Name: Visualisierung von Twitching Motilität und Charakterisierung der Rolle des Pilg in Xylella fastidiosa (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 44 s
Description: Erfahren Sie, wie die Zuckungsmotilität von Xylella fastidiosa in einer nano-mikrofluidischen Kammer visualisiert und funktionell charakterisiert wird. Diese Methode liefert Einblicke in bakterielle Pathogenese.

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Diese Studie wurde von der United States Department of Agriculture, Agricultural Research Service unterstützt. Handelsnamen oder kommerzielle Produkte in dieser Veröffentlichung sind der Bereitstellung von spezifischen Informationen ausschließlich für den genannten Zweck und Empfehlung oder Billigung nicht durch die United States Department of Agriculture implizieren. USDA ist eine Chancengleichheit Anbieter und Arbeitgeber.

1. Der Peripheral Fringe von Bakterienkolonie <ol><li> Wachsen X. fastidiosa (Xf) Temecula Wildtyp 22, mutant Pilg Deletion Xf ΔpliG (unter Verwendung von zuvor beschriebenen Löschstrategie 23) und sein komplementäres XfΔpliG -C (unter Verwendung von zuvor Chromosoms basierte genetische Komplementierung Strategie 24 beschrieben) auf PD2 Medium Agarplatten 25 bei 28 ° C für 5-7 Tage. </li><li> Autoklav Cellophan (1 x 1 cm 2) in Wasser bei 121 ° C (249 ° F) für 15 min. Pick-up ein Stück Zellophan, lassen Sie das Wasser durch das Berühren einer Ecke Zellophan auf einem leeren Petrischale, legen sorgfältig das Zellophan über 15% der Agar-Oberfläche und der Luft trocknen. </li><li> Pick - up einzelne X. fastidiosa Kolonien mit sterilen Zahnstochern gerundet und Spot - Zellen aseptisch auf einem sterilisierten Blatt Cellophan auf die 15% der Agar - Oberfläche in den Agarplatten überlagert. Die Plattes bei 28 ° C für 2-3 Tage. </li><li> Überprüfen Sie die Rand Morphologie der Kolonien ein Binokular mit einem 2X Objektiv und einem 10fach Augenlinse verwendet wird. Fotografieren Sie das periphere Rand um Kolonien. </li></ol> 2. Mikroskopie und Mikrofluidik Strömungskammern <ol><li> Fabrizieren Mikrofluidik - Vorrichtungen unter Verwendung photolithographischer Verfahren ähnlich den zuvor beschriebenen 5,18. Entwerfen vier parallele Kanäle mit computergestützten Design - Software auf dem Master - Silizium - Wafer unter Verwendung von Standard - Lithographieverfahren 26. </li><li> Erstellen Sie die mikrofluidischen Kammern aus Silizium-Wafer-Master mit Polydimethylsiloxan (PDMS). Pour unpolymerisierten PDMS über dem Siliziumwafer Master und härten bei 60 ° C für 1 Stunde. Ziehen Sie die PDMS-Replik aus dem Wafer-Master und schneiden Sie die PDMS-Nachbildung mit einer Klinge in einem 22 mm x 40 mm als die gleiche Größe eines Deckglas ab. </li><li> Setzen Sie die PDMS - Replik, ein Deckglas (22 x 40 mm 2), und eine Microscope Schieber (51 x 76 mm 2) an der Luft - Plasma bei 30 W für 2 min 27. Sandwich der PDMS Körper zwischen dem Deckglas und dem Glasmikroskop des Mikro fluidischen Kammer zu bauen. </li><li> Bohren Sie ein Loch (5,5 mm Durchmesser) durch die PDMS an jedem Ende des gemusterten-Kanal. Schneiden Sie den Silikongummischlauch in 12-20 cm lang. Stecken Sie ein Ende des Silikongummischlauch (5,1 mm Außendurchmesser, 2,1 mm Innendurchmesser, 0,8 mm Wand) in jede Öffnung Ende der Kanäle des PDMS-Replik, und verschließen Sie diese mit unpolymerisierten PDMS bei 60 ° C für 1 Stunde. </li><li> Schließen Sie das andere Ende des Schlauchs am stacheligen Ende der Kunststoff-Luer-Anschlüsse. Wickeln der zusammengebauten mikrofluidischen Kammern mit der Aluminiumfolie und autoklaviert werden sie für 20 min. </li><li> Sammeln Bakterienzellen von X. fastidiosa Wildtyp, Mutante Xf ΔpliG und komplementäre XfΔpliG -C über Schaben, Einweg - Impf mit Loops aus PD2 Mediumplatten. Passen Sie die Zelldichtezu einer optischen Dichte von 0,05 in PD2 Brühe bei 600 nm wie zuvor beschrieben 23. Sammeln Sie die Bakterienzelllösung in eine 1 ml Spritze Gasdichte. </li><li> Montieren Sie die Mikrofluidik-Vorrichtung auf einem inversen Mikroskop Bühne. Schließen Sie ein Einlassrohr zum 5 ml Gasdichte Spritze mit PD2 Brühe. Den 5 ml Spritze Gasdichte mit den Spritzenpumpen. </li><li> Verbinden Sie den Abflussrohr in einen Abfallbehälter. Pflegen eine mittlere Strömungsgeschwindigkeit von 0,2 &amp; mgr; l min -1 für 30 min zur Stabilisierung des Systems. </li><li> Verbinden Seiteneinlaßrohre an eine 1 ml Spritze, die die Gasdichte Bakterienzelllösung enthält. Spülen Sie die bakterielle Zelllösung durch den Gummischlauch, bis der Kanal erreicht ist. Pflegen Sie eine mittlere Strömungsgeschwindigkeit von 0,2 &amp; mgr; l min -1 für weitere 30 Minuten , um ungebundene Zellen aus der Kammer vor der Bildaufnahme zu spülen. </li><li> Bringen Sie den Mikroskop Verschluss unter dem Feld angepasst Teil des Mikroskops das Licht zu steuern. Schließen Sie den Verschluss auf den Auslöser control System und eine Verbindung mit dem Computer das Rolltor-Steuerungssystems. </li><li> Montieren Sie eine Digitalkamera an den Videoanschluss des Mikroskops und verbinden Sie es mit dem Computer. Führen Sie die Zeitraffer-Aufnahme-Software, wählen Sie die &quot;Shutter&quot; Funktion aus dem Menü, und erkennen automatisch die installierte Shutter als Standard in der Software-Verbindungen mit dem Verschluss mit der Software zu etablieren. </li><li> Wählen Sie die &quot;Digitalkamera&quot; Funktion aus dem Menü des Zeitraffer-Aufnahme-Software, um automatisch die Digitalkamera als Standard-Capture-Gerät in der Software erkennen und die Kommunikation mit der Digitalkamera mit der Software. </li><li> Suchen Sie die Bakterienzellen in einem der Kanäle 20x Phasenkontrast-Optik verwenden, schalten dann auf die 40-fach Objektivlinse vor der Bilderfassung. </li><li> Führen Sie die Zeitraffer-Aufnahme-Software, wählen Sie die &quot;Bildaufnahme&quot; -Funktion Standardparameter aus dem Menü die Bilder aus dem Mikroskop zu erwerben.Dann öffnen Sie den &quot;Acquire Zeitraffer-Funktion&quot; und auf 30 sec 5,18,28 für die Dauer von 6-24 Stunden , je nach Experiment benötigt Zucken Motilität von X. das Zeitintervall zu beobachten fastidiosa 5,18,28. Klicken Sie auf &quot;OK&quot;, um die Zeitraffer-Aufnahme zu starten. Klicken Sie auf &quot;Stapelfunktion&quot; aus dem Menü wählen Sie &quot;Speichern unter&quot; die Bilder im Zielordner auf dem Computer zu stapeln, nachdem die Aufnahme wird beendet. </li><li> Für mehrere Kanäle, Zeitraffer-Bilder aus dem ersten Kanal erfassen alle 30 Sekunden für 6 Stunden. Bewegen der Objektivlinse des Mikroskops auf den nächsten Kanal der Zielzellen zu lokalisieren. Wiederholen Sie die Zeitraffer-Funktion wie oben beschrieben, Bilder in jedem der vier Kanäle sequentiell zu erfassen, wenn Experiment wird bis zu vier Kanäle nutzen. Fortsetzung der Zeitraffer-Bildaufnahme für so lange wie drei aufeinander folgenden Tagen. Alle Experimente wurden bei Raumtemperatur (23 ± 2 ° C) durchgeführt. </li><li> Stellen Sie die Zeitraffer-Bilder in einVideodatei die Zeitrafferaufnahme Imaging-Software. Führen Sie Zeitraffer-Aufnahme-Software, klicken Sie auf &quot;Stapelfunktion&quot; aus dem Menü, und wählen Sie &quot;Open-Stack-Funktion&quot;, um die gestapelten Dateien vom Computer öffnen. </li><li> Starten Sie den &quot;Make Movie&quot; Funktion aus dem Stack-Modul, alle Bilder auswählen und das &quot;AVI&quot; Ausgabeformat auswählen. Klicken Sie auf &quot;Speichern unter&quot; auf dem Computer die Videodatei im Zielordner zu speichern. </li><li> Wählen Sie die kompilierten Filme aus dem Zielordner auf dem Computer und spielen sie. Dann beobachten die Beweglichkeit der einzelnen Zellen durch die resultierende Visualisierung der Zucken Motilität Aktivität von Bakterienzellen in den erzeugten Videodateien. </li></ol>

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Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.

In dieser Studie charakterisierten wir das Bewegungsverhalten von X. fastidiosa Pilg Mutante Xf ΔpilG und seinen komplementären XfΔpilG- C - Stämme in neu mehrere parallel-Nano-Kanal Mikro fluidischen Kammern ausgelegt. Die neu entwickelten Mikro fluidischen Kammern können bis zu vier parallelen Kammern haben mit 100 &amp; mgr; m Nanokanal in der Breite im Vergleich zu früheren Konstruktionen mit nur einem einzigen 50 &amp; mgr; m breiten Kanal 18. Die verbesserte ...

Xylella fastidiosa ist ein Gram-negative nicht gegeißelt, pathogene Bakterium , das eine Reihe von wirtschaftlich wichtigen Pflanzenkrankheiten verursacht, einschließlich Pierce-Krankheit in Weinrebe (Vitis vinifera L.) 1,2, 3. Dieses Bakterium ist begrenzt auf den wasserführenden Xylem Schiffe. Die Infektion der Weinrebe bewirkt , dass die Blockade der Xylemgefäße und führt zu Wasserstress und Mangelernährung 3. Erfolgreiche Besiedelung hängt von der Fähigkeit des Bakteriums von der anfänglichen Stelle der Infektion mit dem Rest der Anlage 3 zu bewegen. Zucken Motilität ist ein Mittel der Flagellen-unabhängige Bakterien Bewegung durch die Erweiterung, Anhaftung und das Zurückziehen des polaren Typ IV - Pili 4 , die in X charakterisiert wurde fastidiosa 5,6,7. Die Zuckungen Motilität wurde durch Laser - Pinzette und Rasterkraftmikroskopie (AFM) 8,9,10 beobachtet. Unter Verwendung dieser Techniken twitching Motilitäten von Typ - IV - Pili von N. erzeugt gonorrhoeae und P. aeruginosa wurden durch fl uorescently Kennzeichnung Pili charakterisiert und ihre Bewegungen mikroskopisch zu erfassen. Obwohl beide Verfahren die Haftkraft der einzelnen Bakterien detailliert sind, sind die Verfahren kompliziert und zeitraubend 9,10. Die Mikro fluidischen Kammern wurden verwendet , 5,6 Fern Migration von einzelnen Zellen sowie kleine Aggregate von Bakterienzellen zu beobachten. Diese Kammern wurden als mikrostrukturierte -Nano-Kanal in einer Platte gestaltet , integriert mit einem Zeitraffer-Bildaufnahmesystem 11,12,13,14. Micro fluidischen Kammer Geräte mehrere Vorteile für die Untersuchung der Bewegungsverhalten und Zell-Zell-Wechselwirkungen von Bakterien bieten: (i) es stellt eine integrierte Plattform mit Mehrkanal-Fähigkeiten; (Ii) kann es die Bewegungen und Aggregationen von einzelnen Zellen in den nanoskaligen Eigenschaften von Bakterien zu untersuchen; (Iii) es erlaubt die direkte microscopic Bildaufzeichnung von Bakterienzellen und Zeitraffer-Analyse, (iv) es bietet langfristige räumliche und zeitliche Beobachtungen einzelner und / oder Populationen von Bakterien in einer Mikro-Umgebung; (V) die Strömungsgeschwindigkeit des Kulturmediums in einen Kanal genau gesteuert werden kann, und (vi) nur ein sehr kleines Volumen (1 ml) des Kulturmediums wird für jedes Experiment erforderlich. Vor kurzem hat die Mikro fluidischen Strömungssystem wurde das Verhalten von Bakterienzellen unter verschiedenen Mikroumgebungen 14,15,16 zu untersuchen , beschäftigt. Die Haftfestigkeit und die Oberflächenbefestigung von E. coli 15, X. fastidiosa 16 und Acidovorax citrulli 14 auf Glasoberflächen wurden unter Verwendung von Mikro fluidischen Kammern beurteilt. Die Aggregation und Biofilm - Bildung durch Typ IV - Pili von Acidovorax citrulli vermittelt wurden 14 analysiert. Ferner kann die Bewegung der A. citrulli beobachtet unter fl ow cie Bedingungen gezeigt , dass der Typ IV - Pili eine wichtige Rolle bei der Besiedlung spielen kann und von A. verbreiten citrulli in Xylemgefäße unter dem Splint fl ow Bedingungen. Die Zuckungen Motilitäten von Pseudomonas aeruginosa und X. fastidiosa Zellen wurden gegen einen Flüssigkeitsstrom in einer mikrofabrizierten Strömungskammer 5,6,17 erfolgreich beobachtet. Typ - IV - Pili - defizienten pilB und pilQ Mutanten von X. fastidiosa wurden 5,6,18 die Geschwindigkeit der Zucken Motilität unter den Strömungsbedingungen in Mikro fluidischen Geräten zu tiefgreifend verändern gefunden. Die Studien , die auf bakterielle Adhäsion und Motilität in Mikro fluidischen Vorrichtungen zeigten , dass die Mikro fluidischen Kammern sind besonders geeignet für die Analyse der Zuckungen Motilität und Migration von Pili-vermittelten Bakterien in vitro. Diese Ergebnisse erklären die Zuckungen-vermittelte Migration Mechanismus, der Zell-Zell-Bindung erleichtert, Aggregation und Kolonisierung innerhalbder Wirt, führen schließlich zu einer systemischen Infektion. Pil-CHP - Operon von X. fastidiosa enthält Pilg, Pili, pilJ, pille, chpB und KWKK die Transduktion kodieren Signal 20 Pfade. Die Transchemorezeptoren binden chemische Reize in den periplasmatischen Domäne und aktivieren eine Signalkaskade in ihrem Cytoplasma-Teil, um schließlich bakterielle Zucken Motilität kontrollieren. Im Pil-CHP - Operon von X. fastidiosa, ein Phospho-Shuttle - Protein Pilg ist ein Homolog zu CheY. In E. coli und P. aeruginosa, ist CheY die Antwortregulator in Chemotaxis - Systeme , die 19, 21 mit den Geißeln Motorproteine ​​interagieren. Obwohl die Beiträge des Pil-Chp Operon zu Virulenz in X. fastidiosa wurden kürzlich 20, die Rolle der Pilg in Chemotaxis - Operon in Reaktion auf die Umgebungssignale und geregelt / Motor Typ IV - Pili von X. sucht fastidiosa ist unclear. Um die Einsicht der Chemotaxis Regler Pilg in der Aktivität der Zucken Motilität von X. aufzuklären fastidiosa, einem Mikro fluidischen Kammer verwendet , um die Zuckungen Motilität von X. zu beurteilen fastidiosa. Die Pilg von X. fastidiosa wird durch den Vergleich der Phänotypen einer Deletionsmutante Xf ΔpliG, komplementären Stamm XfΔpliG -C und ihrem Wildtyp in vitro charakterisiert. Die Ergebnisse unterstreichen die Rolle der Pilg im Zucken Motilität von X. fastidiosa.

<table><tbody><tr><td>Biology materials<</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>em>X. fastidiosa (Xf) Temecula Wildtyp</td><td></td><td></td><td>Costa, H. S., et al., 2004 22</sup</td></tr><tr><td>>pilG Deletionsmutante Xf&Delta; pliG</td><td></td><td></td><td>Shi, X. Y., et al., 2007 26</td></tr><tr><td>pilG komplementärer Stamm Xf&Delta; pliG-C&nbsp;</td><td></td><td></td><td>Davis, M. J., et al. 1998 23</td></tr><tr><td>Physikalische Materialien und Ausrüstung</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Einweg-Impfösen</td><td>VWR international, Radnor, PA</td><td>#22-363-607</td><td>quantitative Verfahren wie Bakteriensammlung</td></tr><tr><td>Polydimethylsiloxan (PDMS)</td><td>Dow Corning Corporation</td><td>#0002709226</td><td>Sylgard 184 Silikon Elastomer Kits</td></tr><tr><td>AmScope MD2000 Digitalkamera</td><td>AmScope, Irvine, CA</td><td>SE305R-AZ-E</td><td>Bild-, Videoaufzeichnung und Messung&nbsp;</td></tr><tr><td>Schlauchleitung</td><td>Edgewood, NY</td><td></td>#T4300 <td>Anschluss an die Spritze und mikrofluidische</td></tr><tr><td>Kammer Luer-Anschlüsse aus Kunststoff</td><td>Edgewood, NY</td><td></td><td>Anschluss an die Spritzen- und Mikrofluidikkammer</td></tr><tr><td>Spritzenpumpen</td><td>Pico Plus, Harvard Apparatus, MA</td><td>#702209</td><td>Die Durchflussmenge kann bei laufender Pumpe eingestellt werden.</td></tr><tr><td>Spritzen</td><td>gasdicht, Hemilton Company, Reno, NV</td><td>#1005</td><td>Liefern Sie die fließende</td></tr><tr><td>Brühe Invertiertes Olympus IMT-2 Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>IMT-2 FLuoro PHase</td><td>Bildbeobachtung und -aufzeichnung</td></tr><tr><td>SPOT-RT Digitalkamera</td><td>Diagnostic Instruments, Inc., MI</td><td>RT230</td><td>Bild-, Videoaufzeichnung und -messung</td></tr><tr><td>Mikroskop Verschluss</td><td>Die UNIBLITZ, US</td><td>#LS2T2</td><td>Kamera steuern" s Belichtungszeit</td></tr><tr><td>Mikroskop Shutter Steuerungssystem</td><td>Das UNIBLITZ, US</td><td>VCM-D1</td><td>VCM-D1 Einkanaliger CE/UL/CSA zugelassener Shutter-Treiber</td></tr><tr><td>MetaMorph Bildsoftware</td><td>Universal Imaging Corp., PA</td><td></td><td>Echtzeit-Bildverarbeitung mit Superauflösung</td></tr></tbody></table>

visualisierung von twitching motilität und charakterisierung der rolle des<em&gt; pilg</em&gt; in<em&gt; xylella fastidiosa</em

Visualization of Twitching Motility and Characterization of the Role of the PilG in Xylella fastidiosa

Xylella fastidiosa ist ein Gram-negative nicht-flagellated Bakterium , das eine Reihe von wirtschaftlich bedeutenden Pflanzenkrankheiten verursacht. Die Zuckungen Motilität bietet X. fastidiosa ein Mittel für den Ferninnerbetrieblichen Bewegung und Kolonisation, einen Beitrag zu Pathogenität in X. fastidiosa. Die Zuckungen Motilität von X. fastidiosa wird von Typ IV - Pili betrieben. Typ IV - Pili von Xylella fastidiosa werden durch Pilg geregelt, einem Chemotaxis - Regler in Pil-Chp Operon für Proteine ​​kodiert , die mit Signaltransduktionswege beteiligt sind. Um die Rolle von Pilg im Zucken Motilität von X. aufzuklären fastidiosa, ein Pilg defizienten Mutante Xf ΔpilG und seinen komplementären Stamm XfΔpilG- C enthält nativen Pilg entwickelt. Ein mikrofluidischen Kammern mit einem Zeitraffer-Bildaufnahmesystem integriert wurde verwendet , Zucken Motilität in XfΔp zu beobachtenILG, XfΔpilG- C und seine Wildtyp - Stamm. Unter Verwendung dieses Aufzeichnungssystem ermöglicht es langfristige räumliche und zeitliche Beobachtungen der Aggregation, Migration einzelner Zellen und Populationen von Bakterien über Zucken Motilität. X. fastidiosa Wildtyp und komplementäre XfΔpilG- C - Stamm zeigte typische Zucken Motilität Eigenschaften direkt in den mikrofluidischen Strömungskammern beobachtet, während Mutante XfΔpliG die Zuckungen defizienten Phänotyp aufwiesen. Diese Studie zeigt , dass Pilg zur twitching Motilität von X. trägt fastidiosa. Die mikrofluidischen Strömungskammer für das Beobachten twitching Motilität als Mittel verwendet.

Das Vorhandensein einer peripheren Kolonie fringe indikativ für Typ IV - Pilus-vermittelten twitching Motilität wurde in den Kolonien von X. beobachtet fastidiosa Wildtyp und komplementäre Xf ΔpliG -C Stamm (Abbildung 1). Mutant XfΔpliG zeigen jedoch nicht Fransen um den Umfang der Kolonien (Abbildung 1). Zeitraffer-Bildgebung von Bakterienzellen in Nano mikrofluidischen Strömungskammern ergab , dass Zucken Mo...

In dieser Studie wurde ein Nano mikrofluidischen Strömungskammer wurde verwendet , um die Zuckungen Motilität von Xylella fastidiosa zu visualisieren und funktionell zu charakterisieren, ein Bakterium , das Pierce-Krankheit in Weinrebe verursacht.

Visualisierung von Twitching Motilität und Charakterisierung der Rolle des<em&gt; Pilg</em&gt; in<em&gt; Xylella fastidiosa</em

Xylella fastidiosa is a Gram-negative non-flagellated bacterium that causes a number of economically important diseases of plants. The twitching motility ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls besteht darin, die Gene, die für die Zuckbewegung (Twitching-Motilität) von Bakterien verantwortlich sind, funktionell zu charakterisieren, und zwar mithilfe einer mit einem zeitraffenden Bildaufzeichnungssystem kombinierten nano-mikrofluidischen Durchflusskammer. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen zur Bakterien-Phänotypisierung und assoziierter Genfunktionen zu beantworten, beispielsweise zur Twitching-Motilität von Bakterien. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie eine besondere und kontrollierte Beobachtung der Aggregationsmigration einzelner Zellen sowie von Populationen ermöglicht. Die Demonstration dieses Verfahrens wird Dr. Xiangyang Shi, ein Postdoktorand aus meinem Labor, durchführen. Unter Verwendung einer standardisierten Deletionsstrategie züchten Sie Temecula-Wildtyp-Stämme von Xylella fastidiosa, pilG-Deletionsmutanten sowie den komplementären Stamm jeweils auf PD2-Agarplatten. Inkubieren Sie die Bakterien bei 28

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Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Wir zeigen hier, wie Elektronen cryotomography (ECT) zu verwenden, um auf die Ultrastruktur von Bakterienzellen in nahezu native Staaten zu studieren, "makromolekularen" (~ 4 nm) Auflösung.

Electron Cryotomography von Bakterienzellen

Recording Multizelluläre Behavior in Myxococcus xanthus Biofilme mit Zeitraffer-Microcinematography

Die Prionen-ähnliche Vermehrung von Proteinaggregaten hat sich in letzter Zeit als an vielen neurodegenerativen Erkrankungen beteiligt. Das Ziel dieses Protokolls ist es, zu beschreiben, wie der Fadenwurm C. elegans als Modellsystem zur Überwachung der Proteinausbreitung und zur Untersuchung prionenähnlicher Phänomene verwendet werden kann.

Untersuchung der Verbreitung und Toxizität von Prion-ähnlichen Proteine ​​Mit dem Metazoan Modellorganismus<em&gt; C. elegans</em

Coxiella burnetii ist ein obligat intrazelluläre Gram-negative Bakterium für die Zoonose Q-Fieber verantwortlich. Hier beschreiben wir Verfahren zur Erzeugung von Coxiella Fluoreszenz Transposon-Mutanten als auch die automatisierte Identifizierung und Analyse der resultierenden Internalisierung, Replikation und zytotoxische Phänotypen.

Generation und Multi-phänotypischen High-Content-Screening<em&gt; Coxiella burnetii</em&gt; Transposon-Mutanten

Die Effektortranslokation in Wirtszellen über ein Typ-III-Sekretionssystem ist eine gängige Virulenzstrategie bei gramnegativen Bakterien. Es wurde ein auf Beta-Lactamase-Effektorfusion basierender Assay zur quantitativen Analyse der Translokation angewendet. In Yersinien-infizierten Zellen wird die Umwandlung eines FRET-Reporters durch die Beta-Lactamase mittels Laser-Scanning-Mikroskopie überwacht.

Analyse von<em&gt; Yersinia enterocolitica</em&gt; Effektor Translokation in Wirtszellen unter Verwendung Beta-Lactamase-Effektor-Fusionen

Neuere Erkenntnisse deuten darauf hin, dass bakterielle Flagellenmotoren eine Vielzahl von Umweltsignalen wahrnehmen und sich als Reaktion darauf umgestalten. Es wird erwartet, dass die hier diskutierten Bead-Assays dazu beitragen, die Rolle des Umbaus bei der zellulären Anpassung an Umweltstressoren zu erklären.

Biophysikalische Charakterisierung von Flagellenmotors Funktionen

In diesem Protokoll Eindringmittel beschrifteten T. Trypanosoma wurden in durchsichtigen Zebrafischlarven injiziert und Parasiten Motilität wurde in Vivo mit Lichtblattmikroskopie Fluoreszenz beobachtet.

Gründung der Larven Zebrafisch als Tier-Modell zu untersuchen Trypanosomen Trypanosoma Motilität In Vivo

Bakterienzellen sind räumlich sehr organisiert. Um diese Organisation im Laufe der Zeit in den langsam wachsenden Myxococcus Xanthus Zellen zu folgen, wurde ein Setup für Fluoreszenz live Cell Imaging mit hoher räumlich-zeitliche Auflösung über mehrere Generationen hinweg entwickelt. Mit dieser Methode konnte raumzeitliche Dynamik wichtige Proteine für Chromosom Segregation und Zellteilung bestimmt werden.

Fluoreszenz Live Cell Imaging der komplette Vegetative Zellzyklus von langsam wachsenden sozialen Bakterium Myxococcus xanthus

Die Bildgebung von Bakterienzellen ist ein aufkommendem systembiologischen Ansatz, der sich auf die Definition statischer und dynamischer Prozesse konzentriert, die die Funktion großer makromolekularer Maschinen diktieren. Hier wird die Integration von quantitativer Live-Zell-Bildgebung und Kryo-Elektronentomographie verwendet, um Legionella pneumophila Typ IV Sekretionssystemarchitektur und -funktionen zu untersuchen.

Anwendung von Live Cell Imaging und Cryo-Electron Tomography zur Auflösung der raumzeitlichen Merkmale des Legionella pneumophila Dot/Icm Sekretionssystems

Viele Bakterien verwenden Flagellen-getriebene Motilität, um ihre Umgebung zu navigieren und eine günstige Umgebung sowohl einzeln als auch als Kollektiv zu besiedeln. Demonstriert wird hier die Verwendung von drei etablierten Methoden, die Die Motilität als Selektionswerkzeug nutzen, um Komponenten / Pfade zu identifizieren, die zur Schwimm- und Schwarmmotilität beitragen.

Untersuchung der Flagellen-getriebenen Motilität in Escherichia coli durch Anwendung von drei etablierten Techniken in einer Serie

Dieses Protokoll stellt eine schnelle und effiziente Methode zur Identifizierung genetischer Faktoren dar, die an verschiedenen Arten von Motilitäten bei Pseudomonas aeruginosa beteiligt sind.

Hochdurchsatzmethode zur Beobachtung von Motilitätsphänotypen bei Pseudomonas aeruginosa

Erfahren Sie, wie die Zuckungsmotilität von Xylella fastidiosa in einer nano-mikrofluidischen Kammer visualisiert und funktionell charakterisiert wird. Diese Methode liefert Einblicke in bakterielle Pathogenese.

Visualisierung von Twitching Motilität und Charakterisierung der Rolle des

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