Name: Die Markierung von Brustkrebs-Patienten stamm Xenografts mit Nachvollziehbare Reporter für Tumorwachstum und Metastasierung Studies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 53 s
Description: Erfahren Sie die stabile Markierung von Patienten-xenografts mit lentiviralen Partikeln für Brustkrebsforschung. Diese Methode ermöglicht die Verfolgung von Tumorwachstum und Metastasierung durch In-vivo-Bildgebung.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Die Autoren danken Dr. Darrel Kotton an der Boston University für die Bereitstellung der Phage-EF1aL-dsRed-UBC-GFP-W-Vektor und Protokolle für hohe Titer lentiviralen Produktion in diesen Studien verwendet. Diese Arbeit wurde von DOD BCRP W81XWH-11-1-0101 (DMC), ACS IRG # 57-001-53 (DMC), NCI K22CA181250 (DMC) und R01 CA140985 (CAS) .NCI P30CA046934 Zentrum Zuschuss unterstützt in - vivo - Bildgebung gefördert und Gewebekultur-Kerne an der University of Colorado AMC.

<ol><li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+human+tumour+tissue+xenografts+in+immunodeficient+mice%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived human tumour tissue xenografts in immunodeficient mice: a systematic review.</a> Clin Transl Oncol. 12 (7), 473-480 (2010).</li>
<li>Siolas, D., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumor+xenografts%3A+transforming+clinical+samples+into+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models.</a> Cancer Res. 73 (17), 5315-5319 (2013).</li>
<li>DeRose, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+grafts+derived+from+women+with+breast+cancer+authentically+reflect+tumor+pathology%2C+growth%2C+metastasis+and+disease+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor grafts derived from women with breast cancer authentically reflect tumor pathology, growth, metastasis and disease outcomes.</a> Nat Med. 17 (11), 1514-1520 (2011).</li>
<li>Kabos, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+luminal+breast+cancer+xenografts+retain+hormone+receptor+heterogeneity+and+help+define+unique+estrogen-dependent+gene+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+cancer+research+and+treatment%22%5BJournal%5D)">Patient-derived luminal breast cancer xenografts retain hormone receptor heterogeneity and help define unique estrogen-dependent gene signatures.</a> Breast cancer research and treatment. 135 (2), 415-432 (2012).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+renewable+tissue+resource+of+phenotypically+stable%2C+biologically+and+ethnically+diverse%2C+patient-derived+human+breast+cancer+xenograft+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A renewable tissue resource of phenotypically stable, biologically and ethnically diverse, patient-derived human breast cancer xenograft models.</a> Cancer Res. 73 (15), 4885-4897 (2013).</li>
<li>Lum, D. H., Matsen, C., Welm, A. L., Welm, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+human+primary+tumorgraft+models%3A+comparisons+with+traditional+oncology+preclinical+models+and+the+clinical+relevance+and+utility+of+primary+tumorgrafts+in+basic+and+translational+oncology+research%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Overview of human primary tumorgraft models: comparisons with traditional oncology preclinical models and the clinical relevance and utility of primary tumorgrafts in basic and translational oncology research.</a> Curr Protoc Pharmacol. , (2012).</li>
<li>Marangoni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+patient+tumor-derived+breast+cancer+xenografts+for+preclinical+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A new model of patient tumor-derived breast cancer xenografts for preclinical assays.</a> Clin Cancer Res. 13 (13), 3989-3998 (2007).</li>
<li>Garrido-Laguna, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+engraftment+in+nude+mice+and+enrichment+in+stroma-+related+gene+pathways+predict+poor+survival+and+resistance+to+gemcitabine+in+patients+with+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor engraftment in nude mice and enrichment in stroma- related gene pathways predict poor survival and resistance to gemcitabine in patients with pancreatic cancer.</a> Clin Cancer Res. 17 (17), 5793-5800 (2011).</li>
<li>Landis, M. D., Lehmann, B. D., Pietenpol, J. A., Chang, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+breast+tumor+xenografts+facilitating+personalized+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived breast tumor xenografts facilitating personalized cancer therapy.</a> Breast Cancer Res. 15 (1), 201(2013).</li>
<li>Norum, J. H., Andersen, K., Sorlie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+learned+from+the+intrinsic+subtypes+of+breast+cancer+in+the+quest+for+precision+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Lessons learned from the intrinsic subtypes of breast cancer in the quest for precision therapy.</a> Br J Surg. 101 (8), 925-938 (2014).</li>
<li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumour+xenografts+as+models+for+oncology+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development.</a> Nat Rev Clin Oncol. 9 (6), 338-350 (2012).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenografts+of+triple-negative+breast+cancer+reproduce+molecular+features+of+patient+tumors+and+respond+to+mTOR+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenografts of triple-negative breast cancer reproduce molecular features of patient tumors and respond to mTOR inhibition.</a> Breast Cancer Res. 16 (2), R36(2014).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+from+human+breast+tumors+are+involved+in+spontaneous+metastases+in+orthotopic+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells from human breast tumors are involved in spontaneous metastases in orthotopic mouse models.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (42), 18115-18120 (2010).</li>
<li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cancer+stem+cell+metastasis+in+xenograft+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of cancer stem cell metastasis in xenograft animal models.</a> Methods Mol Biol. 568, 7-19 (2009).</li>
<li>Thibaudeau, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mimicking+breast+cancer-induced+bone+metastasis+in+vivo%3A+current+transplantation+models+and+advanced+humanized+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Mimicking breast cancer-induced bone metastasis in vivo: current transplantation models and advanced humanized strategies.</a> Cancer Metastasis Rev. 33 (2-3), 721-735 (2014).</li>
<li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat Rev Cancer. 11 (2), 135-141 (2011).</li>
<li>Powell, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53+deficiency+linked+to+B+cell+translocation+gene+2+%28BTG2%29+loss+enhances+metastatic+potential+by+promoting+tumor+growth+in+primary+and+metastatic+sites+in+patient-derived+xenograft+%28PDX%29+models+of+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">p53 deficiency linked to B cell translocation gene 2 (BTG2) loss enhances metastatic potential by promoting tumor growth in primary and metastatic sites in patient-derived xenograft (PDX) models of triple-negative breast cancer.</a> Breast Cancer Res. 18 (1), (2016).</li>
<li>DeRose, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+models+of+human+breast+cancer%3A+protocols+for+in+vitro+and+in+vivo+applications+in+tumor+biology+and+translational+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived models of human breast cancer: protocols for in vitro and in vivo applications in tumor biology and translational medicine.</a> Curr Protoc Pharmacol. , (2013).</li>
<li>Wang, X., McManus, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirus+production%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Lentivirus production.</a> J Vis Exp. (32), (2009).</li>
<li>Indumathi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+depletion+of+stromal+vascular+fractions+isolated+from+human+adipose+tissue%3A+a+novel+approach+towards+cell+enrichment+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Lineage depletion of stromal vascular fractions isolated from human adipose tissue: a novel approach towards cell enrichment technology.</a> Cytotechnology. 66 (2), 219-228 (2014).</li>
<li>Hines, W. C., Yaswen, P., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+breast+cancer+requires+identification+and+correction+of+a+critical+cell+lineage-dependent+transduction+bias%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Modelling breast cancer requires identification and correction of a critical cell lineage-dependent transduction bias.</a> Nat Commun. 6, 6927(2015).</li>
<li>Campbell, J. P., Merkel, A. R., Masood-Campbell, S. K., Elefteriou, F., Sterling, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+bone+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Models of bone metastasis.</a> J Vis Exp. (67), e4260(2012).</li>
<li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+TGFbeta+Signaling+in+Mouse+Models+of+Cancer+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Imaging TGFbeta Signaling in Mouse Models of Cancer Metastasis.</a> Methods Mol Biol. 1344, 219-232 (2016).</li>
<li>Jenkins, D. E., Hornig, Y. S., Oei, Y., Dusich, J., Purchio, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+human+breast+cancer+cell+lines+that+permit+rapid+and+sensitive+in+vivo+detection+of+mammary+tumors+and+multiple+metastases+in+immune+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice.</a> Breast Cancer Res. 7 (4), R444-R454 (2005).</li>
<li>Lawson, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+reveals+a+stem-cell+program+in+human+metastatic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis reveals a stem-cell program in human metastatic breast cancer cells.</a> Nature. 526 (7571), 131-135 (2015).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Kritische Schritte innerhalb des Protokolls: Die Verwendung hoch Titer Lentivirale Partikel (&gt; 10 8 TU / ml) ist ein entscheidender Schritt in den Erfolg dieses Protokolls, die sorgfältige Kontrolle der während der in vitro Transduktion Medienzusammensetzung ermöglicht. Während mehrere Methoden für die Herstellung von High-Titer viralen Partikel wurden gut 18,19 beschrieben; Dieses Protokoll verwendet lentivirale Partikel , wie im Detail in ...

Die Entwicklung von Patienten stamm Tumorxenografte (PDXs), wobei operativ reseziert Tumorproben direkt transplantiert werden in immungeschwächten Mäusen, bietet mehrere Vorteile gegenüber Standard - Zell-Linie Xenotransplantatmodellen und stellt einen großen Fortschritt in der Krebsforschung 1,2. PDXs können durch aufeinanderfolgende Durchgänge mit minimalen Veränderung der genetischen und biologischen Eigenschaften des Tumors bei der ersten Passage gezüchtet gepflegt und erweitert werden; und genauer widerspiegeln Tumor Heterogenität als abgeleitet Xenotransplantate von menschlichen Krebszelllinien 3-8. Diese Modelle werden nun in großem Umfang als Plattform genutzt zur Personalisierung von Krebstherapeutika 9,10, als präklinische Plattform in der Medikamentenentwicklung 6,11 und als experimentelles Werkzeug für das Studium der Krebsbiologie 4,12. Die meisten PDXs implantiert werden und subkutan propagiert, die feasibly Messung des Tumorwachstums im Laufe der Zeit ermöglicht Sätteln mit. abermetastatische Erkrankung hat, war schwieriger zu modellieren PDXs verwenden. Speziell für Brustkrebs - Xenotransplantaten mit metastatischen Kapazität verschiedenen Organen haben 3,5,13 beschrieben worden ist , aber die Frequenz der spontanen Verbreitung an metastatischen Stellen ist extrem niedrig. Wo berichtet, stützt sich die Identifizierung und Quantifizierung von metastasierendem Belastung in mühsamer histologische Untersuchung von Zielorganen post-mortem. Krebs-Zelllinien Biolumineszenz (Luciferase, Luc) exprimieren, oder fluoreszierend (Green Fluorescent Protein, GFP) Gen-Reporter werden in experimentellen Modellen von Brustkrebs Metastasen in Gehirn, Lunge, Knochen und Leber nach intrakardial, Schwanz-Vene, intrafemoral und splenic Injektion häufig verwendete 14-16. Während diese Modelle Verbreitung von den primären Tumoren umgehen, sie sind wertvoll, die Mechanismen der Organtropismus und metastatischen Kolonisation zu studieren. Doch von primären Patiententumoren und PDXs abgeleiteten Zellen können niedrige Transfektion oder Transduktionsraten haben using Standardverfahren. Eine Alternative ist PDX-abgeleiteten Zelllinien in vitro zu etablieren 17, die als herkömmliche Gewebekulturprotokollen markiert werden können. Dieser Ansatz ist jedoch nicht geeignet für die meisten PDXs Kennzeichnung, für die Zell-Linie Ableitung schwierig und kann den Phänotyp der Zellen verändern. Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Weiterleitung von PDX-distanzierte Tumorzellen mit lentiviralen Vektoren , die sich für die in - vivo - Bildgebung. Darüber hinaus beschreiben wir experimentelle Metastasierung mit Intrakardial dissoziierter luc-GFP-markierten PDX-Zellen bei immunsupprimierten Mäusen. Ein Basisprotokoll für die Transduktion von PDX-distanzierte Organoide mit Gen-Reporter exprimieren Lentiviren zuvor 18 beschrieben. In der aktuellen Protokoll beschreiben wir zusätzliche Methoden für das menschliche Tumorzellen zu bereichern und in der Nähe von 100% Transduktionseffizienz, sowie die Verwendung von markierten PDXs zum Nachweis von experimentellen Brustkrebs erhaltenMetastasen. Dieses Protokoll kann für die Markierung von mehreren Krebsarten PDXs mit verschiedenen Leucht und Fluoreszenzmarker sowie Modulation der Genexpression (dh shRNA Knockdown von Genen von Interesse) angepasst werden.

<table><tbody><tr><td>DMEM/F12 (1:1)</td><td>Hyclone</td><td>SH30023.01</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>BD Biosciences</td><td>354060</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>BD Biosciences</td><td>354001</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma</td><td>H4784</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>17504-44</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Pilz-Antibiotika</td><td>Hyclone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Accumax</td><td>Innovative Cell Technologies</td><td>AM-105-500</td><td>Aufschlusspuffer</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>HBSS Rot Ca2+/Mg2+freier</td><td>Hyclone</td><td>SH30031.02</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30258.01</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex</td><td>Cultrex</td><td>3433-005-01</td><td>Grundstein-Matrix-Extrakt (BME)</td></tr><tr><td>30 &#176; C-Schüttler</td><td>NewBrunswick Scientific CO. INC</td><td>Serie 25 Inkubator-Schüttler</td><td></td></tr><tr><td>70 &#956; m Filter</td><td>Falcon</td><td>7352350</td><td></td></tr><tr><td>Skalpelle</td><td>Fisher</td><td>22079690</td><td></td></tr><tr><td>Clorhexidin Desinfektionsmittel</td><td>Durvet&nbsp;</td><td>NDC# 30798-624-35</td><td></td></tr><tr><td>Reagenz für die Zelllyse von rotem Blut</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>Neuraminidase</td><td>Sigma</td><td>N7885-1UN</td><td></td></tr><tr><td>EpCAM (CD326+) Mikrokügelchen*</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-061-101</td><td></td></tr><tr><td>Kit zur Depletion von Abstammungszellen, Maus</td>*<td>Miltenyil Biotec</td><td>130-090-858</td><td></td></tr><tr><td>MiniMACS Separator&nbsp;</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Mini MACS Magnetständer</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>MS Säulen</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-042-201 MS-</td><td>oder LS-Säulen können verwendet werden, einstellbar auf die Anzahl der Zellen.</td></tr><tr><td>Illumatool Abstimmbares Lichtsystem</td><td>Lightools research</td><td>Verschiedenes</td><td>Für die in vivo Fluoreszenzbildgebung</td></tr><tr><td>Xenogen IVIS200 Bildgebungsgerät</td><td>Xenogen</td><td>Verschiedenes</td><td>Für die in vivo Luminiszenzbildgebung</td></tr><tr><td>Humanes Cytokeratin Klon MNF116 Monoklonaler Antikörper</td><td>DAKO</td><td>M0821</td><td>Pan-Cytokeratin&nbsp;</td></tr><tr><td>Epidermaler Wachstumsfaktor-Rezeptor-Antikörper</td><td>Zellsignalisierung</td><td>4267S</td><td>EGFR</td></tr></tbody></table>

die markierung von brustkrebs-patienten stamm xenografts mit nachvollziehbare reporter für tumorwachstum und metastasierung studies

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

Die Verwendung präklinischer Modelle zur Untersuchung der Tumorbiologie und des Ansprechens auf die Behandlung ist für die Krebsforschung von zentraler Bedeutung. Alteingesessene humane Zelllinien und viele transgene Mausmodelle versäumen es oft, die Schlüsselaspekte menschlicher Malignome zu rekapitulieren. Daher werden alternative Modelle entwickelt, die die Heterogenität der Tumoren und ihrer Metastasen besser abbilden. Patienten-abgeleitete Xenotransplantat-Modelle (PDX), bei denen chirurgisch resezierte Tumorproben in immungeschwächte Mäuse transplantiert werden, sind zu einer attraktiven Alternative geworden, da sie über mehrere Generationen transplantiert werden können und die Tumorheterogenität effizienter widerspiegeln als Xenotransplantate, die aus menschlichen Krebszelllinien stammen. Eine Einschränkung bei der Verwendung von PDXs besteht darin, dass sie schwer zu transfizieren oder zu transduzieren sind, um rückverfolgbare Reporter einzuführen oder die Genexpression zu manipulieren. Das aktuelle Protokoll beschreibt Methoden zur Transduktion dissoziierter Tumorzellen aus PDXs mit hoher Transduktionseffizienz und die Verwendung von markierten PDXs für experimentelle Modelle von Brustkrebsmetastasen. Das Protokoll demonstriert auch die Verwendung von markierten PDXs in experimentellen Metastasenmodellen, um den Organbesiedlungsprozess der Metastasenkaskade zu untersuchen. Metastasen in verschiedenen Organen können mit Hilfe der biolumineszenten Bildgebung bei lebenden Tieren oder der GFP-Expression während der Dissektion und bei exzidierten Organen leicht sichtbar gemacht und quantifiziert werden. Diese Methoden bieten ein leistungsfähiges Werkzeug, um die Verwendung mehrerer Arten von PDXs auf die Metastasierungsforschung auszuweiten.

Diese Methode beschreibt die Transduktion von PDX-dissoziierten Zellen Brustkrebs mit hohem Titer unter Verwendung von lentiviralen Vektoren pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro und Phage-EF1aL-Luciferase-UBC-GFP-W. Diese Vektoren exprimieren einen fluoreszierenden Marker, der die Effizienz der Transduktion in vitro ermöglicht die Abschätzung bereits 24 h nach der Infektion (Abbildung 1a). Für die meisten PDXs Expression von GFP wird 72 Stunden nach der Infektion (A...

Wir beschreiben ein Verfahren zur stabilen Markierung von Patienten stamm Xenotransplantaten (PDXs) mit lentivirale Partikel exprimieren grün fluoreszierenden Protein und Luziferase-Reporter. Diese Methode ermöglicht es, das Wachstum von PDXs am primären Standort zum Verfolgen sowie Detektieren spontaner und experimentelle Metastasen in vivo Bildgebungssysteme verwendet werden .

Die Markierung von Brustkrebs-Patienten stamm Xenografts mit Nachvollziehbare Reporter für Tumorwachstum und Metastasierung Studies

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

Das übergeordnete Ziel dieses Transduktionsprotokolls besteht darin, Reportergene stabil in von Patienten abgeleitete Xenotransplantate (PDX) einzubringen, um deren Verwendung in experimentellen und spontanen Metastasemodellen zu erleichtern. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen in der Krebsforschung zu beantworten, beispielsweise inwieweit eine extrakutane Metastasierung von patientenabgeleiteten Xenotransplantaten erfolgt. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass markierte PDX mithilfe der In-vivo-Bildgebung verfolgt werden können, wodurch die Beurteilung gezielter, spezifischer Metastasen ohne umfangreiche histologische Analysen post mortem erleichtert wird.Dieses Protokoll wird Jessica Finlay-Schultz, eine Postdoktorandin, demonstrieren, die es routinemäßig zur Markierung von xenotransplantierten Tumoren von Brustkrebspatientinnen anwendet. Beginnen Sie unter Verwendung aseptischer Technik damit, mit einem Skalpell die Haut rund um den Tumor aufzuschneiden. Ziehen Sie anschließend die Haut mit einer Pinzette zurück und trennen Sie sie mit einem sauberen Skalpell vom Tumor ab.Wenn der Tumor vollständig freigelegt ist, verwenden Sie ein sauberes Paar Pinzette und S

labeling-breast-cancer-patient-derived-xenografts-with-traceable

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Diffuse Fluoreszenz-Tomographie bietet eine relativ kostengünstige und potenziell hoher gesamten Ansatz für...

Computertomographie-gesteuerte Time-Domain diffuse Fluoreszenz-Tomographie in der Kleintiere für die Lokalisierung von Krebs-Biomarker

Das folgende Video beschreibt eine Technik der Transduktion zur Markierung von PDX-Tumorzellen (von Patienten stammende Xenotransplantate), die zur Einführung von Lentivirus-exprimierenden grün-fluoreszierenden Protein- und Luciferase-Reportern in die Tumorzelle in vitro verwendet wird.

Transduktion zur Markierung von PDX-Tumorzellen: Einführung eines Lentivirus-exprimierenden fluoreszierenden Markers in die Tumorzelle in vitro

Dieses Manuskript beschreibt eine Methode, die zur Erzeugung von von Prostatakrebspatienten abgeleiteten Xenotransplantaten (PDXs) aus zirkulierenden Tumorzellen (CTCs) verwendet wird. Die Generierung von PDX-Modellen aus CTCs bietet ein alternatives experimentelles Modell zur Untersuchung von Prostatakrebs; Der am häufigsten diagnostizierte Tumor und eine häufige Todesursache durch Krebs bei Männern.

Generation von Prostatakrebs-Patienten gewonnen Xenograft-Modelle von zirkulierenden Tumorzellen

Metastasierung bei Eierstockkrebs ist durch zahlreiche diffuse intraperitoneale Läsionen gekennzeichnet, so dass eine genaue visuelle Quantifizierung der Tumorlast eine Herausforderung darstellt.  In dieser Arbeit beschreiben wir eine Methode zur in situ und ex vivo Quantifizierung der metastasierten Tumorlast unter Verwendung von rot fluoreszierenden Protein (RFP)-markierten Tumorzellen und optischer Bildgebung.

Die Quantifizierung von Intraperitonealtest Ovarian Cancer Metastasis

Hier beschreiben wir das Modell und den Ansatz zur Untersuchung der Funktionen von Lungenalveolarmakrophagen bei der Metastasierung von Krebs. Um die Rolle dieser Zellen bei der Metastasierung zu demonstrieren, wurde das syngene (4T1) Modell des Brustkrebses in Verbindung mit der Depletion von Alveolarmakrophagen mit Clodronat-Liposomen verwendet.

Untersuchung der Rolle von Alveolarmakrophagen in Metastasierung von Brustkrebs

Wir beschreiben ein Protokoll für die präklinische in Vivo Verfolgung von Krebsmetastasen. Es basiert auf einem Radionuklid-Fluoreszenz-Reporter Kombination von Natrium Iodid Symporter, entdeckt nichtinvasive [18F] Tetrafluoroborate-PET, und ein fluoreszierendes Protein für optimierte ex Vivo Bestätigung. Die Methode ist anwendbar für präklinische in Vivo Zelle tracking über Tumorbiologie.

Radionuklid-Fluoreszenz-Reporter-Gen Imaging zu Tumorprogression in Nagetier Tumormodellen verfolgen

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Ultraschall-gesteuerte Injektion von Neuroblastom (NB) und Ewing Sarkom (ES) Zellen zu nutzen (gegründet Zelllinien und Patienten abgeleitet Tumorzellen) an biologisch relevanten Standorten erstellen zuverlässigere präklinische Modellen für Krebs Forschung.

Nutzung von Ultraschall geführte Gewebe gerichtet zellulären Implantation für die Einrichtung der biologisch relevanten metastasiertem Tumor Xenografts

Diese Arbeit setzt ein fortschrittliches Protokoll vor, um die Tumorbelastung durch den Nachweis von grünen Fluoreszenzprotein- und Biolumineszenzsignalen sowie die Integration quantitativer molekularer Detektionstechniken genau zu bewerten.

Studieren von dreifach negativem Brustkrebs mit orthotopischem Brustkrebsmodell

Hier stellen wir ein Protokoll vor, um die Wirksamkeit gezielter Therapien zu testen, die auf der Grundlage der genomischen Zusammensetzung eines Tumors ausgewählt wurden. Das Protokoll beschreibt die Identifizierung und Validierung struktureller DNA-Umlagerungen, die Einplage von Patiententumoren in Mäuse und die Erprobung von Reaktionen auf entsprechende Medikamente.

Testen von gezielten Krebstherapien mit struktureller DNA-Alterationsanalyse und patientenabgeleiteten Xenografts

Das Manuskript beschreibt eine Methodik für die Etablierung sowie das longitudinale Wachstumsmonitoring von spontanen Lungenmetastasen von orthotopisch injizierten Brusttumoren, die in allen Stadien der Metastasierungskaskade interveniert werden kann.

Im lebenden Organismus Bildgebung zur Messung der spontanen Lungenmetastasierung von orthotopisch injizierten Brusttumorzellen

Dieses Protokoll beschreibt eine effiziente, nicht-chirurgische Methode zur orthotopen Implantation von Xenotransplantaten von Brustkrebspatientinnen bei Mäusen. Die Technik beinhaltet eine enzymatische Tumordissoziation, gefolgt von einer direkten Injektion in die Brustfettpolster, was eine Hochdurchsatzimplantation ermöglicht. Die umfassende Validierung gewährleistet die Modelltreue und ermöglicht strenge Studien über verschiedene Brustkrebs-Subtypen hinweg.

Hochdurchsatz-Dissoziation und orthotope Implantation von Xenotransplantaten von Brustkrebspatientinnen

Erfahren Sie die stabile Markierung von Patienten-xenografts mit lentiviralen Partikeln für Brustkrebsforschung. Diese Methode ermöglicht die Verfolgung von Tumorwachstum und Metastasierung durch In-vivo-Bildgebung.

Die Markierung von Brustkrebs-Patienten stamm Xenografts mit Nachvollziehbare Reporter für Tumorwachstum und Metastasierung Studies (Video) | JoVE Journal

Die Markierung von Brustkrebs-Patienten stamm Xenografts mit Nachvollziehbare Reporter für Tumorwachstum und Metastasierung Studies

Weitere Videos entdecken