Name: Ein Mausmodell der irreversiblen und reversiblen Einseitige Ureterobstruktion (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 5 s
Description: Erfahren Sie das Mausmodell der einseitigen Ureterobstruktion zur Untersuchung von Nierenverletzung und Geweberegeneration. Diese Methode ermöglicht die Analyse reversibler und irreversibler Obstruktionseffekte.

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Die vorliegende Studie wurde durch Zuschüsse von Kidney Research UK (ST4/2011), dem Cunningham Trust (CT11/14), dem Mrs AE Hogg Charitable Trust for Kidney Research und dem Renal Endowment Fund der Royal Infirmary of Edinburgh unterstützt.

Allgemeine Hinweise: Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien und Vorschriften durch die Tiere verhängt (Scientific Procedures) Act 1986 Dieses Protokoll und das dazugehörige Video-Protokoll sind für einen Standard- UUO und einem R-UUO, die auf vielen durchgeführt werden durchgeführt Mausstämme. In der dazugehörige Video sind beide Verfahren auf die männliche C57BL / 6 Mäusen im Alter von 8 Wochen durchgeführt. Die in der repräsentative Ergebnisse Abschnitt präsentierten Daten wurden von männlichen FVB / n Mäusen erhalten. Hinweis: Dieses Protokoll und die Video-Informationen begleiten, wie eine Standard UUO zuführen und R-UUO Verwendung der linken Ureter, jedoch können die gleichen Techniken leicht auf der rechten Harnleiter angewendet werden. 1. Vorbereitung der Tiere und Laparotomie <ol><li> Führen Sie alle mit sterilem (autoklaviert) Instrumente und Verbrauchsmaterialien. </li><li> Injizieren Ketaminhydrochlorid (70 mg / kg) und Medetomidin Hydrochlorid (1 mg / kg) intraperitoneal anästhesiertdie Maus. Anmerkung: Die Dauer des resultierenden Anästhesieebene 4 h und keine zusätzliche Anästhesie erforderlich. </li><li> Bestätigen Sie die Narkosetiefe durch Verlust von Reflexen zB Zeh Prise. </li><li> Entfernen Sie alle Haare rund um den Schnittbereich und bereiten die Bauchhaut für die Operation durch die Auftragung einer verdünnten Lösung Chlorhexidin. </li><li> Platzieren Sie die Maus auf einem beheizten Operations Pad in Rückenlage und mit Low-Tack Klebeband fixieren die Gliedmaßen auf das Pad. </li><li> Während der Prozedur überwacht die Maus auf Anzeichen von Verbrennungen aufgrund des erwärmten chirurgischen Pad. Wenn möglich, verwenden Sie eine nicht-elektrische Wärmequelle. </li><li> Verabreichen analgetische durch eine subkutane Injektion von Buprenorphin-Hydrochlorid (0,06 mg / kg) und wenden Augensalbe korneale Trocknen zu verhindern. </li><li> Machen Sie eine Mittellinie Bauchschnitt und einen Einschnitt der avaskulären Linea alba mit Trenngewebe Schere, um den Zugriff auf die Bauchhöhle zu gewinnen. </li><li> Hängen Sie die Maus und legen Sie eine colibriRetraktors in die Inzision. </li></ol> 2. Einseitige Ureterobstruktion <ol><li> Mit sterilisierten Wattestäbchen Setzen Sie das linke Harnleiter durch Verschieben der Darm auf die rechte Seite der Bauchhöhle und sie mit feuchten Tücher. </li><li> Mit abgewinkelten Pinzette isolieren und heben Sie den linken Ureter. </li><li> Um eine Ureterobstruktion erstellen, zu ligieren die linke Harnleiter zweimal mit 6 / A schwarz geflochtenen Seidennaht irgendwo zwischen der Blase und Nierenbecken. Für Langzeitversuche, verwenden resorbierbares Nahtmaterial für alle Bauchoperationen. Alternativ kann eine Ligaturklammer zum Harnleiter angewendet werden. </li><li> Um die Blase aus dem Harnleiter zu isolieren, teilen Sie die Harnleiter zwischen den beiden Nähten. </li><li> Die Eingeweide vorsichtig wieder in die Bauchhöhle. </li><li> Befolgen Sie die in Abschnitt 4 aufgeführten Schritte - postoperative Wiederherstellung und Pflege der Schnitt zu schließen und umgekehrt die Anästhesie. </li></ol> 3. Vorbereitung ReversiblE Einseitige Ureterobstruktion <ol><li> Bereiten Sie eine Maus für die Chirurgie und zu isolieren, die linke Harnleiter wie in den Schritten 1,1-2,2 oben beschrieben. </li><li> Um eine Ureterobstruktion, die rückgängig gemacht werden kann erstellen, zu ligieren die linke Harnleiter zweimal mit 6 / A schwarz geflochtenen Seidenfaden in der Nähe der Blase. Verlassen das eine Ende des oberen Fadens solange dies wird verwendet, um den weichen Kunststoffschlauch walled der richtigen Stelle um den Harnleiter zu verankern. </li><li> Einen Längsschlitz in einem 5 mm Länge der weichen Kunststoffschlauch walled so dass er offen, damit es auf den Harnleiter eingesetzt werden gespreizt werden. Jede weiche walled Silikonkunststoffschlauch mit einem Innendurchmesser von 1 mm und Außendurchmesser von 2 mm, können verwendet werden. </li><li> Setzen Sie den weichen ummauerten Kunststoffschlauch sanft um den Harnleiter. Sicherzustellen, daß die langen Naht taucht von der Mitte des Schlitzes in dem Rohr, sobald es um den Harnleiter geschlossen. </li><li> Legen Sie eine Länge von 6 / A-schwarzen geflochtenen Seidenfaden um die weichen, isolierter Rohr Einschließen des Harnleiters und Krawatteeinmal. Nun das lange Ende des Nahtmaterials, die sich aus der Mitte des Schlitzes in der Röhre, in Längsrichtung über den Schlauch, so dass sie auf der Oberseite des zuvor gebundenen Naht liegt. </li><li> Binden Sie die Naht um den Schlauch befindet zweimal, um den Schlauch und den langen Nahtende in Position um den Harnleiter zu verankern. Hinweis: Um die Bildung von Adhäsionen an der Harnleiter und der weichen Wandkunststoffschlauch zu verhindern, kann ein Haftreduktionslösung auf den Bereich um den Schlauch aufgetragen werden. </li><li> Die Eingeweide vorsichtig wieder in die Bauchhöhle. </li></ol> 4. Postoperative Erholung und Pflege <ol><li> Schließen Sie das Bauchfell mit Zierstich mit 5 / A-schwarzen geflochtenen Seidennaht und annähernd die Haut mit metallischen Hautklammern. </li><li> Um das Risiko einer postoperativen Infektion zu minimieren, setzen ein Antiseptikum, wie Iod / Alkohol-Lösung auf die Bauchhaut. </li><li> Teilweise umgekehrten Anästhesie mit Atipamezol Hydrochlorid (2 mg / kg) subkutan verabreicht. </li&gt; <li> Verwalten Flüssigkeiten durch eine subkutane Injektion von 1 ml Kochsalzlösung erwärmt. </li><li> Überwachen Sie die Maus, bis er das Bewusstsein wieder. </li><li> Lassen Sie die Maus, um in einem beheizten Box bei 29 ° C für 24 Stunden gehalten erholen. Angefeuchtet Essen kann auch vorgesehen sein, um Flüssigkeit und Nahrungsaufnahme fördern. </li><li> Lassen Sie die Maus, um zu erholen, um einen gewünschten Grad der Behinderung, in der Regel 7 Tage zu induzieren. </li><li> Für langfristige Erholung Experimente liefern laufenden Analgetika. Wenn die Maus für mehr als 7 Tagen wiederhergestellt werden, entfernen Sie die Hautklammern 7 Tage nach der Operation. </li><li> Sobald der gewünschte Grad der Verstopfung induziert worden ist, entweder die Rückwärts UUO, wie unten beschrieben, oder euthanize die Maus durch zervikale Dislokation und sammeln die Nieren für histopathologische Analyse. </li></ol> 5. Reversible Einseitige Ureterobstruktion <ol><li> So führen Sie eine R-UUO bereiten eine Maus, die Vorbereitung auf die R-UUO unterzogen wurde, für eine Operation wie in den Schritten 10,1-1,7. </li><li> Falls vorhanden, entfernen Sie die Hautklammern und teilen oder entfernen Sie die Fäden in das Bauchfell, um den Zugang zur Bauchhöhle zu gewinnen. Hinweis: Wenn die Harnleiter wurde für ein Langzeitversuch Hautklammern behindert worden war, sollte entfernt 7 Tage nach der Anwendung haben. </li><li> Bereiten Sie die Maus und isolieren Sie die linke Harnleiter wie in den Schritten 1,8 bis 2,2 beschrieben. </li><li> Mit abgewinkelten Pinzette, müssen Sie den weichen ummauerten Kunststoffschlauch von jedem Granulationsgewebe, die sich gebildet haben können. </li><li> Schneiden Sie den Faden Halten der Kunststoffschlauch um den verstopften Ureter mit einem Skalpell und den Schlauch zu entfernen. </li><li> Bestätigen erfolgreiche UUO durch die Beurteilung für das Vorhandensein von Hydronephrose in der linken Niere, sollte die Nieren auch erscheinen blass. </li><li> Teilen Sie den Harnleiter zwischen den Nähten. </li><li> Legen Sie die Restlänge der Harnleiter in die Niere angeschlossen ist, auf einem kleinen Stück steriler Gaze. Dies wird verwendet, um den Urinsediment und toten Zellen, die aus dem Harnleiter ein Ablass sammeln werdennd Nierenbecken, sobald das Nahtmaterial entfernt wird. </li><li> Teilen Sie den Harnleiter oben, aber in der Nähe, die Naht und lassen Sie die Niere auf die Gaze zu entleeren. Verlassen Sie die untere Naht, am nächsten an der Blase, intakt. Dies ist, um sicherzustellen, daß kein Urin aus der Blase und in die Bauchhöhle austreten. </li><li> Sobald die Harnleiter und Nierenbecken wurden abgelassen, gelten ein lang 6 / A-schwarzen geflochtenen Seidennaht bis zum Ende der Restlänge des Harnleiters. Dies wird verwendet, um den Harnleiter zu Blasen Anastomose später durchgeführt unterstützen. </li><li> Gehen Sie folgendermaßen vor, um die verbleibende Länge der Harnleiter in die Blase anastomosieren: <ol><li> Drehen des Harnleiters, daß er liegt vor in ihre ursprüngliche Position und liegt über die Niere. </li><li> Legen Sie eine einzelne 9 / A-Polyamid-Monofilament Heftnaht 2 mm vom Ende des Harnleiters, dass er in Richtung der Blase entsteht. Achten Sie darauf, dass der Faden bleibt in der Muskelschicht und nicht in die Harnröhre Lumen. Die Heftnaht will verwendet werden, um den Harnleiter in die Blase zu verankern. </li><li> Um einen Kanal durch die Blase zu erstellen, übergeben Sie eine 21G Nadel diagonal durch die Blase, so dass er in Richtung der vorderen (ventralen) Wand der Blase verlässt. </li><li> Seien Sie ein Augen Nadel in der Schräge der 21G Nadel. Verwenden Sie die 21G Nadel, um die Augen Nadel durch die Blase zu führen. Die gemusterte Nadel verwendet, um den Harnleiter durch die Blase zu tragen. </li><li> Passieren die 9 / O Heftnaht aufgebracht, um den Harnleiter in Schritt 5.11.2, durch den ersten Einschnitt in der Harnblase und durch die Blasenwand angrenzend an die Eintrittsstelle. Sobald der Harnleiter durch die Blase geleitet wird dies gebunden werden, um die Harnröhre in die Blase zu verankern. </li><li> Legen Sie die lange 6 / A-schwarzen geflochtenen Seidenfaden durch die Augen Nadel in Schritt 5.10 bis zum Ende des Harnleiters angewendet. </li><li> Die Augen Nadel vorsichtig herausziehen aus der Blase gleichzeitig sicherzustellen, dass der Harnleiter wird auch durch die Blase gezogen. </li><li> Sobald die Harnleiter geht aus the Blase entfernen gemustert Nadel und Anwendung einer Klammer an der langen Naht am Ende des Harnleiters Zurückziehen wieder in die Blase zu verhindern. </li><li> Um den Harnleiter im Ort in der Blase zu verankern, das Ja-9 / A-Polyamid-Monofilament Heftnaht im Schritt 5.11.5 angewendet. </li><li> Bewerben zusätzlichen Einzel 9 / A-Polyamid-Monofilament Krawatte Nähten wie in den Schritten 5.11.2 und 5.11.5 an zwei Standorten rund um den Einstieg beschrieben fest zu verankern den Harnleiter in die Blase. </li><li> Mit der Rückseite geöffnet Schere, drücken Sie die Blasenwand ein wenig zurück, um mehr des austretenden Harnleiter aus. </li><li> Unterteilen den Harnleiter über dem lang Naht am Ende des Harnleiters angeordnet. Der Harnleiter ist in den Körper der Blase zurückzuziehen. Es ist üblich, um Urin aus der Öffnung in der Blase fließt, zu beobachten, was bestätigt, das freie Lumen des Harnleiters. </li><li> Schließen Sie die Ausgabe in der Blase aufgewickelt mit einem 9 / A-Polyamid-Monofilament Naht. </li></ol></li><li> Die Eingeweide vorsichtig wieder indie Bauchhöhle. </li><li> Geben post-operative Betreuung wie in Schritten von 4,1 bis 4,8 beschrieben. </li><li> Lassen Sie die Maus, um zu erholen, bis die Nieren dekomprimiert, in der Regel 7 Tage. </li><li> Bei der experimentellen Endpunkt, einschläfern die Maus durch Genickbruch und sammeln die Nieren zur histopathologischen Analyse. </li></ol>

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<li>Thornhill, B. A., Chevalier, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variable+partial+unilateral+ureteral+obstruction+and+its+release+in+the+neonatal+and+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Variable partial unilateral ureteral obstruction and its release in the neonatal and adult mouse.</a> Methods Mol Biol. 886, 381-392 (2012).</li>
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Die Autoren haben keine Konkurrenz oder widerstreitende Interessen offen zu legen.

Eine Obstruktion der Niere kann native oder transplantierte Nieren betreffen und zu Nierenschäden und Narbenbildung führen. Das R-UUO-Modell ist für menschliche Erkrankungen von Bedeutung, da die Patienten häufig eine Obstruktion des Nierentrakts infolge einer Prostatahypertrophie, hintere Harnröhrenklappen usw. aufweisen, die eine Dekompression erfordern, wobei die Patienten häufig eine signifikante verbleibende Nierenfunktionsstörung aufweisen, für die es derzeit keine Behandlungsoptionen gibt und die schließlich zu ei...

Das übergeordnete Ziel des hier beschriebenen experimentellen Modells ist es, eine obstruktive Nephropathie durch einseitige Harnleiterobstruktion (UUO) zu induzieren, die entweder irreversibel (UUO) oder reversibel (R-UUO) sein kann. Es wird ein einfaches irreversibles Modell der UUO vorgestellt, bei dem der linke Harnleiter durch eine Ligatur mit einer Naht oder durch das Anlegen eines Ligaturclips dauerhaft verschlossen wird. Dies führt zu einer deutlichen Erweiterung des Harnleiters zusammen mit einer verminderten renalen Durchblutung und glomerulären Filtration. Die Nierenhistologie zeigt eine tubuläre Dilatation und eine zunehmend schwere interstitielle Nierenentzündung und Fibrose. Irreversibles UUO ist ein nützliches Modell und wurde von vielen Forschern bei der Erforschung von Nierenentzündungen und Fibrose übernommen. 1-4 Obwohl das irreversible Modell der UUO eine gewisse chirurgische Expertise erfordert, ist es relativ einfach und wird oft verwendet, um Einblicke in die Pathogenese der interstitiellen Nierenschädigung und der daraus resultierenden Fibrose zu erhalten. Ebenfalls vorgestellt wird ein weniger häufig verwendetes R-UUO-Modell, das eine Modifikation der ursprünglich von Tapmeier et al. beschriebenen Methode verwendet. 5 Das R-UUO-Modell hat großes Zukunftspotenzial für die Erforschung von Entzündungs- und Immunprozessen, die Zell- und Geweberegeneration sowie den anschließenden Gewebeumbau nach der Beseitigung eines schädigenden Stimulus. 
Das anspruchsvollere R-UUO-Modell wurde von einer begrenzten Anzahl von Forschern verwendet, wobei einige Gruppen eine signifikant andere Operationstechnik als die hier beschriebene anwandten6,7, jedoch mit interessanten Ergebnissen. In dem vorgestellten R-UUO-Modell wird der Harnleiter ligiert, um eine vollständige Harnleiterobstruktion für einen Zeitraum zu induzieren, der ausreicht, um das gewünschte Ausmaß an Schädigung und Fibrose zu induzieren: Bei der hier beschriebenen Methode wurden 7 Tage UUO gewählt. Die Harnleiterobstruktion wird rückgängig gemacht und die Niere wird für einen vom Untersucher festgelegten Zeitraum dekomprimieren gelassen, bevor die Mäuse gekeult und die Niere zur Analyse entnommen werden: Bei der hier beschriebenen Methode wurden 7 Tage Dekompression gewählt, obwohl ein längerer Zeitraum gewählt würde, wenn das Abklingen von Entzündungen und Fibrose untersucht würde. Obwohl die hier beschriebene Methode viel chirurgisches Know-how erfordert, bietet sie gegenüber anderen R-UUO-Modellen einige Vorteile. Das Anbringen von weichwandigen Kunststoffschläuchen auf dem verstopften Harnleiter verhindert eine übermäßige Harnleitererweiterung und erleichtert so die anschließende Manipulation und Anastomose des Harnleiters. Darüber hinaus ist im beschriebenen R-UUO-Modell der Harnleiter geteilt, wodurch Restsedimente und Ablagerungen im Urin entfernt werden können. Dies bestätigt, dass das verbleibende Harnleiterlumen vor der Anastomose in die Blase entstopft und sichtbar ist. 
Experimente, die sowohl das irreversible als auch das reversible UUO-Modell einbeziehen, können Forschern einen aussagekräftigen Einblick in die molekularen und zellulären Mechanismen sowohl der Verletzung als auch der anschließenden Auflösung und Regeneration geben. Daher wäre das hier beschriebene Modell von R-UUO von großer Bedeutung für Forscher, die sich für postinflammatorischen Gewebeumbau interessieren und wie dieser moduliert werden kann.

<table><tbody><tr><td>Stumpfe Präparierschere</td><td>Fine Science Tools</td><td>14072-10</td><td></td></tr><tr><td>Federschere &ndash; gerade</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>Zahnzange</td><td>Fine Science Tools</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Abgewinkelte Pinzette x 2</td><td>Fine Science Tools</td><td>00649-11</td><td></td></tr><tr><td>Gerade Pinzette</td><td>Fine Science Tools</td><td>00632-11</td><td></td></tr><tr><td>Colibri 3 cm Drahtaufroller</td><td>Fine Science Tools</td><td>17000-03</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo Nadelhalter mit Schloss</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>Wundclip-Applikator</td><td>Fine Science Tools</td><td>12031-07</td><td></td></tr> 7 <tr><td>mm gewickelte Clips</td><td>Fine Science Tools</td><td>12032-07</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo Mikronadelhalter mit Schloss</td><td>Fine Science Tools</td><td>12060-01</td><td></td></tr><tr><td>OPMI Pico-Mikroskop</td><td>Carl Zeiss</td><td>S100</td><td></td></tr><tr><td>Thermisches elektronisches Pad</td><td>Cozee Comfort</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>6/O geflochtenes Seidennaht</td><td>Harvard Gerät</td><td>72-3287</td><td></td></tr><tr><td>9/O Dafilon (Polyamid) Naht</td><td>B-Braun</td><td>G1111434</td><td></td></tr><tr><td>5/O geflochtenes Seidennaht</td><td>Harvard Gerät</td><td>51-7680</td><td></td></tr><tr><td>Regulär abgeschrägte Nadel, 1 Zoll, 21 G</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305175</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Spritzen-Stülpspitze</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>300184</td><td></td></tr><tr><td>Wypall Papiertupfer</td><td>Kimberley-Clark</td><td>L40</td><td>Sterilisiert (Autoklav)</td></tr><tr><td>Wattestäbchen</td><td>Johnson & Johnson</td><td>n/a</td><td>Sterilisiert (Autoklav)</td></tr><tr><td>Glatte Abdeckungen</td><td>Guardian</td><td>CB03</td><td>Sterilisiert (Autoklav)</td></tr><tr><td>Weichwandige Silikonkautschukschläuche</td><td></td><td></td><td>Silikonschläuche - Innendurchmesser 1,0 mm; Außendurchmesser 2,0 mm; Wandstärke 0,6 mm</td></tr><tr><td>(Lacri-Lube) Weißes weiches Paraffin 57,3%, Mineralöl 42,5% und Lanolinalkohole 0,2</td>%<td>Allergan Ltd</td><td>21956GB10X</td><td></td></tr><tr><td>(Videne) Povidon-Jod 10%</td><td>Ecolab Ltd</td><td>PL 04509/0041</td><td></td></tr><tr><td>(Vetalar V) Ketaminhydrochlorid</td><td>Pfizer Animal Health</td><td>Vm 42058/4165</td><td>100mg/ml Lösung</td></tr> <tr><td>(Domitor) Medetomidinhydrochlorid</td><td>Orion Pharma</td><td>Vm 06043/4003</td><td>1mg/ml</td></tr> <tr><td>(Vetergesiekum) Bupernorphin Hydrochlorid</td><td>Alsto Animal Health</td><td>Vm 00063/4002</td><td>0,3 mg/ml</td></tr> <tr><td>(Antisedan) Atipamezol Hydrochorid</td><td>Orion Pharma</td><td>Vm 06043/4004</td><td>5 mg/ml</td></tr> <tr><td>(Adept) 4% Icodextrin</td><td>Baxter</td><td></td><td>Lösung zur Reduzierung der Adhäsion</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>Baxter</td><td>FKE1323</td><td></td></tr></tbody></table>

ein mausmodell der irreversiblen und reversiblen einseitige ureterobstruktion

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

Eine Obstruktion der Niere kann native oder transplantierte Nieren betreffen und zu Nierenschäden und Narbenbildung führen. Hier wird ein Modell der obstruktiven Nephropathie vorgestellt, die durch eine einseitige Harnleiterobstruktion (UUO) induziert wird und entweder irreversibel (UUO) oder reversibel (R-UUO) sein kann. Im irreversiblen UUO-Modell kann der Harnleiter für unterschiedliche Zeiträume verstopft sein, um eine immer schwerere Nierenentzündung und interstitielle fibrotische Narbenbildung zu induzieren. Im reversiblen R-UUO-Modell ist der Harnleiter verstopft, um Hydronephrose, tubuläre Dilatation und Entzündung zu induzieren. Nach einer angemessenen Zeit wird die Harnleiterobstruktion dann chirurgisch durch Anastomose des durchtrennten, zuvor verstopften Harnleiters zur Blase rückgängig gemacht, um eine vollständige Dekompression der Niere und die Wiederherstellung des Harnflusses in die Blase zu ermöglichen. Das irreversible UUO-Modell wurde verwendet, um verschiedene Aspekte von Nierenentzündungen und -narbenbildung zu untersuchen, einschließlich der Pathogenese der Krankheit und der Erprobung potenzieller entzündungshemmender oder antifibrotischer Therapien. Das anspruchsvollere Modell von R-UUO wurde von einigen Forschern verwendet und bietet ein erhebliches Forschungspotenzial, da es die Untersuchung von Entzündungs- und Immunprozessen sowie des Gewebeumbaus in einer verletzten und vernarbten Niere nach Entfernung des verletzenden Stimulus ermöglicht. Infolgedessen bietet das R-UUO-Modell den Forschern die Möglichkeit, die Auflösung von Nierenentzündungen zusammen mit Schlüsselaspekten der Gewebereparatur zu untersuchen. Diese experimentellen Modelle sind für menschliche Erkrankungen von Bedeutung, da Patienten häufig eine Obstruktion des Nierentrakts aufweisen, die eine Dekompression erfordert, und häufig mit einer signifikanten verbleibenden Nierenfunktionsstörung zurückbleiben, für die es derzeit keine Behandlungsoptionen gibt und die schließlich zu Nierenversagen im Endstadium führen kann.

Das Aussehen der Nierenveränderungen deutlich folgende Ureterobstruktion und es wird heller und angespannt Palpation mit der Zeit (Abbildung 1). Es gibt zunehmende Ausdehnung des Ureters proximal der Obstruktion und des Nierenbeckens. Die Niere wird zunehmend atrophische wie die Dauer obstruktiver Nephropathie steigt mit längerer Obstruktion was zu einer deutlichen Verdünnung der Nierenrinde und Medulla. Nach der Auflösung des Ureterobstruktion, wird die Farbe der Niere dunkler Blutfluss erhöht und Gewe...

Das murine Modell der irreversiblen einseitigen Harnleiterobstruktion (UUO) wird zusammen mit dem Modell der reversiblen UUO vorgestellt, bei dem die Harnleiterobstruktion durch Anastomose des durchtrennten Harnleiters in die Blase aufgehoben wird. Diese Modelle ermöglichen die Untersuchung von Nierenentzündungen und Narbenbildung sowie des Gewebeumbaus.

Ein Mausmodell der irreversiblen und reversiblen Einseitige Ureterobstruktion

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

Dieses Video stellt ein Mausmodell einer obstruktiven Neuropathie vor, die durch einseitige Harnleiterobstruktion verursacht wird und entweder irreversibel oder reversibel sein kann. Histologische Daten, die die resultierende strukturelle Schädigung sowie deren Erholung nach der Rückbildung zeigen, werden präsentiert. Diese schematische Zeichnung veranschaulicht die wichtigsten Schritte dieses Modells. Hier sehen wir die linke Niere, den Harnleiter und die Blase.Eine standardmäßige einseitige Harnleiterobstruktion wird durch Ligatur des Harnleiters induziert. Der Harnleiter wird dadurch verengt und die Niere wird im Laufe der Zeit hydro nephrotisch. Um eine reversibele einseitige Harnleiterobstruktion durchzuführen, wird der Harnleiter nahe der Harnblase ligiert und ein weichwandiges Kunststoffrohr, das in Grau dargestellt ist, am Harnleiter an der Stelle der Obstruktion angebracht.Um eine übermäßige Harnleiterdilatation zu begrenzen, wird die Niere im Laufe der Zeit hydro nephrotisch und anschließend zu einem für die Studie geeigneten Zeitpunkt entblockt. Sieben Tage nach diesem Experiment wird die weiche Wandkanüle entfernt und der Harnleiter unmittelbar oberhalb der Ligaturebene durchtrennt. Der entblockte Harnleiter wird anastomosiert in die Harnblase eingebracht, um den Harnfluss zu ermöglichen, und die Niere entleert sich in der Regel über mehrere Tage hinweg.Das einseitige Harnleiterobstruktionsmodell, das als UUO bezeichnet wird, kann verwendet werden, um die Entwicklung von Gewebeschäden und Fibrosen im Anschluss an eine obstruktive Nephropathie zu untersuchen. Das reversibel obstruktive Harnleitermodell, abgekürzt als RUUO, kann genutzt werden, um Einblicke in die Gewebeumgestaltung nach einer Verletzung zu erhalten. Hier ist eine Darstellung eines typischen Experiments, das sowohl die UUL- als auch unsere UUL-Verfahren umfasst.Die Mäuse unterziehen sich am Tag null und sieben Tage später einer UUL. Die Mäuse werden entweder getötet, um das Ausmaß der Schädigung zu beurteilen, oder die Harnleiter werden entblockt, um eine RUUR durchzuführen. Anschließend werden die Nieren sieben Tage lang zur Entlastung belassen, bevor das Gewebe entnommen wird.Das Gewebe kann auf strukturelle Schäden, Makrophageninfiltration, Ansammlung von Myofibroblasten und Fibrose untersucht werden. Hier ist ein typisches chirurgisches Aufbauschema. Der Eingriff wird mit sterilen, autoklavierten Instrumenten und Verbrauchsmaterialien durchgeführt, die innerhalb eines sterilen Operationsfeldes positioniert sind.Wenn mehrere Tiere operiert werden, sollten die Instrumente zwischen den Eingriffen durch einen Perlensterilisator sterilisiert oder für jeden Eingriff ein neuer Satz Instrumente verwendet werden. Die Operateure tragen einen sterilen Kittel, Maske, Haube und Handschuhe. Diese acht Wochen alte männliche C57BL/6-Maus wurde durch eine intraperitoneale Injektion von Ketaminhydrochlorid und meine anesthesiert.Die Tiefen der Anästhesie wurde durch das Fehlen einer Reaktion auf einen Zehenquetsch bestätigt. Der Operationsbereich wurde rasiert und mit einer verdünnten Chlorhexidinlösung desinfiziert. Eine Augenfeuchtigkeitslotion wurde aufgetragen, um eine Hornhauttrocknung zu verhindern.Das Analgetikum Buprenorphinhydrochlorid wurde subkutan injiziert. Der Mund wurde auf eine sterile, abgedeckte, beheizte Operationsauflage gelegt, und die Gliedmaßen wurden mit Gewebetrennschere fixiert. Eine mediane Laparotomie wird durchgeführt, und ein Schnitt entlang der avaskulären linea alba erfolgt. In diesem nächsten Kapitel wird beschrieben, wie eine irreversible UUOA durchgeführt wird. Ein Calibra-Retraktor wird in den Schnitt eingeführt, und die Maus wird mit sterilen Tüchern abgedeckt.Die Därme werden verlagert und mit feuchter steriler Gaze abgedeckt, um den linken Harnleiter freizulegen. Der Harnleiter wird mit gekrümmten Pinzetten freigelegt und isoliert, um eine Obstruktion zu erzeugen. Der Harnleiter wird zweimal mit einer sechsfachen schwarzen geflochtenen Seidennaht ligiert.Der Harnleiter kann überall zwischen der Harnblase und dem Nierenbecken verlegt sein. Der Harnleiter wird dann zwischen den Nähten durchtrennt. In diesem nächsten Kapitel wird beschrieben, wie eine umkehrbare Harnleiterverlegung durchgeführt wird.Dies ist die erste Phase eines RUUL. Der Harnleiter wird mit gekrümmten Pinzetten freigelegt und isoliert, um eine Obstruktion hervorzurufen. Der Harnleiter wird zweimal mit einer 6,0 schwarzen chirurgischen Seidennaht ligiert.Der Harnleiter sollte nahe der Harnblase abgeschnürt werden, um eine geeignete Länge des Harnleiters für die Anastomose an die Harnblase zu erhalten. Während des Umkehrverfahrens werden die Nähte gekürzt, wobei eine Naht jedoch lang gelassen wird, um sie später verwenden zu können, und ein etwa fünf Millimeter langes Stück weichwandigen Kunststoffrohrs wird abgeschnitten. Anschließend wird ein Längsschlitz so angelegt, dass sich das Rohr auseinanderklaffen lässt, um es um den Harnleiter legen zu können.Der weiche Kunststoffschläuch sollte einen Innendurchmesser von einem Millimeter und einen Außendurchmesser von zwei Millimetern aufweisen. Der weiche Kunststoffschläuch wird dann vorsichtig um den Harnleiter gelegt, wobei sichergestellt werden muss, dass nach dem Schließen die lange Naht aus der Mitte des Schlitzes austritt. Anschließend wird ein sechs Zoll langer schwarzer geflochtener Seidenfaden um den Schlauch geführt und verknotet.Einmal wird der lange Faden, der aus der Mitte der Tubing hervorkommt, in die nächste Naht einbezogen. Dies wird durchgeführt, um Harnleiter und Tubing sicher zu fixieren. Die Tubing um den Harnleiter verhindert eine übermäßige Dilatation des Harnleiters am Ende sowohl der UUO- als auch der RUUO-Verfahren.Die Eingeweide werden reponiert, das Peritoneum wird genäht und die Haut mit Metallclips verschlossen. Auf den Operationsbereich wird außerdem Jod aufgetragen. Die Anästhesie wird durch eine subkutane Injektion von Aamaz teilweise aufgehoben.Hydrochlorid und Flüssigkeiten werden durch eine subkutane Injektion von einem Milliliter erwärmter Kochsalzlösung verabreicht. Die Mäuse werden überwacht, bis sie das Bewusstsein wiedererlangt haben, und anschließend zur Erholung in eine auf 29 Grad gehaltene Wärmekiste gestellt, wo sie 24 Stunden lang verbleiben. In den Tagen nach einer Harnwegsobstruktion entwickeln die Nieren eine hydronische Veränderung.Mäuse können zu verschiedenen Zeitpunkten während der Verletzungsphase oder nach der Rückbildung der Obstruktion euthanasiert werden. In diesem nächsten Kapitel wird beschrieben, wie eine Rückbildung durchgeführt wird, was die zweite Phase des RUUO-Verfahrens darstellt. Die Maus wird wie zuvor beschrieben anästhesiert und präpariert.Die metallischen Hautklammern werden entfernt und eine Laparotomie durchgeführt. Die Bauchfellnähte werden entfernt, und das Peritoneum kann vorsichtig mit Rattenzahn-Zangen geöffnet werden. Anschließend wird die Maus präpariert und der linke Harnleiter wie zuvor beschrieben mithilfe von Winkelzangen freigelegt.Der Harnleiter und die weiche Kunststoffschläuche werden vom umgebenden Gewebe isoliert. Die Nähte, die die weiche Schlauchverbindung fixieren, werden mit dem Skalpell durchtrennt und anschließend entfernt. Die weiche Kunststoffschläuche werden dann vorsichtig herausgenommen, wobei ein dilatierter Harnleiter sichtbar wird.Der Harnleiter ist an der Stelle der Obstruktion empfindlich und könnte oberhalb der Obstruktion reißen, wie in diesem Clip zu sehen ist. Die zuvor in der ersten Phase der UUO nahe der Blase platzierten Nähte bleiben jedoch intakt und gewährleisten, dass kein Urin aus der Blase in die Bauchhöhle austritt. Ein Stück steriler Gaze wird unter den Harnleiter gelegt, um eventuelle Harnsedimente aufzufangen, die aus dem zuvor obstruierten Harnleiter abfließen.Die verbleibende Länge des entblockten Harnleiters muss so lange entleeren, bis klares Urin abgeht, um sicherzustellen, dass das Harnleiterlumen von jeglichem Debris befreit ist. Sobald der Harnleiter und das Nierenbecken entleert wurden, wird am Harnleiterende ein langer, schwarzer, sechsfacher, geflochtener Seidenfaden angebracht. Dieser dient zur Unterstützung der anschließenden Harnleiter-Blasen-Anastomose.Der Harnleiter wird dann so gedreht, dass er sich in einer Position vor seiner ursprünglichen Lage befindet und über dem Nierenkörper liegt. Eine einzelne nano Polyamid-Monofil-Naht (TAing) wird am Ende des Harnleiters angebracht. Es ist darauf zu achten, dass die Naht im Muskelmantel verbleibt und nicht in das Harnleiterlumen eindringt.Die Naht dient dazu, den Harnleiter später in der Harnblase zu verankern, um die Harnblase für die Anastomose vorzubereiten. Ein Kanal wird durch die Harnblase hindurch erzeugt, indem eine Nadel der Stärke 21 durch die Harnblase diagonal durchgeführt wird. Die Nadel der Stärke 21 wird anschließend verwendet, um eine Augennadel durch die Harnblase zu führen. Die zuvor im Harnleiter platzierte Nino-Naht wird dann durch den ersten Einschnitt in der Harnblase und aus der Harnblasenwand neben dem Einstichpunkt herausgeführt, um den Harnleiter durch die Harnblase zu ziehen.Die lange Sechs-Null-Naht, die am Ende des Harnleiters angebracht ist, wird durch das Nadelöhr geführt. Danach wird die Kanüle langsam durch die Harnblase zurückgezogen, wobei sichergestellt wird, dass auch der Harnleiter durch die Harnblase gezogen wird. Sobald der Harnleiter innerhalb der Harnblase positioniert ist, werden die am Harnleiter und an der Blasenwand angebrachten Nano-Nähte verknotet, um den Harnleiter an Ort und Stelle zu befestigen und ihn sicher zu verankern.Eine zweite Otax-Naht wird angelegt. Diese wird erneut durch den Harnleiter geführt, wobei sichergestellt wird, dass sie innerhalb der Muskelschicht verbleibt, danach durch den Blasenschnitt und durch die Blasenwand nach außen geführt. Anschließend wird sie auf ähnliche Weise verknotet.Eine dritte Nano-Tax-Naht wird ebenfalls an der Hinterseite der Blase angebracht. Anschließend werden die Rückseiten geöffneter Scheren verwendet, um die Blasenwand leicht zurückzuschieben und so die Länge des Harnleiters freizulegen. Der Harnleiter wird dann oberhalb der Lungennaht durchtrennt.Der markierte Harnleiter zieht sich daraufhin schräg in die Harnblase zurück. Vier Hinweise werden genutzt, um sicherzustellen, dass der Harnleiter vollständig in die Harnblase eingerückt ist. Abschließend wird die Austrittswunde in der Harnblase mit einer neunköpfigen Polyamid-Einzelstrangnaht verschlossen, wobei vor dem Verschluss sichergestellt werden muss, dass der Harnleiter fest innerhalb der Harnblase verankert ist.Das Peritoneum und die Haut werden wie zuvor beschrieben versorgt, die postoperative Pflege erfolgt wie zuvor beschrieben. In dieser Studie wird allen UUO-Mäusen eine Erholungszeit von sieben Tagen eingeräumt, um der entblockierten Niere Zeit zur Dekompression zu geben, obwohl auch frühere oder spätere Zeitpunkte untersucht werden können. Im Folgenden werden Daten präsentiert, die das Erscheinungsbild der blockierten und entblockierten Nieren sowie die resultierende Schädigung veranschaulichen.Diese Abbildung zeigt das Erscheinungsbild der nativen U-U-L-U-U-O-Niere, des Nierenbeckens und der Harnleiter im Vergleich zur nativen Niere. Die UUO-Niere, die sieben Tage lang verlegt war, erscheint hydro-nephrotisch und blass in der Farbe. Nach sieben Tagen der Beseitigung der Verlegung hat sich die RUO-Niere entleert, wobei das Nierenbecken und der Harnleiter wieder eine ähnliche Größe und Farbe wie die native Niere angenommen haben.Beachten Sie, dass der IUO-Harnleiter aufgrund der Destruktionstechnik und der Anastomosierung in die Harnblase kürzer ist als die Harnleiter der UUO- und der nativen Nieren. Diese Abbildung zeigt repräsentative Bilder von mit H und E gefärbten Nierenschnitten aus normalen, UUO- und RUUO-Nieren. Das gesunde Interstitium der normalen Niere besteht aus Querschnitten kompakter, gesunder Tubuli. Mehrere Tubuli, die durch die schwarzen Pfeile markiert sind, weisen am siebten Tag eine deutliche Dilatation auf. Im Gegensatz dazu ist die Dilatation sieben Tage nach der Umkehrung der UUL nach QUL in der Tubusprobe deutlich vermindert. Das hier vorgestellte Mausmodell der obstruktiven Nephropathie wird durch eine einseitige Harnleiterobstruktion induziert, die entweder irreversibel oder reversibel sein kann.Das hier beschriebene reversible Modell ermöglicht das Entfernen der harnleiterseitigen Obstruktion und die Anastomosierung des Harnleiters an die Blase, um den Harnfluss vollständig wiederherzustellen. Die resultierende Nierenentlastung erlaubt die Untersuchung der Gewebeumgestaltung nach Verletzungsversuchen. Die Einbeziehung sowohl irreversibler als auch reversibler Modelle der obstruktiven Nephropathie verschafft Forschern einen tiefen Einblick in Krankheitsprozesse und die Art und Weise, wie therapeutische Maßnahmen sowohl die Entstehung von Schäden als auch die anschließende Gewebeumgestaltung beeinflussen.

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Forschung

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Medizin

Dieses Video zeigt das Verfahren zur Generierung eines unilateralen Harnleiterobstruktionsmodells. Bei dem Verfahren wird einer der Harnleiter der Maus durchtrennt, um den Urinfluss zu behindern.

Einseitige Harnleiterobstruktion Mausmodell: Ein chirurgischer Eingriff zur Behinderung des Harnflusses aus einer Niere in Mausmodellen

Wir beschreiben eine Methode zur Bewertung der microRNA-Expression in den Nieren von Mäusen mit einseitiger Harnleiterobstruktion (UUO) durch quantitative Reverse-Transkription-Polymerase-Kettenreaktion. Dieses Protokoll eignet sich zur Untersuchung von Nieren-MicroRNA-Expressionsprofilen bei Mäusen mit UUO und im Kontext anderer pathologischer Erkrankungen.

Quantitative Echtzeit-PCR-Bewertung von microRNA-Expressions in der Mausniere mit einseitiger ureteraler Obstruktion

Hier präsentieren wir ein Protokoll mit 2-Photonen-Mikroskopie in München Wistar Fromter Ratten mit Oberflächenglomeruli, um die Auswirkungen einer verlängerten Harnleiterobstruktion auf die glomeruläre Dynamik und Funktion zu quantifizieren.

Mit der 2-Photonen-Mikroskopie die Auswirkungen einer chronischen einseitigen Harnleiterobstruktion auf glomeruläre Prozesse quantifizieren

Das vorliegende Protokoll beschreibt ein schrittweises, reproduzierbares Modell der einseitigen Harnleiterobstruktion.

Ein unreifes Mausmodell einer reversiblen einseitigen Harnleiterobstruktion

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Induktion einer einseitigen Harnleiterobstruktion (UUO) bei Mäusen, um das Fortschreiten der Gewebefibrose bei obstruktiver Nephropathie zu untersuchen. Es umfasst chirurgische Eingriffe, postoperative Pflege und Methoden zur Beurteilung der Fibrose.

Einseitiges Harnleiterobstruktionsmodell zur Untersuchung der interstitiellen Nierenfibrose

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Ein Mausmodell zur Bewertung der langfristigen strukturellen und funktionellen Ergebnisse nach der Umkehrung einer anhaltenden einseitigen Harnleiterobstruktion

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Ein Mausmodell der irreversiblen und reversiblen Einseitige Ureterobstruktion

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