Ein Mausmodell der irreversiblen und reversiblen Einseitige Ureterobstruktion

Dieses Video zeigt ein Mausmodell der obstruktiven Neuropathie, die durch eine einseitige Harnleiterobstruktion induziert wird, die entweder irreversible oder reversible sein kann. Histologische Daten zeigen die resultierende strukturelle Verletzung und ihre Genesung nach der Umkehrung. Diese schematische Karikatur veranschaulicht die wichtigsten Schritte dieses Modells. Hier sehen wir den linken Nierenharnleiter und die linke Blase.

Eine standardmäßige einseitige Harnleiterobstruktion wird durch Ligatur des Harnleiters induziert. Der Harnleiter wird disstandard und die Niere wird mit der Zeit hydronephrotisch. Um eine reversible einseitige Harnleiterobstruktion durchzuführen, wird der Harnleiter nahe der Blase ligiert und ein weichwandiger Kunststoffschlauch, der grau dargestellt ist, an der Stelle der Obstruktion um den Harnleiter gelegt.

Um eine übermäßige Harnleiterdilatation zu begrenzen, wird die Niere im Laufe der Zeit hydronephrotisch und wird dann zu einem für die Studie geeigneten Zeitpunkt enobstruktiert. Sieben Tage nach Ablauf dieses Experiments wird der weichwandige Schlauch entfernt und der Harnleiter knapp über dem Ligaturniveau durchtrennt. Der frei verstopfte Harnleiter ist eine Anastomose in die Blase, um den Urinfluss zu ermöglichen, und die Niere dekomprimiert sich in der Regel über mehrere Tage.

Das unilaterale Harnleiterobstruktionsmodell, das als UUO bezeichnet wird, kann verwendet werden, um die Entwicklung von Gewebeverletzungen und Fibrose nach obstruktiver Nephropathie zu untersuchen. Das reversible Harnleiterobstruktionsmodell, abgekürzt RUUO, kann verwendet werden, um einen Einblick in den Gewebeumbau zu erhalten, der auf eine Verletzung folgen kann. Hier ist eine Darstellung eines typischen Experiments, das sowohl UUL als auch unsere UUL-Verfahren umfasst.

Mäuse durchlaufen die UUL am Tag Null und sieben Tage später. Die Mäuse werden entweder geopfert, um das Ausmaß der Verletzung zu beurteilen, oder die Harnleiter werden entstopft, um eine RUUR durchzuführen. Die Nieren werden dann sieben Tage lang dekomprimiert, bevor Gewebe entnommen wird.

Das Gewebe kann auf strukturelle Verletzungen, Makrophagen, Infiltration, Myofibroblastenakkumulation und Fibrose untersucht werden. Hier ist ein typischer chirurgischer Aufbau. Der Eingriff wird mit sterilen Autoklaveninstrumenten und Verbrauchsmaterialien durchgeführt, die in einem sterilen Operationsfeld positioniert sind.

Wenn mehrere Tiere operiert werden, sollten die Instrumente zwischen den Eingriffen mit einer Perle, einem Sterilisator oder einem neuen Satz Instrumente für jeden Eingriff sterilisiert werden. Die Bediener tragen einen sterilen Kittel, eine Maske, einen Hut und Handschuhe. Dieses acht Wochen alte männliche C 57 black six Maus wurde durch eine intraperitoneale Injektion von Ketamin, Hydrochlorid und Mein betäubt.

Die Tiefe der Anästhesie wurde durch den Verlust der Reaktion auf ein Zehenklemmen bestätigt. Der Operationsbereich wurde rasiert und mit einer verdünnten Chlorhexidinlösung desinfiziert. Augenbefeuchtung wurde angewendet, um ein Austrocknen der Hornhaut zu verhindern.

Das Analgetikum Buprenorphinhydrochlorid wurde durch eine subkutane Injektion verabreicht. Der Mund wurde auf eine steril drapierte, beheizte Operationsunterlage gelegt, und die Gliedmaßen wurden mit einer Gewebetrennschere immobilisiert, und es wurde eine Mittellinien-Laparotomie durchgeführt und ein Schnitt entlang des avaskulären linearen Ellbogens vorgenommen. Im nächsten Kapitel wird detailliert beschrieben, wie ein irreversibler UUOA-Calibra-Retraktor in den Schnitt eingeführt und die Maus mit sterilen Tüchern bedeckt wird.

Der Darm wird verdrängt und mit feuchtigkeitssteriler Gaze bedeckt, um den linken Harnleiter freizulegen. Der Harnleiter wird freigelegt und mit einer abgewinkelten Pinzette isoliert, um eine Obstruktion zu induzieren. Der Harnleiter wird zweimal mit sechs schwarzen geflochtenen Seidenfäden ligiert.

Der Harnleiter kann überall zwischen der Blase und dem Nierenbecken verstopft sein. Der Harnleiter wird dann zwischen den Nähten aufgeteilt. Im nächsten Kapitel wird beschrieben, wie eine Harnleiterobstruktion durchgeführt wird, die rückgängig gemacht werden kann.

Dies ist die erste Stufe eines RUUL. Der Harnleiter wird freigelegt und mit einer abgewinkelten Pinzette isoliert, um eine Obstruktion zu induzieren. Der Harnleiter wird zweimal mit einer 6.0 schwarzen geflochtenen Seidennaht ligiert.

Der Harnleiter sollte in der Nähe der Blase verstopft werden, um eine geeignete Länge des Harnleiters für die Anastomose zur Blase zu erhalten. Während des Umkehrverfahrens werden die Nähte gekürzt, aber eine wird für die spätere Verwendung lang belassen und etwa fünf Millimeter weichwandiger Kunststoffschlauch geschnitten. Anschließend wird der Längsschlitz so gemacht, dass er aufgespreizt werden kann, damit er um den Harnleiter herum angelegt werden kann.

Die weichwandigen Kunststoffschläuche sollten einen Innendurchmesser von einem Millimeter und einen Außendurchmesser von zwei Millimetern haben. Der weichwandige Kunststoffschlauch wird dann vorsichtig um den Harnleiter gelegt, um sicherzustellen, dass die lange Naht nach dem Schließen aus der Mitte des Schlitzes austritt. Als nächstes wird eine Länge von sechs oh schwarz geflochtenen Seidenfäden um den Schlauch geführt und gebunden.

Sobald die lange Naht, die aus der Mitte des Schlauchs austritt, in den nächsten Binder eingearbeitet wird. Dies geschieht, um den Harnleiter und den Schlauch sicher zu verankern. Der Schlauch um den Harnleiter verhindert eine übermäßige Harnleiterdilatation am Ende sowohl der UUO- als auch der RUUO-Verfahren.

Der Darm wird ersetzt, das Bauchfell vernäht und die Haut mit metallischen Klammern verschlossen. Jod wird auch auf den Operationsbereich aufgetragen. Die Anästhesie wird mit einer subkutanen Injektion von AAMAZ teilweise rückgängig gemacht.

Hydrochlorid und Flüssigkeiten werden durch subkutane Injektion von einer mil erwärmter Kochsalzlösung verabreicht. Die Mäuse werden überwacht, bis sie das Bewusstsein wiedererlangt haben, und dürfen dann jede Wärmebox, die 24 Stunden lang bei 29 Grad gehalten wird, zurückgewinnen. Die Nieren werden in den Tagen nach der Uterusobstruktion hydronephrotisch.

Mäuse können entweder zu verschiedenen Zeitpunkten während der Verletzungsphase oder nach Umkehrung der Obstruktion getötet werden. Das nächste Kapitel beschreibt, wie man eine Umkehrung durchführt, die die zweite Stufe des RUUO-Verfahrens darstellt. Die Maus wird betäubt und wie zuvor beschrieben präpariert.

Die metallischen Hautklammern werden entfernt und eine Laparotomie durchgeführt. Die Peritonealnähte werden entfernt und das Bauchfell kann mit einer Rattenzahnzange sanft geöffnet werden. Anschließend wird die Maus präpariert und der linke Harnleiter wie zuvor beschrieben mit einer abgewinkelten Pinzette freigelegt.

Der Harnleiter und der weichwandige Kunststoffschlauch sind vom umgebenden Gewebe isoliert. Die Nähte, die den weichwandigen Schlauch an Ort und Stelle halten, werden mit dem Skalpell durchtrennt und dann entfernt. Der weichwandige Kunststoffschlauch wird dann vorsichtig entfernt und ein erweiterter Harnleiter ist sichtbar.

Der Harnleiter ist an der Stelle der Obstruktion brüchig und kann durchaus über der Obstruktion brechen, wie in diesem Clip aufgetreten. Die Nähte, die zuvor in der ersten Phase der UUO in der Nähe der Blase platziert wurden, bleiben jedoch intakt, wodurch sichergestellt wird, dass kein Urin aus der Blase in die Bauchhöhle austritt. Ein Stück steriler Gze wird unter den Harnleiter gelegt, um Harnsedimente aufzufangen, die aus dem zuvor verstopften Harnleiter abfließen

Die verbleibende Länge des verstopften Harnleiters muss abfließen, bis klarer Urin gebildet wird, um sicherzustellen, dass das Harnleiterlumen von Schmutz befreit wird. Sobald der Harnleiter und das Nierenbecken drainiert wurden, wird eine lange, sechs oh schwarz geflochtene Seidennaht an das Ende des Harnleiters gelegt. Dies wird verwendet, um den nachfolgenden Harnleiter zur Blasenanastomose zu unterstützen.

Der Harnleiter wird dann so gedreht, dass er anterior zu seiner ursprünglichen Position liegt und über der Niere liegt. Eine einzelne monofile Nano-Polyamid-TAing-Naht wird am Ende des Harnleiters platziert. Es wird darauf geachtet, dass die Naht im Muskelmantel verbleibt und nicht in das Harnleiterlumen gelangt.

Die Naht wird verwendet, um den Harnleiter später in der Blase zu verankern, um die Blase auf die Anastomose vorzubereiten, ein Kanal wird durch die Blase geschaffen, indem eine 21 Gauge Nadel diagonal durch die Blase geführt wird. Die 21-Gauge-Nadel wird dann verwendet, um eine Augennadel durch die Blase zu führen. Die zuvor in den Harnleiter gelegte Nino-Naht wird dann durch den ersten Schnitt in der Blase und durch die Blasenwand neben dem Eintrittspunkt geführt, um den Harnleiter durch die Blase zu führen.

Die lange Naht mit sechs Ohs, die am Ende des Harnleiters platziert wird, wird durch das Nadelöhr geführt. Anschließend wird die Augennadel langsam durch die Blase zurückgezogen, wobei darauf geachtet wird, dass auch der Harnleiter durch die Blase gezogen wird. Sobald sich der Harnleiter in der Blase befindet, werden die Nanonähte, die in den Harnleiter und die Blasenwand eingesetzt werden, gebunden, um den Harnleiter an Ort und Stelle zu verankern und den Harnleiter sicher zu verankern.

Eine zweite Otax-Naht wird gelegt. Dieser wird wieder durch den Harnleiter geführt, wobei sichergestellt wird, dass er in der Muskelschicht verbleibt, dann durch den Blasenschnitt und durch die Blasenwand nach außen. Dieser wird dann auf ähnliche Weise gebunden.

Ein drittes Nano-Steuernaht wird ebenfalls an der Rückseite der Blase platziert. Als nächstes wird die Rückseite einer offenen Schere verwendet, um die Blasenwand leicht nach hinten zu drücken, um die Länge des Harnleiters freizulegen. Der Harnleiter wird dann oberhalb der Lungennaht geteilt.

Der lackierte Harnleiter zieht sich dann abgewinkelt in die Blase zurück. Vier Spitzen sorgen dafür, dass der Harnleiter vollständig in die Blase eingefahren ist. Zum Schluss wird die Austrittswunde in der Blase mit einer monofilen Naht aus neun oh Polyamid verschlossen, bevor der Verschluss darauf achtet, dass der Harnleiter fest in der Blase geschlossen verankert ist.

Das Peritoneum und die Haut, wie zuvor beschrieben, sorgen für die postoperative Versorgung, wie zuvor beschrieben. Alle UUO-Mäuse dürfen sich in dieser Studie sieben Tage lang erholen, damit sich die entstopfte Niere dekomprimieren kann, obwohl frühere oder spätere Zeitpunkte untersucht werden können. Vorgestellt. Als nächstes folgen Daten, die das Auftreten von verstopften und nicht verstopften Nieren und die daraus resultierende Verletzung veranschaulichen.

Diese Abbildung veranschaulicht das Erscheinungsbild der nativen U-U-L-U-U-O-Nieren, des Nierenbeckens und der Harnleiter im Vergleich zur nativen Niere. Die UUO-Niere, die seit sieben Tagen verstopft ist, erscheint hydronephrotisch und blass. Nach sieben Tagen der Deobstruktion ist die RUO-Niere dekomprimiert worden, wobei das Nierenbecken und der Harnleiter wieder die gleiche Größe und Farbe wie die native Niere angenommen haben.

Es ist zu beachten, dass der IUO-Harnleiter aufgrund der Destrukturierungstechnik und der Anastomose in die Blase kürzer ist als die Harnleiter der UUO und der nativen Nieren. Diese Abbildung zeigt repräsentative Bilder von H- und E-gefärbten Nierenschnitten aus nativen UUO- und RUUO-Nieren. Das gesunde Interstitium der normalen Niere besteht aus Querschnitten kompakter, gesunder Tubuli.

Eine Reihe von Tubuli, die durch die schwarzen Pfeile gekennzeichnet sind, zeigen am siebten Tag eine dramatische Dilatation. Nach der QUL in der Kontraströhre ist die Dilatation sieben Tage nach der Umkehrung der UUL deutlich reduziert. Das hier vorgestellte Mausmodell der obstruktiven Nephropathie wird durch eine einseitige Harnleiterobstruktion induziert, die entweder irreversibel oder reversibel sein kann.

Das hier beschriebene reversible Modell ermöglicht die Entfernung der Harnleiterobstruktion und die Anastomose des Harnleiters zur Blase, um den Harnfluss vollständig wiederherzustellen. Die daraus resultierende Nierendekompression ermöglicht die Untersuchung von Experimenten zum Gewebeumbau nach Verletzungen. Die Einbeziehung sowohl irreversibler als auch reversibler obstruktiver Nephropathiemodelle bietet den Forschern einen aussagekräftigen Einblick in Krankheitsprozesse und wie therapeutische Interventionen sowohl die Entwicklung von Verletzungen als auch den anschließenden Gewebeumbau modulieren.