Name: Layered Alginate Konstrukten: Eine Plattform für Co-Kultur von heterogenen Zellpopulationen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Erfahren Sie die Herstellung zweilagiger Alginat-Hydrogelscheiben für die 3D-Kokultur heterogener Zellpopulationen. Diese Methode ermöglicht ökonomische und reproduzierbare Untersuchungen zellulärer Interaktionen im Tissue Engineering.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde von der National Science Foundation (CBET 0845754, AHH) finanziert.

1. Vorbereitung für die Bildung von Alginate Discs <ol><li> Vorbereiten eines 4% (w / v) Alginatlösung in 1x Dulbecco-Phosphat-gepufferter Saline ohne Zusatz von Calciumchlorid oder Magnesiumchlorid und in einem 37 ° C Wasserbad. Konzentrationen der Alginatlösung kann variieren, aber von 1 bis 4% (w / v) Alginatlösungen werden empfohlen. </li><li> Mischen Sie die Alginat - Lösung in einem Verhältnis von 1: 1 mit warmem Zellkulturmedien Base (beispielsweise Dulbeccos modifiziertes Eagle - Medium.) Für den gewünschten Zelltyp. Die Alginat - Konzentration ist jetzt die Hälfte der ursprünglichen Konzentration, dh., 2% (w / v). Sterilisieren Alginat / Media-Lösung steril 0,2 um Nylonspritzenfilter verwenden. </li><li> Bereiten Sie ein Bad aus sterilen 102 mM Calciumchloriddihydrat in sterilem Wasser mit genug Lösung Formen zu versenken (~ 200 bis 300 ml). </li><li> Sammeln Sie die sterile &quot;Gelbildung Form&quot; (6 mm Durchmesser x 3 mm groß zylindrischen Vertiefungen in einer 3 in x 3 in Aluminiumplatte, siehe <strong&gt; Abbildung 1) und Endplatten (Unten: ein 3 in x 3 in Aluminium - Platte, oben: eine 1,5 in x 3 in Aluminiumplatte) und Formen herzustellen , wie folgt: <ol><li> Schneiden dick Filterpapier (blotter Filterpapier) und die Zelle Mikrosieb Membran (10 &amp; mgr; m Porengröße) zu den Größen der oberen und unteren Endplatten und legen Sie sie in das Bad Calciumchlorid bis zur Sättigung, ca. 1 min. Falls gewünscht, sterilisiert die dicke Filterpapier und die Membran über Mikrosieb Autoklaven oder ultraviolettem Licht für 30 min vor der Verwendung. </li><li> Set-up die Hälfte (die untere Hälfte) des Form Konstrukt. <ol><li> Legen Sie die folgenden Elemente übereinander in der folgenden Reihenfolge und glätten einen sterilen Spatel mit: große Endscheibe (3 in x 3 Zoll), dickes Filterpapier, und dann die Mikrosieb Membran. </li><li> Umkehren und drücken Sie die Form auf einen Stapel von Papierhandtüchern Verlust von überschüssigem Calciumchloridlösung zu gewährleisten. </li><li> Legen Sie die &quot;Gel-Bildung Form&quot; mit den zylindrischen Vertiefungen auf der Oberseite des cell Mikrosieb Membran und befestigen Sie sanft die Form zusammen auf zwei Seiten mit Binder Clips auf der linken und rechten Seite. Achten Sie darauf, genügend Platz für die obere Endscheibe (1,5 Zoll x 3 Zoll) zu verlassen, die Vertiefungen vollständig später zu decken. </li></ol></li><li> Set-up in der zweiten Hälfte (die obere Hälfte) des Form Konstrukt. <ol><li> Legen Sie die folgenden Elemente übereinander in der folgenden Reihenfolge und glätten: kleine Endscheibe, dickes Filterpapier, Mikrosieb Membran. </li><li> Umkehren und drücken Sie diese Hälfte der Form auf einen Stapel von Papierhandtüchern Verlust von überschüssigem Calciumchloridlösung zu gewährleisten. mit Binder Clips zu diesem Zeitpunkt nicht über diese Hälfte der Form zu befestigen. </li></ol></li></ol></li><li> Kulturzellen als den Anweisungen des Herstellers empfohlen. Ernten Sie die gewünschten Zellen in den geschichteten Alginat Hydrogele einbetten. Die empfohlene Zelldichte von 1 bis 2 x 10 6 Zellen / ml, dies kann jedoch je nach gewünschter Experimenten variiert werden. Hinweis: Bei Verwendung dieser Methodefür Schichten mit unterschiedlichen Zelltypen zu machen, machen die Kultur zwei Zelltypen parallel sicher für die Schichtung. Mesenchymale Stammzellen (MSCs) in einer Zelldichte von 1 x 10 6 Zellen / ml wird als ein Beispiel für das folgende Protokoll verwendet werden. Die Zellzahl und Disc-Nummer kann für Experimente skaliert werden nach Bedarf. <ol><li> Ein bis zwei Wochen vor dem Einbetten, seed mesenchymalen Stammzellen in einer Zelldichte von 3000 - 5000 Zellen / cm 2 in 10 ml basale Wachstumsmedien (Dulbeccos Modified Eagle Medium, das 10% fötales Rinderserum, 2% L-Glutamin, 1 % nicht-essentielle Aminosäuren, 1% Penicillin / Streptomycin) in T-75-Flaschen. </li><li> Entfernen Sie verbrauchte Medien alle 2 - 3 Tage und ersetzen mit 10 ml basale Wachstumsmedium, bis die Zellen 80 sind - konfluenten 90%. </li><li> Ernten Zellen, verbrauchtes Medium zu entfernen, und die Pipette 3 ml 1x Dulbecco-Phosphat-gepufferter Saline ohne Zusatz von Calciumchlorid oder Magnesiumchlorid zu spülen Zellen. Entfernen Sie diese Lösung, Pipette 3 ml 0,25% VersuchenPSIN-EDTA auf Zellen in T-75-Kolben wachsen, und bei 37 ° C für 5 min inkubiert. Nachdem die Zellen von der Haftfläche angehoben haben, fügen Sie 6 - 9 ml basale Wachstumsmedien. </li><li> Zentrifuge MSCs bei 600 xg für 5 min bei Raumtemperatur, saugt den Überstand und resuspendiere in 1 bis 5 ml der basalen Wachstumsmedien. Zählen Sie die Zellen unter Verwendung eines Zählkammer Gerät Anweisungen. </li><li> Entfernen Sie 1 x 10 6 Zellen aus der gesamten Zelle Aufwirbelung, Zentrifuge die gleichen Bedingungen verwendet, und den Überstand aspirieren. </li></ol></li></ol> 2. Bildung von Zell Gesetzt Alginate Discs <ol><li> Resuspendieren des Zellpellets mit 1 ml der sterilen Alginat / Medien - Lösung mit einer Zelldichte von 1 x 10 6 Zellen / ml zu erreichen. Das Zell-Alginat-Gemisch wird in Aussehen homogen trübe sein, wenn die Zellen in geeigneter Weise gemischt werden. </li><li> Pipette 130 ul der Zell-Alginat-Mischung in sechs 6 mm Durchmesser x 3 mm tall Vertiefungen in der unteren Hälfte der FormKonstrukt tropft, um keine Luftblasen zu erzeugen. Ein leicht konvexer Meniskus sollte über dem Rand jeder Vertiefung sichtbar. </li><li> Sorgfältig glätten sie über die obere Hälfte der Form Konstrukt, das eine sterile Spachtel und drehen, so dass die Zelle Mikrosieb Membran auf der Oberseite der Brunnen ist. Legen Sie die Form auf der Oberseite der Brunnen bauen, um sicherzustellen, die Vertiefungen, die die Zelle und Alginat-Gemisch vollständig zu bedecken. </li><li> Heben Sie die beschickte Form Konstrukt und unten drücken und fest auf der Mitte, Heftklammer, die verbleibenden zwei Seiten (oben und unten), um die oberen und unteren Hälften der Form Konstrukt zu befestigen. Die Zell-Alginat-Lösungen sollten sicher in den Vertiefungen zu diesem Zeitpunkt eingebettet werden. </li><li> Tauchen Sie die befestigte Form Konstrukt in der 102 mM Calciumchlorid-Bad, um sicherzustellen, dass das gesamte Konstrukt eingetaucht ist. Inkubieren der Zellkultur Haube bei Raumtemperatur für 90 min. </li><li> Am Ende der 90 Minuten, entfernen Sie das Form Konstrukt aus dem 102 mM CalciumchloridBad und auf einen Stapel von Papierhandtüchern in der Zellkultur Kapuze. Entfernen Sie alle vier Binder Clips und trennen die beiden Hälften der Form Konstrukt. Hydrogele in den Vertiefungen gebildet werden, sollten keine Blasen haben und die Vertiefungen vollständig ausfüllen sollte. </li><li> Mit einem Spatel, Spuren sorgfältig den Rand der Vertiefungen der Hydrogele enthaltend die Hydrogele sorgfältig lösen und Keil aus. Nachdem die Hydrogele aus der Form Konstrukts Entfernen Drop die Hydrogele direkt in ein Bad aus 1x Dulbecco Phosphat-gepufferte Saline mit Calciumchlorid und Magnesiumchlorid. Decken Sie die Gele vollständig abzuwaschen das überschüssige Calciumchloridlösung für 1 - 5 min. </li><li> Übertragen Sie die Hydrogele in basalen Nährmedien Lösung in gewünschte Schale (z. B. 6 - Well - Platten) , die vollständig der Hydrogele abdeckt. Mindestens 1 Stunde in der Zellkulturbrutschrank bei 37 ° C und 5% CO 2 für vor zur Schichtungsschritt fort. Anmerkung: Hydrogele Zellen enthält, kann gehalten werden indie Zellkultur-Inkubator auf unbestimmte Zeit zu dieser Zeit, bis der Gele mit einem anderen Zellpopulation Schichtung gewünscht wird, vorausgesetzt, dass Medienwechsel alle 2 abgeschlossen sind - 3 Tage. </li></ol> 3. Layering von Alginate Discs <ol><li> Während der letzten halben Stunde der 1-stündigen Inkubation sammeln und bereiten sterile Formen und Lösung für die Gele Glühen. <ol><li> Bereiten Sie die &quot;Stanzform&quot; durch eine Form Befestigung, die Vertiefungen der Hälfte der Höhe der &quot;Gelbildung Form&quot; (6 mm Durchmesser x 1,5 mm groß Brunnen in einem 3 in x 3 in Aluminiumplatte) zu einer Endscheibe (3 in x hat 3 in Aluminiumplatte) -Bindemittel Clips auf der linken und rechten Seite verwendet wird. </li><li> Bereiten Sie die &quot;annealing mold&quot; durch eine Formbefestigungs, die 3 mm im Durchmesser größer als der &quot;Gelbildung mold&quot; (9 mm Durchmesser x 3 mm tall Vertiefungen in einer 3 in x 3 in Aluminiumplatte) zu einer Endplatte (3 in x 3 in Aluminiumplatte) -Bindemittel Clips auf der linken und rechten Seite verwendet wird. </li><li> Eine Lösung aus100 mM Natriumcitrat / 30 mM EDTA (Natriumcitrat-Dihydrat, dihydrat Ethylendiamintetraessigsäure-Tetranatriumsalz) in sterilem Wasser. </li></ol></li><li> Entfernen Sie Gele der gewünschten Zellpopulationen (in diesem Beispiel zwei Scheiben mit hMSCs) von den Medien in der Schale, und legen Sie in die &quot;Stanzform&quot; Brunnen. Jedes Gel sollte eng anliegen in die Vertiefungen mit der Hälfte des Gels über der Form vorsteht. </li><li> Mit einem Skalpell schneiden, das Gel auf der Oberfläche der Form (dies wird das Hydrogel in Hälften geschnitten). Drehen Sie die obere Hälfte des Gels und legen Sie sie in eine offene Form gut. Die Hälfte des Gels sollte auch eng in die Form passt gut, aber jetzt beide Halb Gele sollte die Höhe der Form mit dem ausgeschnittenen Innenfläche sichtbar sein. Wiederholen Sie mit dem zweiten Gel. Hinweis: Achtung: Es werden nur die inneren Schnittflächen werden geschichteten Scheiben bilden. die Außenflächen Verwendung in der Hälften Trenn führen. Es ist diese Textur aus der Mikrosieb Membran auf die Geloberfläche übertragen Verdacht verhindernDer Erfolg des Wärmebehandlungsprozesses. </li><li> Legen Sie ein Stück Trockenzelle Mikrosieb Membran auf der Oberseite der Vertiefungen, um sicherzustellen, dass die Mikrosieb Membran in Kontakt mit allen der Gel-Hälften werden geglüht und bedeckt sie vollständig. Legen Sie dickes Filterpapier auf der Oberseite der Mikrosieb Membran, um sicherzustellen, die Gele vollständig zu bedecken. </li><li> Pipettieren einer Lösung von 100 mM Natriumcitrat / 30 mM EDTA (Natriumcitratdihydrat, dihydrat Ethylendiamintetraessigsäure -tetranatriumsalz) auf den dicken Filterpapier, bis er gesättigt ist. Ungefähr 750 &amp; mgr; l ist für vier Brunnen ausreichend. </li><li> Inkubieren der Gele für 1 min bei Raumtemperatur. Entfernen Sie dann die Zelle Mikrosieb Membran und dicke Filterpapier und entsorgen Sie sie. Entfernen Sie die Binder Clips und öffnen Sie die Form. </li><li> Für jede geglüht Gel, Transfer ein Natriumcitrat / EDTA-behandelten Hälfte des Hydrogels auf die vorbereitete &quot;Glühen Form&quot; mit der Schnittfläche nach oben. Dies wird eine Hälfte des geglüht const seinein- em. </li><li> Mit einem Spatel, Lift und legen Sie eine zweite Natriumcitrat / EDTA-behandelten Halb Gel (eine andere Zelltyp enthalten kann) auf das Gel bereits in der &quot;Glühen Form&quot;, diese zweite Halb Gel Spiegeln, so dass die Schnittfläche in ist Kontakt mit der Schnittfläche des Gels bereits in der &quot;Glühen Form&quot;. </li><li> Drücken Sie vorsichtig auf die beiden Gele mit einem Spatel keine Blasen zwischen den beiden Gele zu entfernen verwenden. Auch neu positionieren die Gele nach Bedarf, um sicherzustellen, dass sie direkt auf voneinander. </li><li> Heben Sie die &quot;Glühen mould&quot; und es in der 102 mM Calciumchlorid-Bad für 30 Minuten untertauchen. Sie nicht die Brunnen mit einer Endscheibe decken. </li><li> Nach der 30 Minuten Inkubation, entfernen Sie das &quot;Glühen mould&quot; und es auf Papiertücher legen. Entfernen Sie die Binder Clips und trennen Sie die Form von der Endscheibe. </li><li> Mit einem Spatel, sammeln die geglüht Gele und sie in einer phosphatgepufferten Salz des 1x Dulbecco mit Calciumchlorid und magnesium Chlorid-Bad die Gele zu waschen. Anschließend übertragen geglüht Hydrogele Zellkulturmedien in einer gewünschten Schale (z. B. 6-well - Platte) für die Kultur. </li></ol>

<ol><li>Sophia Fox, A. J., Bedi, A., Rodeo, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Basic+Science+of+Articular+Cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Sports+Health%22%5BJournal%5D)">The Basic Science of Articular Cartilage.</a> Sports Health. 1 (6), 461-468 (2009).</li>
<li>Neidlinger-Wilke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+loading+of+the+intervertebral+disc%3A+from+the+macroscopic+to+the+cellular+level%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Spine+J%22%5BJournal%5D)">Mechanical loading of the intervertebral disc: from the macroscopic to the cellular level.</a> Eur. Spine J. 23 (3), 333-343 (2013).</li>
<li>Klein, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+of+stratified+articular+cartilage+from+chondrocyte+subpopulations%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarth.+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering of stratified articular cartilage from chondrocyte subpopulations.</a> Osteoarth. Cartilage. 11 (8), 595-602 (2003).</li>
<li>Han, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold-free+Grafts+for+Articular+Cartilage+Defects%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Orthop.+Relat.+R%22%5BJournal%5D)">Scaffold-free Grafts for Articular Cartilage Defects.</a> Clin. Orthop. Relat. R. 466 (8), 1912-1920 (2008).</li>
<li>Ng, K. W., Ateshian, G. A., Hung, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zonal+chondrocytes+seeded+in+a+layered+agarose+hydrogel+create+engineered+cartilage+with+depth-dependent+cellular+and+mechanical+inhomogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+A%22%5BJournal%5D)">Zonal chondrocytes seeded in a layered agarose hydrogel create engineered cartilage with depth-dependent cellular and mechanical inhomogeneity.</a> Tissue Eng. A. 15 (9), 2315-2324 (2009).</li>
<li>Ng, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+layered+agarose+approach+to+fabricate+depth-dependent+inhomogeneity+in+chondrocyte-seeded+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Orthop.+Res%22%5BJournal%5D)">A layered agarose approach to fabricate depth-dependent inhomogeneity in chondrocyte-seeded constructs.</a> J. Orthop. Res. 23 (1), 134-141 (2005).</li>
<li>Nguyen, L. H., Kudva, A. K., Saxena, N. S., Roy, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+articular+cartilage+with+spatially-varying+matrix+composition+and+mechanical+properties+from+a+single+stem+cell+population+using+a+multi-layered+hydrogel%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Engineering articular cartilage with spatially-varying matrix composition and mechanical properties from a single stem cell population using a multi-layered hydrogel.</a> Biomaterials. 32 (29), 6946-6952 (2011).</li>
<li>Leone, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+multilayered+composite+hydrogel+as+osteochondral+substitute%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+A%22%5BJournal%5D)">Continuous multilayered composite hydrogel as osteochondral substitute.</a> J. Biomed. Mater. Res. A. 103 (8), 2521-2530 (2015).</li>
<li>Lai, J. H., Kajiyama, G., Smith, R. L., Maloney, W., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+catalyze+cartilage+formation+by+neonatal+articular+chondrocytes+in+3D+biomimetic+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Stem cells catalyze cartilage formation by neonatal articular chondrocytes in 3D biomimetic hydrogels.</a> Sci. Rep. 3, (2013).</li>
<li>Vigfúsdòttir, ÁT., Pasrija, C., Thakore, P. I., Schmidt, R. B., Hsieh, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Pericellular+Matrix+in+Mesenchymal+Stem+Cell+Deformation+during+Chondrogenic+Differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Role of Pericellular Matrix in Mesenchymal Stem Cell Deformation during Chondrogenic Differentiation.</a> Cell. Mol. Bioeng. 3 (4), 387-397 (2010).</li>
<li>Lee, C. S. D., Gleghorn, J. P., Won Choi, N., Cabodi, M., Stroock, A. D., Bonassar, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+layered+chondrocyte-seeded+alginate+hydrogel+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Integration of layered chondrocyte-seeded alginate hydrogel scaffolds.</a> Biomaterials. 28 (19), 2987-2993 (2007).</li>
<li>Gleghorn, J. P., Lee, C. S. D., Cabodi, M., Stroock, A. D., Bonassar, L. J. Adhesive properties of laminated alginate gels for tissue engineering of layered structures. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGleghorn%2C+JP+%22J.+Biomed.+Mater.+Res.+A%22">J. Biomed. Mater. Res. A</a>. 85 (3), 611-618 (2008).</li>
<li>Gharravi, A. M., Orazizadeh, M., Ansari-Asl, K., Banoni, S., Izadi, S., Hashemitabar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+Fabrication+of+Anatomical+Bioreactor+Systems+Containing+Alginate+Scaffolds+for+Cartilage+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Avicenna+J.+Med.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Design and Fabrication of Anatomical Bioreactor Systems Containing Alginate Scaffolds for Cartilage Tissue Engineering.</a> Avicenna J. Med. Biotechnol. 4 (2), 65-74 (2012).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrogenic+Differentiation+of+Human+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Three-Dimensional+Alginate+Gels%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+A%22%5BJournal%5D)">Chondrogenic Differentiation of Human Mesenchymal Stem Cells in Three-Dimensional Alginate Gels.</a> Tissue Eng. A. 14 (5), 667-680 (2008).</li>
<li>Yeatts, A. B., Gordon, C. N., Fisher, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+an+aggregated+alginate+construct+in+a+tubular+perfusion+system%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Formation of an aggregated alginate construct in a tubular perfusion system.</a> Tissue Eng. C, Methods. 17 (12), 1171-1178 (2011).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Bildung von geschichteten Alginat Hydrogelscheiben zur Untersuchung Kokulturen von mehreren Zellpopulationen, wie sie in physiologisch geschichteten Geweben, beispielsweise Knorpel. Schichtstrukturen, wie beispielsweise die Kulturplattform beschrieben, kann das Zusammenspiel zwischen zwei verschiedenen Zellpopulationen zu derselben Kulturumgebung oder unter Belastung zu untersuchen, verwendet werden. Alginate ein anionisches lineares Polysaccha...

Auflast Lager Gewebe wie Gelenkknorpel oder Bandscheiben bestehen aus heterogenen Gewebebereiche, die sowohl für biomechanische Funktion und geeignete mechano-Übertragung im Gewebe entscheidend sind. Nicht nur zelluläre Organisation und Funktion verschieden in den verschiedenen Regionen, aber die extrazellulären Matrizes (ECM) sind ebenfalls in der Zusammensetzung und Organisation variieren. Zum Beispiel besteht Gelenkknorpel von drei primären Zonen mit unterschiedlichen Zellmorphologie, mechanische Funktion und ECM. Die Unterschiede in ihren ECM führen tragende Verantwortung Differential; die oberflächliche Schicht wird in Zugwirkung zu laden, während die mittleren und tiefen Zonen sind in erster Linie verantwortlich für die Reaktion auf Kompression 1 in erster Linie beteiligt. Ebenso in der Bandscheibe, eine gelartige Nucleus pulposus durch eine lamellar Annulus fibrosis und die Zellen in diesen zwei unterschiedlichen Bereichen erfahren verschiedene Arten von Stimuli biophysikalischen umgeben2. In dieser Art von Gewebe, Zellen und der extrazellulären Matrix innerhalb der Gewebeschichten miteinander interagieren , wenn das Gewebe unterzogen wird und reagiert auf mechanische Kräfte. Rekapitulation eines solchen heterogenen Gewebestrukturen bleibt eine Herausforderung im Tissue Engineering und der regenerativen Medizin und unser Verständnis für ihre biologische Bedeutung ist begrenzt. Es besteht ein Bedarf für die Kultivierung von Plattformen für die geschichtete Gewebe sowie Co-Kulturen von verschiedenen Populationen von Zellen innerhalb eines Konstrukts analysiert. Im Gelenkknorpel Tissue Engineering , gerüstlosen Schichtaufbauten wurden durch die Nutzung der Fähigkeit der zonalen Chondrozyten zu deponieren variiert ECM zu imitieren , die verschiedenen Schichten dieses Gewebes 3,4 aufgebaut. Jedoch liefern geschichtete Hydrogels Konstrukten eine Möglichkeit für das Zusammenspiel von verschiedenen Arten von Zellpopulationen untersucht, der die Fähigkeit fehlt, unabhängig eine robuste Gewebe zu bilden. Zum Beispiel können verschiedene Populations von mesenchymalen Stammzellen können in Schichtkonstrukten co-kultiviert werden. Solche Schicht Gerüste wurden mit beiden Chondrozyten und Differenzierung von mesenchymalen Stammzellen für eine verbesserte Tissue Engineering 5 verwendet. Nicht nur können unterschiedliche Zellpopulationen in ähnlicher Hydrogelschichten co-kultiviert werden, aber ein Zelltyp kann auch innerhalb der Schichten gezüchtet werden , die manipuliert wurden variierende Steifheit oder biochemische Gehalt zu haben , um verschiedene Antworten von Zellen 6,7 hervorzurufen. Viele verschiedene Biomaterial Hydrogele wurden 7-9 zu Schicht Zellpopulationen für die Knorpelgewebetechnik , wie sie unter Verwendung von Polyethylenglykol oder Polyvinylalkohol Basen verwendet. Jedoch Alginat-Hydrogele sind eine der einfachsten Biomaterialien, aus denen für die Untersuchung heterogene Zellpopulationen in Kokultur geschichtete Gerüste zu schaffen. Während Agarose Hydrogele auch leicht gebildet werden, weisen Alginat-Hydrogele den zusätzlichen Vorteil, dass einfach ist,polation von Zellen aus dem 3-D - Konstrukt für die Analyse von einzelnen Zellen , wie bereits zuvor beschrieben 10. In früheren Studien wurden zweischichtige Alginat - Hydrogele wurden in dünnen Blechen gebildet und aus diesen Folien wurden die Schnitte geschnitten (z. B. eine Biopsie Stanze verwendet wird ) für bestimmte Anwendungen , wie beispielsweise für die Analyse von biochemischen Inhalte oder Grenzflächenschereigenschaften 11,12. Ein anderes Verfahren zur Bildung dünner Blätter Alginat wurde mit dem Potential für Schichtung in mehreren Schichten beschrieben, aber dennoch würde Veränderung des Hydrogels für die Verwendung in mechanischen Prüfung 13 erfordern. Hier stellen wir ein Verfahren zur zweischichtigen Alginat Hydrogelscheiben zur Verwendung in Co-Kultivierung von verschiedenen Populationen von Zellen reproduzierbar zu schaffen. Diese Alginat-Disc-Plattform besitzt mehrere Vorteile. In erster Linie die reproduzierbare Form und die geringe Größe ist für die mechanische Stimulation der eingebetteten Zellen förderlich, ohne eine Biopsie pu erfordernnch oder andere physikalische Veränderung des Hydrogels für viele Anwendungen. Darüber hinaus bleibt die Lebensfähigkeit der Zellen während des Beschichtungsprozesses hoch, und nach der Gelbildung eine klare Trennung der beiden Zellpopulationen innerhalb des Gels ist sichtbar ohne anfängliche Überlappungsbereich.

<table><tbody><tr><td>Alginsäure-Natriumsalz</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A1112</td><td>Lösung hergestellt in Gew.-% unter Verwendung von DPBS (-/-)</td></tr><tr><td>1x Dulbecco's Phosphat Buffered Saline (-/-)</td><td>Gibco Life Technologies&nbsp;</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>1x Dulbecco's Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (+/+)</td><td>Gibco Life Technologies&nbsp;</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>Modifizierter Eagle Medium von Dulbecco</td><td>Gibco Life Technologies&nbsp;</td><td>11965</td><td>Beispiel. Verwenden Sie</td></tr><tr><td>die gewünschten Spritzenvorsatzfilter (0,02 &#956; m Nylon)</td><td>FisherBrand</td><td>0979C</td><td></td></tr><tr><td>Calciumchlorid-Dihydrat</td><td>Fisher Bioreagenzien</td><td>BP510</td><td>Lösung in sterilem Wasser vorbereiten</td></tr><tr><td>Criterion Blotter Filterpapier</td><td>Biorad</td><td>1704085</td><td>Zuschnitt von Endplatten für die Schimmelbildung</td></tr><tr><td>Zell-Mikrosieb-Membran (10 &#956; m Porengröße)</td><td>Biodesign Inc aus New York</td><td>N10R</td><td>Zuschnitt auf die Größe von Endplatten für die Schimmelbildung</td></tr><tr><td>Natriumcitrat-Dihydrat</td><td>FisherScience</td><td>S93364</td><td></td></tr><tr><td>Ethylendiamintetraessigsäure-Tetranatriumsalz-Dihydrat (EDTA)</td><td>FisherBioreagent</td><td>BP121</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum&nbsp;</td><td>Gibco Life Technologies&nbsp;</td><td>26140</td><td>Zur Verwendung in Beispielen für mesenchymale Stammzellen Basalwachstumsmedien</td></tr><tr><td>Penicilin/Streptomycin (10.000 U/ml)</td><td>Gibco Life Technologies&nbsp;</td><td>15140</td><td>Wird z.B. für mesenchymale Stammzellen verwendet: basales Wachstumsmedium</td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td><td>Gibco Life Technologies&nbsp;</td><td>25030081</td><td>Verwendet in Beispielen für mesenchymale Stammzellen Basalwachstumsmedien</td></tr><tr><td>Nicht-essentielle Aminosäuren (100x)</td><td>Gibco Life Technologies&nbsp;</td><td>11140050</td><td>Wird beispielsweise in basalen Wachstumsmedien für mesenchymale Stammzellen</td></tr></tbody></table> verwendet

layered alginate konstrukten: eine plattform für co-kultur von heterogenen zellpopulationen

Layered Alginate Constructs: A Platform for Co-culture of Heterogeneous Cell Populations

Viele tragende Gewebe besitzen strukturell und funktionell unterschiedliche Regionen, typischerweise begleitet von unterschiedlichen Zellphänotypen mit unterschiedlichen mechanosensorischen Eigenschaften. Die Entwicklung und Analyse dieser Gewebetypen bleibt eine Herausforderung. Schichthydrogel-Konstrukte bieten die Möglichkeit, die Wechselwirkungen zwischen mehreren Zellpopulationen innerhalb einzelner Konstrukte zu untersuchen. Alginat-Hydrogele sind sowohl biokompatibel als auch ermöglichen eine einfache Isolierung von Zellen nach dem Experimentieren. Hier beschreiben wir ein Verfahren zur Entwicklung von kleinen zweischichtigen Alginat-Hydrogel-Scheiben. Dieser Prozess erhält eine hohe Zellviabilität menschlicher mesenchymaler Stammzellen während des Entstehungsprozesses, und diese geschichteten Scheiben können einer uneingeschränkten zyklischen Kompression standhalten, die üblicherweise zur Stimulation von hMSCs verwendet wird, die sich in der Chondrogenese befinden. Diese geschichteten Konstrukte können möglicherweise auf zusätzliche Ebenen skaliert werden und auch verwendet werden, um Zellpopulationen zunächst nach dem Layering zu trennen. Diese zweischichtige Alginat-Hydrogel-Kulturplattform kann für viele verschiedene Anwendungen verwendet werden, einschließlich des Engineerings und der Analyse von Zellen von tragenden Geweben und Co-Kulturen anderer Zelltypen.

1 zeigt die Bildung und die Schichtung der Alginat - Hydrogele. Abgeschlossen zweischichtigen Gele zeigen eine vollständige anfängliche Trennung von Zellpopulationen , wie in 2 gezeigt. Die Lebensfähigkeit der Zellen von humanen mesenchymalen Stammzellen) eingebettet in diesen Hydrogelen und geschichtete bleibt hoch und vergleichbar mit den bulk Hydrogele wie in Figur 3 gezeigt ist . Die Lebensfähigkeit wurde bewertet nach dem Tempern ve...

Die Entwicklung und Analyse von tragenden Geweben mit heterogenen Zellpopulationen ist immer noch eine Herausforderung. Hier beschreiben wir eine Methode zur Herstellung von zweischichtigen Alginat-Hydrogel-Scheiben als Plattform für die Co-Kultur verschiedener Zellpopulationen innerhalb eines Konstrukts.

Layered Alginate Konstrukten: Eine Plattform für Co-Kultur von heterogenen Zellpopulationen

Many load bearing tissues possess structurally and functionally distinct regions, typically accompanied by different cell phenotypes with differential ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, reproduzierbar zweischichtige Alginate-Hydrogeldisken herzustellen, um die Beziehungen zwischen verschiedenen Zellpopulationen während einer 3D-Kokultur zu untersuchen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung der Wechselwirkungen zwischen mehreren Zellpopulationen in räumlich heterogenen 3D-Kulturen, was zur Beantwortung zentraler Fragen im Bereich des Gewebeengineerings und der Physiologie belasteter Gewebe beitragen kann. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie eine einfache, kostengünstige und reproduzierbare Möglichkeit bietet, mehrschichtige Alginate-Hydrogels mit eingeschlossenen Zellen herzustellen, die strukturell für mechanische Stimulation geeignet sind.Die Demonstration dieses Verfahrens wird Poonam Sharma, eine Doktorandin aus meinem Labor, durchführen. Um die Alginate-Scheiben herzustellen, stapeln Sie zuerst ein Stück dickes Filterpapier auf einer 3 × 3 Zoll großen Endplatte, gefolgt von einer Zell-Mikrosieb-Membran. Glätten Sie die Membran und das Filterpapier mit einem sterilen Spatel.Danach das Stapel auf einen Haufen Papiertücher stürzen und die Materialien zusammendrücken, um die überschüssige Calciumchloridlösung zu entfernen. Als Nächstes eine Gel-Formungsform mit zylindrischen Vertiefungen auf die Mikrosiebmembran setzen und Büroklammern verwenden, um die Form vorsichtig an den linken und rechten Seiten mit der Endplatte zu befestigen. Nun eine dicke Filterpapierscheibe auf eine kleine Endplatte legen, gefolgt von einer Mikrosiebmembran, und das Stapel umdrehen, um überschüssiges Calciumchlorid wie gerade gezeigt zu entfernen.Wenn beide Formhälften bereit sind, resuspendieren Sie eine Million Zellen der gewünschten Art pro Milliliter sterilem Alginate-Medium. Die Mischung erscheint homogen trüb, wenn die Zellen gleichmäßig verteilt sind. Anschließend werden 130 Mikroliter der Zellsuspension tropfenweise in einzelne Vertiefungen mit einem Durchmesser von sechs Millimetern und einer Höhe von drei Millimetern in der unteren Hälfte des Formkörpers überführt.Über dem Rand jedes Wells sollte ein leicht konvexer Meniskus sichtbar sein. Sobald alle Zellen ausgesät wurden, glätten Sie mit einem sterilen Spatel vorsichtig die obere Hälfte des Formlings. Drehen Sie dann die Form um, sodass die Mikrosiebmembran sich über den Wells befindet, und setzen Sie die Form auf die Wells auf, wobei darauf zu achten ist, dass die Wells mit der Zell- und Alginate-Mischung vollständig abgedeckt sind. Wenn die Form platziert ist, heben Sie die beladene Formkonstruktion an und setzen Sie, während Sie fest in der Mitte andrücken, Klammern an den verbleibenden beiden Seiten der Konstruktion an, um die obere und untere Hälfte der Form zu befestigen. Die Zell-Alginatlösungen sollten sicher in den Vertiefungen liegen. Tauchen Sie anschließend die gesamte Formkonstruktion für 90 Minuten in ein Bad aus 102 Millimolar Calciumchlorid in einer Zellkulturschutzhaube bei Raumtemperatur ein.Am Ende der Inkubation das Konstrukt auf einen Stapel Papiertücher übertragen und die beiden Büroklammern entfernen, die die obere Endplatte an der Form befestigen. Die beiden Hälften des Konstrukts voneinander trennen. Die in den Vertiefungen gebildeten Hydrogele sollten keine Blasen enthalten und die Vertiefungen vollständig ausfüllen.Entfernen Sie die verbleibenden beiden Klemmen und trennen Sie die die Hydrogel enthaltende Form von der verbleibenden Endplatte. Verfolgen Sie mit einem Spatel vorsichtig den Rand der Vertiefungen, die die Hydrogels enthalten, um die Gele vorsichtig zu lösen. Überführen Sie die Hydrogels anschließend direkt in ein Bad aus DPBS mit Calciumchlorid und Magnesiumchlorid.Nach ein bis fünf Minuten überführen Sie die Hydrogels in einzelne Vertiefungen einer sechswelligen Platte, die mit ausreichend Basilikum-Wachstumsmediumlösung gefüllt ist, um die Gele mindestens eine Stunde lang bei 37 Grad Celsius und fünf Prozent CO2 vollständig zu benetzen. Verwenden Sie während der letzten 30 Minuten der Inkubation Büroklammern, um die Form mit Vertiefungen, deren Höhe der halben Höhe der Gel-Formungsform entspricht, an den linken und rechten Seiten mit einer drei mal drei Zoll oder drei mal 1,5 Zoll großen Aluminium-Endplatte zu befestigen, um eine Schneidform zu erzeugen. Erstellen Sie anschließend die Glühform, indem Sie die Form mit Vertiefungen, die einen Durchmesser um drei Millimeter größer als die der Gel-Formungsform aufweisen, an den linken und rechten Seiten mit drei mal drei Zoll großen Aluminium-Endplatten verbinden.Überführen Sie nun die Hydrogels in die Vertiefungen der Schneidform. Jedes Gel sollte passgenau in die Vertiefung passen, wobei die Hälfte des Gels über die Form hinausragen sollte. Schneiden Sie dann mit einem Skalpell entlang der Oberfläche der Form, um das Hydrogel zu halbieren.Drehen Sie die obere Hälfte des Gels um und legen Sie sie in eine offene Mulde der Form. Das Gelpiece sollte fest in der Mulde sitzen, wobei nun beide Hälften die Höhe der Form erreichen sollten und die geschnittene innere Oberfläche sichtbar ist. Legen Sie danach ein Stück trockene Mikrosiebmembran für Zellen über die Mulden, wobei sichergestellt werden muss, dass die Membran mit allen zu verbindenden Gelhälften in Kontakt steht, und bedecken Sie die Membran mit einem Stück dickem Filterpapier.Wenn die Gele vollständig bedeckt sind, die Filterpapier mit Natriumcitrat ergänzt durch EDTA durchnässen und die Gele bei Raumtemperatur inkubieren. Nach einer Minute die Zell-Mikrosieb-Membran und das dicke Filterpapier entsorgen und die Schellen entfernen. Anschließend die Form öffnen und eine Gelhälfte in eine vorbereitete Annealing-Form überführen, wobei die Schnittfläche nach oben zeigt.Übertragen Sie mit einem Spatel eine zweite behandelte halbe Gelplatte auf die erste Gelplatte, sodass die Schnittfläche mit der Schnittfläche der ersten Gelplatte in Kontakt kommt. Wenn alle Gelplatten platziert sind, drücken Sie vorsichtig mit einem Spatel auf die Gelplatten, um eventuelle Blasen zu entfernen, und tauchen Sie die Annealing-Form vorsichtig in das Calciumchlorid-Bad ein. Nach 30 Minuten stellen Sie die Annealing-Form auf einen Stapel Papiertücher und entfernen Sie die Bindeklammern.Anschließend die Form von der Endplatte trennen und die Gele kurz in ein DPBS-Bad überführen, gefolgt von ihrer Einbringung in das geeignete Zellkulturmedium. Fertige Bilayer-Gele weisen eine vollständige anfängliche Trennung der Zellpopulationen auf, wie in diesem Bild von 293 FT-Zellen, die mit grünen oder roten Zelltracern markiert wurden, zu beobachten ist. Die Vitalität von humanen mesenchymalen Stammzellen, die nach dem Ausheizen in geschichteten Hydrogelen eingebettet wurden, ist hoch und vergleichbar mit der Zellvitalität in massiven Hydrogelen.Nach der Isolierung der Maximalspannung aus jedem Zyklus über eine vierstündige unbelastete zyklische Kompression zeigen zellfreie geschichtete Hydrogele eine deutlich geringere Spannungsantwort auf die zyklische Kompression im Vergleich zu massiven, nicht geschichteten zellfreien Hydrogelen, obwohl beide Hydrogeltypen nach sieben Tagen in Kultur intakt bleiben. Wenn man diese Technik einmal beherrscht, kann sie einschließlich der Vorbereitung aller Materialien bei sachgemäßer Durchführung in weniger als viereinhalb Stunden abgeschlossen werden. Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, sorgfältig und langsam vorzugehen, um Fehler zu vermeiden und die verschiedenen Proben leichter verfolgen zu können.Nach diesem Verfahren können weitere Methoden wie mechanische Stimulation und Immunfärbung durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen bezüglich der Wechselwirkungen zwischen den verschiedenen Zellpopulationen in den möglicherweise gebildeten extrazellulären Matrizen zu beantworten. Diese Technik ermöglicht es Forschern auf den Gebieten der Mechanobiologie und des Gewebeengineerings, die Beziehung zwischen verschiedenen Zellpopulationen – wie mesenchymalen Stammzellen, Chondrozyten und Zellen des Nucleus pulposus – leichter zu untersuchen. Vergessen Sie nicht, dass das Arbeiten mit scharfen Gegenständen, biologischem Material und insbesondere menschlichen Zellen äußerst gefährlich sein kann und dass stets Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen geeigneter persönlicher Schutzausrüstung getroffen werden sollten, während dieses Verfahren durchgeführt wird.

layered-alginate-constructs-platform-for-co-culture-heterogeneous

Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

In diesem Protokoll, zeigen wir die Herstellung eines Mikroaktor Reihe von vertikal versetzt zum Thema, die die Technologie basiert, und wie diese Basistechnologie können modifiziert werden, um High-Throughput-mechanisch dynamischen Zellkultur in beiden zweidimensionalen und dreidimensionalen Kultur durchzuführen Paradigmen.

Mikrofabrizierten Plattformen für Mechanisch Dynamische Cell Culture

Kultur von normalen Zellen in ihrer dreidimensionalen Kontext stellt eine alternative Methode zur frühen Ereignisse für die zelluläre Transformation und Tumorentstehung erforderlich studieren. Diese Methode wird verwendet, um normale Eierstock-und Eileiter Zellen wachsen zu frühen Ereignisse bei Eierstockkrebs Bildung zu studieren.

Alginat Hydrogele für Three-Dimensional Organ Culture der Eierstöcke und Eileitern

In den folgenden Abschnitten beschreiben wir Verfahren zur Herstellung von Alginat-Mikrokugeln für den Einsatz in biomedizinischen Anwendungen. Wir illustrieren speziell eine Technik zur Erstellung mehrschichtiger Alginat-Mikrokugeln für den doppelten Zweck der Zell-und Protein-Kapselung als potenzielle Therapie für Typ 1 Diabetes.

Erzeugung von Alginat-Mikrokugeln für biomedizinische Anwendungen

Wässriger Zweiphasensysteme wurden gleichzeitig Muster mehrere Populationen von Zellen verwendet. Dieses schnelle und einfache Methode zur Musterbildung Zelle nutzt die Phasentrennung der wässrigen Lösungen von Dextran und Polyethylenglycol und die Grenzflächenspannung zwischen den beiden Polymerlösungen besteht.

Zelle Co-Kultur Strukturierung mit wässrigen Zwei-Phasen-Systeme

Wir haben eine Methode zur Verkapselung von pluripotenten Stammzellen (PS-Zellen) in Alginat-Hydrogel-Kapseln mit einer koaxialen Düse etabliert.  Dies verhindert eine übermäßige Aggregation der Zellen und begrenzt die Scherspannung, der Zellen in Suspensionskulturen ausgesetzt sind.  Die Technik ist sowohl auf die Massenproduktion von PS-Zellen als auch auf die Forschung in der Stammzellnische anwendbar.

Alginat Encapsulation pluripotenter Stammzellen Mit einer Co-Axial Düsen

Das folgende Protokoll beschreibt das Verfahren zum Assemblieren von sandwichartigen Kulturen, die als Zwischenstufe zwischen zweidimensionalen (2D) und dreidimensionalen (3D) zellulären Umgebungen verwendet werden sollen. Die technischen Systeme können in der Mikroskopie, Biomechanik, Biochemie und Zellbiologie eingesetzt werden.

Sandwichartigen Mikroumgebungen zu nutzen Handy / Material-Interaktionen

Wir beschreiben die Herstellung von mikrostrukturierten Hydrogelplatten mit einem einfachen Prozess, der in einer freistehenden Form zusammengesetzt und manipuliert werden kann. Unter Verwendung dieser modularen Hydrogel-Platten kann ein einfaches makroskaliertes 3D-Zellkultursystem mit einer kontrollierten zellulären Mikroumgebung erzeugt werden.

Bau von Modular Hydrogel Blätter für mikrostrukturierten Makro skaliert 3D Cellular Architektur

Die dreidimensionale Kultur in Alginatkügelchen wurde aufgrund ihrer Einfachheit und Reproduzierbarkeit ausgewählt, um die Hypophysenadenomzellen zu erhalten. Die Verfahren umfassten einen initialen enzymatischen Verdau und eine mechanische Dissoziation des Tumorgewebes, und die anschließende Zellsuspension wurde in Alginatkügelchen verkapselt.

Dreidimensionale Alginat-Perle Kultur der Menschen Hypophysenadenom Cells

Aktuelle Bilayer Kultur Modelle erlauben nicht funktioneller in-vitro- Studien, die in Vivo Mikroumgebungen zu imitieren. Mit Polyethylenglykol und Zinkoxid Template Methode, beschreibt dieses Protokoll die Entwicklung der eine ultradünne biomimetische Basalmembran mit einstellbaren Steifigkeit, Porosität und biochemische Zusammensetzung, die eng in Vivo imitiert extrazellulären Matrizen.

Ultradünne derzei-elastischen Hydrogele als eine biomimetische Basalmembran für Dual Zellkultur

Diese Arbeit beschreibt ein Protokoll für den Freiform-eingebetteten 3D-Druck von neuralen Stammzellen in selbstheilenden, annealbaren Partikel-extrazellulären Matrixkompositen. Das Protokoll ermöglicht die programmierbare Strukturierung von miteinander verbundenen menschlichen Nervengewebekonstrukten mit hoher Genauigkeit.

Mikrogel-extrazelluläre Matrix-Komposit-Unterstützung für den eingebetteten 3D-Druck menschlicher neuronaler Konstrukte

Das Protokoll zeigt ein neuartiges experimentelles In-vitro-Modell , das die Biologie von zwei Arten von adhärenten Zelllinien mit einem dreidimensionalen (3D)-gedruckten Gerüst rekapitulieren kann. Der Aufbau dieses Modells und die Arbeitsabläufe, von der Zellpräparation über die Zellkultur bis hin zur Analyse und Auswertung, werden beschrieben.

Co-Kulturmodell mit zwei Arten von adhärenten Zelllinien

Erfahren Sie die Herstellung zweilagiger Alginat-Hydrogelscheiben für die 3D-Kokultur heterogener Zellpopulationen. Diese Methode ermöglicht ökonomische und reproduzierbare Untersuchungen zellulärer Interaktionen im Tissue Engineering.

Layered Alginate Konstrukten: Eine Plattform für Co-Kultur von heterogenen Zellpopulationen

Weitere Videos entdecken