Name: Ein Hormon ansprechenden 3D-Kultur Modell des menschlichen Brustdrüse Epithel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: Erfahren Sie die standardisierte 3D-Kulturmethode für hormonsensible Brustepithelzellen zur Untersuchung mammogener Hormone. Dieses Verfahren liefert physiologisch relevante Einblicke für die Brustkrebsforschung.

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Wir freuen uns über die redaktionellen Beiträge von Cheryl Schaeberle. Diese Forschung wurde unterstützt von Avon Grants # 02-2009-093 und 02-2011-095, und NIEHS / NIH ES 08314 zu AMS. Der Inhalt ist allein in der Verantwortung der Autoren und stellen nicht notwendigerweise die offizielle Meinung des National Institute of Environmental Health Sciences oder der National Institutes of Health vertreten.

1. Vorbereitung der Reagenzien <ol><li> Man löst das synthetische Gestagen Promegeston (R5020) und 17-β-Estradiol (E2) in Ethanol zu machen 10 -3 M Stammlösungen. Löse Prolaktin in destilliertem deionisiertem Wasser auf eine 1 mg / ml Stammlösung machen. Man löst das Antiöstrogen ICI 182,780 in DMSO auf 10 -2 M Stammlösung machen. Bewahren Sie diese Lösungen bei -20 ° C bis zu 6 Monaten. </li><li> Holzkohle-Dextran (CD) gereinigten Serum und CDFBS Medium: <ol><li> Wärme-Inaktivierung von fötalem Rinderserum (FBS) in einem 57 ° C Wasserbad für 30 min. Hinweis: Verwenden Sie nur säuregewaschenen Glaswaren für den Rest dieses Protokolls. </li><li> Berechnen der Menge an Aktivkohle benötigt. Verwendung von 10% größeres Volumen als die Menge an Serum für die Verschiebung von der Holzkohle, wiegen 5% wt / vol Aktivkohlepulver zu kompensieren. </li><li> Waschen Kohle zweimal mit kaltem entionisiertem destilliertem Wasser das gleiche Volumen wie die Menge des Serums. Für jede Wasch centrifuge bei 50 g für 2 min die Holzkohle zu pelletieren. Entfernen Sie das Wasser zwischen den Waschgängen. In 0,5% w / v Dextran T-70 bis zum letzten Kohle Pellet. Resuspendieren mit destilliertem, entionisiertem Wasser und Zentrifuge bei 100 × g für 5 min. Saugen Sie das Wasser. </li><li> Fügen Sie den entsprechenden Volumen von Serum zu dem Pellet und erneut zu suspendieren die Holzkohle-Dextran-Pellet in das Serum. Man inkubiert, während (6 RPM) Walzen, bei 37 ° C für 60 min. Zentrifuge bei 2.000 × g für 20 min. Wenn überstehende trübe erscheint, wiederholen Zentrifugation; jedoch Serum kann nicht völlig klar sein, zu diesem Zeitpunkt aber wird während der Filtration geklärt werden. </li><li> Man filtriert durch ein 0,80-Mikron-Filter und dann erneut durch ein 0,45 Mikrometer-Filter, um größere Partikel zu entfernen. Schließlich Filter-Sterilisieren mit einem 0,20-Mikron-Filter. Shop gefiltert CDFBS in Glasröhrchen oder T-25 Kulturflaschen bei -20 ºC. </li><li> Charcoal Dextran Stripped Fetal Bovine haltigen Medien (CDFBS Medien): mix 375 ml Phenolrot-freiem DMEM und 125 ml DMEM/ F-12. Entfernen 37,5 ml und ersetzen Sie es mit dem gleichen Volumen von Holzkohle Dextran Stripped Fetal Bovine Serum. Fügen Sie 10 6 U / ml Penicillin und L-Glutamin in eine 2 mM Endkonzentration. Das resultierende Medium beträgt 75% DMEM, 25% DMEM / F-12, 7,5% Charcoal Dextran abgestreift-FBS, 2 mM L-Glutamin und 10 &amp; sup6; U / ml Penicillin. </li></ol></li><li> Bereiten 10X PBS, 1 N NaOH und destilliertem deionisiertem Wasser. Bereiten genügend Volumen von jedem nach dem Volumen der Kollagenlösung benötigt. Sterilisieren Sie alle Lösungen durch Filterung. Bewahren Sie die 10x PBS und sterilem destilliertem entionisiertem Wasser bei 4 ° C für bis zu 1 Monat. Bewahren Sie das 1 N NaOH-Lösung. </li><li> Bereiten Kollagenlösung bei einer 1 mg / ml Endkonzentration nach dem Protokoll für &quot;Alternate Gelierung Verfahren für Kollagen I, Rat tail&quot; durch den Hersteller zur Verfügung gestellt. Jedes Gel wird von 1,5 ml Kollagenlösung hergestellt. Zum Beispiel, bereiten 18,5 ml Kollagenlösung (0,5 ml für den Verlust beim Pipettieren zu berücksichtigen) vorbereiten12 Gele. Verwenden Sie die Kollagenlösung sofort oder halten auf dem Eis für bis zu 2-3 Stunden. </li><li> Carmine Alum Farbstoff: <ol><li> Kombinieren Sie 1 g Carmine und 2,5 g Aluminiumkaliumsulfat in 500 ml destilliertem Wasser. Kochen während 20 Minuten unter Rühren. Achten Sie sorgfältig Überkochen zu vermeiden. Passen endgültige Volumen wieder auf 500 ml mit zusätzlichem destilliertem Wasser. </li><li> Fügen Sie einen Kristall von Thymol auf antimikrobielle Aktivität und decken Flasche mit Aluminiumfolie vor Licht zu schützen. Man filtriert durch ein Laborqualität Papierfilter vor jedem Gebrauch. Wiederverwendung der Carminlösung für bis zu drei Monaten. Aufbewahren bei Raumtemperatur, vor Licht geschützt. </li></ol></li><li> Kollagenase-Lösung: Man löst die Kollagenase in DMEM / F12-Medium in einer Konzentration von 0,125% w / v. Sie diese Lösung nicht speichern. </li></ol> 2. 3D Culture von T47D Zellen in Rattenschwanz Kollagen Typ 1 Gels und Hormonbehandlung Hinweis: Halten Sie sterilen serologischen Pipetten und Pipettenspitzen bei 4 ° C. <ol><li> Prepaerneut eine Einzelzellsuspension und führen Sie eine Zellzahl. Split T47D Zellkulturen, bevor sie erreichen 70% Zusammenfluss. Zentrifugieren Sie die Lautstärke, die die Menge von Zellen benötigt enthält. Bedenken Sie, dass ein Gel sollte etwa 75.000 T47D Zellen enthalten. </li><li> Verwendung eines kalt Pipette resuspendieren das Zellpellet in dem entsprechenden Volumen von Kollagen. Bedenken Sie, dass jeder Gel von 1,5 ml Kollagen aus. Mischen Sie die Zellen und das Kollagen sanft zu vermeiden Blasen einzuführen. </li><li> Um die Wirkung von statischer Elektrizität auf Zellverteilung verhindern, Pinsel die Ränder, oben und unten an der 12-Well-Platte mit einer statischen reduzierenden Bürste nach den Teller auspacken. Um zu vermeiden, statische Aufladung bei Berührung mit der Arbeitsfläche der Haube, legen Sie diese Platte auf eine andere 12-Well-Platte (Blindplatte), die auch mit der statischen mindernde brush.Gently gebürstet wurde, gießen 1,5 ml der Mischung in jede Vertiefung der 12-Well-Platte. </li><li> Die Platte wird in einem Brutschrank bei 37 ° C für 30 Minuten. entfernen the Platte aus dem Inkubator und legen Sie sie in die Kapuze zurück. </li><li> Mit einer p200 sterile Spitze, nehmen sorgfältig das Gel in einer sanften kreisenden Bewegungen von der Grenze des Brunnens. Das Gel sollte auch aus dem Boden des Bohrlochs zu lösen. </li><li> Verdünnte Hormone in CDFBS Medien zu den Vertiefungen hinzugefügt werden. Verwenden E2 und R5020 bei einer 10 -10 M Endkonzentration und Prolaktin auf eine bei 10 -7 M Endkonzentration. Als Kontrolle verwenden CDFBS Medien ohne Hormone zugesetzt, aber immer noch das höchste Volumen von DMSO in Höhe der Hormon Lagerbestände enthält. Stellen Sie sicher, dass jede Vertiefung 1,5 ml Medium enthält. Platzieren Sie die 3D-Kulturen in einem 37 ° C, 5% CO 2, 100% Feuchtigkeit Gewebekultur-Inkubator. Pflegen Sie die Kulturen für ein oder 2 Wochen die Medien alle 2 Tage zu ändern. </li></ol> 3 Gel-Verarbeitung für Whole Mounts <ol><li> Entfernen Kulturmedien und fügen Sie in jede Vertiefung 1,5 ml PBS. </li><li> Übertragen Sie das Gel auf einen Objektträger. Schneiden Sie das Gel in ein halbes Kurved chirurgischen Klinge. Weiter Verarbeitung mit der Hälfte und die andere Hälfte zur histologische Analyse speichern. </li><li> Übertragen Sie die Hälfte Gel für ganze auf einen Objektträger montieren. Lassen Sie Gel trocken für 5 Minuten und dann übertragen Sie die Folie in eine Coplin-Gefäß 10% Formalin enthält. Anmerkung: Alle Inkubationen sollte bei RT geschehen. </li><li> Fix Gele in einem Coplin-Gefäß auf einem Schüttler O / N. </li><li> Wash gleitet zweimal mit PBS für jeweils 10 Minuten auf einem Schüttler. Objektträger nach 70% EtOH; 1 h auf einem Schüttler inkubiert. Objektträger zu Carmine Alum O / N. </li><li> Am nächsten Tag entwässern gleitet auf Schüttler in 70% EtOH, 95% EtOH und 100% EtOH für 1 Stunde jede. Objektträger zweimal 1 Stunde jeden und halten am Schüttler zu Xylol. Verwenden Toluol-basierte Montage Medium der Gele und 1,5 mm dicken Deckgläser zu montieren. </li><li> Untersuchen ganze Halterungen unter normalen Licht (Mikroskop oder Stereoskop). Für eine genauere Analyse der Form und Lumen nutzen konfokale Mikroskopie und Carmine Farbstoff mit He-Ne-633-nm-Laser visualisieren. </li></ol>4. Gel Verfahren für die Verarbeitung für die Histologie Analyse <ol><li> Die restliche Hälfte des Gels auf eine 20 ml-Glasfläschchen, das 10% Formalin und legen Sie auf den Schüttler O / N. </li><li> Waschen Sie Gele zweimal mit PBS für jeweils 10 Minuten auf einem Schüttler. Platz Gele in Verarbeitung Kassetten für Paraffineinbettung. </li><li> Transfer Gele bis 70% EtOH, Inkubation für 1 Stunde und folgen mit 95% EtOH für 1 Stunde, ändern an die frische 95% EtOH für 1 h, 100% EtOH für 1 Stunde, und wechseln Sie in frischem 100% EtOH für 1 Stunde. An diesem Punkt, Gele können für 1 Stunde und dann wieder in frischem Xylol für 1 Stunde in 100% EtOH O / N bei RT oder inkubiert mit Xylol gespeichert werden. </li><li> Transfer Kassetten für 1 h bei 60 ° C im Vakuum Inkubator wiederholt mit frischem Paraffin zweimal mehr Paraffin. </li><li> Füllen Kunststoffformen mit sauberem Paraffin. Öffnen Sie die Kassette entfernen Sie das Gel und legen Sie sie in der Kunststoffform, die Paraffin. Füllen Sie mit Paraffin up und top In der Kassette mit dem Etikett nach oben enthalten, und lassen Block cool. </li><li> Entfernen Sie die plastic Form und Abschnitt der Block mit einem Mikrotom. Erhalten Sie 5 um dicke Abschnitte für HE-Färbung und Immunzytochemie. </li></ol> 5. Gewinnung von Zellen aus Zellen aus Gele Collagenase-Behandlung <ol><li> Entfernen Gel aus dem Brunnen und überträgt es auf eine Petrischale mit PBS. Spülen Gel kurz. </li><li> Übertragen Sie das Gel in ein 15 ml Röhrchen mit 2 ml 0,125% Collagenase. Pipette auf und ab 4-5 mal, um das Gel in kleine Stücke zu brechen. </li><li> bei 37 ° C inkubieren für 25 min (bis-Gel aufgelöst und die Zellen werden in Suspension) </li><li> 2 ml Serum ergänzten Kulturmedium. Sammeln Sie die Zellen durch Zentrifugation (1000 × g, 5 min), Überstand verwerfen, resuspendieren Zellen und zählen. </li></ol>

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<li>Vignon, F., Bardon, S., Chalbos, D., Rochefort, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiestrogenic+effect+of+R5020%2C+a+synthetic+progestin+in+human+breast+cancer+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.Clin.Endocrinol.Metab%22%5BJournal%5D)">Antiestrogenic effect of R5020, a synthetic progestin in human breast cancer cells in culture.</a> J.Clin.Endocrinol.Metab. 56, 1124-1130 (1983).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Hier beschreiben wir ein hormonsensitives 3D-Kulturmodell, um die Wirkung von Hormonen auf das Brustepithel zu testen. Die Reaktion auf Hormone kann auf den Ebenen der Gewebemorphologie, der Zellproliferation und der Genexpression beurteilt werden 12. Eine Einschränkung dieser Technik besteht darin, dass die Visualisierung während der Kulturperiode auf die Lichtmikroskopie beschränkt ist, da die Kulturen in einer Kunststoffbodenplatte gezüchtet werden. Das 3D-Kultursystem konnte an Glasbodenplatten angepasst w...

Im Gegensatz zu Standard-2D-Kulturen erlauben Surrogat 3D-Zellkulturmodelle für die Untersuchung von epithelialen Zellverhalten in einem physiologisch relevanten Kontext man eine Gewebe ähnelt. 3D-Kulturen der Brustdrüse viele Aspekte der Brustdrüse Entwicklung und Neoplasie aufzuklären haben dazu beigetragen. Die Mehrzahl der 3D-Kulturmodellen jedoch derzeit verfügbar sind ungeeignet Hormonwirkung zu studieren, weil die menschlichen epithelialen Zelllinien für die Aufgabe eingesetzt 6,7,9 fehlt Hormonrezeptorexpression. Hier beschreiben wir eine 3D-Kultur-Modell der menschlichen Brust-Epithel, die geeignet ist, um die Hormonwirkung 12 studieren. Dieses Modell verwendet die im Handel erhältlich Hormone ansprechenden menschlichen Brust epithelialen Zelllinie T47D 3,11,13, die ursprünglich von einem Pleuraerguss von einer 54-jährigen Patientin mit einer Infiltrations duktale Mammakarzinom erhalten abgeleitet wurden. Wir verwenden Rattenschwanz Kollagen vom Typ 1 als Matrix. Diese 3D-Kulture-Modell ist für die Untersuchung der Wirkung von den drei Haupt mammotropic Hormone (Östradiol, Promegeston (ein Analogon von Progesteron) und Prolaktin) angemessen auf die menschliche Brust Epithelzellen. Hormonbedingten können epitheliale Morphologie quantitativ im Laufe der Zeit durch morphometrische Analyse 12 bewertet werden. Eine geeignete Aussaatdichte ermöglicht diese 3D-Kulturen für 2 Wochen aufbewahrt werden. Zu dieser Zeit ist die Entwicklung von Strukturen für eine ausreichend robust quantitative Bewertung der Hormonwirkung auf epitheliale Morphologie. Gele können auch zu früheren Zeitpunkten für die Zellproliferation und die Genexpression analysiert geerntet werden. Darüber hinaus ist dieses Modell die Auswirkungen einer sequentiellen Hormonbehandlung zu testen geeignet; zum Beispiel nach der Behandlung mit Estradiol während der ersten Woche und Austausch mit anderen Hormon / Kombination von Hormonen während der folgenden Woche. Die Wirkung des Östrogen-Verbindungen und Antiöstrogene, wie ICI 182,780, können auch stu werdenstarb dieses 3D-Kultur-Modell 12 mit.

<table><tbody><tr><td>12-Well-Gewebekulturplatten (Falcon)</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-29</td><td></td></tr><tr><td>15 ml konische Polystyrol-Röhrchen</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49D</td><td></td></tr><tr><td>Aktivkohle</td><td>Sigma</td><td>C-5510</td><td></td></tr><tr><td>Karmin Alaun</td><td>Sigma</td><td>C1022-100G</td><td></td></tr><tr><td>Kollagenase, Typ 3</td><td>Worthington</td><td>S0C11784</td><td></td></tr><tr><td>Konfokales Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>LSM510</td><td>Ausgestattet mit HeNe 633nm Laser</td></tr><tr><td>Dextran T-70</td><td>Abersham/Pharmacia</td><td>17-0280-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES, kein Phenol rot&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>11339-021</td><td>Phenolrot-freie Medien für die Hormonanwendung</td></tr><tr><td>DMEM, niedrige Glukose, Pyruvat, kein Glutamin, kein Phenolrot</td><td>Life Technologies</td><td>11054-020</td><td>Phenolrot-freie Medien für die Hormonanwendung</td></tr><tr><td>17-&beta;-Estradiol</td><td>EMD Millipore</td><td>3301</td><td>In Ethanol gelöst</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Koptec</td><td>V1001</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum-Hyklon</td><td></td><td>SH30070.03</td><td>Zur Verwendung mit Hormonen muss Aktivkohle-Dextran abgestreift werden&nbsp;</td></tr><tr><td>Filter (115 ml)</td><td>Nalgene</td><td>380-0080, 245-0045, 120-0020</td><td>0,88, 0,45, 0,20 Mikron bzw.</td></tr><tr><td>Formalin, 10%</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF93-20</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>ICI 182,780 (Fulvestrant)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I4409-25MG</td><td>Gelöst in DMSO-Mikrotom</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Leica</td><td>RM2155</td><td></td></tr><tr><td>Einbettungsmedium</td><td>für Gewebe McCormick Scientific</td><td>39502004</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin</td><td>Sigma</td><td>7794-10MU</td><td>Gelöst in 10 ml destilliertem Wasser</td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-500</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung pH 7,4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3813-10PAK</td><td></td></tr><tr><td>Prolaktin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L4021-50UG</td><td>Gelöst in destilliertem deionisiertem Wasser</td></tr><tr><td>Promegestone</td><td>Perkin Elmer</td><td>NLP004005MG</td><td>Gelöst in Ethanol</td></tr><tr><td>Rattenschwanzkollagen&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>354236</td><td>Chargen können unterschiedliche Konzentrationen enthalten, entsprechend beachten Skalpell</td></tr><tr><td></td><td>Miltex</td><td>4311</td><td></td></tr><tr><td>Halbgeschlossener Tisch-Tissue-Prozessor</td><td>Leica</td><td>TP1020</td><td></td></tr><tr><td>Natriumhydroxid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td>Vorbereiten 1N NaOH-Lager</td></tr><tr><td>StaticMaster Antistatik-Bürste&nbsp;</td><td>Amstat</td><td>C3500</td><td></td></tr><tr><td>Serologische Stripettenpipetten&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>4101</td><td></td></tr><tr><td>T-25 Kolben</td><td>Corning&nbsp;</td><td></td><td></td>430168</tr><tr><td>Gewebekassetten</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-200-403E</td><td></td></tr><tr><td>Wheaton Fläschchen, Glas, 20 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-341-25D&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Xylol&nbsp;</td><td>VWR</td><td>95057-822</td><td></td></tr></tbody></table>

ein hormon ansprechenden 3d-kultur modell des menschlichen brustdrüse epithel

A Hormone-responsive 3D Culture Model of the Human Mammary Gland Epithelium

Der Prozess der Morphogenese des Brustepithels wird durch Hormone beeinflusst. Die Untersuchung der Hormonwirkung auf das Brustepithel mit Hilfe von 2D-Kulturen beschränkt sich auf die Zellproliferation und die Endpunkte der Genexpression. Im Organismus findet die Morphogenese der Brust jedoch in einer 3D-Umgebung statt. 3D-Kultursysteme helfen, die Lücke zwischen Monolayer-Zellkultur (2D) und der Komplexität des Organismus zu schließen. Darin beschreiben wir ein 3D-Kulturmodell des menschlichen Brustepithels, das sich zur Untersuchung der Hormonwirkung eignet. Es verwendet die kommerziell erhältliche hormonempfindliche humane Brustepithelzelllinie T47D und Rattenschwanzkollagen Typ 1 als Matrix. Dieses 3D-Kulturmodell reagiert auf die wichtigsten mammotropen Hormone: Östradiol, Gestagene und Prolaktin. Der Einfluss dieser Hormone auf die epitheliale Morphogenese kann je nach Endpunkt nach 1- oder 2-wöchiger Behandlung beobachtet werden. Die 3D-Kulturen können für die Analyse der epithelialen Morphogenese, der Zellproliferation und der Genexpression entnommen werden.

Abbildung 1 fasst die Vorgehensweise für die hormonsensitive 3D-Kulturen vor. Epithelialen Strukturen werden in ganze Halterungen von Gelen kultiviert für 2 Wochen in Gegenwart von E2 allein und in Kombination mit anderen Hormonen beobachtet. Nur einzelne Zellen oder Gruppen von 2-3 Zellen vorhanden sind, wenn keine Hormone zu dem Kulturmedium (CDFBS mittel) (Bild 2) zugesetzt werden. Dieser Zustand dient als Negativkontrolle. Die Zellen in 3D-Kultur bilden ...

Wir beschreiben ein 3D-Kulturmodell des menschlichen Brustepithels, das geeignet ist, die Hormonwirkung zu untersuchen.

Ein Hormon ansprechenden 3D-Kultur Modell des menschlichen Brustdrüse Epithel

The process of mammary epithelial morphogenesis is influenced by hormones. The study of hormone action on the breast epithelium using 2D cultures is ...

Das übergeordnete Ziel dieser physiologisch relevanten 3D-Kulturmethode besteht darin, die Wirkung der wichtigsten mammogenen Hormone auf die morphogenetische Entwicklung des Brustepithels zu untersuchen. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen auf den Gebieten der Endokrinologie und der Biologie der Brustdrüse zu beantworten, beispielsweise wie Östrogen, Progesteron und Prolaktin die morphogenetische Entwicklung des Brustepithels beeinflussen. Der entscheidende Vorteil dieser standardisierten Methode liegt darin, dass hormonsensitive Brustepithelzellen als Reaktion auf Hormone 3D-Strukturen ausbilden, ähnlich wie dies in vivo beobachtet wird.Die Auswirkungen dieser Technik reichen bis hin zu Therapien gegen Brustkrebs, da es sich um ein physiologisch relevantes Kultursystem des komplexen menschlichen Brustepithels handelt. Wir hatten erstmals die Idee zu dieser Methode, weil uns auffiel, dass standardisierte In-vitro-Modelle dafür fehlen, zu untersuchen, wie die hormonelle Einflussnahme die Morphogenese des menschlichen Brustgewebes beeinflusst. Beginnen Sie damit, die Anzahl der Zellen in einer Einzelzell-Suspension von T47D-Zellen zu zählen.Die Art und Weise, wie die Zellen g

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Eine einfache Methode ist für die Analyse von Auswirkungen von Fibroblasten aus dem Bindegewebe auf verbundene Epithelzellen beschrieben. Die Kombination dieser Verfahren und dreidimensionalen Gewebekultur Analyse von Zellen nach der Isolierung aus 3D zu erleichtern. Die Technik ist für Zellen unterschiedlicher maligne Potential, so dass systematische Untersuchung der Wirkungen von Tumor-assoziiertem Stroma auf Tumorzellen.

Isolierung von Brustepithelzellen aus dreidimensionalen Mixed-Zelle Spheroid Co-Kultur

In Standardkulturverfahren, Zellen aus ihrer physiologischen Umgebung genommen und auf die Kunststoffoberfläche einer Schale gezüchtet. Um das Verhalten von primären humanen Knochenmarkzellen untersuchen wir eine 3-D-Kultur-System, wo Zellen unter Bedingungen rekapituliert die native Mikroumgebung des Gewebes gewachsen erstellt.

Eine dreidimensionale Zellkulturmodell zu primären humanen Knochenmark und seine Malignome Studieren

Dreidimensionale Kultur von Säugetier-Epithelzellen auf einem rekonstituierten Basalmembran ist eine nützliche Methode, um die in vivo-Architektur der gutartigen Brust rekapitulieren und den malignen Phänotyp von gutartigen Brust Phänotyp zu differenzieren. Wichtiger ist, kann dieses System angewandt werden, um invasive Karzinome in anderen Geweben zu untersuchen.

Dreidimensional Kulturen: Ein Werkzeug, um Architektur zu studieren Normale acinar gegen maligne Transformation von Brustzellen

Wir haben eine neue Ex-vivo-Modell, um die Hormonwirkung in der menschlichen Brust zu studieren entwickelt. Es wird auf das Gewebe Mikrostrukturen von chirurgischen Brustgewebeproben, die Gewebearchitektur, interzellulären Wechselwirkungen und parakrine Signal bewahren isoliert basiert.

Ein<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Modell um die Hormonwirkung in der menschlichen Brust Studieren

Die in diesem Artikel beschriebene indirekte Immunofluoreszenz-Protokoll ermöglicht den Nachweis und die Lokalisierung von Proteinen in der Milchdrüse der Maus. Eine vollständige Verfahren wird gegeben, um Brustdrüsenproben herzustellen, um die Immunhistochemie die Gewebeschnitte durch Fluoreszenzmikroskopie durchführen, um Bild und um Bilder zu rekonstruieren.

Die indirekte Immunfluoreszenz auf Gefrierschnitte von Mäusemilchdrüse

Diese Handschrift beschreibt eine weiche Lithographie-basierte Technik einheitlichen Arrays von dreidimensionalen (3D) Epithelgewebe definierter Geometrie durch extrazelluläre Matrix umgeben zu konstruieren. Dieses Verfahren ist offen für eine große Vielfalt von Zelltypen und experimentelle Kontexten und ermöglicht Hochdurchsatz-Screening von identischen Replikaten.

Technik Dreidimensionale Epithelgewebe Eingebettet in extrazellulären Matrix

Wir beschreiben Techniken zur Differenzierungsinduktion von zwei Brustepithellinien, HC11 und EpH4. Während beide fetales Kalbsserum, Insulin und Prolaktin benötigen, um Milchproteine zu produzieren, können sich EpH4-Zellen in der dreidimensionalen Kultur vollständig in Mammosphären differenzieren. Diese komplementären Modelle sind nützlich für Signaltransduktionsstudien der Differenzierung und Neoplasie.

Differenzierung von Mausbrustepithel-HC11- und EpH4-Zellen

Die Brustdrüse ist eine zweischichtige Struktur, die äußere myoepitheliale und innere luminale Epithelzellen umfasst. Präsentiert ist ein Protokoll zur Vorbereitung von Organoiden mit Differential-Trypsinisierung. Diese effiziente Methode ermöglicht es Forschern, diese beiden Zelltypen getrennt zu manipulieren, um Fragen über ihre Rolle in der Form und Funktion der Brustdrüse zu untersuchen.

Generierung von Mosaik-Mammary-Organoiden durch Differential-Trypsinisierung

Das vorliegende Protokoll beschreibt den Aufbau von 3D-On-Top-Kulturen einer nicht transformierten Brustepithelzelllinie, MCF10A, die modifiziert wurde, um die durch den Thrombozytenaktivierungsfaktor (PAF) induzierte Transformation zu untersuchen. Immunfluoreszenz wurde verwendet, um die Transformation zu bewerten und wird ausführlich diskutiert.

Phospholipid-Mediator-induzierte Transformation in dreidimensionalen Kulturen

In diesem Protokoll wird ein Ansatz zur Erzeugung von Epithelorganoiden aus primärem Normal- und Tumorbrustgewebe durch differentielle Zentrifugation erörtert. Darüber hinaus sind Anleitungen für die dreidimensionale Kultivierung sowie die Immunfluoreszenz-Bildgebung von eingebetteten Organoiden enthalten.

Erzeugung und Bildgebung von Epithelorganoiden von Mäusen und Menschen aus normalem und Tumor-Brustgewebe ohne Passaging

Dieses Protokoll beschreibt eine definierte, hydrogelbasierte Methode zur Erzeugung menschlicher Brustorganoide, die zentrale Merkmale der Mammarienmorphogenese in einem kontrollierten dreidimensionalen Kultursystem nachbilden.

Eine definierte hydrogelbasierte Methode zur Erzeugung dreidimensionaler menschlicher Brustorganoide, die die Mammarienmorphogenese rekapitulieren

Erfahren Sie die standardisierte 3D-Kulturmethode für hormonsensible Brustepithelzellen zur Untersuchung mammogener Hormone. Dieses Verfahren liefert physiologisch relevante Einblicke für die Brustkrebsforschung.

Ein Hormon ansprechenden 3D-Kultur Modell des menschlichen Brustdrüse Epithel

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