Name: Ganze Glaskörper Dissection für Vitreodynamic Analysis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 41 s
Description: Lernen Sie die Dissektion des gesamten Glaskörpers für vitreodynamische Analysen an postmortalen Schweineaugen. Diese Methode isoliert intakte Glaskörperkerne und -kortexe unter Erhalt der anatomischen Struktur.

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Die Autoren nennen die folgenden Finanzierungsquellen: Whittier Foundation, Harrington Foundation, National Institutes of Health und Research to Prevent Blindness.

Alle Augen enukleiert wurden von einem Schlachthaus erhalten, und alle Experimente wurden in Übereinstimmung mit institutionellen Biosicherheit Gesetze durchgeführt. <ol><li> Sichere entkernte Auge nach unten auf eine Oberfläche. Tun Sie dies, indem Gewebestifte durch das überschüssige Gewebe um das Auge herum und befestigen Sie sie nach unten in eine Styroporplatte. </li><li> Sezieren und nehmen perilimbal Bindehaut aus dem Auge. <ol><li> Verwenden feinen Pinzette (0.3 Pinzette) und Mikroschere (Westcott Schere), die Bindehaut am Limbus einzuschneiden und stumpf sezieren von der Lederhaut. Schneiden Sie die Bindehaut entlang des Limbus, wie der stumpfe Präparation schreitet weiter Dissektion ermöglichen. </li><li> Entfernen Binde ganzen Weg rund um das Auge (360 Grad), um so viel wie möglich Sklera freizulegen. HINWEIS: Es ist hilfreich, eine kleine Menge von Bindehaut zu verlassen, um zu erleichtern Fixierung des Auges mit den chirurgischen Stiften oder einer Pinzette während der Rest des Verfahrens. </li></ol></li><li> Erstellen Sie eine volle Dicke Skleralappen entlang einerSeite des Auges (Skalpellklinge 69). <ol><li> Einen ~ 5 mm Skleraeinschnitt parallel zum Limbus und 3 mm hinter dem Limbus durch leichtes Einschneiden der Sklera mit dem Skalpell (Skalpell 11) bis dunkel pigmentierten Chorioidea sichtbar. Achten Sie darauf, die Aderhaut selbst einzuschneiden. </li><li> Sorgfältig seziert entlang der Ebene zwischen der Sklera und der Choroidea, entweder mit einer Schere (unter Verwendung stumpf) oder mit dem Skalpell, bis es möglich ist, das Potential Raum zwischen diesen Geweben zu vergrößern, indem der Choroidea sanft nach innen. </li><li> Eine weitere Skleraeinschnitt senkrecht zur ersten Skleraeinschnitt mit scharfen Mikroscheren, wodurch eine T-förmige Einschnitt. </li><li> Dann weiterhin unverblümt sezieren in Umfangs Mode, um die Skleragewebe von der darunter liegenden Aderhaut zu entfernen, und schieben Sie die Aderhaut weg von der Lederhaut, wie oben erwähnt. </li><li> Vergrößern Sie die Lederhautlappen nach Bedarf. <ol><li> Sanft leckersten Blunt der Aderhaut weg von der Lederhaut zu sezierenwährend des gesamten Prozesses. </li><li> Vergrößern der Klappe bis der Schnitt senkrecht zu dem Limbus vorgenommen erreicht den Sehnerv und der Einschnitt parallel zum Limbus ist zumindest ein Drittel des Auges Umfangs (45 °). </li><li> Verwenden Sie die Lederhautlappen als Quelle der Hebelwirkung für die Manipulation des Auges während stumpf. Die Gegen Traktion auf der Klappe erleichtert es stumpf. </li></ol></li><li> Wiederholen Sie diesen Schritt auf der anderen Lederhautlappens. </li></ol></li><li> Schneiden Sie die Lederhautlappen um einen großen Bereich der Aderhaut freizulegen. </li><li> Weiterhin den Einschnitt in Schritt 3, die um das Auge des Umfangs (360 Grad) aus. </li><li> Entfernen Sie die verbleibenden Aderhaut-Retina-Gewebe. <ol><li> Innerhalb der freigelegten Bereich, mit einem Watte-Spitze vorsichtig abbürsten die verbleibende Aderhaut-Retina-Gewebe. Alternativ sanft greifen das Gewebe mit einer Pinzette und abziehen der darunter liegenden Glaskörper. </li><li> Falls erforderlich einen Einschnitt in die Aderhaut starting vom Sehnerven. Dann abziehen der Aderhaut sanft, um die Netzhaut und Glaskörper freizulegen. </li></ol></li><li> Weiter stumpfes Sezieren der Aderhaut weg von der Lederhaut und dann abziehen der Aderhaut, die ganze, intakte Glaskörper zu erhalten. </li><li> Verwenden Sie die Sklerarand an der Hornhaut angebracht, um die gesamte Glaskörper in gewünschten Stelle zu positionieren. An diesem Punkt wird der Glaskörper an der vorderen Sklera und Objektiv. </li><li> Blunt den Glaskörper von der Innenseite der Sklera zu zergliedern, um die Linse, Entfernen aller Sklera. </li><li> Verwenden Sie ein stumpfes Werkzeug, um die Linse von der Glaskörper schöpfen, wenn es sein muss. Verwenden Sie die Probe für verschiedene vitreodynamic Experimente. <ol><li> Man gibt die Probe in einem Becherglas mit bekannter Oberfläche der Luft ausgesetzt. Platzieren Sauerstoff empfindliche Sonde an der Kante der Probe. Verwenden Sie einen Mikromanipulator, um die Sonde zu einem bekannten Abstand (r) in die Probe zu bewegen. </li><li> Verwenden Fickschen Gesetzen der Diffusion, die theoretische Diffusionsgleichung erhalten. Mit dem data in Schritt 10.1 gesammelt, erhalten den experimentellen Diffusionskoeffizient / Reaktionszeit usw. </li></ol></li></ol>

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<li>Stocchino, R., Repetto, A., Cafferata, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+investigation+of+vitreous+humour+motion+within+a+human+eye+model%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Experimental investigation of vitreous humour motion within a human eye model.</a> Phys Med Biol. 50 (19), 4729-4743 (2005).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Es gibt zwei wichtige Schritte, die sorgfältig im Glaskörper Dissektion durchgeführt werden müssen. Schritt 3, der eine gesamte Dicke Lederhautlappen, ist von entscheidender Bedeutung für die gesamte Sektion. Achten Sie darauf, nicht in die Aderhaut schneiden bei der Erstellung der gesamten Dicke Lederhautlappen werden. Die andere wichtige Schritt ist Sezieren entfernt die Lederhaut von der Aderhaut. Dieser Schritt muss sorgfältig durchgeführt werden Erstellen mehrerer Löcher in der Aderhaut, aus der die Glaskörper kann...

Das Ziel dieser Methode ist es, detaillierter eine Technik, um eine ganze, intakte Glaskörper zu isolieren, mit dem glasartigen Kern und Cortex intakt von einem kadaver Auges, für die Zwecke der vitreodynamic Analyse. Da der Bereich der Glaskörper Physiologie hat, multidisziplinären Forscher, wie der Strömungsmechanik Forscher geworden, untersuchen die physikalischen und biomechanischen Eigenschaften des Glaskörpers 1. Zu diesem Zweck ist es wesentlich, detailliert eine Technik, die ganze, intakte Glaskörper zu isolieren, um multidisziplinäre Forscher unterstützen. Sebag et al. 2 und 3 durchgeführt, andere elegant ganze Glaskörper Dissektionen auf menschliche kadaver Augen und zeigte Darstellungen der Ergebnisse. Jedoch wurde die Technik verwendet, nicht im Detail, und Nicht-Experten beschrieben nicht in der Lage ist, das Verfahren unabhängig replizieren. Andere Studien haben Glaskörper aus kadaver Augen mit einfacheren Methoden wie Aspiration oder Teilzerlegung geerntet,von denen beide nicht in eine ganze, intakte Glaskörper führen. Gisladottis et al. 4 und Xu et al. 5 zu untersuchen Lässigkeit in Glaskörper aus kadaver Augen geerntet. Da jedoch kein Verfahren aus glasartigem Extraktion wurde beschrieben, wurde angenommen, daß sie die Glaskörperflüssigkeit mit einer Spritze abgesaugt. Watts et al. 6 ging noch einen Schritt weiter, indem ein Verfahren zur Isolierung Kaninchen Glaskörper mit einem Operationstechnik beschreibt. Führt dieses Verfahren jedoch in einer Isolation von nur dem Glaskern und dem Glaskörper nicht. Skeie et al. 7 später organisierte den Glaskörper in 4 einzigartigen Regionen und ein Verfahren beschrieben, um jeden Teil zur Analyse sezieren elegant. Diese Technik jedoch nicht in einer intakten Glaskörper als Ganzes führen. Die aktuelle Technik wurde entwickelt, um die biophysikalischen Experimenten, die derzeit nur in kadaver Augen durchgeführt werden, zu erleichtern. Früheren Verfahren, beschrieben alsBove, sind begrenzt, da 1) keine die gesamte Glaskörper vollständig zu isolieren, 2) geerntet glasigen Kern und Cortex homogenisiert, 3) glasartigen anatomischen Struktur nicht beibehalten wird, oder 4) Dissektion Techniken sind nicht ausreichend für die Replikation von Forschern in anderen Bereichen detailliert . Darüber hinaus aufgrund der Opazität des Sklera und Aderhaut, die Visualisierung des Glaskörpers in der intakten Augapfels beschränkt. Dies begrenzt die Genauigkeit und Realisierbarkeit von Messungen, die innerhalb des ganzen Auges gemacht werden können. Zusätzlich können die anatomischen Strukturen umgebenden Glaskörper das Studium der biochemischen und physikalischen Eigenschaften der glasartigen verwechseln. In den letzten Jahren hat der Körper aus glasartigem Wissenschaft enorm gewachsen und es gibt Grund zu glauben, dass die gesamte Glaskörper hat andere Eigenschaften als ihre Einzelteile. Es gibt ein wachsendes Interesse bei der Untersuchung der physikalischen, biomechanische und chemischen Eigenschaften des Glaskörpers für vitreodynamics research, die Anwendungen in der klinischen Medizin, wie Arzneimittelabgabe, intravitreale Sauerstoffversorgung 8 und Vitrektomie hat. Pharmakologische vitreodynamics, das pharmakologische Mittel verwendet, um den Glaskörper zu manipulieren, können zur Vitrektomie Ergebnisse 9 zu verbessern. Biomechanischen Eigenschaften verwendet werden, um glasartige Fluidströmung, die verwendet werden können zur Verbesserung der intravitrealen Darreichungsformen 10-12 modellieren. Die physikalischen Eigenschaften der verschiedenen Segmente des Glaskörpers sind entscheidend für das Verständnis vitreoretinalen Sauerstofftransport 13. Die vorgeschlagene glasigen Dissektionstechnik verwendet, um verschiedene Eigenschaften des intakten Glaskörper zu untersuchen. Es ermöglicht Tischexperimente auf ganze, intakte Glaskörper mit besseren Visualisierung erfolgen. Zusammenfassend aktuellen Methoden zur Untersuchung des Glaskörpers sind entweder nicht hinreichend beschrieben, oder führen zu einer unvollständigen Trennung der Glaskern und Kortex. Daher besteht ein Bedarf, e auszuführenXperiments in einem transparenten Augenmodell unter Beibehaltung der Anatomie des Glaskörpers, die im kadaver Auge vorliegt.

<table><tbody><tr><td>0.3 Pinzette</td><td>Storz Opthalmics</td><td>E1793</td><td></td></tr><tr><td>Westcott Tenotomieschere gebogen rechts</td><td>Storz Opthalmics</td><td>E3320 R</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellgriff Nr. 3</td><td>VWR</td><td>25607-947</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellklinge, #11, für #3 Griff</td><td>VWR</td><td>470174-844</td><td></td></tr></tbody></table>

ganze glaskörper dissection für vitreodynamic analysis

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

Die Autoren schlagen eine effektive Technik vor, um ganzen, intakten Glaskörperkern und Kortex aus post mortem enukleierten Schweineaugen zu isolieren. Während frühere Studien die Ergebnisse solcher Sektionen gezeigt haben, wurden die detaillierten Schritte nicht beschrieben, was Forscher außerhalb des Fachgebiets daran hindert, ihre Methoden zu replizieren. Andere Studien entnehmen den Glaskörper entweder durch Aspiration, wodurch die Anatomie der Glaskörperstruktur nicht erhalten bleibt, oder durch partielle Dissektion, bei der nur der Glaskörperkern isoliert wird. Die vorgeschlagene Methode isoliert den gesamten Glaskörper, wobei der Glaskörperkern und die Rinde intakt sind, während die Glaskörperanatomie und die strukturelle Integrität erhalten bleiben. Bei dieser Methode wird zunächst ein Sklerallappen in voller Dicke in einem enukleierten Schweineauge angelegt und durch diesen kann das Aderhautgewebe von der Sklera getrennt werden. Anschließend wird der Skleralappen erweitert und die Aderhaut vollständig von der Sklera getrennt. Schließlich wird das Aderhaut-Netzhaut-Gewebe vom Glaskörper abgezogen, so dass ein isolierter intakter Glaskörper übrig bleibt. Die vorgeschlagene Glaskörperdissektionstechnik kann verwendet werden, um die physikalischen Eigenschaften des Glaskörpers zu untersuchen. Insbesondere ist diese Methode von Bedeutung für experimentelle Studien, die sich mit der Wirkstoffabgabe, dem vitreoretinalen Sauerstofftransport und der intraokularen Konvektion befassen.

Anlehnung an das Protokoll zu einem erfolgreichen glasigen Dissektion mit dem Kern und Cortex (Abbildung 3) intakt zu führen. Dies ergibt sich aus den Reststücken Retina in den Glas cortex haftet. Intakte ganze Glaskörper kann auf verschiedene Weise für spezifische vitreodynamic Experimente eingesetzt werden. In unserem Fall ist die Diffusionsgeschwindigkeit von Sauerstoff in intakten Glaskörper und entsprechende Zeitkonstante wurde (Figur 2) untersucht. Glaskörper, die präpariert wurde...

Das Ziel dieses Protokolls ist es, eine effektive Technik zur Isolierung des ganzen, intakten Glaskörperkerns und der Rinde aus post mortem enukleierten Schweineaugen zu zeigen.

Ganze Glaskörper Dissection für Vitreodynamic Analysis

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine effektive Technik zur Isolierung ganzer, intakter Glaskörperkerne und -kortizes aus postmortalen und kernhaltigen Schweineaugen darzustellen. Dies wird erreicht, indem zunächst die perilimbale Bindehaut disseziert und die Sklera freigelegt wird. Im zweiten Schritt wird ein vollständig durch die Sklera reichender Skleral-Lappen angelegt und erweitert.Die Aderhaut wird dann von der Sklera gelöst und das Aderhaut-Netzhaut-Gewebe vom Glaskörper abgezogen. Letztendlich kann die vollständige intakte Dissektion von Glaskörperkern und -kortex verwendet werden, um die physikalischen, biomechanischen und chemischen Eigenschaften des Glaskörpers zu untersuchen. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber anderen bestehenden Methoden wie partiellen Glaskörperdissektionen besteht darin, dass mit ihr der gesamte intakte Glaskörperkern und -kortex unter Erhaltung der anatomischen Struktur des Glaskörpers isoliert werden kann. Beginnen Sie, indem Sie das enukleierte Auge durch das umgebende überschüssige Gewebe hindurch auf einer Styropor-Präparationsplatte fixieren.Wenn das Auge sicher fixiert ist, verwenden Sie feine Pinzette und Mikroscheren, um die Bindehaut am Limbus einzuschneiden, und lösen Sie sie stumpf von der Sklera ab. Schneiden Sie die Bindehaut entlang des Limbus, während die stumpfe Präparation fortschreitet, um eine weitere Präparation zu ermöglichen. Entfernen Sie anschließend die gesamte Bindehaut bis auf einen kleinen Rest vollständig um das Auge herum, um so viel wie möglich von der Sklera freizulegen.Verwenden Sie anschließend das Skalpell, um vorsichtig einen etwa fünf Millimeter langen und drei Millimeter hinter der Limbus verlaufenden skleralen Schnitt parallel zur Oberfläche vorzunehmen, bis die dunkel pigmentierte Aderhaut sichtbar ist, um eine sklerale Klappe zu bilden. Danach wird das Gewebe vorsichtig stumpf entlang der Ebene zwischen Sklera und Aderhaut dissekiert, bis es möglich ist, die Aderhaut sanft nach innen zu drücken, um den Raum zwischen den beiden Gewebeschichten zu vergrößern. Mit scharfen Mikroscheren wird ein weiterer skleraler Schnitt senkrecht zum ersten angelegt, um einen T-förmigen Einschnitt zu erzeugen.Danach weiterhin stumpf zirkulär dissezieren, um das sklerale Gewebe vom darunterliegenden Choroidea zu lösen, und die Choroidea vorsichtig von der Sklera wegschieben, um die Klappe zu vergrößern. Stumpf und vorsichtig die Choroidea von der Sklera lösen, bis der senkrecht zum Limbus angelegte Schnitt den Sehnerv erreicht und der parallel zum Limbus verlaufende Schnitt mindestens 45 Grad des Augenumfangs abdeckt. Verwenden Sie diese Klappe, um die stumpfe Dissektion auf der anderen Seite des Auges zu wiederholen.Schneiden Sie dann beide skleralen Lappen ab, um einen großen Bereich der Aderhaut freizulegen. Fahren Sie nun mit dem Schnitt stumpf um den Augenumfang herum fort. Lösen Sie die Aderhaut von der Sklera ab und entfernen Sie das verbleibende Aderhaut-Netzhaut-Gewebe im freigelegten Bereich.Führen Sie einen Schnitt in die Aderhaut beginnend vom Sehnerv aus durch. Verwenden Sie dann eine Pinzette, um das Gewebe vorsichtig von der darunterliegenden Glaskörpermasse abzulösen. Setzen Sie die stumpfe Dissektion fort und lösen Sie die Aderhaut ab, bis der gesamte intakte Glaskörper gewonnen ist.Verwenden Sie dann den am Kornea befestigten skleralen Rand, um das gesamte Glask&ouml;rpergewebe an der gew&uuml;nschten Stelle zu positionieren. Zu diesem Zeitpunkt sollte der Glask&ouml;rper noch mit der vorderen Sklera und der Linse verbunden sein. Schlie&szlig;lich l&ouml;sen Sie den Glask&ouml;rper stumpf dissezierend von der Innenseite der Sklera und rund um die Linse ab.Um die gesamte Sklera zu entfernen, verwenden Sie ein stumpfes Werkzeug, um die Linse bei Bedarf vorsichtig vom Glaskörper abzulösen. Wenn man das Protokoll wie gerade demonstriert befolgt, gelingt eine erfolgreiche Glaskörperpräparation, bei der Kern und Kortex intakt bleiben, wie die noch am Glaskörperkortex haftenden Reste der Netzhaut zeigen. In diesem Bild kann der intakte, gesamte Glaskörper anschließend auf verschiedene Weisen für spezifische viremische Experimente verwendet werden.Beispielsweise wurde hier die Diffusionsrate von Sauerstoff in einem intakten Glaskörper und die entsprechende Zeitkonstante in Gegenwart der Glaskörperkapsel untersucht. Die Diffusion des Sauerstoffs erfolgte über einen längeren Zeitraum. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit scharfen Gegenständen gefährlich sein kann, und beachten Sie stets Vorsichtsmaßnahmen wie einen sachgemäßen Umgang und die ordnungsgemäße Entsorgung von s während dieses Verfahrens.

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Forschung

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