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DOI: 10.3791/52835-v
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Wir haben eine Methode zur Verkapselung von pluripotenten Stammzellen (PS-Zellen) in Alginat-Hydrogel-Kapseln mit einer koaxialen Düse etabliert. Dies verhindert eine übermäßige Aggregation der Zellen und begrenzt die Scherspannung, der Zellen in Suspensionskulturen ausgesetzt sind. Die Technik ist sowohl auf die Massenproduktion von PS-Zellen als auch auf die Forschung in der Stammzellnische anwendbar.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, Stammzellen sicher und effektiv in Alginat- und Hydrogelkapseln einzubetten und sie innerhalb der Kapseln zu kultivieren, um die Aggregation und Mikroumgebung zu kontrollieren. Dies wird erreicht, indem zunächst eine gefilterte Stammzellsuspension und eine Natriumalginatlösung gemischt werden. Die Mischung wird dann auf eine Spritze übertragen und eine Koaxialdüse wird auf der Spritze installiert, bevor sie auf eine Spritzenpumpe gesetzt wird. Als nächstes werden die Tröpfchen hergestellt, indem die Zellsuspension mit koströmendem Stickstoffgas ausgestoßen wird, gefolgt von der Sammlung und der Calciumchloridlösung.
Die Kapseln werden dann mit Poly-L-Lysin behandelt, um Zellleckagen zu verhindern, und EDTA, um die inneren Kapseln zu fluidisieren, bevor die verkapselten Zellen in einem rotierenden Schüttelzustand kultiviert werden. Schließlich werden die Zellen durch EDTA und physikalische Zerstörung der Membran aus den Kapseln entnommen. Letztendlich verhindert die Alginatverkapselung von pluripotenten Stammzellen eine übermäßige Aggregation der Zellen und begrenzt den Stress, dem die Zellen in der Suspensionskultur ausgesetzt sind.
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