Durchführung der 1D-Dünnschichtchromatographie

1. TLC-Platten

1. Gängige Adsorbentien für DC-Toxizität sind Kieselgel, Aluminiumoxid und Zellulose. DC-Platten sind mit einer Vielzahl von Eigenschaften im Handel erhältlich. Wählen Sie eine DC-Platte und schneiden Sie sie auf eine geeignete Größe zu (ca. 5 cm x 5 cm ist für die meisten Anwendungen ausreichend). Bei DC-Platten mit Glasrücken ritzen Sie das Glas mit einem Lineal und einem Glasschneider ein und brechen Sie dann vorsichtig entlang der Linie.

2. Flecken

1. Löse die Probe in einem geeigneten Lösungsmittel auf, um eine etwa 1%ige Lösung herzustellen. Wenn möglich, sollte das Lösungsmittel unpolar sein. Säulenchromatographie-Fraktionen und andere verdünnte Lösungen können ohne Verdünnung verwendet werden, wenn der gelöste Stoff in einer Konzentration zwischen 0,2 % und 2,0 % vorliegt.
2. Markieren Sie die Grundlinie mit einem Bleistift etwa 1,0 cm vom Boden der Platte entfernt. Positionieren Sie die Spots mindestens 1,0 cm vom Rand der Platte entfernt und beschriften Sie sie entsprechend.
3. Die Spots können mit einer Glaskapillare aufgetragen werden. Um die DC-Platte zu erkennen, tauchen Sie die Kapillare in die Lösung, um eine kleine Menge Flüssigkeit aufzunehmen. Berühren Sie die Spitze vorsichtig an der gewünschten Stelle auf der DC-Platte und entfernen Sie sie sofort.
4. Alternativ können Sie Spots mit einer Mikroliterspritze auftragen, indem Sie bei jeder Anwendung etwa 1 μl Lösung abgeben.
5. Die Spots können nacheinander an jeder Stelle aufgetragen werden, wobei darauf zu achten ist, dass die Oberfläche des Adsorptionsmittels mit dem Spotter nicht gestört wird. Lassen Sie das Lösungsmittel zwischen den Anwendungen trocknen.

3. Auswahl eines Entwicklungslösungsmittels

1. Für eine gute Trennung ist es vorzuziehen, ein möglichst wenig polares Lösungsmittel zu verwenden. Zu den gängigen Lösungsmitteln für die Gleichstromversorgung gehören Hexan, Ethylacetat, Dichlormethan und Methanol (Tabelle 1).
2. Eine bequeme Möglichkeit, eine geeignete mobile Phase zu finden, besteht darin, die DC-Platte mit einer Probe zu beleuchten. Tragen Sie so viel Lösungsmittel direkt auf die Stelle auf, dass ein Kreis aus Lösungsmittel mit einem Durchmesser von 1–2 cm entsteht. Markieren Sie den Umfang des Kreises. Bei der Visualisierung zeigt ein geeignetes Lösungsmittel gut getrennte Ringe, wobei der äußerste Ring etwa 50% des Abstands von der Mitte zur Lösungsmittelfront beträgt.
3. Es kann erforderlich sein, die Polarität der mobilen Phase einzustellen, indem zwei mischbare Lösungsmittel ausgewählt und in unterschiedlichen Anteilen getestet werden. Beispiele für gängige Mischungen sind Hexane mit Ethylacetat und Dichlormethan mit Methanol.

4. Entwicklung

1. Legen Sie die gefleckte DC-Platte in eine Entwicklungskammer, die das entsprechende Entwicklungslösungsmittel enthält. Die Lösungsmittellinie sollte unter der auf der DC-Platte markierten Basislinie liegen.
2. Die Entwicklungskammer kann ein Glas mit Deckel oder ein Becherglas sein, das mit Aluminiumfolie oder Plastikfolie bedeckt ist. Verwenden Sie den kleinsten verfügbaren Behälter, der die DC-Platte aufnehmen kann.
3. Lassen Sie das Lösungsmittel nicht an die Oberkante der Platte gelangen. Wenn die Lösungsmittelfront (die Grenze, an der der nasse Teil des Adsorptionsmittels endet) 5–10 mm von der Oberseite der Platte entfernt ist, entfernen Sie die DC-Platte aus der Entwicklungskammer und markieren Sie die Lösungsmittelfront mit einem Bleistift, bevor das Lösungsmittel trocknet.

5. Visualisierung

1. Farbige Punkte können sofort sichtbar gemacht und mit einem Bleistift markiert werden. Oft sind Flecken nicht sichtbar und müssen daher mit einer anderen Methode visualisiert werden.
2. Oft enthält das DC-Adsorptionsmittel einen Fluoreszenzindikator. Flecken können mit einer tragbaren Ultraviolett (UV)-Lampe sichtbar gemacht werden. Verbindungen, die die Fluoreszenz löschen, erscheinen als dunkle Flecken, wenn die Platte mit kurzwelligem (254 nm) UV-Licht bestrahlt wird. Fluoreszierende Verbindungen erzeugen helle Flecken, wenn sie mit UV-Licht einer geeigneten Wellenlänge bestrahlt werden. Markiere die Mitte jedes Punktes mit einem Bleistift.
3. Flecken können auch sichtbar gemacht werden, indem ein Visualisierungsreagenz oder eine Färbung auf die DC-Platte aufgetragen wird. Das Visualisierungsreagenz kann durch Eintauchen der Platte in das Reagenz oder durch Abwischen der Platte mit einem Wattebausch, der mit einem nicht korrosiven Reagenz getränkt ist, angewendet werden.
4. Eine 20%ige Lösung von Phosphomolybdsäure in Ethanol ist nützlich für die Visualisierung der meisten organischen Verbindungen. Die Flecken treten beim Erhitzen der Platte mit einer Heißluftpistole oder in einem Ofen auf.
5. Andere Reagenzien können zur Visualisierung spezifischer Klassen von Verbindungen verwendet werden. Zum Beispiel wird das Ninhydrin-Reagenz für die Visualisierung von Aminosäuren und 2,4-Dinitrophenylhydrazin für Aldehyde und Ketone verwendet.

6. Analyse

1. Der Verzögerungsfaktor (R_f) ist das Verhältnis zwischen der Entfernung, die eine Verbindung auf einer DC-Platte zurücklegt, und der Entfernung, die das Lösungsmittel zurücklegt. Dies kann bestimmt werden, indem der Abstand von der Basislinie zur Mitte des Spots gemessen und der Wert durch den Abstand von der Basislinie zur Lösungsmittelfront dividiert wird.
   
2. Die R_f einer Verbindung ist charakteristisch für ihre physikalischen Eigenschaften und hängt von Faktoren wie Temperatur, Probengröße sowie Dicke und Aktivität des Adsorptionsmittels, Temperatur und Probengröße ab.
3. Um zu bestätigen, dass eine unbekannte Verbindung mit einer bekannten Verbindung identisch ist, sollte ein Standard auf derselben DC-Platte entdeckt werden. Identische Stoffe haben die gleichen Eigenschaften R_f.