Name: Ein Enzym- und Serumfreie Neural Stem Cell Culture Modell für EMT Investigation Geeignet für Drug Discovery (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Erfahren Sie ein enzym- und serumfreies Kulturmodell neuronaler Stammzellen zur Untersuchung der epithelial-mesenchymalen Transition in Krebszellen. Diese Methode ermöglicht die Identifizierung von Verbindungen, die Migration aktivieren oder blockieren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Die Studie wurde von der Universität Basel Science Foundation und der Schweizerischen National Science Foundation unterstützt durch einen Zuschuss zu MHS und AG (SNF IZLIZ3_157230) unterstützt. Wir danken: Dr. Tania Rinaldi Burkat für Infrastruktur großzügig bereitstellt; alle Mitglieder der Gruppe Bettler für Diskussionen und Kommentare. Wir danken Gerhard Dorne (Leica Microsystems, Schweiz) für professionelle und kompetente Installation des Full-HD-MC170 Videokamera (Leica Microsystems, Schweiz).

<ol><li>Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-Mesenchymal+Transitions+in+development+and+disease%3A+old+views+and+new+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial-Mesenchymal Transitions in development and disease: old views and new perspectives.</a> Int J Dev Biol. 53, 1541-1547 (2009).</li>
<li>Sauka-Spengler, T., Bronner-Fraser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+regulatory+network+orchestrates+neural+crest+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A gene regulatory network orchestrates neural crest formation.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 9, 557-568 (2008).</li>
<li>Barriere, G., Fici, P., Gallerani, G., Rigaud, M. Mesenchymal Transition: a double-edged sword. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarriere%2C+G+%22Clin+Transl+Med%22">Clin Transl Med</a>. 4, 14(2015).</li>
<li>Zawadzka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS-resident+glial+progenitor%2Fstem+cells+produce+Schwann+cells+as+well+as+oligodendrocytes+during+repair+of+CNS+demyelination%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">CNS-resident glial progenitor/stem cells produce Schwann cells as well as oligodendrocytes during repair of CNS demyelination.</a> Cell Stem Cell. 6, 578-590 (2010).</li>
<li>Paxinos, G., Ashwell, K. W. S., Törk, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22Atlas+of+the+developing+rat+nervous+system%22">Atlas of the developing rat nervous system</a>. , 2nd edn, Academic Press. (1994).</li>
<li>O'Leary, D. D., Chou, S. J., Sahara, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Area+patterning+of+the+mammalian+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Area patterning of the mammalian cortex.</a> Neuron. 56, 252-269 (2007).</li>
<li>O'Leary, D. D., Sahara, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+regulation+of+arealization+of+the+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Genetic regulation of arealization of the neocortex.</a> Curr Opin Neurobiol. 18, 90-100 (2008).</li>
<li>Sailer, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+neural+stem+cells+become+invasive+in+vitro+by+combined+FGF2+and+BMP4+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Non-invasive neural stem cells become invasive in vitro by combined FGF2 and BMP4 signaling.</a> J Cell Sci. 126, 3533-3540 (2013).</li>
<li>Sailer, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP2+and+FGF2+cooperate+to+induce+neural-crest-like+fates+from+fetal+and+adult+CNS+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">BMP2 and FGF2 cooperate to induce neural-crest-like fates from fetal and adult CNS stem cells.</a> J Cell Sci. 118, 5849-5860 (2005).</li>
<li>Sailer, M., Oppitz, M., Drews, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+cellular+contractions+in+the+human+melanoma+cell+line+SK-mel+28+after+muscarinic+cholinergic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Embryol+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Induction of cellular contractions in the human melanoma cell line SK-mel 28 after muscarinic cholinergic stimulation.</a> Anat Embryol (Berl). 201, 27-37 (2000).</li>
<li>Wicki, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+role+of+podoplanin+in+tumour+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">The potential role of podoplanin in tumour invasion.</a> Br J Cancer. 96, 1-5 (2007).</li>
<li>Wicki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+invasion+in+the+absence+of+epithelial-mesenchymal+transition%3A+podoplanin-mediated+remodeling+of+the+actin+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Tumor invasion in the absence of epithelial-mesenchymal transition: podoplanin-mediated remodeling of the actin cytoskeleton.</a> Cancer Cell. 9, 261-272 (2006).</li>
<li>Mishima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+expression+of+podoplanin+in+malignant+astrocytic+tumors+as+a+novel+molecular+marker+of+malignant+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Increased expression of podoplanin in malignant astrocytic tumors as a novel molecular marker of malignant progression.</a> Acta Neuropathol. 111, 483-488 (2006).</li>
<li>Motomura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+analysis-based+proteomic+subclassification+of+newly+diagnosed+glioblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Science%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical analysis-based proteomic subclassification of newly diagnosed glioblastomas.</a> Cancer Science. 103, 1871-1879 (2012).</li>
<li>Kono, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+detection+of+the+lymphatic+marker+podoplanin+in+diverse+types+of+human+cancer+cells+using+a+novel+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical detection of the lymphatic marker podoplanin in diverse types of human cancer cells using a novel antibody.</a> Int J Oncol. 31, 501-508 (2007).</li>
<li>Raica, M., Cimpean, A. M., Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+podoplanin+in+tumor+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">The role of podoplanin in tumor progression and metastasis.</a> Anticancer Res. 28, 2997-3006 (2008).</li>
<li>Panchision, D. M., McKay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+control+of+neural+stem+cells+by+morphogenic+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">The control of neural stem cells by morphogenic signals.</a> Curr Opin Genet Dev. 12, 478-487 (2002).</li>
<li>Lamouille, S., Xu, J., Derynck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+epithelial-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of epithelial-mesenchymal transition.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15, 178-196 (2014).</li>
<li>Gonzalez-Perez, O., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligodendrogenesis+in+the+subventricular+zone+and+the+role+of+epidermal+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Oligodendrogenesis in the subventricular zone and the role of epidermal growth factor.</a> Brain Res Rev. 67, 147-156 (2011).</li>
<li>Hu, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDGF-AA+mediates+B104CM-induced+oligodendrocyte+precursor+cell+differentiation+of+embryonic+neural+stem+cells+through+Erk%2C+PI3K%2C+and+p38+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">PDGF-AA mediates B104CM-induced oligodendrocyte precursor cell differentiation of embryonic neural stem cells through Erk, PI3K, and p38 signaling.</a> J Mol Neurosci. 46, 644-653 (2012).</li>
<li>Galvao, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+quiescent+adult+oligodendrocyte+precursor+cells+into+malignant+glioma+through+a+multistep+reactivation+process%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Transformation of quiescent adult oligodendrocyte precursor cells into malignant glioma through a multistep reactivation process.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111, E4214-E4223 (2014).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+analysis+with+double+markers+reveals+tumor+cell+of+origin+in+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mosaic analysis with double markers reveals tumor cell of origin in glioma.</a> Cell. 146, 209-221 (2011).</li>
<li>Das, S., Srikanth, M., Kessler, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+and+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Clin+Pract+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells and glioma.</a> Nat Clin Pract Neurol. 4, 427-435 (2008).</li>
<li>Modrek, A. S., Bayin, N. S., Placantonakis, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+stem+cells+as+the+cell+of+origin+in+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Brain stem cells as the cell of origin in glioma.</a> World J Stem Cells. 6, 43-52 (2014).</li>
<li>Sampetrean, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+precedes+tumor+mass+formation+in+a+malignant+brain+tumor+model+of+genetically+modified+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Invasion precedes tumor mass formation in a malignant brain tumor model of genetically modified neural stem cells.</a> Neoplasia. 13, 784-791 (2011).</li>
<li>McNeill, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+astrocytoma+pathogenesis+in+vitro+and+in+vivo+using+cortical+astrocytes+or+neural+stem+cells+from+conditional%2C+genetically+engineered+mice%5BTitle%5D)+AND+%22JoVE%22%5BJournal%5D)">Modeling astrocytoma pathogenesis in vitro and in vivo using cortical astrocytes or neural stem cells from conditional, genetically engineered mice.</a> JoVE. , e51763(2014).</li>
<li>Lara-Padilla, E., Caceres-Cortes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+nature+of+the+tumor-initiating+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">On the nature of the tumor-initiating cell.</a> Curr Stem Cell Res Ther. 7, 26-35 (2012).</li>
<li>Busch, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP-2-dependent+integration+of+adult+mouse+subventricular+stem+cells+into+the+neural+crest+of+chick+and+quail+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">BMP-2-dependent integration of adult mouse subventricular stem cells into the neural crest of chick and quail embryos.</a> J Cell Sci. 119, 4467-4474 (2006).</li>
<li>Thiery, J. P., Acloque, H., Huang, R. Y., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-mesenchymal+transitions+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Epithelial-mesenchymal transitions in development and disease.</a> Cell. 139, 871-890 (2009).</li>
<li>McDonald, O. G., Wu, H., Timp, W., Doi, A., Feinberg, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+epigenetic+reprogramming+during+epithelial-to-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Struct+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Genome-scale epigenetic reprogramming during epithelial-to-mesenchymal transition.</a> Nat Struct Mol Biol. 18, 867-874 (2011).</li>
<li>Rahimi, R. A., Leof, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta+signaling%3A+a+tale+of+two+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">TGF-beta signaling: a tale of two responses.</a> J Cell Biochem. 102, 593-608 (2007).</li>
<li>Xu, J., Lamouille, S., Derynck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta-induced+epithelial+to+mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">TGF-beta-induced epithelial to mesenchymal transition.</a> Cell Res. 19, 156-172 (2009).</li>
<li>Suva, M. L., Riggi, N., Bernstein, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+reprogramming+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Epigenetic reprogramming in cancer.</a> Science. 339, 1567-1570 (2013).</li>
<li>Sullivan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+possible+new+focus+for+stroke+treatment+-+migrating+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">A possible new focus for stroke treatment - migrating stem cells.</a> Expert Opin Biol Ther. , 1-10 (2015).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

In dieser Studie wurde ein standardisiertes System für die EMT - Analyse unter Verwendung von NSCs beschrieben wird (im Ergänzungs Abbildung 3 zusammengefasst). Die Standardisierung gewährleistet Reproduzierbarkeit (Tabelle 1 und 2). Die NSCs werden von der Entwicklung Cortex abgeleitet, ein Gewebe, das normalerweise nicht EMT unterziehen. Dies ist von Vorteil für die Analyse der frühen Schritte in EMT. Erste Schritte in EMT nicht ausreichend in Tumorzellen untersucht werden, die geneti...

Während mehrere Stadien der embryonalen Entwicklung, verlieren Epithelzellen ihre starke Haftung zueinander (zB tight junctions) und erwerben einen Migrations Phänotyp in einem Prozess namens epitheliale zu mesenchymale Transition (EMT) 1. EMT ist für die Bildung von zusätzlichen Zelltypen, wie beispielsweise die mesenchymalen Neuralleistenzellen erforderlich, eine Population , die 2 aus dem Neuroepithel segregiert. EMT ist nicht nur wesentlich während Embryonalstadien , sondern auch in späteren Phasen des Erwachsenenlebens erforderlich physiologischen Prozesse im adulten Organismus zu halten, wie der Wundheilung 3 und des zentralen Nervensystems (ZNS) Regeneration in Läsionen 4 demyelinisierenden. Epithelialen Tumoren sind bekannt für Migration, Invasion und Metastasierung von EMT als Initiations Schritt zu reaktivieren, was letztlich zu Krebs Progression führt 1,3. EMT in der Tat ist zentral zu starke Migration 1,3 verknüpft. Die zellulären Schritte conditioning, initiiert, unterziehen und EMT Aufrechterhaltung nicht vollständig verstanden werden und müssen weitere Untersuchungen. Hier ist ein in - vitro - EMT Modellsystem auf Basis von NSCs, mit definierten Wachstumsfaktoren und Medien (kein Serum und keine Enzymeinsatz) wird vorgestellt. Dieses Modellsystem ist von Bedeutung für die Wissenschaftler auf EMT arbeiten. Die Schnecke, Zeb und Twist Proteinfamilien wurden für EMT sowohl in der Entwicklung und Krankheit 1 als kritisch gezeigt. Die Schnecke, Zeb und Twist Familien sind auch in dem vorgestellten System beteiligt. Das System basiert auf einem bestimmten Bereich des Vorderhirns, die normalerweise nicht EMT Bereitstellen während EMT Induktions für die Untersuchung der anfänglichen Ereignisse einen besonderen Vorteil erfährt. Das Modellsystem könnte möglicherweise EMT in Epithelien angewendet werden außerhalb des ZNS zu studieren, da Schlüssel EMT-Induktoren wie die Schnecke, Zeb und Twist-Proteine, werden auch während der EMT in Gewebesystemen außerhalb des ZNS gefunden. Dieses Modell system ermöglicht die standardisierte Isolierung von NSCs aus der Entwicklung Cortex Stammzelleigenschaften im Allgemeinen und EMT insbesondere zu studieren. Mit diesem System isolierten wir NSCs, induzierte EMT und studierte die spätere Migration unter der Wirkung von FGF2 und BMP-4. Wir beobachteten, dass FGF und BMP-Signalgebung wirkt mit TGFß Signalzellmigration zu fördern, damit die Modellsystem zu validieren.

<table><tbody><tr><td>BMP4, rhBMP4</td><td>RnD-Systeme&nbsp;</td><td>314-BP-01M</td><td></td></tr><tr><td>Pankreasinsulin für Rinder</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>I1882</td><td></td></tr><tr><td>Boyden-Kammer, CytoSelect Zellinvasionsassay</td><td>Cell Biolabs</td><td>CBA-110</td><td>24-Well-Plattensystem</td></tr><tr><td>Zellkulturschale mit Gitter</td><td>Ibidi 500 mm Schale, 35 mm</td><td>80156</td><td></td></tr><tr><td>CellMask Orange</td><td>Life Technologies</td><td>C10045</td><td>Plasmamembranfarbstoff, Verwendung im Verhältnis 1:1.000.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>LifeTechnologies</td><td>D1306</td><td>Bestand bei 5 mg/ml. Anwendung bei 1:10.000. Krebserregend. Angemessener Schutz (Handschuhe, Mantel, Schutzbrille) erforderlich.</td></tr><tr><td>DMEM/F12 1:1 mittelgroße Flasche</td><td>Gibco Invitrogen</td><td>21331-020</td><td></td></tr><tr><td>FGF2, rhFGF2</td><td>RnD Systems</td><td>233-FB-01M</td><td></td></tr><tr><td>Fibronektin, bovine</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>F4759</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax Ergänzung&nbsp;</td><td>Gibco Invitrogen&nbsp;</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Grafiksoftware mit Pixelmessfunktion</td><td>Fiji</td><td>fiji.sc/Fiji</td><td>Version 2.0.0-rc-30/1.49s</td></tr><tr><td>HBSS media</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>H9394</td><td></td></tr><tr><td>Humanes Apo-Transferrin</td><td>Sigma</td><td>T1147</td><td>Mögliche Lungenreizung. Vermeiden Sie das Einatmen. Verwenden Sie einen angemessenen Schutz.</td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Gibco Invitrogen&nbsp;</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Nestin, Maus-Anti-Nestin-Antikörper</td><td>Genetex</td><td>GTX26142</td><td>Verwendung bei 1:100, 4 % PFA-Fixierung, Triton X100 bei 0,1 %</td></tr> <tr><td>Olig2, Kaninchen-Anti-Olig2-Antikörper</td><td>Bereitgestellt von Hirohide Takebayash</td><td>Persönlicher Lagerbestand</td><td>Verwendung bei 1:2.000, 4 % PFA-Bindung, Triton X100 bei 0,1 %</td></tr> <tr><td>Penicillin/Streptomycin/Fungizone</td><td>Gibco Invitrogen&nbsp;</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Podoplanin, Maus-Anti-Podoplanin-Antikörper</td><td>Acris</td><td>DM3614P</td><td>Anwendung bei 1:250, 4% PFA-Fixierung, vermeiden Sie Triton X100</td></tr><tr><td>Poly-L-Ornithin</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P3655</td><td></td></tr><tr><td>Putrescine</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P5780</td><td>Haut- und Augenreizend. Angemessener Schutz erforderlich.</td></tr><tr><td>Natriumselenit</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S5261</td><td></td></tr><tr><td>Sox10, Kaninchen-Anti-Sox10-Antikörper</td><td>Millipore Chemicon</td><td>AB5774</td><td>Verwendung bei 1:200, 4% PFA-Fixierung, Triton X100 bei 0,1%</td></tr><tr><td>TGFb1, rhTGFb1</td><td>RnD Systems</td><td>240-B-010</td><td></td></tr><tr><td>Unbeschichtete Petrischalen</td><td>Falcon Corning</td><td>351029</td><td></td></tr></tbody></table>

ein enzym- und serumfreie neural stem cell culture modell für emt investigation geeignet für drug discovery

An Enzyme- and Serum-free Neural Stem Cell Culture Model for EMT Investigation Suited for Drug Discovery

Epithelial zu mesenchymale Transition (EMT) beschreibt den Prozess der Epithel Transdifferenzierung zu Mesenchym. EMT ist ein fundamentaler Prozess während der embryonalen Entwicklung, die auch tritt häufig bei Glioblastom, der häufigsten bösartigen Hirntumor. EMT wurde auch in mehreren Karzinomen außerhalb des Gehirns einschließlich Brustkrebs, Lungenkrebs, Dickdarmkrebs, Magenkrebs beobachtet. EMT ist zentral zur Malignität verknüpft durch die Förderung von Migration, Invasion und Metastasenbildung. Die Mechanismen der EMT Induktions sind nicht vollständig verstanden. Hier beschreiben wir ein in vitro - System für standardisierte Isolation kortikaler neurale Stammzellen (NSC) und anschließender EMT-Induktion. Dieses System bietet die Flexibilität, entweder einzelne Zellen oder Explantation Kultur zu verwenden. In diesem System werden Ratten- oder Maus sind embryonalen Vorderhirns NSC kultiviert in einem definierten Medium ohne Serum und Enzyme. Die NSCs ausgedrückt Olig2 und Sox10, zwei Transkriptionsfaktoren in oligodendroc beobachtetyte Vorläuferzellen (OPC). Mit diesem System Wechselwirkungen zwischen FGF, BMP- und TGF- &amp; bgr;-Signalgebung beteiligt ZEB1, Zeb2 und Twist2 wurden beobachtet , wo TGF &amp; beta; Aktivierung signifikant die Zellmigration verbessert, was auf eine synergistische BMP- / TGFß-Interaktion. Die Ergebnisse weisen auf ein Netzwerk von FGF, BMP- und TGF- &amp; bgr;-Signalgebung in EMT Einleitung und Aufrechterhaltung beteiligt. Dieses Modellsystem ist relevant EMT in vitro zu untersuchen. Es ist kostengünstig und weist eine hohe Reproduzierbarkeit auf. Es ermöglicht auch den Vergleich von verschiedenen Verbindungen bezüglich ihrer Migrationsantworten (quantitative Entfernungsmessung) und Hochdurchsatz-Screening von Verbindungen EMT (qualitative Messung) zu hemmen oder zu verstärken. Das Modell ist daher gut geeignet, Arzneimittel-Bibliotheken für Substanzen zu testen EMT zu beeinflussen.

Dieses EMT Modellsystem auf die genormte Isolierung von NSC basierend sowohl als einzelne Zellen oder als Explantate aus einer bestimmten Region des Entwicklungs Neuralrohr, die zentrale cortex (1 und 2). Für die quantitative Beurteilung wurden Explantate direkt im Zentrum eines 500 &amp; mgr; m Raster Kulturschale (Abbildung 3) ausgesät. Explantate von der zentralen Kortex wurden zunächst für zwei Tage ausgesetzt FGF2, durch zusätzliche...

Der Übergang von Epithel zu Mesenchym (EMT) ermöglicht es Krebserkrankungen, invasiv zu werden. Zur Untersuchung der EMT wird ein auf neuralen Stammzellen (NSC) basierendes In-vitro-Modell beschrieben, das frei von Serum und Enzymen ist. Dieses standardisierte System ermöglicht die quantitative und qualitative Bewertung der Zellmigration, der Gen- und Proteinexpression. Das Modell eignet sich für die Wirkstoffforschung.

Ein Enzym- und Serumfreie Neural Stem Cell Culture Modell für EMT Investigation Geeignet für Drug Discovery

Epithelial to mesenchymal transition (EMT) describes the process of epithelium transdifferentiating into mesenchyme. EMT is a fundamental process during ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die Migration in typischerweise nicht-migratorischen Zellen zu induzieren, um spezifische Verbindungen zu identifizieren, die die Migration aktivieren oder blockieren. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen auf dem Gebiet der Zellmigration und -invasion zu beantworten und könnte für Wissenschaftler, die mit neuronalen Stammzellen arbeiten, von besonderem Interesse sein. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass nicht-migratorische und nicht-invasive Zellen während ihres Übergangs zu migratorischen und invasiven Zellen analysiert werden können.Die Implikationen dieser Technik reichen bis zur Identifizierung neuartiger Verbindungen, die den Übergang von epithelialen zu mesenchymalen Zellen – oder EMT – blockieren, welcher bei humanen Gliomen hohen Grades auftritt, die vermutlich aus neuronalen Stammzellen hervorgehen. Obwohl diese Methode Einblicke in EMT und neuronale Stammzellen ermöglicht, kann sie auch zur Untersuchung anderer epithelialer Krebserkrankungen wie Brust-, Lungen- oder Darmkrebs verwendet werden. Am embryonalen Tag 14,5 bestätigen Sie das korrekte Alter der Rattenembryonen durch das Vorhandensein ein

an-enzyme-serum-free-neural-stem-cell-culture-model-for-emt

Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Dieses Video beschreibt die Methode zur Isolierung von neuroprecursors aus den Entwicklungsländern Kortex embryonaler Mäuse verwendet. Das Verfahren zur Entfernung von Embryonen aus der Gebärmutter, sezieren die kortikale Gewebe und verdauen die isolierten Hirnrinde dargestellt.

Kultur der Maus Neural Stem Cell Precursors

Dieses Video-Protokoll zeigt die Anwendung der Neurosphäre Assay für die Isolierung und Expansion von neuronalen Stammzellen, die aus den Ganglien-Eminenzen der embryonalen Tag 14-Maus-Gehirn.

Gründung Embryonale Maus Neural Stem Cell Culture Mit dem Neurosphäre Assay

Eine einfache und zuverlässige Methode zur Isolierung und Kultivierung von neuralen Stammzellen aus gebrauchten menschlichen fetalen kortikalen Gewebe wird beschrieben. Kulturen von bekannten menschlichen neurologischen Erkrankungen abgeleitet werden können für die Charakterisierung von pathologischen zellulären und molekularen Prozesse eingesetzt werden, sowie eine Plattform bieten, um pharmakologische Wirksamkeit zu beurteilen.

Generierung von neuralen Stammzellen aus menschlichen Föten Ausrangierte Rindengewebe

Neuronale Stammzellen aus dem erwachsenen Gehirn geerntet steigen in Anwendungen, die von der Grundlagenforschung der Entwicklung des Nervensystems zu erforschen mögliche klinische Anwendungen in der regenerativen Medizin eingesetzt. Dies macht eine strenge Kontrolle bei der Isolierung und Kultivierungsbedingungen verwendet werden, um diese Zellen entscheidend für experimentelle Ergebnisse klingen wachsen.

Wachsende neuronale Stammzellen aus konventionellen und Nonconventional Regionen der Volks Nagetier Gehirn

Die Protokolle beschreiben zwei In-vitro-Testsysteme Entwicklungstoxizität (UKK und UKN1) auf der Grundlage humaner embryonaler Stammzellen und Transkriptom-Studien. Die Testsysteme voraussagen menschlichen Entwicklungstoxizität Gefahren und kann dazu beitragen, Tierversuche, die Kosten und die Zeit für die Stoffsicherheitstests zu reduzieren.

Menschliche pluripotente Stammzelle Basierend Entwicklungstoxizität Assays für chemische Sicherheit Screening und Systembiologie Datengenerierung

Ein benutzerdefiniertes Protokoll wird beschrieben, um ES-Zellen von Mäusen in definierte Populationen von hochreinen Neuronen zu differenzieren, die funktionierende Synapsen und emergentes Netzwerkverhalten aufweisen. Die elektrophysiologische Analyse zeigt den Verlust der synaptischen Übertragung nach Exposition gegenüber Botulinum-Neurotoxin-Serotypen /A-/G und Tetanus-Neurotoxin.

Funktionale Bewertung der biologischen Neurotoxine in Networked Cultures für Stammzell abgeleitete Zentralnervensystem Neuronen

Mit der Absicht, Veränderungen in miRNAs auf differenzierten humanen neuralen Stammzellen (hNSCs) zu charakterisieren, beschreiben wir die hNSC-Differenzierung auf einem dreidimensionalen System, die Bewertung von Veränderungen in der microRNA-Expression durch miRNA-PCR-Arrays und computergestützte Analysen zur Vorhersage von miRNA-Zielen und deren Validierung durch duale Luciferase-Assays.

Differenzierung einer Menschen Neural Stem Cell Line auf Dreidimensional Kulturen, Analyse der MicroRNA und mutmaßlichen Zielgene

Dieses Protokoll beschreibt detailliert die Methode zur Erzeugung von neuralen Vorläuferzellen aus embryonalen Stammzellen unter Verwendung einer serumfreien Monolayer-Methode. Diese Vorläuferzellen können verwendet werden, um reife neuronale Zelltypen abzuleiten oder den Prozess der neuronalen Spezifikation zu untersuchen, und sind für die Skalierung im Multiwell-Format für das Screening von Verbindungen zugänglich.

Neuronale Differenzierung von embryonalen Stammzellen der Maus in Serum-freiem Monolayer-Kultur

Hier berichten wir über ein Protokoll zur Entwicklung eines dreidimensionalen (3-D) -Systems aus humanen induzierten pluripotenten Stammzellen (hiPSCs), dem so genannten serumfreien Embryoidkörper (SFEB). Dieses 3-D-Modell kann wie eine organotypische Scheibenkultur verwendet werden, um die menschliche kortikale Entwicklung zu modellieren und für die physiologische Abfrage der Entwicklung von neuronalen Schaltungen.

Entwickeln von HiPSC-abgeleiteten serumfreien Embryoidkörpern zur Vernehmung von 3-D-Stammzellkulturen unter Verwendung physiologisch relevanter Assays

Hier wird ein Protokoll zur Erzeugung einer einzelzelligen Kultur menschlicher embryonaler Stammzellen und deren anschließende Differenzierung in neuronale Vorläuferzellen vorgestellt. Das Protokoll ist einfach, robust, skalierbar und eignet sich für Arzneimittelscreenings und anwendungen in der regenerativen Medizin.

Effiziente neuronale Differenzierung mit einzelzellischer Kultur menschlicher embryonaler Stammzellen

Hier haben wir eine kostengünstige und einfach zu bedienende Methode etabliert, die eine schnelle und effiziente Differenzierung von embryonalen Stammzellen in Neuronen leitet. Diese Methode eignet sich für die Popularisierung unter Laboratorien und kann ein nützliches Werkzeug für die neurologische Forschung sein.

Neuronale Differenzierung von Maus embryonalen Stammzellen In vitro

Erfahren Sie ein enzym- und serumfreies Kulturmodell neuronaler Stammzellen zur Untersuchung der epithelial-mesenchymalen Transition in Krebszellen. Diese Methode ermöglicht die Identifizierung von Verbindungen, die Migration aktivieren oder blockieren.

Ein Enzym- und Serumfreie Neural Stem Cell Culture Modell für EMT Investigation Geeignet für Drug Discovery

Weitere Videos entdecken