin-left: 40px;"><li> Lösen Sie die RPE-Zellen mit vorgewärmten Zelldissoziationslösung für 5-8 Minuten bei 37 ° C. </li><li> Kratzen Sie die Zellen vorsichtig zu einem noch angebracht sind freizugeben. </li><li> Verdünnen Sie die Zellen mit einem großen Volumen von Kulturmedien (füllen einen 15-ml-Tube), um die Dissoziationslösung inaktivieren und gezählt. </li><li> Zentrifuge bei 800 × g für 5 min, um die Zellen zu pelletieren. </li><li> Die Zellen auf 200.000 Zellen / ul (100.000 Zellen in einem 0,5 ul Volumen zu liefern) in sterile vorgewärmten PBS und übertragen diese in ein 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen. </li><li> Fügen Sie optional einen Live Cell transienten Fluoreszenzmarker und bei 37 ° C für 30-45 min. </li><li> Legen Sie die Spritze mit einer stumpfen Nadel mit 0,5 ul der Zellen. Injizieren die Zellen so schnell wie möglich. </li></ol> 3. Unternetzhaut Injection (~ 5 min pro Injektion) HINWEIS: Wenn möglich, zu lernen, die Technik mit Erwachsenen Albinoratten, da die Limbus Gefäße sind viel einfacher zu visualisieren. Injizieren Fast Green-Lösung, wenn das Lernen (bevor Sie versuchen, Zellen injizieren), um die Visualisierung der Injektionsstelle leichter zu erleichtern. <ol style="margin-left: 40px;"><li> Anesthetize das Nagetier. Verwenden intraperitoneale Injektionen von 100 mg / ml Ketamin und 10 mg / ml Xylazin (20 &amp; mgr; l / 10 g Körper wacht) über Isofluoran Inhalation, da es schwierig ist, das Nagetier manövrieren und zu injizieren, in dem Auge mit der Schnauze in dem Inhalator. <ol><li> Stellen Sie sicher, dass das Tier tief durch Kneifen einer seiner Pfoten betäubt. Wenn er zuckt zusammen, einige Minuten warten und erneut versuchen, bevor Sie den subretinalen Injektion. </li></ol></li><li> Positionieren Sie das Nagetier auf die Seite, so dass das Auge, das injiziert wird wird mit Blick auf die Decke. </li><li> Unter einem Binokular sanft dehnen die Haut, so dass die Augen öffnet leicht nach oben aus dem Sockel (temporäre Exophthalmus) und leichter zugänglich, indem Sie den Kopf mit zwei Fingern direkt über dem Ohr und durch seinen Kiefer und sanft dehnen die Haut parallel zu den Augenlidern so dass das Auge springt leicht nach oben aus dem Sockel (siehe Abbildung 1C). Fassen Sie nicht die Nager zu nahe an der Kehle. </li><li> Mit einem 30 gis Einweg vorsterilisiert Nadel, machen Sie ein Loch direkt unter dem Limbus (wenn die Gefäße betroffen sind, werden Blutungen bE signifikant und es schwierig sein, das Loch später zu finden) und in einem Winkel zu vermeiden, berühren Sie das Objektiv mit der Nadel (1D). Berühren Sie das Objektiv mit der scharfen (oder stumpf) Nadel oder unmittelbaren Kataraktbildung auftreten. HINWEIS: Die Injektionen besser mit zwei Personen. Auf diese Weise kann eine Person die Spritze mit der stumpfen Nadel auf die Person, die die Injektion, nachdem sie das erste Loch mit der scharfen Nadel Einweg erstellt, um den Fokus auf das zu halten, wo das Loch spielte. </li><li> Fahren Sie den Einweg-spitzen Nadel aus dem Auge und gleichzeitig die Haftung auf den Kopf. Denken Sie daran, genau dort, wo das Loch ist. </li><li> Nachdem sowohl die Montage des vorinstallierten Spritze mit einer stumpfen Nadel auf einem Mikromanipulator oder halten Sie es von Hand, legen Sie die Spitze der Spritze mit der stumpfen Nadel durch das Loch, kümmert sich wieder das Objektiv nicht zu berühren und drücken Sie sie vorsichtig durch das Auge sehr vorsichtig, bis das Gefühl Widerstand (1D). </li><li> Keeping alle Bewegungen auf ein Minimum, sorgfältig zu injizieren die RPE-Zellen langsam in den subretinalen Raum. HINWEIS: RPE / Netzhautablösung induziert wird; dies unvermeidbar ist. Jedoch eine sauberere Injektion minimiert die Ablösung und die Chancen der Wiederbefestigung (1E) stark verbessert. Alle übertriebenen Bewegungen kann die Nadel wieder in die Netzhaut zu bewegen und Seitwärtsbewegungen kann die Netzhaut schädigen. Die Verwendung einer Einspritzpumpe ist optional, aber ermöglicht eine sehr präzise Lieferung. </li><li> Ziehen Sie die Spritze langsam. Bewerben Auge Feuchtigkeitstropfen auf das Auge hydratisiert. </li><li> Weiter, um das Tier zu überwachen, bis sie Brustlage gewinnt. Lassen Sie das Tier unbeaufsichtigt oder in einen Käfig mit anderen Alarm Tiere, bis sie Brustlage gewinnt. </li></ol>

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<li>Hu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+for+subretinal+implantation+of+ultrathin+substrates+containing+stem+cell-derived+retinal+pigment+epithelium+monolayer%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Research%22%5BJournal%5D)">A novel approach for subretinal implantation of ultrathin substrates containing stem cell-derived retinal pigment epithelium monolayer.</a> Ophthalmic Research. 48 (4), 186-191 (2012).</li>
<li>Diniz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+implantation+of+retinal+pigment+epithelial+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells%3A+improved+survival+when+implanted+as+a+monolayer%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Subretinal implantation of retinal pigment epithelial cells derived from human embryonic stem cells: improved survival when implanted as a monolayer.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (7), 5087-5096 (2013).</li>
</ol>

Keiner der Autoren hat kommerzielle Angaben zu machen.

In diesem Artikel beschreiben wir ein relativ einfaches Verfahren zum Durchführen subretinalen Injektion von RPE-Zellen in Suspension in Ratten und Mäusen. Das Protokoll ist einfach zu erlernen und mehr Erfahrung mit der Technik zu weniger Verletzungen zu übersetzen (3; dies stellt eine der besseren Injektionen), insbesondere wenn ein Mikromanipulator verwendet wird (1A). Jede Trauma kann in vivo mit einem cSLO und OCT-System (2), wenn vorhanden überwacht werde...

Die sensorische Netzhaut ist in funktionelle Schichten von Neuronen, Gliazellen und Endothelzellen unterteilt. Photorezeptoren auf der Rückseite der Netzhaut werden durch Licht aktiviert; Durch Phototransduktion wandeln sie Photonen in elektrische Signale um, die von Interneuronen verfeinert und an die Sehrinde im Gehirn weitergeleitet werden. Phototransduktion kann nicht ohne die koordinierten Anstrengungen von Mueller-Gliazellen und retinalen Pigmentepithelzellen (RPE) stattfinden. RPE sind in einer Monoschicht direkt hinter den Photorezeptoren organisiert und erfüllen mehrere und vielfältige Funktionen, die für die Funktion der Photorezeptoren und die Homöostase wesentlich sind. Tatsächlich sind RPE und Photorezeptoren so voneinander abhängig, dass sie als eine funktionelle Einheit betrachtet werden. Der Tod oder die Dysfunktion von RPE führt zu verheerenden Sekundärwirkungen auf die Photorezeptoren und ist mit der altersbedingten Makuladegeneration (AMD) verbunden, der Hauptursache für Erblindung bei älteren Menschen1,2.
Obwohl keine Heilung für AMD entdeckt wurde, haben mehrere klinische Studien gezeigt, dass der Ersatz von RPE-Zellen eine vielversprechende therapeutische Option sein könnte3-13. Mit dem Aufkommen der Stammzelltechnologie ist es nun möglich, eine große Anzahl von RPE-Zellen in vitro aus embryonalen und induzierten pluripotenten Stammzellen (hES und hiPS) zu erzeugen, die ihren somatischen Gegenstücken funktionell und anatomisch stark ähneln14-26. Aus Stammzellen gewonnene RPE haben auch in vivo von mehreren unabhängigen Gruppen, einschließlich unserer eigenen, gezeigt, dass sie die Netzhautdegeneration in Ratten- und Mauslinien mit spontaner Netzhautdegeneration signifikant verlangsamen16,18,21,22,25,28,29. Diese Kombination aus klinischer und präklinischer Evidenz ist so überzeugend, dass derzeit mehrere klinische Studien zur Verhinderung von Netzhautdegeneration mit aus Stammzellen gewonnenen RPE-Zellen durchgeführt werden30,31. 
RPE kann leicht aus hES und/oder hiPS abgeleitet und mit verschiedenen Ableitungs- und Injektionstechniken in den subretinalen Raum von Nagetieren implantiert werden32,33. (Siehe Westenskow et al. für ein Methodenpapier im Multimedia-Format, das das von uns verwendete gerichtete Differenzierungsprotokoll demonstriert)34. Es gibt noch kritische Fragen bezüglich der Sicherheit, des Überlebens und der Funktionsfähigkeit von exogen verabreichten RPE-Zellen nach der Implantation, daher ist die Fähigkeit, subretinale Injektionen bei Nagetieren durchzuführen, eine entscheidende Fähigkeit16,18,21,29,36,37. Die Verabreichung von RPE ist nicht trivial, und das Feld ist über die effektivste Injektionstechnik geteilt. Das Protokoll, das wir hier beschreiben, ist eine einfache und effektive Methode zur subretinalen Abgabe des Bolus von RPE-Zellen und wurde in der ersten klinischen Studie zur Stammzelltransplantation von RPE31 verwendet. (Der Leser kann sich auch auf einen anderen JoVE-Artikel von Eberle et al. beziehen, um eine alternative Darstellung von subretinalen Injektionen bei Nagetieren zu erhalten. 38) 
Die in diesem Manuskript beschriebene Technik kann nicht visualisiert werden und ein Trauma ist unvermeidlich (wie bei jeder subretinalen Injektionstechnik). Sie wird durchgeführt, indem ein Loch direkt unter den Limbusgefäßen gebohrt und eine stumpfe Nadel auf einem transskleralen Weg eingeführt wird, um einen Zellbolus unter die diametral entgegengesetzte Netzhaut zu injizieren. Die Person, die die Injektion durchführt, spürt einen Widerstand, wenn die stumpfe Nadel die Netzhaut berührt. Die Zellen können jedoch direkt nach der Injektion sichtbar gemacht werden, und der Grad der induzierten Netzhautablösung kann bestimmt werden, indem die RPE-Zellen mit einem transienten Fluoreszenzmarker markiert und mit einem konfokalen Scanning-Ophthalmoskop (cSLO) nachgewiesen werden. Ein optisches Kohärenztomographie-System (OCT) kann ebenfalls verwendet werden, um das Trauma zu überwachen und die Injektionsstelle leicht zu identifizieren.

<table><tbody><tr><td>2-Mercaptoethanol (55 mM)</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>21985-023</td><td>50 ml x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>Cell Scapers</td><td>VWR</td><td>89260-222</td><td>Case x 1</td></tr><tr><td>CellTracker Grün CMFDA</td><td>Molekulare Sonden</td><td>C34552</td><td>50 &micro; g x 20</td></tr><tr><td>DPBS, kein Kalzium, kein Magnesium</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>500 ml x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>Schnelles Grün</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7258</td><td>25 g x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>Genteal Geldrops Mittelschwere bis schwere Gleitmittel Augentropfen&nbsp;</td><td>Walmart</td><td>4060941</td><td>25 ml x 1</td></tr><tr><td>Hamilton Modell 62 RN SYR</td><td>Hamilton</td><td>87942</td><td>Spritze x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>Hamilton Nadel 33 G, 0.5", Spitze 3 (304 Edelstahl)</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td>Nadeln x 6</td></tr><tr><td>Knockout DMEM</td><td>Gibco</td><td>10829-018</td><td>500 ml x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>KnockOut Serum Ersatz</td><td>Gibco</td><td>10828-028</td><td>500 ml x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>L-Glutamin 200 mM</td><td>Gibco</td><td>25030-081</td><td>100 ml x 1</td></tr><tr><td>Magnetischer Ständer</td><td>Leica Biosystems</td><td>39430216</td><td>Ständer x 1</td></tr><tr><td>MEM Lösung für nicht-essentielle Aminosäuren 100X&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td>100 ml x 1</td></tr><tr><td>Mikromanipulator</td><td>Leica Biosystems</td><td>3943001</td><td>Manipulator x 1</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10.000 U/ml)</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>100 ml x 1</td></tr><tr><td>Slip-Tip-Spritzen ohne Nadeln BD&nbsp; (3 ml) &nbsp; &nbsp;</td><td>VWR</td><td>BD309656</td><td>Packung x 1</td></tr><tr><td>Spezialnadeln BD&nbsp; (30 G, 1")</td><td>VWR</td><td>BD305128</td><td>Box x 1</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzym (1X), kein Phenolrot</td><td>Gibco</td><td>12604013</td><td>100 ml x 1</td></tr></tbody></table>

darstellende subretinale injektionen in nagetiere zu retinalen pigmentepithelzellen in suspension liefern

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

Die Umwandlung von Licht in elektrische Impulse erfolgt in der äußeren Netzhaut und wird weitgehend von Stäbchen und Zapfen-Photorezeptoren und retinalen Pigmentepithel (RPE) Zellen durchgeführt. RPE liefern wichtige Unterstützung für Photorezeptoren und den Tod oder Dysfunktion der RPE-Zellen ist charakteristisch für die altersbedingte Makuladegeneration (AMD), die häufigste Ursache für dauerhafte Sehverlust bei Menschen im Alter von 55 und älter. Während keine Heilung für AMD identifiziert worden ist, kann die Implantation von gesunden RPE in erkrankten Augen sich als eine wirksame Behandlung sein, und eine große Zahl von RPE-Zellen können leicht aus pluripotenten Stammzellen erzeugt werden. Einige interessante Fragen hinsichtlich der Sicherheit und Wirksamkeit von RPE-Zell Lieferung noch in Tiermodellen untersucht werden, und gut anerkannten Protokollen zur RPE injizieren entwickelt. Die hier beschriebene Technik ist von mehreren Gruppen in verschiedenen Studien verwendet und beinhaltet zunächst ein Loch in das Auge mit einer spitzen Nadel schaffen. Dann wird eine Spritze mit einer Blunt Nadel mit Zellen beladen ist, durch das Loch eingeführt und geleitet durch den Glas bis es leicht berührt RPE. Mit dieser Einspritzverfahren, das relativ einfach und erfordert minimale Ausrüstung wir konsistente und effiziente Integration von Stammzellen abgeleiteten RPE Zellen zu erreichen zwischen dem Host RPE, die signifikante Menge an Photorezeptordegeneration verhindert in Tiermodellen. Obwohl nicht Teil der tatsächlichen Protokoll beschreiben wir auch, wie das Ausmaß des Traumas durch die Injektion und zum Überprüfen, ob die Zellen in den subretinalen Raum unter Verwendung von in vivo-Bildgebungsverfahren injiziert induziert wird. Schließlich wird die Verwendung dieses Protokoll nicht RPE Zellen begrenzt; es kann verwendet werden, um jede Verbindung oder Zelle in den subretinalen Raum zu injizieren.

Wir können eine Aussetzung der RPE-Zellen schnell und konsequent in den subretinalen Raum von Nagetieren zu liefern mit dem in dieser Handschrift beschriebenen Technik. Obwohl nicht erforderlich, können Traumata stark mit dem mit einem Mikromanipulator in 1A &amp; B gezeigten Aufbau minimiert werden. Halten Sie den Nager wie in 1C für temporäre Exophthalmus gezeigt. Die Schritte sind die gleichen, wenn der Mikromanipulator oder von Hand durchgeführt wird; diese werden in der Karikatur i...

Hier präsentieren wir ein von der Community akzeptiertes Protokoll im Multimedia-Format für die subretinale Injektion eines Bolus von RPE-Zellen in Ratten und Mäuse. Dieser Ansatz kann zur Bestimmung von Rettungspotenzialen, Sicherheitsprofilen und Überlebenskapazitäten von transplantierten RPE-Zellen nach Implantation in Tiermodellen der Netzhautdegeneration verwendet werden.

Darstellende Subretinale Injektionen in Nagetiere zu retinalen Pigmentepithelzellen in Suspension liefern

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, retinale Pigment-, Epithel- oder RPE-Zellen in den subretinalen Raum von Nagetieren zu injizieren und gleichzeitig das Trauma zu minimieren. Dies wird erreicht, indem man zuerst mit einer scharfen Nadel ein Loch in das Auge eines behäbigen Tieres sticht. Anschließend werden die Zellen mit einer stumpfen Nadel in den subretinalen Raum injiziert.Im letzten Schritt wird das Auge mit Feuchtigkeitscreme überzogen, um es mit Feuchtigkeit zu versorgen. Letztendlich können Histologie und In-vivo-Bildgebungsmodalitäten verwendet werden, um die Wirksamkeit der Injektion zu überwachen. Während die Methode, die wir Ihnen heute gezeigt haben, speziell auf die Verabreichung von RPE-Zellen in den subretinalen Raum zugeschnitten war, ist die Technik selbst auf die Verabreichung einer Vielzahl anderer Zelltypen und Chemikalien in den subretinalen Raum anwendbar, um in einer Vielzahl von präklinischen Studien verwendet zu werden.Im Allgemeinen werden Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten haben, da es schwer zu erkennen ist, wie gut die Injektion durchgeführt wurde. Visuelle Demonstrationen dieser Methode sind von entscheidender Bedeutung, da die Injektionsschritte schwer zu erlernen sind, ohne dass sie durchgeführt werden. Persönlich.Etwa eine Stunde vor der Injektion wird eine trypsinfreie Dissoziationslösung, steriles PBS und Nährmedien auf 37 Grad Celsius vorgewärmt, die Bestandteile einer Spritze mit einer stumpfen 33-Gauge-Nadel in kochendes Wasser gelegt. Als nächstes lösen Sie die RPE-Zellen für fünf bis acht Minuten in der Zelldissoziationslösung. Bei 37 Grad Celsius wird vorsichtig geschabt, um alle noch anhaftenden Zellen freizusetzen, und dann die Zellen in 15 Millilitern Nährmedium verdünnt, um das Enzym zu inaktivieren, die dissoziierten Zellen in ein 15-Milliliter-Röhrchen überführt und dann nach dem Zählen die Zellen heruntergeschleudert und das Pellet bei zwei mal 10 bis fünf Zellen pro Mikroliter in steriler Vorwärmung resuspendiert.PBS überträgt dann die Zellen in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen und befüllt die sterilisierte Spritze mit 0,5 Mikrolitern Zellen zur sofortigen Injektion, um die Zellen zu injizieren. Nach Bestätigung der Sedierung durch die Zehe kneifen Sie das anästhesierte Nagetier auf die Seite, so dass das Auge, das injiziert wird, nach oben zeigt. Halten Sie dann unter einem Präpariermikroskop den Kopf des Tieres mit zwei Fingern knapp über dem Ohr und am Kiefer und dehnen Sie die Haut sanft parallel zu den Augenlidern, so dass das Auge leicht aus der Augenhöhle herausragt. Halten Sie es dann in einem Winkel.Um das Berühren der Linse zu vermeiden und darauf zu achten, dass keine Gefäße entstehen, verwenden Sie die scharfe 30-Gauge-Nadel, um ein Loch direkt unter den Limbus-Injektionen zu bohren. Arbeiten Sie besser mit zwei Personen, sodass eine Person den Injektor, die stumpfe Nadel und die Spritze passieren kann, sodass der Injektor den Fokus auf das Auge der Maus behalten kann. Ziehen Sie nun die scharfe Einwegnadel aus dem Öhr zurück, während Sie den Griff am Kopf beibehalten.Achten Sie darauf, dass Sie sich genau merken, wo sich das Loch befindet, und montieren Sie die vorgeladene Spritze. Ausgestattet mit der stumpfen Nadel an einem Mikromanipulator, führen Sie die Spitze der stumpfen Nadel durch das Loch ein. Achten Sie auch hier darauf, die Linse nicht zu berühren und schieben Sie die Nadel vorsichtig durch das Öhr, bis ein Widerstand zu spüren ist.Alle Bewegungen werden auf ein Minimum reduziert. Injizieren Sie die RPE-Zellen vorsichtig langsam in den subretinalen Raum. Es kommt zu einer RPE-Netzhautablösung.Eine sauberere Injektion minimiert jedoch die Ablösung und verbessert die Chancen auf eine erneute Anheftung erheblich, ziehen Sie dann die Spritze langsam zurück und tragen Sie feuchtigkeitsspendende Tropfen für das Auge auf, um das Auge mit Feuchtigkeit zu versorgen, und überwachen Sie das Tier, bis es sich vollständig erholt hat. RPE-Zellen können schnell und konsistent in den subretinalen Raum von Nagetieren abgegeben werden. Mit dieser Technik.Obwohl dies nicht erforderlich ist, können Traumata mit einem Mikromanipulator stark minimiert werden. Mit diesem Aufbau kann bei sauberer Durchführung die Fluoreszenz von markierten RPE-Zellen mit einem konfokalen Scanning-Ophthalmoskop detektiert und die induzierte Netzhautablösung mit einem optischen Kohärenztomographen sichtbar gemacht werden. Die konfokale Scanning-Ophthalmoskopie wurde verwendet, um diese Bilder um die gesamte Injektionsstelle unmittelbar nach der subretinalen Injektion aufzunehmen.Beachten Sie, dass die Ablösung, die in den mittleren Bildern am tiefgreifendsten, aber nicht schwerwiegend ist, in den mittleren Bildern am tiefgreifendsten, aber nicht schwerwiegend ist, kann die eigentliche Injektion in fünf Minuten durchgeführt werden, wenn sie richtig durchgeführt wird. Während dieser Prozedur ist es wichtig, sorgfältig zu arbeiten und unnötige Bewegungen auf ein Minimum zu beschränken. Wir hoffen, dass Sie nach dem Anschauen dieses Videos ein gutes Verständnis und eine gute Wertschätzung für die Technik der subretinalen Injektion in Nagetiere haben. Wir hoffen, dass dies ein wirksamer Weg sein wird, um Zellen zu transportieren und gleichzeitig Beschwerden und Traumata für das Auge der Nagetiere zu minimieren.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Diese Operationstechnik veranschaulicht die Injektion von Gentherapie-Vektoren und Stammzellen in den subretinalen Raum des Auges Maus.

Subretinalen Injektion von Vektoren für die Gentherapie und Stammzellen in die Maus Eye

Quelle: Park, S. W., et al. Limbaler Zugang-Subretinale Injektion von viralen Vektoren für die Gentherapie im retinalen Pigmentepithel von Mäusen. J. Vis. Exp. (2015)Das Video beschreibt die Methode zur subretinalen Injektion von viralen Vektoren in das retinale Pigmentepithel (RPE) in einem Mausmodell. Es beschreibt das Verfahren von der Anästhesie und der Augenvorbereitung bis hin zur präzisen lentiviralen Vektorverabreichung, um die Genintegration und -expression im RPE sicherzustellen.

Subretinale Injektion von viralen Vektoren in das retinale Pigmentepithel in einem Mausmodell

Die subretinale Injektion ist eine chirurgische Technik zur effektiven Genabgabe an das retinale Pigmentepithel im Mausauge.  Hier beschreiben wir eine einfache und replizierbare Methode zur subretinalen Injektion von viralen Vektoren in retinales Pigmentepithel bei Versuchsmäusen.

Limbus-Ansatz-Subretinale Injektion von viralen Vektoren für die Gentherapie bei Mäusen Retinapigmentepithel

Subretinale Injektionen sind die gebräuchlichste Technik zur Verabreichung großer therapeutischer Wirkstoffe wie Proteine und viraler Vektoren an Photorezeptoren und das retinale Pigmentepithel. Eine alternative Methode bei Mäusen, die erfolgreich auf den subretinalen Raum mit minimalen Kollateralschäden und schnellen Erholungszeiten abzielt, wird hier beschrieben.

Eine Alternative und Validated Injektionsmethode für den Zugriff auf den subretinalen Raum<i&gt; über</i&gt; A Transcleral dorsalen Zugang

Subretinale Injektion hat weit in präklinischen Studien der Stammzell-Ersatz-Therapie bei altersbedingter Makuladegeneration angewendet worden. In diesem visualisierte Artikel beschreiben wir eine weniger riskante, reproduzierbar und präzise modifizierte subretinalen Injektionstechnik über den Trans-skleralen Ansatz um Zellen in Ratte Augen zu liefern.

Entwicklung eines raffinierten Protokolls für Trans-skleralen subretinalen Transplantation von menschlichen retinalen Pigment Epithelzellen in Ratte Augen

Retinalen Pigment Epithelzellen könnte als eine Zelle-Ersatz-Therapie für die fortgeschrittene Form der trockene altersbedingte Makuladegeneration dienen. Dieses Protokoll beschreibt die Erzeugung eines großen Augen Modells der geografischen Atrophie und die subretinale Transplantation von menschlichen embryonalen Stammzellen gewonnenen retinalen Pigment Epithelzellen auf dieses Modell der Krankheit.

Subretinale Transplantation von humanen embryonalen Stammzellen abgeleitet retinalen Pigment Epithelzellen zu einem großen Augen geographische Atrophie

Die subretinale Implantation von retinalem Pigmentepithel (RPE) ist einer der vielversprechendsten Ansätze zur Behandlung degenerativer Netzhauterkrankungen. Die Leistung präklinischer Studien an großäugigen Tiermodellen bleibt jedoch eine Herausforderung. In diesem Bericht werden Leitlinien für die subretinale Transplantation von RPE auf einem Zellträger in Minischweine vorgestellt.

Subretinale Implantation von RPE auf einem Träger bei Minipigs: Leitlinien für präoperative Vorbereitungen, Operationstechniken und postoperative Versorgung

Dieses Protokoll stellt einen transpupillengesteuerten transskleralen Ansatz zur sicheren und präzisen Verabreichung subretinaler zellulärer Transplantate mit einer geringen Rate an chirurgischen Komplikationen bei Mäuseempfängern mit oder ohne Netzhautdegeneration dar.

Transpupillengesteuerte transsklerale Transplantation von subretinalen Transplantaten in einem retinalen Degenerations-Mausmodell

Wir beschreiben ein detailliertes Protokoll für die Präparation von post-kryokonservierten hESC-abgeleiteten Photorezeptor-Vorläuferzellen und die subretinale Verabreichung dieser Zellen in rd10-Mäusen .

Subretinale Verabreichung von Photorezeptor-Vorläuferzellen aus humanen embryonalen Stammzellen in rd10-Mäusen

In diesem Artikel werden Methoden zur subretinalen Injektion bei Ratten beschrieben, bei denen intraoperative Visualisierung verwendet wird, um sowohl die Injektionsstelle als auch den Bereich der Netzhautablösung zu kontrollieren.

Intraoperative Visualisierung der subretinalen Injektion und Netzhautablösung bei Ratten

Subretinale Injektionen sind eine unverzichtbare Technik für die präklinische Entwicklung von Therapeutika für Photorezeptor- und RPE-Erkrankungen. Wir beschreiben eine optimierte transsklerale subretinale Injektionstechnik bei Mäusen, die die intraoperativen Erfolgsraten verbessert und Netzhautschäden minimiert.

Optimierte minimal-invasive transsklerale subretinale Injektionstechnik in der Maus

Lernen Sie die subretinale Injektion von RPE-Zellen bei Nagetieren mit minimaler Traumatisierung. Diese Methode ermöglicht präklinische Studien zur Zelltherapie bei retinalen Degenerationen.

Darstellende Subretinale Injektionen in Nagetiere zu retinalen Pigmentepithelzellen in Suspension liefern

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