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Sequenzierung von Pflanzenwand Heteroxylane Mit Enzymatische, Chemical (Methylierungs) und Physic...
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JoVE Journal Chemistry
Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Sequenzierung von Pflanzenwand Heteroxylane Mit Enzymatische, Chemical (Methylierungs) und Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Full Text
8,057 Views
11:49 min
March 24, 2016

DOI: 10.3791/53748-v

Sunil Ratnayake1, Kristina Ford1, Antony Bacic1

1ARC Centre of Excellence in Plant Cell Walls, School of BioSciences,University of Melbourne

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Dieses Protokoll beschreibt die spezifischen Techniken, die für die strukturelle Charakterisierung von Glykosylsequenz(en) im reduzierenden Endbereich (RE) und Glykosylsequenz(en) im internen Bereich von Heteroxylanen verwendet werden, indem das RE vor der enzymatischen Hydrolyse (Endoxylanase) mit 2 Aminobenzamid markiert und dann die resultierenden Oligosaccharide mittels Massenspektrometrie (MS) und Kernspinresonanz (NMR)

analysiert werden.

Das übergeordnete Ziel besteht darin, die Glykosalsequenzen des reduzierenden Endes und der internen Region von Heteroxylanen zu charakterisieren, indem der ursprüngliche reduzierende Endzuckerrest der wasserlöslichen Heravenaxylane markiert und mit einer Endoxylanase behandelt wird, um ein Gemisch aus Dolara-Sacchariden zu erzeugen. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im glykomischen Bereich zu beantworten, wie z.B. Veränderungen der Feinstruktur von Oligosacchariden oder Polysacchariden als Reaktion auf die geplante Wachstumsentwicklung, sowie abiotische und biotische Stressoren. Der Hauptvorteil dieser Methode besteht darin, dass sie den integrierten Ansatz zur Sequenzierung der reduzierenden n-Sequenz sowie der internen Regenerationssequenz eines beliebigen Glykans oder Polysaccharids beschreibt.

Bereiten Sie eine einmolare Natriumcyanoborohydrid-Lösung in einem Milliliter Wasser vor. Lösen Sie dann 27,2 Milligramm 2AB-Reagenz in der Natriumcyanoborohydridlösung, indem Sie auf 65 Grad Celsius erhitzen und den pH-Wert des Reaktionsgemisches mit 10 Prozent Essigsäure auf pH 5,5 einstellen. 200 Mikroliter des Reaktionsgemisches zu einem Milligramm wasserlöslichen Arabinoxylanen in ein Glasröhrchen mit Kappe geben und mit einem Wirbelmischer mischen.

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Chemie Heft 109 Zellwand Heteroxylan 2 aminobenzamid Endoxylanase Reduktions Ende und inneren Bereich Oligosaccharide Methylierungs Glycosyl-Sequenz MALDI-TOF-MS ESI-QTOF-MS ESI-MS n NMR

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