Name: Heterotope Cervical Herztransplantation bei Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: Erfahren Sie die heterotope zervikale Herztransplantation bei Mäusen mit der Cuff-Technik zur Untersuchung von Ischämie-Reperfusionsverletzung und Transplantatabstoßung. Diese Methode vereinfacht die Gefäßanastomose erheblich.

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M.-A. Deutsch wird gefördert durch das Dr. Rusche Forschungsprojekt (2014), die Deutsche Stiftung für Herzforschung und die Deutsche Gesellschaft für Thorax-, Herz- und Gefäßchirurgie. M. Krane wird gefördert durch die Deutsche Stiftung für Herzforschung (F/37/11), Deutsches Zentrum für Herzkreislauf Forschung (DZHK B 13-050A; DZHK B 14-013SE) und der Deutschen Forschungsgemeinschaft (KR3770/7-1; KR3770/9-1)

Alle Experimente wurden vom Deutschen Herzzentrum München und der Regierung von Bayern, Deutschland (Gz. 55.2-1-54-2532.3-17-13) zugelassen. Die Tiere wurden in einer speziellen pathogenfreien Einrichtung untergebracht und erhielten menschlicher Obhut in Übereinstimmung mit den &quot;Principles of Laboratory Animal Care&quot; von der Nationalen Gesellschaft für Medizinische Forschung und dem &quot;Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren&quot; durch die National Academy bereitgestellt formuliert der Wissenschaften und von den National Institutes of Health (NIH Publikation Nr. 86-23, überarbeitet 1985) veröffentlicht. HINWEIS: Ein kompletter Satz von sterilen mikrochirurgischen Instrumenten, darunter zwei gebogenen Pinzette und Gefäß Dilatatoren, ist notwendig für das Verfahren (Abbildung 2a). Perioperative Antibiotikaprophylaxe nicht routinemäßig notwendig, kann aber bei immungeschwächten Tiere angegeben werden. Die Tiere wurden unter Verwendung von terminaler Isofluran Inhalation geopfert. Spender Vorbereitung und Graft-Ernte &lt;ol&gt; <li> Betäuben das Tier durch intraperitoneale (ip) Injektion von Midazolam (5,0 mg / kg), Medetomidin (0,5 mg / kg) und Fentanyl (0,05 mg / kg Körpergewicht). Platzieren Sie die Maus in Rückenlage auf dem Operationsfeld und bestätigen chirurgische Toleranz durch die Pedalrückzugreflex. </li><li> Desinfizieren Sie die Haut dreimal mit Chlorhexidin und führen Sie eine Mittellinie Bauchschnitt. Fahren Sie die Därme mit nassen Gaze auf der linken Seite, um den unteren Hohlvene aussetzen. </li><li> Injizieren 50 IE Heparin in 0,4 ml Kochsalzlösung durch die Vena cava inferior zur Antikoagulation verdünnt. Einzuschneiden das Gefäß 1 min nach Heparinisierung. </li><li> Öffnen Sie die Blende und führen Sie eine bilaterale Thorakotomie, um das Herz freizulegen. Der vorderen Brustwand kranial reflektiert und an der Stelle mit einer Klammer gehalten wird. </li><li> Entfernen Sie den Thymus und unverblümt zu sezieren das Bindegewebe zwischen Aorta und Truncus pulmonalis. Einzuschneiden das Recht der oberen Hohlvene. </li><li> Punktion der mobilisierten aufsteigenden Aorta auf der Ebene derTruncus brachiocephalicus mit einer 30 G-Nadel auf einer 5 ml Spritze befestigt und das Herz retrogradually langsam durchströmen, ohne übermäßigen Druck mit 3 ml 4 ° C kalter Kardioplegielösung. Vermeiden Sie das Eindringen von Luft in das Herz-Kreislauf. Drop eiskalter Kochsalzlösung auf das Transplantat zur weiteren Verbesserung der Herzstillstand. </li><li> Trennen die Aorta proximal zu dem Ursprung des Truncus brachiocephalicus. </li><li> Ligieren die untere und die beiden überlegenen Hohlvenen in der Nähe des Herzens mit 8-0 Seide und durchschneiden sie distal zu den Ligaturen. </li><li> Präparieren Sie kostenlos die Lungenstamm als distal wie möglich. Ligieren die Lungenarterien in der Nähe der Bifurkation mit 8-0 Seide und durchschneiden sie distal. </li><li> Ligieren die Lungenvenen alle zusammen mit einem einzigen 8-0 Seidenligatur und durchschneiden sie. </li><li> Entfernen Sie das Herz aus dem Spender und speichern sie in eiskaltes kardioplegischen Lösung bis zur Implantation. </li></ol> 2. Empfänger Vorbereitung <ol><li> Bereitendie Manschetten für Anastomosen durch Schneiden des Polyimid-Schlauch mit einem No. 11 Skalpell oder einer Schere unter dem Mikroskop. Die Manschette besteht aus einem zylindrischen Körper und einer Verlängerung (1/3 des Umfangs) für die Platzierung des Gefäßklemme, die jeweils mit einer Länge von 1 mm (Abbildung 2b). </li><li> Betäuben das Tier und bestätigen chirurgische Toleranz, wie oben beschrieben. Injizieren 0,25 ml warmen Kochsalzlösung subkutan (sc) für Flüssigkeitsersatz. </li><li> Entfernen Sie die Haare von der rechten Halsbereich mit einem elektrischen Rasierer und legen Sie das Tier in Rückenlage auf einer warmen Unterlage. Sichern Sie sich die Beine mit Strängen der Band unter Vermeidung von Überdehnung der vorderen Gliedmaßen, da dies die Atmung beeinträchtigen. Decken Sie die Augen mit Augensalbe, um Trockenheit zu verhindern. Desinfizieren Sie die Operationsstelle dreimal mit Chlorhexidin. </li><li> Einen Querhautschnitt von der rechten Kieferwinkel, um die Halsschlagkerbe. </li><li> Unverblümt zu mobilisieren, die external Halsschlagader. Cauterize Seitenäste mit einer bipolaren Pinzette und durchschneiden sie. </li><li> Teilen Sie die äußere Jugularvene zwischen Ligaturen auf der Ebene der Einmündung in die Vene von der Unterkieferspeicheldrüse. </li><li> Ziehen Sie die äußere Jugularvene durch die Manschette und verschließt das Gefäß proximal durch Platzieren einer Gefäßklemme an der Verlängerung der Manschette. Entfernen Sie die Blattschraube und zu bewässern das Gefäßlumen mit 1:10 heparinisierter Kochsalzlösung. </li><li> Evert die Gefäßwand über der Manschette und fixieren Sie es mit einem voreingestellten Umfangs 8-0 Seidenligatur. </li><li> Entfernen Sie den oberflächlichen Teil des M. sternocleidomastoideus. </li><li> Mobilisieren die rechte Arteria carotis communis und durchschneiden das Gefäß zwischen Ligaturen unter dem Karotisbifurkation. </li><li> Ziehen der Halsschlagader durch die Manschette und verschließt den Behälter proximal durch Platzieren eines Yasargil Klemme an der Verlängerung der Manschette. Entfernen Sie die Blattschraube und zu bewässern das Gefäßlumen mit 1:10 heparinisierter Kochsalzlösung. </li><li> Gently dilate das arterielle Lumen mit einem Schiff Dilatator, umzustülpen die Gefäßwand über der Manschette und fixieren Sie es mit einem voreingestellten Umfangs 8-0 Seidenligatur. </li><li> Um ausreichend Platz für Graft-Implantation zu gewinnen, nehmen Sie den rechten Lappen der Unterkieferspeicheldrüse. </li><li> Halten Sie das Operationsfeld feucht bis zur Implantation. </li></ol> 3. Graft-Implantation <ol><li> Legen Sie das Transplantat in den Empfänger Halsbereich auf den Kopf mit der Aorta medial orientiert und die Pulmonalarterie seitlich. </li><li> Ziehen Sie die Aorta des Transplantats über der Manschette mit der Halsschlagader und sichern Sie die Anastomose mit einer umlaufenden 8-0 Seidenligatur. </li><li> Einzuschneiden den Truncus pulmonalis auf seiner vorderen Seite und ziehen Sie sie über die Manschette mit der äußeren Halsschlagader. Auch hier sichern die Anastomose mit einer umlaufenden 8-0 Seidenligatur. </li><li> Entfernen Sie die Klemme an der äußeren Halsschlagader, gefolgt von Lösen der Halsschlagader. Die Herzen füllt sofort mit Blut. Um r verbesserneperfusion fallen 37 ° C warmen Kochsalzlösung auf das Transplantat. Normalerweise entwickelt sich die Herzsinusrhythmus innerhalb einer Minute. Entfernen Sie die Manschette Verlängerung bei der venösen Seite. </li><li> Stellen Sie sicher, korrekte Transplantatposition muss Anastomosen spannungsfrei und Gefäße ohne Torsion sein. Nicht kauterisiert Gefäße der Haut, da dies die Wundheilung beeinträchtigen. Blutungen in der Regel stoppt spontan. Schließen Sie die Haut mit einem einzigen 8-0 fortlaufende Naht. </li></ol> 4. Nachsorge <ol><li> Injizieren 0,25 ml warmen Kochsalzlösung sc zum Flüssigkeitsersatz. </li><li> Um antagonisieren Drogen injizieren Naloxon (1,2 mg / kg), Flumazenil (0,5 mg / kg) und atipamezol (2,5 mg / kg Körpergewicht) SC das Tier Linke auf dem warmen Unterlage, bis es ausreichend, das Bewusstsein wiedererlangt, um Brustlage zu halten. Beobachten Sie das Tier für mindestens eine weitere Stunde, um eine abnormale Verhalten registrieren. Sie ein Tier, das der Operation an die Firma von anderen Tieren, bis sie vollständig Recove unterzogen wurde nicht zurückred. </li><li> Bereitzustellen preemptive Analgesie mit Buprenorphin (0,05 mg / kg sc dreimal täglich) oder eine alternative Analgesie nach einem lokalen institutionellen Protokoll für eine Mindestdauer von 72 Stunden nach dem Eingriff. </li><li> Der Chirurg und ein Tierarzt sollten die Tiere regelmäßig zu sehen. Im Falle der Gewichtsverlust&gt; 15%, Apathie, Schwellungen oder chirurgische Seiten Infektion Tiere werden unter Verwendung von terminaler Isofluran Einatmen euthanasiert. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Wir haben mehr als 200 Herztransplantationen mit einer Erfolgsquote von über 90% in verschiedenen experimentellen Einstellungen vorgenommen. Mit dem hier beschriebenen Verfahren kann das gesamte Verfahren innerhalb von 60 min durch einen erfahrenen Chirurgen durchgeführt werden. Durch die Herstellung der Halsgefäße vor der Organbeschaffung kann insgesamt Transplantat Ischämie Zeit auf 20 min begrenzt werden. Zeit für Implantation (warme Ischämie Zeit) wesentlich kürzer ist mit der Manschette Technik im Vergleich zu der ...

Die Herztransplantationsmodell wird häufig verwendet, um I / R-Verletzung, Allotransplantatabstoßung nach Transplantation Vaskulopathie und die Effizienz der immunmodulierende Mittel zu untersuchen. Mausmodelle kombinieren viele Vorteile wie die bekannten immunologischen und genetischen Hintergründen, die Verfügbarkeit von vielen Inzucht und transgenen Linien und der relativ geringen experimentellen Kosten. Im Jahr 1973 wurde eine Technik der Bauchherztransplantation bei Mäusen zuerst von Corry et al. 1 beschrieben In diesem Modell Transplantate werden von Ende-zu-Seite-Anastomosen der aufsteigenden Aorta zu abdominalen Aorta des Empfängers und des Hauptlungenarterie zu der unteren Hohlvene revaskularisiert. 1991 wurde ein Nahttechnik für zervikale Herztransplantation bei Mäusen durch Chen et al. 2 beschrieben In diesem Modell wird ein Rück koronare Herzdurchblutung wird durch Anastomose der A. carotis des Empfängers zu den aufsteigenden Aorta des gr gegründetachtern. Das venöse Blut Drains über den Koronarsinus in das rechte Atrium, den rechten Ventrikel und durch die Lungenarterie in den Empfänger äußere Jugularvene (Figur 1) ausgestoßen wird. Im Vergleich zu der Bauch Graft-Implantation der zervikale Modell ist weniger invasiv und die oberflächliche Lage des Transplantats ermöglicht eine sehr gute Zugänglichkeit für zusätzliche Kontrolluntersuchungen (zB Palpation, Echokardiographie, Intravitalfluoreszenzmikroskopie) 3,4. Trotz technische Verbesserungen 5,6, wurde eine weitere Verbreitung dieses Modells aufgrund technischer Probleme beschränkt genäht Anastomosen von kleinen Schiffen mit einer hohen Inzidenz von Anastomosen Leckagen und Thrombosen führen. 1991, Matsuura et al. erläutert den Manschettenverfahren, bei dem die Gefäßwand über eine synthetische Zylinder, der das Modell des zervikalen Herztransplantationen 7 erleichtert stülpt. Die Technik war fueitere angenommen für verschiedene experimentelle Transplantationsmodellen einschließlich Nieren 8, Bauchspeicheldrüsen 9, des Körpers 10, Leber 11,12, 13,14 und Lungengefäßtransplantation 15. Im Vergleich zu der Nahttechnik die erforderliche Zeit für Anastomosen und somit ist das warme Ischämie Zeit kürzer, und es sind deutlich weniger vaskulären Komplikationen mit der Manschette Technik 16. Darüber hinaus ermöglicht es Chirurgen, mit wenig Ausbildung in der Mikrochirurgie, um den Betrieb mit einer hohen Erfolgsquote durchzuführen. Ein Nachteil der Manschette Technik ist Voraussetzung Ligatur der Arteria carotis, der zerebralen Durchblutung verändern können. In diesem Video-Papier stellen wir ein verbessertes und vereinfachtes Manschettentechnik für zervikale Herztransplantation bei Mäusen.

<table><tbody><tr><td>Pinzette JFC-7.2</td><td>S& T</td><td>P-00036</td><td>Gebogene Spitze 0,20 mm</td></tr><tr><td>Gefäßdilatator D-5a</td><td>S& T</td><td>S-00124</td><td></td></tr><tr><td>Adventita Schere</td><td>S& T</td><td>S-00102</td><td></td></tr><tr><td>Klemme für Gefäße B-1V</td><td>S& T</td><td>S-00396</td><td></td></tr><tr><td>Yasargil Clip</td><td>Peter Lazic</td><td>65,097</td><td>3,5 mm Länge</td></tr><tr><td>Bipolare Pinzette</td><td>Micromed</td><td>148-100-011</td><td>Spitze 0,25 mm</td></tr><tr><td>Polyimid-Schläuche</td><td>River Tech Medical</td><td></td><td>19-24 Gauge</td></tr><tr><td>8,0 Seidenligaturen</td><td>Catgut</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK-Lösung</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

heterotope cervical herztransplantation bei mäusen

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

Die heterotope zervikale Herztransplantation bei Mäusen ist ein wertvolles Werkzeug in der Transplantations- und Herz-Kreislauf-Forschung. Die Manschettentechnik vereinfacht dieses Modell erheblich, indem sie schwierige Nahtanatostomen kleiner Gefäße vermeidet und dadurch die warme Ischämiezeit verkürzt. Im Vergleich zur Bauchtransplantatimplantation ist das zervikale Modell weniger invasiv und das implantierte Transplantat ist für weitere Nachuntersuchungen leicht zugänglich. Anastomosen werden durchgeführt, indem die aufsteigende Aorta des Transplantats mit der Arteria carotis communis des Empfängers über die Manschette gezogen wird und die Hauptpulmonalarterie mit der Vena jugularis externa über die Manschette gezogen wird. Die Auswahl der geeigneten Manschettengröße und die vollständige Mobilisation der Gefäße sind wichtig für eine erfolgreiche Revaskularisation. Ischämie-Reperfusionsschäden (I/R) können durch Perfusion des Transplantats mit einer kardioplegischen Lösung und durch Hypothermie minimiert werden. In diesem Artikel stellen wir technische Details für eine vereinfachte und verbesserte Manschettentechnik vor, die es Chirurgen mit grundlegenden mikrochirurgischen Fähigkeiten ermöglichen soll, den Eingriff mit einer hohen Erfolgsquote durchzuführen.

Unser Team konnte die beschriebene Technik nach ca. 20 Trainings Operationen erfolgreich durchzuführen. Die größte Herausforderung ist es, die Gefäßwand der Halsschlagader über die Manschette umzustülpen, weil es leicht kippt zurück und mehrere Versuche können zum Reißen der Wand führen. Nach der Ausbildungszeit, die mittlere Gesamtoperationszeit betrug 60 ± 8 min. Rund 20 min sind für Spender der Ernte, 25 min zur Herstellung der Halsgefäße und 15 Minuten für die Anastomosen und Hautverschluss erforderlich. <p clas...

Die Manschettentechnik verkürzt und erleichtert das Modell der heterotopen zervikalen Herztransplantation bei Mäusen, indem technisch anspruchsvolle Nahtanastomosen kleiner Gefäße vermieden werden. Die technischen Details, die in diesem Videopapier gezeigt werden, sollten es Forschern ermöglichen, dieses Modell in ihren Labors zu etablieren.

Heterotope Cervical Herztransplantation bei Mäusen

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Dieses Video stellt ein experimentelles Modell der zervikalen Herztransplantation vor, um Ischämie-Reperfusionsschäden an syngenen Mäusen oder die Abstoßung von Transplantaten an allogenen Tieren zu untersuchen. Der erste Schritt des Verfahrens besteht darin, das Herz aus der Spendermaus zu entnehmen. Das Transplantat wird bis zu vier Stunden lang in einer kalten Kardioplegelösung auf Eis gelagert, abhängig vom experimentellen Ansatz.Der nächste Schritt ist die Vorbereitung der rechten Halsgefäße der Empfängermaus, bei der die Gefäßwand der durchtrennten Vena jugularis externa und der Arteria carotis über eine Manschette geführt und mit einer Ligatur fixiert wird. Der letzte Schritt des Verfahrens ist die Implantation des Transplantats in die Empfängermaus. Die Aorta ascendens des Transplantats wird über die Manschette mit der Arteria carotis gezogen, und der Truncus pulmonalis wird mit der Vena jugularis externa anastomosiert.Schließlich werden die Klammern entfernt und die Reperfusion beginnt. Normalerweise entwickelt das Herz innerhalb einer Minute einen Sinusrhythmus. Im Vergleich zur abdominellen Graft-Implantation bei der zervikalen Herztransplantation ist das Verfahren weniger invasiv und die Tiere erholen sich schneller.Auch durch die Verwendung von Cals für die Anastomose kann das Nähen kleiner Gefäße vollständig vermieden werden, wodurch dieses ein technisch machbareres Modell darstellt. Nachdem die Maus mit Isofluran vorberuhigt wurde, anästhesieren Sie sie durch eine intraperitoneale Injektion von Anästhetika und überprüfen Sie die chirurgische Toleranz durch Kontrolle des Zehe-zieh-Reflexes. Befestigen Sie anschließend die Maus in Rückenlage auf dem Operationsfeld.Desinfizieren Sie die Haut anschließend dreimal mit Chlorhexidin. Führen Sie nun einen medianen Bauchschnitt durch und verlagern Sie mit einem feuchten Tupfer den Darm nach links, um die untere Hohlvene freizulegen. Injizieren Sie danach 50 Einheiten Heparin, die in 0,4 Milliliter Kochsalzlösung verdünnt wurden, in die Vena cava inferior, um eine Koagulation zu verhindern.Eine Minute später, öffnen Sie das Diaphragma und führen Sie eine bilaterale Thorakotomie durch, um das Herz freizulegen, reflektieren Sie die vordere Brustwand nach kranial und fixieren Sie sie mit einer Klemme. Entfernen Sie anschließend den Thymus und dissezieren Sie stumpf das Bindegewebe zwischen Aorta und Pulmonalstamm, schneiden Sie dann in die rechte obere V. cava. Verwenden Sie danach eine 30-Gauge-Nadel, um die mobilisierte Aorta descendens am Truncus brachiocephalicus zu punktieren, und perfundieren Sie das Herz langsam retrograd mit drei Millilitern eiskalter kardioplegischer Lösung.Üben Sie keinen übermäßigen Druck aus. Injizieren Sie keine Luft. Und um den Herzstillstand weiter zu verstärken, tropfen Sie eiskalte Kochsalzlösung auf das Transplantat. Danach die Aorta proximal zum Ursprung des Truncus brachiocephalicus durchtrennen und die Vena cava inferior sowie beide Venae cavae superiores nahe am Herzen ligieren. Nach Setzen der Ligaturen mittels ATO-Seide jede Gefäßerstreckung distal zu den Ligaturen durchtrennen. Anschließend den Truncus pulmonalis so weit distal wie möglich freilegen und die Arteriae pulmonales nahe der Bifurkation ligieren.Mit einer Seidenschnur werden auch diese Gefäße distal zu den Ligaturen durchtrennt. Die letzten zu ligierenden Gefäße sind die Lungenvenen, die gemeinsam mit einer einzigen Seidenschnur-Ligatur verschlossen werden können. Anschließend werden diese Venen durchtrennt und das Herz vom Spender entfernt.Bewahren Sie das Herz in eiskalter Kardioplegelösung auf, bis es unter dem Mikroskop benötigt wird. Bereiten Sie die Cuffs für die Anastomose vor, indem Sie das Polyamidrohr mit einer Schere oder einer Skalpellklinge der Größe 11 schneiden. Nachdem der Empfänger wie der Spender für die Operation vorbereitet wurde, verabreichen Sie eine subkutane Injektion von 0,25 Millilitern warmer Kochsalzlösung zur Flüssigkeitsersatztherapie.Nächster Schritt: Rasieren Sie das Haar im rechten zervikalen Bereich und positionieren Sie die Maus in Rückenlage auf einer warmen Unterlage. Befestigen Sie die Beine mit Klebeband, dehnen Sie jedoch die Vordergliedmaßen nicht übermäßig, da dies die Atmung beeinträchtigen kann. Tragen Sie anschließend einen Augensalbe auf und desinfizieren Sie die Operationsstelle dreimal mit mehreren Chlorhexidin-Antiseptika. Beginnen Sie nun die Operation, indem Sie einen transversalen Hautschnitt vom rechten Unterkieferwinkel bis zur Jugularkerbe anlegen.Danach die Vena jugularis externa stumpf mobilisieren und die Seitenäste mit einer bipolarer Pinzette koagulieren und durchtrennen. Die Vena jugularis externa zwischen den Ligaturen durchtrennen, wo sie sich mit dem Venenast der Glandula submandibularis vereinigt. Nach der Isolierung die Vena jugularis externa durch die Manschette ziehen.Dann okkludieren Sie das Gefäß proximal, indem Sie eine vaskuläre Klemme auf die Verlängerung der Manschette setzen. Entfernen Sie nun die Ligatur und spülen Sie das Gefäßlumen mit ein bis 10 Heparin-haltigem Kochsalzlösung aus. Vervollständigen Sie die Befestigung an der Manschette, indem Sie die Gefäßwand darüber umstülpen und das Gefäß mit einer vorgefertigten umlaufenden Seidenligatur fixieren.Entfernen Sie nun den oberflächlichen Teil des Musculus sternocleidomastoideus. Danach mobilisieren Sie die rechte Arteria carotis communis. Platzieren Sie dann unterhalb der Carotisbifurkation zwei Ligaturen und durchtrennen Sie das Gefäß zwischen ihnen.Ziehen Sie nun die Arteria carotis durch die Manschette und setzen Sie eine A-Clamp an der Strecke proximal zur Manschette an. Um das Gefäß zu verschließen, entfernen Sie das Ligaturmaterial und spülen Sie das Gefäßlumen mit einer bis 10 Heparin-Salzlösung aus. Weiten Sie anschließend das Lumen vorsichtig mit einem Gefäßdilatator. Und wie zuvor wird die Gefäßbefestigung an der Manschette abgeschlossen. Der schwierigste Teil des Verfahrens besteht darin, das Gefäßlumen der entnommenen Arterie über die Manschette zu stülpen, da es leicht zurückklappen kann. Daher ist es wichtig, die Arterie vollständig zu mobilisieren, um eine geeignete Manschettengröße auszuwählen, und das Gefäßlumen vor der Stülpung vorsichtig zu erweitern.Zur Vorbereitung der Transplantation wird der rechte Lappen der Submandibulardrüse entfernt und das Operationsfeld feucht gehalten. Die Transplantat wird mit der Bauchseite nach oben in die Empfänger-Halsregion eingelegt, wobei die Aorta medial und die Lungenarterie lateral orientiert ist. Anschließend wird die Aorta des Transplantats über die Manschette mit der Arteria carotis gezogen und die Anastomose mit einer umlaufenden 8-0-Seidenligatur gesichert.Als Nächstes den Lungenstamm an seiner vorderen Seite einschneiden und mit der Vena jugularis externa über die Manschette ziehen. Diese Anastomose mit einer weiteren Ligatur sichern. Nun den Klemmverschluss an der Vena jugularis externa entfernen und danach den an der Arteria carotis, woraufhin das Herz sich schnell mit Blut füllen sollte, um die Reperfusion zu verbessern; gleichzeitig gewärmtes Kochsalz auf das Transplantat tropfen lassen.Normalerweise setzt innerhalb einer Minute ein Sinusrhythmus ein. Entfernen Sie nun die Manschettenerweiterung an der venösen Stelle und überprüfen Sie die Bypass-Prothese. Die Anastomose muss spannungsfrei sein, und die Gefäße dürfen keine Torsion aufweisen.Die Gefäße der Haut nicht kauterisieren. Da dies die Wundheilung beeinträchtigen könnte, sollte die Blutung spontan stoppen; die Haut anschließend mit einer einzelnen kontinuierlichen Naht verschließen. Nach der Operation dem Tier ein Viertel Milliliter warmer Kochsalzlösung subkutan injizieren.Als Nächstes injizieren Sie ein Medikamentencocktail subkutan, um die Wirkung der Betäubungsmittel zu antagonisieren. Lassen Sie das Tier auf einer warmen Unterlage ausruhen, bis es eine stabile Rückenlage aufrechterhalten kann. Beobachten Sie das Tier mindestens eine Stunde lang, bevor Sie es als vollständig erholt einstufen.Nach der Genesung sollte die Maus mindestens drei Tage lang einzeln untergebracht werden. Verabreichen Sie Analgetika für mindestens 72 Stunden. Wiegen Sie das Tier außerdem täglich, um schweren Gewichtsverlust auszuschließen, und überwachen Sie die allgemeine Gesundheit des Tieres.Mithilfe des beschriebenen Protokolls wurden syngene Black-six-Mäuse für die histopathologische Untersuchung transplantiert. Die Transplantate wurden mit Hämatoxylin, Eosin und Safranrot gefärbt. Gewebeschnitte von nicht transplantierten Tieren dienten als Kontrollen im Vergleich zu Kontrollen.Verlängerte Ischämie. Die Reperfusion führte zu einer starken entzündlichen Reaktion mit Gewebsödem. Hyperämie mit infiltrierenden Leukozyten, wie mit Sternchen gekennzeichnet, sowie mikrovaskuläre Okklusion.Schwere rote Färbung zeigte eine deutliche interstitielle Kollagenablagerung, die durch die Pfeile angezeigt wird. Solche Kollagenablagerungen wurden in den Kontrollen nicht beobachtet. Dieses Transplantationsmodell ist ein interessantes Werkzeug in der kardiovaskulären und Transplantationsforschung.Es ist besonders nützlich, die myokardiale Ischämie-Reperfusionsschädigung zu untersuchen, bevor mit Experimenten begonnen wird. Stellen Sie sicher, dass Sie diese Technik mit reproduzierbaren operativen Ergebnissen durchführen können, da dies andernfalls eine wesentliche Verzerrung darstellen könnte; die Anastomosezeit und damit die warme Ischämiezeit sollten daher auf weniger als 20 Minuten begrenzt werden.

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Forschung

JoVE Journal

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Medizin

Die Maus heterotope Herztransplantation Modell wurde von vielen Forschern nachgewiesen worden, eine wichtige Methode zur Untersuchung von Mechanismen der Abstoßung und Immunantwort werden. Allerdings sind die eingesetzten Techniken erforderlich noch eine Herausforderung. Durch die Modifikation Standard-Techniken haben wir Erfolg mit mehr als 1000 Transplantationen.

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Es wird eine Technik für das mikrochirurgische Verfahren zur heterotopen Transplantation von Herzen bei Mäusen demonstriert, einschließlich vereinfachter Methoden für die Spenderentnahme und die Anastomose der Empfängergefäße.

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Dieses Protokoll präsentiert eine vereinfachte, end-zu-seitige Nahtanastomose-Technik für die Zervikalherztransplantation der Maus und bietet ein robustes und reproduzierbares Modell zur Untersuchung der Transplantationsimmunologie.

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