Name: Erstellung von Verwachsungen bei Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Lernen Sie eine chirurgische Methode zur Erzeugung von Bauchfellverwachsungen bei Mäusen mit Sandpapier und Stärke. Diese Technik ermöglicht zuverlässige Adhäsionsbildung bei minimaler Mortalität für pathophysiologische Studien.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

CDM wurde von der American College of Surgeons (ACS) Resident Research Stipendium unterstützt. MSH wurde vom California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) Klinische Fellow Ausbildungsförderung TG2-01159 unterstützt. MSH, HPL und MTL wurden von der American Society of MKG-Chirurgen (ASMS) / MKG-Chirurgen Foundation (MSF) Research Grant-Award unterstützt. HPL wurde von NIH Zuschusses R01 GM087609 und ein Geschenk von Ingrid Lai und Bill Shu zu Ehren von Anthony Shu unterstützt. HPL und MTL wurden vom Hagey Labor für Pädiatrische Regenerative Medizin und der Oak Foundation unterstützt. MTL wurde von der Gunn / Olivier Fund unterstützt.

Das folgende Protokoll wurde von der Stanford University Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) und erfüllt alle institutionellen ethischen Richtlinien in Bezug auf die Verwendung von Versuchstieren genehmigt. 1. Schaffung von Verwachsungen <ol><li> Beginnen Sie mit der Maus auf Antibiotika-Chow-Diät eine Woche vor dem Eingriff. </li><li> Autoclave die chirurgischen Instrumente und vorwärmen die Salz Spüllösung. </li><li> Anesthetize die Maus 2% inhalativen Isofluran verwenden. </li><li> Mit Hilfe einer Haarschneidemaschine durch eine schnelle Anwendung gefolgt (5 - 10 s eingestellt) von Enthaarungsmittel, entfernen Sie das Haar von der Mehrheit der Oberfläche des Bauches. Gründlich entfernen Sie das Enthaarungsmittel, indem Sie vorsichtig mit nassen Gaze abgewischt und gegebenenfalls durch sorgfältig die untere Hälfte der Maus in warmes Wasser tunken. Gründlich trocknen das Tier. </li><li> Legen Sie die Schnauze des Tieres in die Betäubung Bugnase. Während der gesamten Operation sorgfältig überwachen die respiratory Rate des Tieres und titriert das Anästhetikum Flussrate nach Bedarf. </li><li> Verwenden, um eine Erwärmungsvorrichtung, wie beispielsweise ein Heizkissen oder eine Wärmelampe, Hypothermie zu verhindern. </li><li> Vor den Bauch prepping, sichern Sie die Maus mit Klebestreifen über und unter dem Bauch gelegt von der Maus zu verhindern, während der Operation zu verschieben. Desinfizieren Sie den Bauch mit betadine, dann folgen mit 70% Ethanol. Fügen Sie so viel Fläche wie möglich in der Vorbereitung, an den Rändern des rasierten Bereich der Haare darunter. Legen Sie ein steriles Tuch über die Maus. (Figur 1) </li><li> Subkutan injizieren 0,1 mg / kg Buprenorphin oder 3 ug für eine 30 g-Maus. </li><li> Machen Sie den Hautschnitt. <ol><li> mit einer scharfen Schere Beginnend in der unteren Bauchmittellinie, fassen Sie die Haut mit einer Pinzette und einem flachen vertikalen Schnitt in der Haut. </li><li> Tragen Sie den Schnitt kranial zum Xyphoid mit der Schere. Achten Sie darauf, nur die Haut zu gelangen. </li></ol></li><li> Da die Bauchmuskulatur ist now sichtbar die Eingeweide bedeckt, greifen die Mittellinie der Muskulatur mit einer Pinzette und sehr sorgfältig einen kleinen Schnitt in sie mit einer scharfen Schere machen. Achten Sie darauf, nicht aus Versehen in ein Bauchorgan zu schneiden. </li><li> die Bauchraum mit einem kleinen Schnitt und zu sehen, die Muskelschicht ziehen weg von der Bauchorgane nach der Eingabe erweitern den Schnitt nach kranial und kaudal durch die Schere in die Öffnung einsetzen und vorsichtig in beide Richtungen schneiden. Erweitern Sie den Schnitt aus der Xyphoid kranial bis über die Blase inferior. (Figur 2) </li><li> Nun, da der Darm ausgesetzt sind, suchen Sie den Blinddarm und sanft exteriorisieren. Vermeiden Sie den Blinddarm mit gezahnten oder scharfe Zange greifen. Verwenden Sie stattdessen eine atraumatische Zange wie einer Adson gezackten Zange. </li><li> Schürfen die Blinddarm mit Schmirgelpapier. <ol><li> Sanft abzuschleifen 30 die gesamte Oberfläche beider Seiten des Blinddarms mit 100 Schleifpapier - 60 Sekunden, bis die Oberfläche appea weniger glänzend und Petechien wirdr auf der Oberfläche. Wenn der Chirurg rechtshändig ist, hilft es, den Blinddarm mit der Spitze nach rechts gerichtet zu orientieren und den Blinddarm über den Chirurgen linken Zeigefinger drapieren. (Figur 3) </li><li> Führen Sie die Schleif sanft, da es leicht versehentlich eine Perforation der dünnen Blinddarmwand verursachen. Eine kleine Menge von Sandigkeit sollte empfunden werden, wie das Schleifpapier entlang der Blinddarmoberfläche bewegt wird. Wenn das Sandpapier wiederholt auf den Blinddarm zu spüren ist zu kontrollieren, wird dies wahrscheinlich eine Träne in der Blinddarmwand verursachen. Achten Sie sorgfältig, um sicherzustellen, dass Partikel von Schmirgelpapier nicht lösen und im Bauch bleiben, da dies eine übermäßige Fremdkörperreaktion hervorrufen kann. </li><li> Wenn ein Riss in der Blinddarmwand auftritt, das Verfahren zu beenden und das Tier einschläfern. </li><li> Wenn ein Blinddarm Blutgefäß durch das Schmirgelpapier geschert wird und verursacht Blutungen, halten Druck für bis zu zwei Minuten mit Gaze. Wenn jedoch Blutungen nach dieser Zeit bestehen, stellen eine Figur einer Acht 7-0 Monofilament Naht um diePunkt von Blutungen. Dies wird die Blutung in fast allen Fällen zuverlässig stoppen. Achten Sie darauf, nicht eine große Menge an Blinddarmwand in die Naht zu übernehmen, da diese Nekrose des betroffenen Teils der Wand Risiken verursachen. </li></ol></li><li> Verletzen die rechte Bauchseitenwand. <ol><li> Verwenden eines Streifens aus Schleifpapier der peritonealen Oberfläche des Muskel der rechten Bauchseitenwand abzuschleifen. Seien Sie aggressiver mit dem Schleif hier als auf der Blinddarm und fortgesetzt, bis die gesamte Oberfläche der rechten Bauchseitenwand erscheint aufgeraut. Vermeiden Sie so hart Schleifen, dass die Haut durch Öffnungen in der Muskelschicht sichtbar ist. (Figur 4) </li><li> Mit einem Castro-Viejo Nadeltreiber, zwischen zwei und vier Ziffer-acht 4-0-Seiden Stiche in die Muskelschicht der rechten Bauchseitenwand. Lassen Sie die Schwänze etwa 5 mm lang. Achten Sie darauf, nicht versehentlich Darmwand in die Naht zu fangen. (Figur 5) </li></ol></li><li> Mit einem 10-ml-Spritze gefüllt with erwärmten Salzlösung, um den Darm mehrmals bewässern. Richten Sie den Strom von Kochsalzlösung in die Bauchhöhle als auch das Innere zu bewässern. Wenn die Oberfläche der Unterseite der Maus getränkt wird, bewegen Sie die Maus über oder um die Oberfläche zu ersetzen, um Unterkühlung zu vermeiden. </li><li> Verwenden Sie eine sterile Gaze über den Schnitt gelegt, um überschüssige Bewässerung aufzusaugen. </li><li> Nehmen Sie eine Prise Stärke und streuen Sie es auf die Oberfläche des rechten Bauchseitenwand und auf beiden Seiten des Blinddarms. (Figur 6) </li><li> Stellen Sie sicher, dass es keine aktive Blutung ist. Wenn vorhanden ist, verwenden Sie einen Gazeschwamm Druck direkt auf den Punkt von Blutungen gelten bis zum Anschlag. Wenn die Blutung nicht ohne weiteres zu stoppen, setzen Sie eine hämostatische Naht, wie oben beschrieben. </li><li> Mit dem stumpfen Ende der Zange und einem Finger, drücken Sie vorsichtig den Darm wieder in die Bauchhöhle. Positionieren Sie den Blinddarm neben den Nähten in der rechten Bauchseitenwand, um die Bildung von Adhäsionen zu maximieren. </li><li> Cverlieren die Bauchschnitt. <ol><li> Mit 6-0 resorbierbaren geflochtenen Naht, legen Sie einen Vorstich in die Muskelschicht an der Spitze des Einschnitts. </li><li> Führen Sie den Faden nach unten in Richtung des Bodens des Einschnitts, womit sich die Muskelschicht zusammen. Reisen von etwa 3 mm und 3 mm nehmen Bissen mit jeder neuen Masche. Achten Sie darauf, nicht zu nehmen versehentlich einen Bissen von Darm, während Nähte setzen. </li><li> An der Unterseite des Einschnitts, um eine Schleife der Naht aus dem vorherigen bite verlassen und verwenden diese, um das Instrument Nahtverbindungs. Schneiden Sie die Naht verlassen 5 mm Schwänze. </li><li> Wiederholen Sie die obigen drei Schritte mit 6-0 Nylon-Monofilament Naht der Haut zu schließen. </li></ol></li><li> Verwalten einer 20 ml / kg subkutan Salz Bolus (etwa 0,5 ml für eine 30 g Maus). </li><li> Mit einem trockenen Gaze, gründlich trocknen das gesamte Tier, wie die dorsale Fell während der Bewässerung zu nass neigt. </li><li> Locker einen Klebstoff wickeln um den Bauch, den Einschnitt zu decken Dressing. Achten Sie darauf, nicht das eine zu beschränkennimal Beine oder Atemmechanik mit dem Dressing. </li><li> sorgfältig überwachen, um das Tier, wie es aus der Narkose erholt. Verabreichen Buprenorphin alle 12 Stunden für 2-3 Tage nach dem Eingriff zur Schmerzkontrolle. </li></ol> 2. Ernte Adhesion Tissue <ol><li> Warten Sie mindestens sieben Tage nach der ersten Operation. Auch chirurgische Instrumente im Autoklaven und die Maus mit Isofluran anästhesiert. </li><li> Sterilisieren Sie den Bauch mit betadine um 70% Ethanol. Rasur und enthaaren zusätzliche Haare von der rechten Seite des Bauches so daß die Haftung Probe Haut enthalten, nicht in Haar bedeckt werden, die Histologie erschwert. </li><li> Verwenden Sie einen links paramedian Einschnitt, da Darm oft auf den ursprünglichen Schnitt geklebt wird. Beginnend am unteren Ende des Bauches, ca. 5 mm nach links von der Unterseite des ursprünglichen Einschnitt, fassen Sie die Haut mit kleinen Zahnzange und Schnitt in die Haut mit einer scharfen Schere. Erweitern Sie diese schneiden überlegenly auf den Brustkorb. (Figur 7) </li><li> Mit einer Schere, schneiden in die Muskelschicht und nach dem Peritonealraum eintritt, erweitern den Schnitt an der Ober- und Unterseite des Einschnitts. Es werden Klebstoffgewebe sein, das Zökum und Dünndarm verursachen an der rechten Seitenwand des Bauches zu haften und gegebenenfalls auch auf den ursprünglichen Einschnitts. (Figur 8) </li><li> Mit Hilfe der Schere und beginnend am Rand des Einschnitts, über dem Niveau des Blinddarms, starten rund um den Bereich in einem Kreis in die Bauchdecke schneiden, wo der Darm haftet. </li><li> Abwechselnd oberhalb und unterhalb der Ebene des Blinddarms, nach und nach den ganzen Weg um die Haftung geschnitten und der Kreis, eine &quot;Insel&quot; von Haut und Bauchwand verwachsen den Darm führt. (Figur 9) </li><li> Wieder mit der Schere, in den Darm schneiden und trennen den anhaftenden Teil vom Rest des Darms, ein Sandwich von Gewebe ergibt, die Wand von Haut und Bauch bestehtauf der einen Seite, des Darms auf der anderen Seite, und Klebstoffgewebe Verbinden der beiden dazwischen. (Abbildung 10) </li><li> Gegebenenfalls kann ein spitzer Schere verwenden, um scharf die Haut von der Bauchwand Muskeln trennen. Für die Histologie betrachten sich die Haut immer angebracht ist, sondern für die Verdauung und Zellisolierung kann die Haut entfernt werden. Wenn das Gewebe für die Histologie verwendet werden, stellen Sie sicher, so viel Nahtmaterial wie möglich zu entfernen, ohne übermäßig die Klebstoff-Schnittstelle zu stören. Für die Verdauung und Zellisolierung ist es akzeptabel, die Nähte an Ort und Stelle zu verlassen, solange die Gewebe digest filtriert. </li><li> Haftung Gewebe Nach Exzision, einschläfern die Maus eine humane Methode, indem Sie Ihre institutionellen Tiernutzung Ausschuss genehmigt werden. </li></ol>

<ol><li>Ellis, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesion-related+hospital+readmissions+after+abdominal+and+pelvic+surgery%3A+a+retrospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Adhesion-related hospital readmissions after abdominal and pelvic surgery: a retrospective cohort study.</a> Lancet. 353 (9163), 1476-1480 (1999).</li>
<li>Brochhausen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+strategies+and+future+perspectives+for+intraperitoneal+adhesion+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastrointest+Surg%22%5BJournal%5D)">Current strategies and future perspectives for intraperitoneal adhesion prevention.</a> J Gastrointest Surg. 16 (6), 1256-1274 (2012).</li>
<li>diZerega, G. S., Campeau, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+repair+and+post-surgical+adhesion+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod+Update%22%5BJournal%5D)">Peritoneal repair and post-surgical adhesion formation.</a> Hum Reprod Update. 7 (6), 547-555 (2001).</li>
<li>Hellebrekers, B. W., Kooistra, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+postoperative+adhesion+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of postoperative adhesion formation.</a> Br J Surg. 98 (11), 1503-1516 (2011).</li>
<li>Herrick, S. E., et al. Human peritoneal adhesions are highly cellular, innervated, and vascularized. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHerrick%2C+SE+%22J+Pathol%22">J Pathol</a>. 192 (1), 67-72 (2000).</li>
<li>Beyene, R. T., Kavalukas, S. L., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-abdominal+adhesions%3A+Anatomy%2C+physiology%2C+pathophysiology%2C+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Probl+Surg%22%5BJournal%5D)">Intra-abdominal adhesions: Anatomy, physiology, pathophysiology, and treatment.</a> Curr Probl Surg. 52 (7), 271-319 (2015).</li>
<li>ten Broek, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Benefits+and+harms+of+adhesion+barriers+for+abdominal+surgery%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Benefits and harms of adhesion barriers for abdominal surgery: a systematic review and meta-analysis.</a> Lancet. 383 (9911), 48-59 (2014).</li>
<li>Becker, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+postoperative+abdominal+adhesions+by+a+sodium+hyaluronate-based+bioresorbable+membrane%3A+a+prospective%2C+randomized%2C+double-blind+multicenter+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Surg%22%5BJournal%5D)">Prevention of postoperative abdominal adhesions by a sodium hyaluronate-based bioresorbable membrane: a prospective, randomized, double-blind multicenter study.</a> J Am Coll Surg. 183 (4), 297-306 (1996).</li>
<li>Cassidy, M. R., Sherburne, A. C., Heydrick, S. J., Stucchi, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+intraoperative+administration+of+a+histone+deacetylase+inhibitor+and+a+neurokinin-1+receptor+antagonist+synergistically+reduces+intra-abdominal+adhesion+formation+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Combined intraoperative administration of a histone deacetylase inhibitor and a neurokinin-1 receptor antagonist synergistically reduces intra-abdominal adhesion formation in a rat model.</a> Surgery. 157 (3), 581-589 (2015).</li>
<li>Thaler, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coincidence+of+connective+tissue+growth+factor+expression+with+fibrosis+and+angiogenesis+in+postoperative+peritoneal+adhesion+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Coincidence of connective tissue growth factor expression with fibrosis and angiogenesis in postoperative peritoneal adhesion formation.</a> Eur Surg Res. 37 (4), 235-241 (2005).</li>
<li>Hong, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+macrophage-dependent+peroxisome+proliferator-activated+receptor+gamma+signalling+on+adhesion+formation+after+abdominal+surgery+in+an+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Effects of macrophage-dependent peroxisome proliferator-activated receptor gamma signalling on adhesion formation after abdominal surgery in an experimental model.</a> Br J Surg. 102 (12), 1506-1516 (2015).</li>
<li>Whang, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+search+of+the+best+peritoneal+adhesion+model%3A+comparison+of+different+techniques+in+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">In search of the best peritoneal adhesion model: comparison of different techniques in a rat model.</a> J Surg Res. 167 (2), 245-250 (2011).</li>
<li>Buckenmaier, C. C. 3rd, Pusateri, A. E., Harris, R. A., Hetz, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+antiadhesive+treatments+using+an+objective+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Surg%22%5BJournal%5D)">Comparison of antiadhesive treatments using an objective rat model.</a> Am Surg. 65 (3), 274-282 (1999).</li>
<li>Rajab, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+model+for+the+induction+of+experimental+adhesions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Surg%22%5BJournal%5D)">An improved model for the induction of experimental adhesions.</a> J Invest Surg. 23 (1), 35-39 (2010).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen haben.

Die kritischen Schritte in diesem Verfahren sind: gründlich den Blinddarm Abschleifen ohne Perforation verursacht, Nähte in der Bauchseitenwand und die Anwendung die richtige Menge an Stärke setzt. Nur Schleifpapier Caecum anzuwenden oder zu einem kleinen spezifischen Teil des Darms. Breiter Einsatz von Schmirgelpapier auf große Mengen von Dünndarm neigt erhebliche Ileus zu verursachen. Achten Sie darauf, den Blinddarm mit genug Kraft, um abzuschleifen, dass die Oberfläche rau wird, aber nicht so sehr, dass die Wand rei...

Abdominalen Adhäsionen sind eine Form von Narbengewebe, das in Reaktion auf eine Entzündung im Abdomen bilden, in der Regel nach einem chirurgischen Eingriff oder intraabdominale Infektion. Adhäsionen sind eine der Hauptursachen für chronische Bauchschmerzen und Unfruchtbarkeit, und sind die häufigste Ursache von Dünndarmobstruktion 1. Das Vorhandensein von Adhäsionen macht die Durchführung einer zweiten Bauchoperation schwieriger und erhöht die Wahrscheinlichkeit von Komplikationen 2. Trotz jahrelanger Forschung, bleiben die Mechanismen, die die Bildung von Adhäsionen zugrunde liegenden schlecht verstanden. Es ist bekannt , dass eine anfängliche Schädigung der peritonealen Oberfläche eine Exsudation von Fibrin-reichen Flüssigkeit verursacht, die dann ein Gerinnsel bildet , das die Oberflächen des Darms und der Bauchwand 3 zusammen bindet. Später wandern Fibroblasten und andere Zellen in die Klebefläche und Bindegewebe 4 absondern. Über Monate bis Jahre reift die Adhäsion von Blutgefäßen entwickeln und Nerven <sup&gt; 5. Mehrere kommerzielle Produkte existieren, die die Bildung von Adhäsionen nach Bauchchirurgie (zB Seprafilm) zu reduzieren sollen. Alle diese Produkte wirken als mechanische Barrieren und Adhäsionsbildung stoppen durch physischen Kontakt zwischen Darmschlingen und der Bauchwand 6,7 verhindern. Trotz des Beweises aus einer kontrollierten Studie , die eine chirurgische Adhäsionsbarriere die Bildung von Adhäsionen verringert 8, anekdotisch viele Chirurgen haben mit der Wirksamkeit der mechanischen Barriere Produkte enttäuscht worden. Momentan gibt es keine Drogen-basierte Anti-Adhäsions-Therapien, was die Tatsache widerspiegelt, dass die genauen in Adhäsionsbildung beteiligten Prozesse kaum verstanden werden. Entwicklung einer Therapie, die bei der Bildung beteiligten zellulären oder molekularen Mittel von Adhäsionen speziell Ziele wird ein verbessertes Verständnis der Ereignisse erfordern, die in der Bildung der Adhäsion beteiligt sind. Mehrere Gruppes haben molekularen Mechanismen identifiziert , die für die Bildung von Adhäsionen 9-11 wichtig sein kann. Tiermodelle bieten eine hervorragende Umgebung für die Bildung von Verwachsungen zu studieren. Viele Studien wurden in mehreren Tieren, insbesondere Ratten und Mäusen 6,12-14 beschreibt die chirurgische Schaffung Haftung veröffentlicht. Aufgrund unserer Erfahrung Fibrose in der Maus und der breiten Verfügbarkeit von transgenen Mäusen und Maus-basierten Antikörper mit dem Studium, wählten wir die Maus als unser Modell für die Untersuchung von Adhäsionen. Hier berichten wir über die Technik, die wir entwickelt haben, reproduzierbar und zuverlässig Verwachsungen in der Maus erstellen.

<table><tbody><tr><td>Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24"</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-206-62</td><td></td></tr><tr><td>Polylined Sterile Field, 18" x 24"</td> <td>Busse Krankenhaus Einwegartikel</td><td>696</td><td>Schneiden Sie ein rechteckiges Loch in der entsprechenden Größe</td></tr><tr><td>Isothesia Isofluran</td><td>Henry Schein&nbsp;</td><td></td><td></td>050033</tr><tr><td>Fisherbrand Steriles Watte-Mull-Pad, 4" x 4"</td> <td>Fisher Scientific</td><td>22-415-469</td><td></td></tr><tr><td>Puralube Vaseline Augensalbe, 1/8 oz. Tube</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Nair Enthaarungscreme</td><td>Kirche & Dwight Co.</td><td>22339-05</td><td></td></tr><tr><td>Buprenex Buprenorphin & nbsp; 0,3 mg/ml</td><td>Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc.</td><td>NDC 12496-0757-5</td><td></td></tr><tr><td>1 cc Insulinspritze, 27&nbsp; G</td><td>Becton Dickinson</td><td>329412</td><td></td></tr><tr><td>Povidon Jod Vorbereitungslösung</td><td>Medline</td><td>MDS093944H</td><td></td></tr><tr><td>Webcol Alkoholvorbereitungstapfer</td><td>Covidien</td><td>6818</td><td></td></tr><tr><td>Allzweck Labarotory Beschriftungsband</td><td>VWR</td><td>89097-912</td><td></td></tr><tr><td>BioGel PI OP-Handschuhe</td><td>M&ouml; lnlycke Health Care</td><td>ALA42675Z</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozange mit Zähnen</td><td>Roboz</td><td>RS-5150</td><td></td></tr><tr><td>Feine Schere - scharf</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Gerade Zange mit Wellenschliff</td><td>Fine Science Tools</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>Castro-Viejo Nadeltreiber</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>100 Körnung 1/4 Blatt Schleifpapier</td><td>ACE Hardware</td><td>1010446</td><td>In Streifen geschnitten</td></tr><tr><td>4-0 Seidennaht, 30", SH Nadel</td><td>Ethicon</td><td>K831</td><td></td></tr><tr><td>7-0 PDS II resorbierbares monofiles Nahtmaterial, 30", BV-1 Nadel</td><td>Ethicon</td><td>Z135</td><td>Wird normalerweise doppelarmig geliefert. Schneiden Sie die Naht in der Mitte ab, um zwei brauchbare Nähte zu erzeugen.</td></tr><tr><td>Reisstärke</td><td>MP Biomedicals</td><td>102955</td><td></td></tr><tr><td>0,9 % Natriumchlorid-Bewässerungsbaxter</td><td></td><td>BHL2F7121</td><td>Warm auf 37 &°; C vor Gebrauch</td></tr><tr><td>10 ml Spritze</td><td>Becton Dickinson</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Vicryl resorbierbares geflochtenes Nahtmaterial, 18", RB-1 Kegelnadel</td><td>Ethicon</td><td>J212H</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Ethilon Nylon monofil &nbsp; Naht, 18", P-3 Nadel, &nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>1698G</td><td></td></tr><tr><td>Tegaderm Transparente Folie Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm</td><td>3M</td><td>1624W</td><td>Längs halbiert</td></tr></tbody></table>

erstellung von verwachsungen bei mäusen

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Abdominale Adhäsionen bestehen aus fibrotischem Gewebe, das sich im Peritonealraum als Reaktion auf einen entzündlichen Insult, typischerweise eine Operation oder eine intraabdominale Infektion, bildet. Die genauen Mechanismen, die der Adhäsionsbildung zugrunde liegen, sind nur unzureichend verstanden. Viele Verbindungen und physikalische Barrieren wurden mit unterschiedlichem Erfolg auf ihre Fähigkeit getestet, Adhäsionen nach Operationen zu verhindern. Die Maus und die Ratte sind wichtige Modelle für die Untersuchung von abdominalen Adhäsionen. In der Literatur gibt es verschiedene Techniken zur Erzeugung von Adhäsionen bei Maus und Ratte. Hier beschreiben wir ein Protokoll, bei dem der Blinddarm mit Sandpapier und Nähten in der rechten Bauchseitenwand abgenutzt wird. Die Maus wird betäubt und der Bauch vorbereitet. Es wird eine Mittellinien-Laparotomie angelegt und der Blinddarm identifiziert. Schleifpapier wird verwendet, um die Oberfläche des Blindmals sanft abzuschleifen. Als nächstes werden mehrere Achternähte in das Bauchfell der rechten Bauchseitenwand gelegt. Die Bauchhöhle wird gespült, eine kleine Menge Stärke aufgetragen und der Schnitt geschlossen. Wir haben festgestellt, dass diese Technik die konsistentesten Adhäsionen mit der niedrigsten Sterblichkeitsrate erzeugt.

<html> Um sieben Tage nach der Operation, Caecum und möglicherweise Colon ascendens, Leber und Dünndarmschlingen sollte auf die rechtsseitige Bauchwand anhaftenden sein. (Abbildung 8) Abgeschnittene Gewebe eingebettet und geschnitten werden und ausgezeichnete histologischen Schnitten ergeben. (11, 12) Wenn das Verfahren korrekt durchgeführt wird, sollte 100% der Mäuse haben erhebliche Verwachsu...

Abdominale Adhäsionen, die sich nach der Operation bilden, sind eine Hauptursache für Schmerzen, Unfruchtbarkeit und Krankenhausaufenthalte und erneute Operationen wegen Dünndarmobstruktion. Unser chirurgisches Verfahren zur Herstellung von abdominalen Adhäsionen bei Mäusen ist ein zuverlässiges Werkzeug, um die Mechanismen zu untersuchen, die der Bildung von Adhäsionen zugrunde liegen.

Erstellung von Verwachsungen bei Mäusen

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, bei der Maus konsistent abdominelle Adhäsionen zu erzeugen, während die Mortalität minimiert wird. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der abdominellen Adhäsionen zu beantworten, beispielsweise welche Zellen, Makromoleküle, Signalwege und Zytokine an der Adhäsionsbildung beteiligt sind. Die wesentlichen Vorteile dieser Technik liegen darin, dass die Mäuse zu 100 % Adhäsionen ausbilden und die Mortalitätsrate sehr gering ist, wenn das Verfahren korrekt durchgeführt wird.In der Regel haben Personen, die neu bei diesem Verfahren sind, Schwierigkeiten damit, die richtige Kraftmenge beim Bearbeiten mit dem Schleifpapier sowie die korrekte Menge an Stärke aufzutragen. Eine visuelle Demonstration dieser Technik ist entscheidend, da zu großer Kraftdruck den Blinddarm perforieren kann, während zu geringer Kraftdruck möglicherweise keine Adhäsionen verursacht. Am Tag der Operation verwenden Sie Haarschneider, um das Baarfell des anästhesierten Tieres zu kürzen.Bringen Sie das Tier dann auf eine Wärmeeinrichtung und sichern Sie die Gliedmaßen mit Klebeband. Desinfizieren Sie anschließend den Bauchbereich mit Betadine, gefolgt von 70 % Ethanol, wobei darauf zu achten ist, auch die Haare an den Rändern des rasierten Bereichs einzubeziehen. Legen Sie eine sterile Abdeckung über die Maus.Dann greifen Sie mit einer Pinzette die Haut des unteren Bauchbereichs und führen einen flachen, vertikalen Schnitt durch. Setzen Sie den Schnitt bis zum Schwertfortsatz fort. Greifen Sie anschließend die Bauchmuskulatur in der Mittellinie und verwenden Sie eine scharfe Schere, um vorsichtig einen kleinen Einschnitt zu machen, wobei Sie darauf achten, die inneren Organe zu vermeiden.Wenn die Bauchorgane sichtbar sind, die Schere in den Einschnitt einführen und vorsichtig in beide Richtungen schneiden, um den Schnitt vom Schwertfortsatz bis über die Harnblase zu verlängern. Sobald der Darm freigelegt ist, das Caecum lokalisieren und mit einer atraumatischen Pinzette das Gewebe vorsichtig nach außen führen. Das Caecum so ausrichten, dass die Spitze zur dominanten Hand zeigt, und das Caecum über den Zeigefinger der nicht-dominanten Hand legen.Die gesamte Oberfläche beider Seiten des ausgelagerten Darms mit Schleifpapier der Körnung 100 vorsichtig 30 bis 60 Sekunden lang abschleifen. Ein geringes Kratzen sollte spürbar sein, während das Schleifpapier über die Oberfläche des Caecums bewegt wird. Falls während des Abschleifens ein Blutgefäß im Caecum verletzt wird, vorsichtig bis zu zwei Minuten lang einen Mullverband auf die Blutungsstelle drücken.Falls die Blutung nach zwei Minuten anhält, legen Sie eine 8/0 monofile Naht um das Gefäß. Wenn die Zäkumoberfläche weniger glänzend wird und Petechien auftreten, verwenden Sie einen neuen Sandpapierstreifen, um die peritoneale Oberfläche des rechten Bauchwandmuskels so lange zu abschleifen, bis die gesamte Oberfläche der Bauchwand rau erscheint. Anschließend verwenden Sie einen Castroviejo-Nadelhalter, um zwei bis vier 8/0 Seidenstiche in Form einer Acht in die Muskelschicht der rechten Bauchwand einzubringen, wobei feine, millimeterlange Fäden übrig bleiben.Spülen Sie den Darm und die Bauchhöhle mehrmals mit einem 10-Milliliter-Spritzen mit erwärmter Kochsalzlösung aus. Wenn der Bereich unterhalb der Maus durchnässt wird, stellen Sie die Maus auf eine trockene Unterlage, um eine Hypothermie zu vermeiden. Sobald der Darm ausreichend ausgespült ist, legen Sie steriles Mulltuch über die Inzision, um die überschüssige Kochsalzlösung aufzusaugen.Danach positionieren Sie den Blinddarm neben den Nähten in der rechten Bauchwand. Benutzen Sie einen Gazetupfer, um Druck auf aktive Blutungsstellen auszuüben. Streuen Sie anschließend eine Prise Reisstärke auf die Oberfläche der rechten Bauchwand und des Blinddarms.Um den Bauch zu schließen, verwenden Sie einen 60 resorbierbaren geflochtenen Faden, um einen fortlaufenden Stich in die Muskelschicht am oberen Ende des Schnitts zu legen. Führen Sie den Faden entlang des Schnitts nach unten und verbinden Sie mit jedem neuen Stich jeweils drei Millimeter lange Abschnitte der Muskulatur. Lassen Sie am unteren Ende des Schnitts eine Schlaufe des Fadens vom vorherigen Stich stehen, um den Faden mit einem Instrument zu verknoten, und schneiden Sie den Faden ab, wobei fünf Millimeter lange Enden verbleiben.Schließen Sie die Haut auf die gleiche Weise mit einer 60er Nylon-Einzelstrangnaht. Verabreichen Sie anschließend einen subkutanen Salinenschub von 20 Milliliter pro Kilogramm Körpergewicht und trocknen Sie das Tier gründlich mit frischer Gaze ab. Wickeln Sie abschließend eine adhäsive Wundauflage locker um den Operationsbereich, wobei darauf geachtet werden muss, dass die Beine oder die Atemmechanik des Tieres nicht eingeschränkt werden, und überwachen Sie die Maus, bis sie sich vollständig erholt hat.Sieben Tage nach der Operation sollten das Caecum und möglicherweise der aufsteigende Colonabschnitt, die Leber sowie Schlingen des Dünndarms an der rechten Bauchwand verwachsen sein. Durch das Einbetten und Schneiden des entfernten Bauchgewebes entstehen hervorragende Präparate für histologische und immunhistochemische Analysen. Sobald dieses Verfahren beherrscht ist, kann es in weniger als 30 Minuten durchgeführt werden.Nach Durchführung dieses Verfahrens können andere Methoden wie die quantitative PCR und die Glasfasernkultur verwendet werden, um Fragen zur Genexpression im Adhäsionsgewebe zu beantworten.

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieses Video zeigt, wie man abdominalen Aortenaneurysmen (AAA) in Mäusen über vorübergehende intraluminale Infusion von Schweine-Pankreas-Elastase in der infrarenalen Segment der abdominalen Aorta induzieren. Das Modell verfügt über die Fähigkeit zur umfassenden Einblick in die Pathobiologie von AAA durch die Entstehung zahlreicher transgenen und Knockout-Mäuse hinzu.

Erstellung von Murine Experimental Bauchaortenaneurysmen mit Elastase

Eine Störung des Gallenflusses führt zu einer schweren entzündlichen cholestatischen Leberschädigung mit einer charakteristischen zeitabhängigen Abfolge morphologischer Veränderungen. In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll für die chirurgische Ligatur des Gallengangs communis bei Mäusen vor, das es ermöglicht, nach 21 bis 28 Tagen eine starke fibrotische Reaktion zu induzieren.

Gallengang-Ligation in Mice: Induktion von Entzündungsleber-Verletzung und Fibrose von obstruktiver Cholestase

Hier präsentieren wir Ihnen teilweise Gallengang Ligatur als chirurgische Modell der Leberschädigung und Regeneration bei Nagetieren.

Partielle Gallengang Ligation in der Maus: eine kontrollierte Modell der lokalisierten obstruktive Cholestase

Anastomosen Leck oder Aufschlüsselung nach der Operation ist eine der Hauptursachen der postoperativen Morbidität und Mortalität. Unsere Praxis für die Erstellung eines Kolon Anastomose ist eine zuverlässige und reproduzierbare Methode zur Untersuchung der heilenden Mechanismen der Anastomosen.

Erstellung von Kolon Anastomose bei Mäusen

Wir beschreiben ein Mausmodell des postoperativen Ileus, das durch intestinale Manipulation erzeugt wurde. Die gastrointestinale Transitfunktion, die pathologischen Veränderungen und die Aktivierung der Immunzellen wurden 24 Stunden nach der Operation beurteilt.

Postoperatives Ileus-Mausmodell

Dieses Manuskript stellt ein Protokoll zur Etablierung eines Modells für ein abdominales Aortenaneurysma der Maus unter Verwendung von Calciumchlorid und Elastase vor, das die Vorteile früherer Modellierungsmethoden kombiniert. Dieses Modell kann verwendet werden, um die pathophysiologischen Mechanismen zu untersuchen, die abdominalen Aortenaneurysmen zugrunde liegen.

Ein Modell eines abdominalen Aortenaneurysmas der Maus durch periadventielle Calciumchlorid- und Elastase-Infiltration

Dieses Protokoll beschreibt einen methodischen chirurgischen Ansatz zur Modellierung fortgeschrittener Bauchaortenaneurysmen bei Mäusen durch eine Kombination aus direkter Applikation von Elastase auf die infrarenale Aorta und Verabreichung von ß-Aminopropionitril über das Trinkwasser.

Fortgeschrittene Modellierung des abdominalen Aortenaneurysmas bei Mäusen durch Kombination von topischer Elastase und oralem ß-Aminopropionitril

Intrauterine Adhäsionen (IUAs), die häufigste pathologische Folge einer Endometriumschädigung, beeinträchtigen die Fortpflanzungsfunktion erheblich. Traumata und Infektionen sind weithin als Hauptrisikofaktoren für die Entwicklung von IUA anerkannt. Wir haben erfolgreich ein reproduzierbares Rattenmodell von IUAs etabliert, indem wir zwei kritische Verletzungsmethoden kombiniert haben: die mechanische Kürettage und die infektiöse Induktion mit Lipopolysaccharid.

Etablierung eines Rattenmodells für intrauterine Adhäsionen durch duale Verletzung: Kürettage und Infektion

In dieser Studie wird ein Bauchmassagegerät für Mäuse vorgestellt, das die manuelle Massage repliziert und gleichzeitig Stress und Gewebeschäden minimiert. Das Gerät senkt den Blutzuckerspiegel erheblich, verbessert den Fettstoffwechsel und erhöht die Insulinsensitivität bei Typ-2-Diabetes-Mäusen und bietet einen vielversprechenden, nicht-invasiven Therapieansatz mit klinischem Potenzial.

Fixations- und Operationsmethode für die Bauchmassage bei T2DM-Mäusen

Dieses Protokoll beschreibt ein Schweinemodell der postoperativen intraabdominalen Adhäsionsbildung mit Yucatan-Mini-Schweinen, die eine offene Bauchoperation mit Darmresektion durchlaufen. Der Ansatz induziert zuverlässig intraabdominale Verwachsungen und bietet eine Plattform zur Bewertung der Adhäsionsentwicklung sowie zum Testen von Anti-Adhäsionsstrategien.

Ein translationales chirurgisches Porcines Modell für postoperative intraabdominale Adhäsionsbildung

Dieses Protokoll bietet eine wiederholbare und zuverlässige Methode zur Induzierung von abdominalen Aortenaneurysmen (AAAs) bei C57BL/6-Mäusen mittels Elastinsensibilisierung und perivaskulärer Elastase-Anwendung als AAA-Modell, das eine Immunsensibilisierungskomponente integriert.

Zuverlässige Erstellung eines murinalen abdominalen Aortenaneurysma-Modells unter Verwendung von Elastinsensibilisierung und perivaskulärer Elastase

Lernen Sie eine chirurgische Methode zur Erzeugung von Bauchfellverwachsungen bei Mäusen mit Sandpapier und Stärke. Diese Technik ermöglicht zuverlässige Adhäsionsbildung bei minimaler Mortalität für pathophysiologische Studien.

Erstellung von Verwachsungen bei Mäusen

Weitere Videos entdecken