<em>Ex Utero</em> Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Sathish Venkataramanappa; Ruth Simon; Stefan Britsch

doi:10.3791/52550

Ex Utero Elektroporation und Organotypischen Kultur der Maus Hippocampus-Gewebe

JoVE Journal
Developmental Biology

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Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Elektroporation und Organotypischen Kultur der Maus Hippocampus-Gewebe

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09:17 min

March 4, 2015

DOI: 10.3791/52550-v

Sathish Venkataramanappa¹, Ruth Simon¹, Stefan Britsch¹

¹Institute of Molecular and Cellular Anatomy,University of Ulm

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Hier stellen wir ein Protokoll vor, das ein Werkzeug zur Untersuchung der Regulationsmechanismen bestimmter Gene während der Hippocampus-Entwicklung bietet. Der Einsatz von Ex-utero-Elektroporation und organotypischer Schnittkultur ermöglicht die Hoch- und Herunterregulierung der Expression von Genen von Interesse in einzelnen Zellen und die Verfolgung ihres Schicksals während der Entwicklung.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, einzelne Zellen des Gyrus dentatus zu markieren, zu modifizieren und ihre Entwicklung zu verfolgen. Dies wird erreicht, indem zuerst DNA in eine Hemisphäre des Gehirns am Embryonaltag, dem 15.5. oder 18.5. Tag, injiziert wird. Der zweite Schritt besteht darin, die injizierte DNA in den sich entwickelnden Bereich des Gyrus dentatus zu elektroporieren.

Die nächsten Hirnschnitte werden mit einem Vibrator präpariert und die Hirnschnitte werden bis zu 14 Tage in Kultur aufbewahrt. Der letzte Schritt ist die Immunfluoreszenzfärbung der Hirnschnitte mit geeigneten Antikörpern. Letztendlich wird die konfokale Immunfluoreszenzmikroskopie eingesetzt, um Veränderungen der modifizierten Körnerzellen des sich entwickelnden Gyrus dentatus darzustellen.

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